高效液相色谱法测定黑种草子中黑种草苷含量

目的建立黑种草子中黑种草苷的含量测定方法,为其开发利用提供依据。方法采用高效液相色谱(HPLC)法,色谱柱为YMC-Pack ODS-A(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈(A)-0.0175 mol·L^(-1)乙酸水溶液(B),梯度洗脱(0～20 min,13%→18%A,>20～25 min,18%→13%A);流速1.0 mL·min^(-1);柱温30℃;检测波长290 nm。结果黑种草苷在0.01～0.30 mg·mL^(-1)范围内,峰面积与进样浓度呈良好的线性关系(R^2=0.9991);精密度、稳定性、重复性实验RSD均小于2%;平均回收率为96.66%,RSD为1.25%(n=6)。结论该方法重复性好,准确性高,可用于黑种草子药材的质量控制。

黑种草子总皂苷对炎症介质及ERK/MAPK信号转导通路的影响

目的:研究黑种草子总皂苷的抗炎机制。方法:IFN-γ和LPS协同造成小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症模型;Griess反应测定细胞上清液中NO产量;FRAP法测定细胞总抗氧化能力;RT-PCR检测iNOS,COX-2,IL-1β,IL-6,TNF-α,PPAR-γmRNA表达;Western blot检测iNOS,PPAR-γ,p-ERK蛋白表达水平。结果:黑种草子总皂苷呈剂量依赖性抑制细胞上清液中NO含量,提高细胞总抗氧化能力,下调iNOS,COX-2,IL-1β,IL-6 mRNA和iNOS蛋白的表达,抑制ERK磷酸化,上调PPAR-γ mRNA和蛋白表达。但对TNF-α mRNA表达影响不大。结论:黑种草子总皂苷部分通过抑制MAPK信号转导通路中的ERK磷酸化来下调iNOS基因和蛋白的表达从而减少NO的产量,下调COX-2,IL-1β,IL-6炎症介质表达;同时提高细胞总抗氧能力及上调抗炎介质PPAR-γ的表达而发挥抗炎效果。

瘤果黑种草子总皂苷的长期毒性研究

目的:观察瘤果黑种草子总皂苷连续灌胃给药90天对大鼠产生的毒性反应。方法:给大鼠灌胃不同浓度(分别为35、157和700mg/kg)瘤果黑种草子总皂苷90天,分别于给药45天、90天及停药后17天处死10只大鼠进行血液学、血液生化学及组织病理学检查。结果:瘤果黑种草子总皂苷不同剂量组大鼠在给药及停药恢复期间外观体征、行为活动、体质量、摄食量、血液学、血液生化学及组织病理学检查均未见异常,与正常对照组比较差异均无显著性。结论:瘤果黑种草子总皂苷长期用药对大鼠无明显毒性。

HPLC-ELSD法测定黑种草总皂苷提取物中黑种草皂苷A的含量

目的:建立测定黑种草总皂苷提取物中黑种草皂苷A含量的方法。方法:采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法。色谱柱为Cosmosil C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0ml/min,柱温为30℃,进样量为10μl,ELSD的漂移管温度为65℃,气体流速为2.0L/min。结果:黑种草皂苷A的质量浓度在0.183～2.562mg/ml范围内与其峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.9990);精密度、稳定性、重复性试验的RSD均<2%;平均加样回收率为99.93%,RSD=1.60%(n=6)。结论:该方法操作简便、重复性好、准确性高,可用于黑种草总皂苷提取物中黑种草皂苷A的含量测定。