黑素传递的研究进展

黑素合成和黑素在细胞内的运动是非常复杂而精确的过程,这个过程决定皮肤色素的沉着。黑素细胞和角化细胞转移黑素的机制尚不清楚。黑素细胞的胞吐作用和角化上皮细胞的吞噬作用是黑素传递的最可能的机制。其他的可能机制包括经过黑素细胞释放的包含黑素体的小囊泡,或者经过角化上皮细胞和黑素细胞浆膜的融合形成隧道单位。已经确认的最重要的和转移有关的分子是角化细胞的蛋白酶激活受体2。该分子经过吞噬作用完成黑素的传递。另外黑素传递也可经过E-钙粘蛋白、SNAREs、Rab和RhoGTP酶的活动由外源凝集素和糖蛋白的交互作用来完成。

p21小干扰RNA对低浓度过氧化氢诱导的黑素细胞提前衰老和黑素传递的影响

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)抑制p21表达对低浓度过氧化氢(H2O2)诱导的黑素细胞提前衰老的影响,以及黑素细胞提前衰老与黑素传递功能间的关系。方法:p21 siRNA序列转染黑素细胞,采用荧光显微镜、实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)及western blot检测抑制效率。将正常人黑素细胞分为对照组(阴性siRNA转染处理)、p21 siRNA组(p21 siRNA转染处理)、阴性siRNA+H2O2组(阴性siRNA转染24 h后加入400μmol/L H2O2处理)及p21 siRNA+H2O2组(p21 siRNA转染24 h后加入400μmol/L H2O2处理)。采用β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老;EdU细胞增殖检测细胞增殖能力;western blot检测各组p21和树突调节蛋白[RhoA、Rac1及细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)]表达;免疫荧光检测细胞骨架蛋白和黑素小体分布。结果:p21siRNA转染黑素细胞后明显抑制p21 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。与阴性siRNA+H2O2组比较,p21 siRNA+H2O2组β-半乳糖苷酶染色阳性率降低、细胞增殖能力增加及p21蛋白表达降低(P<0.05)。与对照组比较,阴性siRNA+H2O2组树突负性调节因子Rho A蛋白表达升高,而正性调节因子Rac1及Cdc42蛋白表达均降低,且细胞骨架蛋白及黑素小体荧光强度均降低(P<0.05)。经p21siRNA预处理后,p21 siRNA+H2O2组较阴性siRNA+H2O2组Rho A蛋白表达降低,Rac1和Cdc42蛋白表达均增高,且细胞骨架蛋白及黑素小体荧光强度均增高(P<0.05)。结论:低浓度H2O2诱导提前衰老的黑素细胞存在黑素传递功能障碍,p21 siRNA可改善低浓度H2O2诱导的黑素细胞提前衰老以及受损的黑素传递功能。

人表皮黑素细胞与HaCaT细胞共培养体外模型的建立

目的:建立人表皮黑素细胞与HaCaT细胞共培养的体外模型,观察α-促黑素以及烟酰胺对黑素在两细胞间传递的影响。方法:分别培养人表皮黑素细胞和HaCaT细胞,接种黑素细胞48h后再将HaCaT细胞以1:2的比例与黑素细胞共培养,分别以不同浓度的α-促黑素和烟酰胺干预共培养的细胞9天,Fontana-Masson银染法观察共培养模型中黑素颗粒在两细胞间传递的情况。结果:培养3天即可观察到约20%HaCaT细胞核周围出现从邻近黑素细胞传递来的黑素颗粒,随着时间的延长阳性染色HaCaT细胞比例逐渐增多,第7天达到高峰(约80%),α-促黑素以及烟酰胺分别以浓度依赖方式促进/抑制了黑素颗粒在两细胞间的传递。结论:成功建立了人表皮黑素细胞与HaCaT细胞共培养体外模型,为大规模筛选促/抑黑素传递的药物奠定了实验基础。