黑素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24抑制肺癌细胞增殖

目的:探讨黑素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24(mda-7/IL-24)对非小细胞肺癌细胞系H460增殖的影响。方法:将mda-7/IL-24插入真核表达载体pcDNA3中,构建重组表达载体pcDNA 3-mda-7/IL-24。按照DNA和脂质体(L ipofectam ine)的不同比例,将重组表达载体瞬时转染H460细胞,用RT-PCR检测mda-7/IL-24在不同转染条件下的表达,用MTT法检测转染重组表达载体后对H460细胞增殖的影响。结果:成功构建了mda-7/IL-24的重组表达载体,用SP6引物和mda-7/IL-24上游引物进行RT-PCR分析,在DNA和L ipofectam ine的比例为1μg∶2μl^1μg∶4μl时有目的基因表达。按照1μg∶2μl的比例瞬时转染重组表达质粒72 h后进行MTT分析,结果表明,与未转染细胞和转染空质粒细胞相比,重组质粒pcDNA3-mda-7/IL-24对肺癌细胞H460的增殖有明显抑制作用,抑制率为18.4%。结论:mda-7/IL-24对非小细胞肺癌细胞系H460增殖具有明显的抑制作用。

携带mda-7基因的腺病毒联合达卡巴嗪对人黑素瘤裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:评价携带mda-7基因的腺病毒(Ad·mda-7)与达卡巴嗪(DTIC)联合应用对人恶性黑素瘤裸鼠移植瘤的抑制作用。方法:建立裸鼠恶性黑素瘤移植瘤模型,分别给予PBS、Ad·mda-7、DTIC或Ad·mda-7联合DTIC治疗后,测量肿瘤生长体积。免疫印迹法检测MDA-7蛋白表达,TUNEL法检测肿瘤组织凋亡,免疫组化法检测Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:联合治疗组的肿瘤生长速度明显慢于PBS组(P=0.003)和DTIC组(P=0.022);Ad·mda-7单用或与DTIC联合应用都可使肿瘤组织表达MDA-7蛋白;联合治疗组的凋亡指数明显高于其他各组(P<0.05);Ad·mda-7与DTIC都可以上调Bax的表达和下调Bcl-2表达,二者联合应用的作用更为显著(P<0.05)。结论:Ad·mda-7与DTTiC联合应用可以明显抑制人恶性黑素瘤细胞裸鼠移植瘤的生长,促进肿瘤组织凋亡。

重组腺相关病毒介导黑色素瘤分化相关基因7对人肝癌细胞体内外抑制效应的研究

目的观察PEG启动子调控腺相关病毒介导的黑色素瘤分化相关基因7（MDA-7）在体内外抑制肝癌细胞的生物学活性，探讨重组腺相关病毒介导MDA-7基因用于肝癌基因治疗的应用前景。方法构建重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统，体外感染人肝癌细胞株HepG2细胞。Western印迹检测转染细胞内MDA-7蛋白；MTT法检测细胞增殖抑制率；流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡变化。构建肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤模型，尾静脉注射rAAV-PEG-MDA-7，观察其对肝癌生长的抑制作用；ELISA方法检测血浆MDA-7蛋白浓度；TUNEL法分析MDA-7对肿瘤细胞的凋亡诱导情况；免疫组织化学分析MDA-7在肿瘤组织中的表达。结果重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7可特异性转染HepG2细胞，MDA-7蛋白在HepG2细胞中高效表达，并呈时间依赖性。重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡，G0／G1期细胞百分比明显增多，G2／M期的细胞显著减少（P〈0、05）。全身系统性给予rAAV-PEG-MDA-7后，血清中可持续检测到MDA-7蛋白，且注射后2周浓度达高峰（200ng／ml）；肿瘤生长受抑制，抑瘤率为62％（P〈0、05）；免疫组化结果显示MDA-7在肿瘤组织中表达；TUNEL结果显示rAAV-PEG-MDA-7可诱导肿瘤细胞凋亡。结论构建出的重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统具有良好的肿瘤靶向性，通过抑制肝癌细胞增殖和诱导其凋亡发挥抗肝癌作用。

黑色素瘤分化相关基因-7研究进展

黑色素瘤分化相关基因 7(MDA 7)是一分泌型肿瘤细胞抑制因子。许多肿瘤细胞MDA 7mRNA水平明显高于原发和转移的人黑色素瘤细胞。MDA 7通过抑制血管生成、激活GADD等信号传导途径 ,促进肿瘤细胞的生长抑制和凋亡 ,而对正常细胞无明显影响。MDA 7是第一个被报道的具有白介素作用的肿瘤抑制分子。

MDA-7/IL-24对Burkitt淋巴瘤细胞的诱导分化作用

目的:研究黑色素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene 7,MDA-7)/IL-24对Burkitt淋巴瘤细胞的促分化作用并探讨其作用机制。方法:构建稳定过表达MDA-7/IL-24的人Burkitt淋巴瘤Raji和Daudi细胞株,MTS法检测稳定转染MDA-7/IL-24对Raji和Daudi细胞活力的影响;Transwell小室实验检测转染MDA-7/IL-24对Raji和Daudi细胞侵袭和迁移能力的影响;流式细胞术检测细胞凋亡水平及免疫表型;Western blotting技术检测转染MDA-7/IL-24对Raji和Daudi细胞表达分化相关蛋白Myb、BLIMP1及BCL-6的影响;建立裸鼠Raji细胞移植瘤模型,检测在体内环境中稳定转染MDA-7/IL-24对Raji细胞生物活性的影响。结果:过表达MDA-7/IL-24的Raji和Daudi细胞其增殖(P<0.05)、侵袭(P<0.01)及迁移(P<0.01)能力均明显下降,但凋亡细胞无明显增加(P>0.05),表达CD45及CD138的水平均明显增加(P<0.01),而表达CD10的水平明显下降(P<0.01)。过表达MDA-7/IL-24的Raji和Daudi细胞表达BLIMP1的水平明显增加(P<0.01),而表达Myb及BCL-6的水平均明显减低(P<0.01)。MDA-7/IL-24过表达组裸鼠模型Raji细胞移植瘤质量明显低于对照组[(1.23±0.21)vs(1.96±0.24)g,P<0.01]。结论:转染MDA-7/IL-24可能通过诱导分化作用抑制Burkitt淋巴瘤细胞的生物活性。

腺病毒介导mda-7基因联合阿霉素治疗裸鼠移植肝癌的作用

目的将重组腺病毒介导的黑色素瘤分化相关基因-7(melanomadifferentiation-associatedgene-7,mda-7)/IL-24与阿霉素(adriamycin,ADM)联合治疗裸鼠肝癌,探索基因治疗和化疗相结合治疗肿瘤的新方法。方法构建携带人mda-7/IL-24的重组腺病毒载体(Ad.mda-7),单独使用该载体或ADM以及两者联合使用对实验性肝癌裸鼠进行治疗(分别为Ad.mda-7组、ADM组及Ad.mda-7+ADM组,并设立对照组),观察抗肿瘤效果。用免疫组化方法检测各组肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)与转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果成功构建重组腺病毒并实现体内表达,Ad.mda-7+ADM组裸鼠平均生存时间为(83.8±4.82)d,较其他3组〔对照组为(43.4±1.67)d,ADM组为(64.2±4.14)d,Ad.mda-7组为(61.4±1.67)d〕生存时间明显延长(P<0.01)。Ad.mda-7+ADM组裸鼠平均肿瘤大小与单独使用ADM或Ad.mda-7相比明显缩小(P<0.01)。Ad.mda-7组肿瘤组织VEGF和TGF-β1的表达分别为(56.2±7.7)%和(35.2±4.5)%,抑制作用明显优于ADM组〔(70.7±6.5)%,P<0.05;(52.6±7.4)%,P<0.01〕;Ad.mda-7+ADM组肿瘤组织VEGF的表达为(37.3±5.0)%,较其余各组显著下降(P<0.01);Ad.mda-7+ADM组肿瘤组织TGF-β1的表达为(31.2±3.1)%,仍明显低于对照组和ADM组(P<0.01),而与Ad.mda-7组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组腺病毒介导mda-7/IL-24联合ADM对裸鼠人肝癌转移模型有明显的抗肿瘤作用及协同效应,其机理可能与抗肿瘤侵袭、转移有关。

抑癌基因mda-7/IL-24研究现状及进展

在肿瘤治疗研究领域中,一个有效策略是发现并利用肿瘤细胞特异基因改变和（或）信号转导通路改变,从而能选择性地杀伤破坏肿瘤细胞,而对正常细胞和组织无毒副作用[1]。而一个理想的基因治疗要求该基因只在促进肿瘤细胞生长抑制和凋亡时,

人mda-7/IL-24对淋巴瘤细胞Namalwa的抑制作用

目的:研究黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7,又称IL-24)对淋巴瘤细胞系Namalwa细胞的抑制作用。方法:用半定量RT-PCR方法检测10个造血系统恶性肿瘤细胞系(Namalwa、Raji、K562、NB4、U937、Ramous、CEM、KG1a、HL60、J6-1)中mda-7/IL-24的表达情况。用RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞(PBMC)中克隆mda-7/IL-24编码区,构建真核表达载体pTarget-IL-24。经测序鉴定后,用脂质体法转染Namalwa细胞,筛选稳定表达细胞株。转染细胞经RT-PCR和Western blotting证实mda-7/IL-24的表达。通过MTF法、集落形成试验、流式细胞术、裸鼠体内成瘤实验来评价mda-7/IL-24对肿瘤细胞增殖、生长特性、集落形成、凋亡情况、体内致瘤能力的作用。结果:10个造血系统恶性肿瘤细胞系中未检测到mda-7/IL-24的表达;转染重组质粒pTarget-IL-24的Namalwa细胞在mRNA与蛋白水平都有mda-7/IL-24的表达;稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞增殖活力以及集落形成能力与转染空载体的对照组相比明显下降(P<0.05);但是两者的凋亡率比较无统计学意义。裸鼠体内移植瘤实验结果显示稳定表达mda-7/IL-24的Namalwa细胞株的致瘤性明显低于转染空载体的对照组(P<0.05)。结论:mda-7/IL-24对来源于Burkitt淋巴瘤的Namalwa细胞系具有明显的增殖抑制作用,为Burkitt淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路。

人mda-7/IL-24对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑制作用

目的:探索人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑制作用。方法:用RT-PCR法检测11个造血系统恶性肿瘤细胞系mda-7受体的转录情况。用脂质体转染法将构建的重组真核表达载体pTarget-IL-24转染K562细胞。以RT-PCR和Western blotting方法检测转染的K562细胞mda-7的表达情况;通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin-Ⅴ/PI检测mda-7/IL-24对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期和凋亡的影响;以裸鼠移植瘤模型观察mda-7对K562细胞移植瘤的治疗作用。结果:在11个造血系统恶性肿瘤细胞系(NB4、HL60、CEM、Namalwa、Jurkat、KG1a、U937、K562、Ramos、J6-1、HEL细胞)中没有检测到完整mda-7受体的表达。转染mda-7的K562细胞能显著表达mda-7mRNA及其蛋白;其与转染空载体和未转染的K562细胞相比,细胞增殖活力以及集落形成能力明显下降(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05),但细胞凋亡率没有明显变化。裸鼠体内实验证实了mda-7/IL-24明显抑制K562细胞移植瘤生长(P<0.01)。结论:mda-7/IL-24对白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用,该作用与mda-7/IL-24引起细胞周期G0/G1期阻滞有关。

mda-7/IL-24腺病毒对小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖的抑制作用研究

目的构建mda-7/IL-24腺病毒,检测其对小细胞肺癌NCI-H446细胞增殖的影响。方法将mda-7/IL-24cDNA亚克隆至腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,在大肠杆菌BJ5183中将重组病毒穿梭质粒和骨架质粒重组。在HEK293细胞中进行病毒包装和扩增,用PCR方法鉴定后,通过TCID50法测定病毒滴度。用滴度为50pfu/细胞的重组腺病毒Ad·mda-7/IL-24感染NCI-H446细胞72h后,经MTT实验检测其对细胞增殖的影响,并用Westernblot方法检测mda-7/IL-24在NCI-446中的表达。结果核酸序列测定和PCR鉴定表明成功构建Ad·mda-7/IL-24;TCID50法测定扩增的腺病毒滴度为2×1010pfu/ml。Ad·mda-7/IL-24在NCI-H446细胞中表达MDA-7/IL-24,MTT检测表明Ad·mda-7/IL-24明显抑制NCI-H446细胞生长,抑制率为21·37%。结论重组腺病毒Ad·mda-7/IL-24能显著抑制NCI-H446细胞增殖,为研究mda-7/IL-24的作用机制及将其用于小细胞肺癌的基因治疗提供了条件。

癌特异性的细胞凋亡诱导因子MDA-7/IL-24的研究进展

黑色素瘤分化相关基因7（melanoma differ-entiation-associatedgene-7，MDA-7）最初是由Jiang等^[2]利用消减杂交法从β干扰素（IFN-β）和瑞香素（MEZ）诱导的终末分化人类黑色素瘤细胞中克隆到的基因。后来根据其结构序列的同源性，染色体的定位及类细胞因子的特点，被国际人类基因组织（HUGO）重新命名为IL-24。MDA-7／IL-4位于人类染色体的lq32-33，

过表达MDA-7/IL-24蛋白的亚细胞定位

目的了解标签蛋白GFP的位置对过表达的MDA-7/IL-24融合蛋白亚细胞定位的影响。方法分别构建在MDA-7/IL-24 cDNA的5'端和3'端带有GFP-tag的重组表达质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24,瞬时转染猴胚肾Cos7细胞,48h后用Hoechst 33258染核,在荧光显微镜下观察GFP-MDA-7/IL-24融合蛋白在Cos7细胞的亚细胞分布。结果测序表明重组质粒pEGFP-C1-mda-7/IL-24和pEGFP-N3-mda-7/IL-24构建正确;分别转染Cos7细胞后,在氨基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光均匀分布于胞浆和胞核,但在羧基端带有GFP-tag的MDA-7/IL-24融合蛋白表达阳性细胞中,绿色荧光则分布于核膜外侧和胞浆。结论GFP-tag位置的不同对过表达融合蛋白MDA-7/IL-24的亚细胞定位有显著的影响。

mda7-/IL2-4和IL2-4delE5诱导急性髓系白血病细胞向单核细胞分化

目的:研究人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)及其剪接体IL-24 delE5与急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞分化的关系。方法:十四烷酰佛波醇-乙酯(12-O-tetrade-canoylphorbol-13-acetate,TPA)处理人急性髓系白血病细胞系U937、HL-60,real-time PCR及Western blotting检测细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达,FACS检测细胞表面CD11b、CD14和CD115的表达。siRNA干扰U937、HL-60细胞中mda-7/IL-24和IL-24 delE5的表达后,再以TPA诱导细胞分化,FACS检测CD11b、CD14和CD115的表达。用前期构建的mda-7/IL-24和IL-24 delE5载体转染U937、HL-60及AML-M5患者的原代白血病细胞,观察异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5能否诱导白血病细胞向单核细胞分化。结果:TPA在诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化过程中显著促进mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达,用siRNA干扰mda-7/IL-24及IL-24 delE5的表达后,TPA诱导U937、HL-60细胞向单核细胞分化的作用也被阻断。异位过表达mda-7/IL-24和IL-24 delE5可诱导U937、HL-60以及原代AML细胞向单核细胞分化:U937、HL-60细胞表面CD11b和CD14表达均显著升高,CD115表达仅在U937细胞有显著升高;3例AML-M5患者的原代AML细胞中CD11b、CD14及CD115表达均有不同程度升高,细胞呈现单核细胞的形态特征。结论:TPA可通过上调mda-7/IL-24及其剪接体IL-24 delE5的表达诱导白血病细胞向单核细胞分化。

全反式维甲酸对乳腺癌MCF-7细胞MAGE家族分子表达的影响

研究全反式维甲酸(ATRA)在诱导乳腺癌MCF-7细胞分化和凋亡过程中黑色素瘤相关抗原基因(MelanomaAssociatedAntigen,MAGE)家族分子的表达水平的变化,从而为其功能研究提供线索。六孔培养板培养乳腺癌MCF-7细胞至对数生长期,给以终浓度为10-6mol/L的ATRA的刺激,于不同时间点(0h,12h,18h,24h,36h,48h)收集细胞,RT-PCR检测MAGE家族中(MAGE-A1、MAGE-C1、MAGE-D1、Necdin)分子的表达水平。结果ATRA诱导不同时间的MCF-7细胞MAGE家族分子表达水平呈现MAGE酸性亚家族(Ⅰ型抗原)表达逐步下调,而MAGE碱性亚家族(Ⅱ型抗原)表达逐步上升的趋势。说明MAGE家族酸性和碱性分子均参与ATRA诱导MCF-7细胞分化、凋亡,而且可能发挥作用是相反的。

重组腺相关病毒介导的MDA-7基因对人肝癌细胞的选择性凋亡诱导效应

目的探讨PEG启动子调控腺相关病人毒介导的黑色素瘤分化相关基因MDA-7对肝癌细胞的选择性凋亡诱导效应。方法以重组腺相关病人毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统感染人肝癌细胞株HepG2细胞和正常人肝细胞株L02细胞，Westerm Blot检测转染细胞内MDA-7蛋白，MTT法检测细胞增殖抑制率，流式细胞术分析细胞周期、Annexin—V、线粒体跨膜电位（△ψm），RT—PCR检测bcl-2基因mRNA。结果重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA7可特异性转染HepG2细胞，MDA7蛋白在HepG2细胞中高效表达，并呈时间依赖性；重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7可抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡，细胞周期分析处于G0／G1期细胞百分比明显增多，处于G2／M期的细胞减少，并且可见到较明显的凋亡峰的形成，从24h开始Annexin-V阳性细胞比例增多，△ψm降低，抗凋亡基因bcl-2mRNA表达降低。而重组腺相关病毒rAAu-PEG-MDA-7对LO2细胞无类似效应。结论构建出的重组腺相关病毒rAAV-PEG-MDA-7表达系统可选择性抑制肝癌细胞增殖和诱导其凋亡，其诱导凋亡机制受到bcl-2家族经线粒体途径的调节。

携带人黑色素瘤分化相关基因-7／白细胞介素-24基因的溶瘤腺病毒SG600-IL24和干扰素联合治疗裸鼠肝癌

目的利用携带人黑色素瘤分化相关基因（MDA）-7／白细胞介素（IL）-24基因的溶瘤腺病毒SG600-IL24与干扰素（IFN）联合治疗肝癌裸鼠移植瘤。方法构建携带人MDA-7／IL-24基因的溶瘤腺病毒SG600-IL24，单独使用该病毒或IFN以及两者联合治疗裸鼠肝癌模型，观察其抗肿瘤效应。结果成功构建携带人MDA-7／IL-24基因的溶瘤腺病毒SG600-IL24载体，SG600-IL24＋IFN联合治疗组裸鼠平均生存时间为（111．20±2．60）d，与其他3组[对照组为（35．20±1．53）d，IFN组为（67．60±2．10）d，SG600-IL24组为（59．20±1．16）d]比较生存期明显延长（P〈0．01），且有3例生存时间超过120d，达到长期生存；SG600-IL24＋IFN组裸鼠肝癌体积也明显小于SG600-IL24组或IFN组（P〈0．01）。结论溶瘤腺病毒SG600-IL24联合IFN对裸鼠人肝癌移植瘤模型有协同抗肿瘤作用。

携带人黑色素瘤分化相关基因-7/白细胞介素-24基因的溶瘤腺病毒SG600-IL24选择性促进肝癌细胞凋亡和增殖阻滞

目的观察携带人黑色素瘤分化相关基因（MDA）-7/白细胞介素（IL）-24的溶瘤腺病毒SG600-IL24对各种不同转移潜能肝癌细胞HepG2、Hep3B、SMMC7721和正常肝细胞L02的作用。方法将携带人MDA-7/IL-24的溶瘤腺病毒SG600-IL24分别感染人肝癌细胞HepG2、Hep3B、SMMC7721和正常肝细胞L02，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、Western blot检测MDA-7/IL-24基因的表达，噻唑蓝（MTT）观察肝癌细胞的生长抑制，Hoechst 33258和流式细胞仪（FCM）检测细胞的凋亡，FCM检测细胞周期。结果RT-PCR和Western blot显示MDA-7/IL-24在肝癌细胞和正常肝细胞中高效表达，ELISA提示细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白也明显增加。MTT和FCM提示MDA-7/IL-24能明显抑制肝癌细胞的生长[生长抑制率分别为（75.0±2.5）%、（85.0±2.0）%、（86.0±3.5）%，HepG2：F=5.860，Hep3B：F=7.210，SMMC7721：F=7.980，均P=0.000]，促进肝癌细胞凋亡[凋亡抑制率分别为（56.5±4.0）%、（34.4±2.0）%、（43.3±2.5）%，HepG2：F=203.400，Hep3B：F=313.200，SMMC7721：F=130.500，均P=0.000]，阻滞肝癌细胞在G2/M期[G2/M期阻滞分别为（35.4±4.2）%、（47.3±6.2）%、（40.5±5.0）%]，而对正常肝细胞没有明显的促进凋亡和增殖阻滞作用。结论溶瘤腺病毒SG600-IL24能选择性杀伤不同转移潜能人肝癌细胞和诱导凋亡，促进肝癌细胞增殖阻滞，而对正常肝细胞无明显促进凋亡和增殖阻滞作用。

黑色素瘤分化相关基因-7逆转上皮-间充质转化抑制肝癌细胞的侵袭转移机制

目的观察黑色素瘤分化相关基因-7／白细胞介素-24（MDA-7／IL-24）基因对肝癌细胞株MHCC97-H侵袭转移及上皮一间充质转化（EMT）特性的影响。方法构建携带MDA-7／IL-24基因的腺病毒载体，转染肝癌细胞株MHCC97-H，噻唑蓝（MTT）、免疫荧光检测转染效率。采用Transwell侵袭实验和迁移实验分别检测未转染细胞（空白对照组）、转染阴性对照组（Ad．vec组）和实验组（转染Ad．MDA-7细胞组）侵袭转移能力。镜下观察转染前后细胞形态的变化，免疫荧光检测转染前后细胞上皮表型蛋白和间质表型蛋白的定位和表达，实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测转染后细胞MDA-7／IL-24基因的表达，Westernblot检测E-钙黏蛋白（E-cad）、N-钙黏蛋白（N-cad）、波形蛋白（Vim）蛋白的表达。结果MDA-7／IL-24可以有效转染肝癌细胞株MHCC97-H，稳定表达MDA-7／IL-24mRNA（空白组：2．042±0．915比Ad．MDA-7组：37．512±2．354，P〈0．05）和蛋白。转染MDA-7／IL-24的肝癌细胞株MHCC97-H较空白对照组和阴性对照组侵袭迁移能力明显受到抑制（实验组迁移率：空白组迁移率=1．00：0．46，实验组侵袭率：空白组侵袭率=1．00：0．61，P〈0．01）。镜下观察肝癌细胞株MHCC97-H转染MDA-7／IL-24后，由成纤维细胞纺锤体样、排列分散，转变为细胞排列紧密如圆形或椭圆形铺路石样。免疫荧光可见肝癌细胞株MHCC97-H转染后细胞膜表达的E-cad荧光由胞质转移至细胞周边浓聚，而Vim的荧光强度较前下降。Westernblot进行蛋白定量分析，转染后MHCC97-H细胞上皮表型标志性蛋白E-cad表达量增高，间质表型标志性蛋白Twist、Vim表达降低，差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论再表达MDA-7／IL-24基因的MHCC97-H细胞可以增加上皮表型蛋白表达，减少间质表型蛋白，改变细胞骨架构型，逆转肝癌细胞EMT过程，使肿瘤细胞侵袭能力减弱。

腺病毒介导的黑色素瘤分化相关基因-7抑制内质网应激蛋白表达阻滞MHCC-97H血管形成及转移机制的研究

目的 探讨黑色素瘤分化相关基因（MDA）-7抑制内质网应激蛋白表达,以及阻滞MHCC-97H血管形成的机制.方法 以人肝癌细胞株MHCC-97H为实验对象,使用噻唑蓝（MTT）法和流式细胞仪比较Ad.MDA-7及对照组、缺氧组及正氧组的细胞生存率,比较缺氧环境中,MHCC-97H凋亡率的变化.荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测MDA-7、细胞外信号调节激酶（ERK）、E-钙黏蛋白（E-cad）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶（MMP）-9 mRNA的变化.Western blot检测MDA-7、蛋白激酶样内质网激酶（PERK）、E-cad、VEGF、MMP-9蛋白表达的变化.结果 MTT表明缺氧条件下,正氧组正常肝细胞LO2生长抑制率分别为（12.60±4.85）％,（7.80±0.61）％,Ad.MDA-7对正常肝细胞LO2无生长抑制作用.肝癌细胞株MHCC-97H生长抑制率缺氧组,正氧组分别为（5.10±0.09）％、（4.80±0.05）％.缺氧环境中,ERK、VEGF和MMP-9空白组及空白对照组mRNA表达量为[（18.042 ±5.915）/（17.512 ±6.354）、（22.654±5.976）/（22.587 ±7.741）、（22.654±2.789）/（22.587±8.551）]高于正氧组[（10.987±2.514）/（12.347±4.385）、（15.321 ±4.262）/（15.634 ±8.521）、（15.321 ±6.384）/（15.634±4.423）].缺氧环境中,E-cad mRNA空白组及空白对照组[（6.427 ±0.512）/（6.042±1.972）]表达低于正氧组[（10.987±2.514）/（12.347 ±4.385）],而Ad.MDA-7干预后,ERK、VEGF和MMP-9 mRNA缺氧组及正氧组表达量降低[（4.117±1.843）/（5.683±0.794）、（5.371 ±0.541）/（4.209 ±0.348）、（5.371 ±0.941）/（4.209±0.265）],E-cad表达量明显增加[（19.573 ±5.971）/（21.309±8.544）].PERK、VEGF和MMP-9蛋白表达与mRNA一致.结论 缺氧环境中,肝癌细胞株MHCC-97H生长抑制率与正氧环境中差异无统计学意义,MDA-7基因明显抑制PERK表达,抑制肝癌细胞血管生成作用.同时,MDA-7基因增强E-cad表达,协同其作用,抑制肿瘤细胞转移.

奥曲肽联合腺相关病毒介导的黑色素瘤分化相关基因7对肝癌的抑制作用

目的观察不同剂量的奥曲肽联合PEG启动子调控的黑色素瘤分化相关基因7表达重组腺相关病毒系统（rAAV－PEG－MDA－7）对非肥胖糖尿病．重症联合免疫缺陷（NOD－SCID）小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。方法构建rAAV－PEG－MDA－7表达系统并建立肝癌细胞株HepG2的NOD－SCID小鼠皮下移植瘤模型，以尾静脉注射rAAV－PEG空载体±肿瘤周边皮下注射生理盐水为对照，按照尾静脉注分射不同病毒量的rAAV－PEG－MDA－7及肿瘤周边皮下注射不同剂量的奥曲肽组合为8个实验组。注射药物后21d处死小鼠，比较各组小鼠移植瘤质量。结果单独应用rAAV－PEG－MDA－7或奥曲肽均能抑制小鼠移植瘤的生长。不同剂量的奥曲肽（5μg／kg、30μg／kg）与低剂量MDA－7（1×10＾－11 particles）联用时，可以增加MDA－7的抑制肿瘤作用[（1．14±0．24）g，（0．98±0．11）g比（1．71±0．26）g，均P〈0．05]；不同剂量奥曲肽（5Iμg／kg）与高剂量MDA．7（5×10＾11particles）联用时，亦可增加MDA－7的抑制肿瘤作用[（1．05±0．21）g、（0．90±0．18）g比（1．41±0．20）g，均P〈0．05]。不同剂量MDA－7（1×10＾11 particles、5×10＾11 particles）与低剂量奥曲肽（5pμg／kg）联用时，可以增加奥曲肽的抑制肿瘤作用[（1．14±0．24）g、（1．05±0．21）g比（1．68±0．18）g，均P〈0．05]；不同剂量MDA－7（1×10＾11 particles、5×10＾11 particles）与高剂量奥曲肽（30斗g，l【g）联用时，亦可增加奥曲肽的抑制肿瘤作用[（0．98±0．11）g、（0．90±0．18）g比（1．34±0.12）g，均P〈0．05]。结论MDA－7与奥曲肽联合应用可以增强对小鼠肝癌移植瘤的抑制作用。