α黑素细胞刺激素及其类似物对内毒素休克小鼠的保护作用

目的 研究α黑素细胞刺激素 (α -NSH)及其类似物 (NDP -MSH)对内毒素休克小鼠的保护作用。方法 腹腔注射LPS 5 0 μg/kg和D -半乳糖 (D -Gal) 90 0mg/kg复制小鼠内毒素休克模型 ,研究不同剂量α -MSH及NDP -MSH在不同时间或经不同途径给药对内毒素休克小鼠生存率的影响。用常规病理切片观察α -MSH对内毒素休克小鼠重要脏器病理变化的影响。结果 未给予α-MSH的内毒素休克小鼠在 9h内全部死亡 ,经尾静脉、腹腔和皮下注射α -MSH 2 5mg/kg或 5 0mg/kg均可以起到一定的保护作用 ;给予LPS前后不同时间注射 2 5mg/kgα -MSH都可以明显延长内毒素休克小鼠起始死亡的时间 ,提高存活率 ,其中以给予LPS后 1h经腹腔给药疗效最好 ,72h的生存率达 33 3% ,但增加给药次数未见疗效提高。经腹腔注射 2 5mg/kgNDP -MSH ,小鼠平均起始死亡时间较α-MSH组延长 4h ,72h的生存率升至 44 4%。病理学检查结果表明浕 -MSH可以减轻LPS引起的肝脏、脾脏及肺脏瘀血及细胞坏死。结论 α -MSH及NDP -MSH可以减轻LPS引起的小鼠重要脏器的病理损害 。

利用DHPLC研究我国几个地方绵羊品种黑素细胞刺激素受体基因单核苷酸多态性(英文)

利用测序及变性高效液相色谱 (DHPLC)研究了蒙古羊、哈萨克羊、滩羊和藏绵羊黑素细胞刺激素受体(MSHR)基因单核苷酸多态性 (SNP)。结果表明 ,在扩增片断长度为 4 15bp范围内存在一个T317C突变 ,DHPLC可检测到该突变并被证明是一种高通量且简便的筛选方法。通过两次DHPLC可确定两个杂合子和一个纯合子 ,第一次DHPLC可迅速检测出由于形成异源双链而呈肩峰的杂合子 (TC) ,但不能区分两个均呈单峰的纯合子 (TT或CC)。第二次DHPLC将未知纯合子与已知序列的纯合子混合后进行 ,通过判定单峰或肩峰即可推断未知纯合子的基因型。所研究的 4个绵羊群体在该突变位点均处于Hardy Weinberg平衡状态。

刺蒺藜对小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响

目的观察刺蒺藜水提物对C57BL/6J小鼠毛囊黑素细胞刺激素表达的影响,探讨刺蒺藜在毛囊休眠期黑素细胞活化、增殖及移行至表皮过程中的作用。方法选择在离体实验中对酪氨酸酶有激活作用、对黑素细胞有增殖作用及在临床应用中对白癜风有治疗作用的中药刺蒺藜,用SPF级C57BL/6J小鼠为实验动物,采用免疫组织化学技术观察高剂量(相当于成人1g/(kg·d)刺蒺藜水提物灌服后小鼠毛囊黑素细胞刺激素水平的变化,并用χ2检验进行统计学分析。结果黑素细胞刺激素在试验组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为75.00%,在对照组小鼠毛囊细胞中阳性表达率为18.75%,两者比较有显著性差异(P<0.01)。结论高剂量刺蒺藜水提物可以提高小鼠毛囊黑素细胞刺激素的表达水平,并可能通过上调毛囊黑素细胞刺激素表达这一途径来活化酪氨酸酶、促进毛囊休眠期黑素细胞的增殖、移行及黑素合成。

α-黑素细胞刺激素对皮肤黑素合成的调控作用

皮肤色素异常是整形美容外科常见的问题 ,目前还无较好的解决方法 ,主要是对皮肤色素沉着的机制还不完全清楚。近年来 ,逐步认识到α 黑素细胞刺激素 (α melanocyte stimulatinghormone ,α MSH)与黑素的合成有密切关系。α MSH通过与其黑素细胞表面受体—黑皮素 1受体 (melanocortin 1receptor,MC 1R)结合 ,使黑素细胞内酪氨酸酶的表达增加、活性增强 ,黑素合成增加并优先刺激优黑素细胞的合成 ;α MSH还可促进黑素细胞的增生和树突形成及黑素小体的转运 ,同时α MSH对黑素细胞的免疫保护作用及与其他外源性刺激因素协同作用而调控皮肤的色素沉着过程。α MSH的内源性拮抗剂刺鼠信号蛋白 (ASIP)可明显减弱其黑素合成作用 ,降低皮肤的着色能力。随着对α MSH调控黑素合成作用的更进一步了解 ,必将为解决临床上获得性色素沉着或色素脱失性疾病提供一种新的治疗方法。

α黑素细胞刺激素对大鼠胶原性关节炎软骨破坏的抑制作用

目的 :研究 α黑素细胞刺激素 (α- melanocyte- stim ulating horm one,α- MSH)对大鼠胶原性关节炎 (collagen- inducedarthritis,CIA)软骨破坏的保护作用及其机制。 方法 :建立大鼠 CIA动物模型 ,随机分为 3组 :正常对照组 ,CIA组和 α- MSH注射组 ,每组 8只。于致敏建模当天起连续腹腔注射 α- MSH或 PBS,比较各组大鼠组织病理学及 X线放射学表现。收集 CIA组牛 型胶原 (b C )诱导的大鼠淋巴细胞和 L PS诱导的大鼠腹腔巨噬细胞 ,加入不同浓度的 α- MSH(10 - 1 2～ 10 - 6 mol/ L)后 ,分别培养 4 8h和 2 4 h收集上清 ,应用 EL ISA法测定 IL- 1β和 IL- 10含量 ,MTT法测定 TNF- α浓度 ,硝酸还原酶法测定一氧化氮 (NO)水平。 结果 :α- MSH可改善关节炎大鼠病灶的病理及 X线表现 ,抑制关节软骨破坏。给予α- MSH后 ,CIA大鼠腹腔巨噬细胞和淋巴细胞上清中 IL - 1β、TNF-α及 NO水平明显下降 ,IL - 10含量则明显升高。 结论 :α- MSH对关节炎大鼠软骨破坏具有抑制作用 ,其机制可能与调节细胞因子及

α-黑素细胞刺激素处理的树突状细胞对小鼠心脏移植物存活时间的影响

目的:观察α黑素细胞刺激素(αMSH)处理的小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)预防同种异基因小鼠心脏移植排斥反应的效果。方法:在供者BALB/c小鼠DC培养的过程中加入αMSH,用流式细胞仪分析DC的表型变化,用ELISA方法检测培养上清中IL 12的分泌水平。在同种异基因心脏移植前,分别将αMSH处理后7 d的DC(αMSH DC)和正常培养7 d的DC(Day7 DC)输至受者C57BL/6小鼠体内,并另设输入PBS的小鼠为对照组,通过颈部Cuff法小鼠异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,并用ELISA方法测定受者血清细胞因子水平的变化。结果:αMSH DC表面分子的表达明显低于Day7 DC。αMSH DC培养上清中分泌IL 12 [(95.2±6.3) pg/ml]的水平也明显低于Day7 DC[(197.1±10.2) pg/ml]。与PBS组[(7.17±0.26) d]相比,Day7 DC组[(6.25±0.61) d]的心脏移植物存活时间缩短;而αMSH DC组[(15.08±1.32) d]的心脏移植物存活时间明显延长。与Day7 DC和PBS组相比,αMSH DC组移植后血清IL 2 和IFN γ细胞因子水平明显降低。结论:αMSH可以抑制体外培养的DC表面分子的表达和IL 12的分泌;αMSH处理的DC在体内能延长同种异基因心脏移植物的存活时间。

刺蒺藜对豚鼠皮肤黑素细胞刺激素表达影响的研究

目的:观察刺蒺藜水提物对豚鼠皮肤黑素细胞刺激素表达的影响,探讨刺蒺藜水提物在皮肤黑素细胞增殖和迁移过程中的作用。方法:所用实验动物为棕黄色普通级豚鼠,采用免疫组织化学技术检测高剂量〔每只豚鼠5.55g/(kg.d),相当于成人60g/(60kg.d)〕刺蒺藜水提物灌服后豚鼠皮肤黑素细胞刺激素水平的变化,并用χ2检验进行统计学分析。结果:试验组豚鼠皮肤黑素细胞中阳性表达率为75%,对照组豚鼠皮肤黑素细胞中阳性表达率为25%,两者比较有显著性差异(P<0.01)。结论:高剂量刺蒺藜水提物可以提高豚鼠皮肤黑素细胞刺激素的表达水平。并可能通过上调皮肤黑素细胞刺激素表达这一途径,来活化酪氨酸酶、促进黑素细胞的增殖、迁移及黑素合成。

α-黑素细胞刺激素在自体移植皮片中的mRNA表达及意义

目的初步探索α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-stimulatinghormone,α-MSH)在自体移植皮片过度色素沉着中的作用。方法标本取自颈部自体中厚移植皮片术后1年,局部需再次矫正的18例患者。在切取颈部自体中厚移植皮片同时于每例移植皮片受区及原供区腹部周围分别切取正常皮肤作对照,切取范围1.0cm×0.5cm。分别利用RT-PCR、银染-丽春红染色法计算自体中厚移植皮片、原供区及受区周围自体正常对照皮肤中α-MSHmRNA电泳条带及表皮的灰度值,测定各组中α-MSHmRNA的半定量表达及黑色素的含量。结果α-MSH在自体中厚移植皮片中的mRNA表达明显高于自体正常对照皮肤,差异有统计学意义(P<0.01);自体中厚移植皮片表皮中黑色素含量较自体正常对照皮肤表皮中的黑色素含量明显增多,差异亦有统计学意义(P<0.01);且表皮中黑色素的含量与α-MSH的mRNA表达量呈正相关。结论α-MSH在自体中厚移植皮片中的表达较在自体正常对照皮肤中显著增高,致皮片中黑色素含量升高,在自体移植皮片过度色素沉着中起重要调控作用。

Alpha-黑素细胞刺激素对内毒素血症小鼠肝肺组织表达高迁移率族蛋白1的抑制作用

目的研究Alpha-黑素细胞刺激素(α-MSH)对内毒素血症小鼠肝、肺组织中表达高迁移率族蛋白1(HMGB1)的调控作用。方法腹腔内注射(ip)LPS(25g/kg)和D-Gal(100mg/kg)建立内毒素血症小鼠模型,分别在LPS刺激小鼠1、2、3h后腹腔注射α-MSH(2.5mg/kg),24h后处死小鼠,取小鼠肺、脑、脾、肝、肾组织,应用RT-PCR和Westernblot的方法,从基因、蛋白两个水平检测α-MSH对HMGB1表达的调节作用。结果HMGB1mRNA及蛋白在内毒素血症小鼠肺、脑、脾、肝、肾中均有表达,但在肝、肺中的表达量高于其他组织;于LPS刺激小鼠3h之内腹腔注射α-MSH,能显著下调HMGB1mRNA及蛋白的表达,并且1h之内给药效果最理想。结论α-MSH能有效抑制内毒素血症小鼠肝、肺组织中HMGB1的表达。

碱性成纤维细胞生长因子和α-黑素细胞刺激素对体外培养黑素细胞黏附和迁移的影响

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和α-黑素细胞刺激素(-αM SH)对黑素细胞黏附、迁移的影响。方法:从正常人包皮分离、纯培养黑素细胞,分别用bFGF和-αM SH处理培养黑素细胞;采用纤维连接素包裹的培养板观测黑素细胞黏附,用T ransw ell微孔膜法研究黑素细胞迁移。结果:bFGF和-αM SH均可促进黑素细胞黏附于培养板,bFGF可诱导黑素细胞迁移并呈剂量依赖性(P<0.05),-αM SH对黑素细胞迁移无明显影响(P>0.05)。结论:bFGF和-αM SH可以诱导黑素细胞的黏附和/或迁移,参与白癜风的恢复。

α-黑素细胞刺激素对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度的影响

目的:探讨α黑素细胞刺激素(αMSH)对体外培养黑素细胞迁移和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响。方法:从正常人包皮分离并纯培养黑素细胞,用αMSH处理纯培养的人表皮黑素细胞,用Transwell微孔膜法研究黑素细胞迁移,激光共聚焦扫描显微镜检测[Ca2+]i。结果:αMSH可诱导黑素细胞迁移,并使[Ca2+]i浓度升高。结论:αMSH可能通过诱导黑素细胞内的Ca2+浓度升高,从而促进黑素细胞的迁移。

α-黑素细胞刺激素对恶性黑色素瘤细胞Fas/FasL表达的影响及其与凋亡的关系

目的:研究α黑素细胞刺激素(αMSH)对恶性黑色素瘤细胞凋亡特性的影响。方法:采用流式细胞检测分析、DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测α黑素细胞刺激素作用后恶性黑色素瘤细胞的凋亡情况,应用RT PCR检测恶性黑色素瘤细胞Fas/FasLmRNA的表达情况。结果:α黑素细胞刺激素作用1、3、24小时恶性黑色素瘤细胞凋亡率分别为14.9%、33.7%、46.7%,α黑素细胞刺激素能明显上调恶性黑色素瘤细胞Fas/FasL的表达,各处理组间差异比较均具有显著性(P<0.05);α黑素细胞刺激素作用24小时组细胞的DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯状(ladder)”条带。结论:α黑素细胞刺激素能上调恶性黑色素瘤细胞Fas/FasL的表达并诱导恶性黑色素瘤细胞的凋亡。

Alpha-黑素细胞刺激素及其新型类似物对小鼠脑微血管内皮细胞产生组织因子的抑制作用

目的：研究Alpha-黑素细胞刺激素（α-MSH）及其新型类似物（STY39）对原代小鼠脑微血管内皮细胞（ MBMEC）在脂多糖（ LPS）刺激下产生组织因子（ TF）和组织因子途径抑制物（ TFPI）的影响。方法选用雌性BALB/c小鼠,纯化并原代培养MBMEC,培养至57 d,采用免疫荧光法检测Ⅷ因子相关抗原,鉴定MBMEC模型。将MBMEC分为PBS对照组,LPS刺激组,LPS刺激后1、2、3 h加入10-7mol/L的α-MSH或STY39组（LPS＋α-MSH,LPS＋STY39）,共8组,每组4孔。分别在LPS刺激后6 h和8 h收集细胞培养上清液和细胞,应用酶联免疫吸附法检测细胞上清液的TF和TFPI浓度,RT-PCR检测细胞TF mRNA表达水平。结果（1） LPS 可诱导 MBMEC 产生 TF 和TFPI蛋白,细胞培养上清液中TF水平于6 h达到高峰, TFPI水平于8 h达到高峰。（2） LPS刺激 MBMEC后1、2、3 h给予10-7mol/L的α-MSH或 STY39,均可显著降低细胞上清液中 TF蛋白含量（P〈0.01）,尤其在 LPS刺激后1 h给予α-MSH 或 STY39的效果最显著（P 〈0.05）, STY39降低TF含量的作用较α-MSH明显（P〈0.05）；但α-MSH和STY39对LPS诱导MBMEC产生TFPI均没有显著的上调作用。（3）在LPS刺激后不同时间点给予10-7mol/L的α-MSH 或STY39,均可显著下调MBMEC TF mRNA的表达水平（P〈0.01）,其中1 h时间点作用最显著（P〈0.05）,但α-MSH与STY39的作用差异无统计学意义。结论α-MSH和 STY39均能抑制LPS诱导原代 MBMEC 产生 TF 蛋白和表达 TF mRNA,且 LPS 刺激1 h 后给药效果较好；STY39对MBMEC产生TF蛋白的抑制作用优于α-MSH。

新型α-黑素细胞刺激素类似物对内毒素休克小鼠的保护作用

目的:评价新型α-黑素细胞刺激素(α-MSH)类似物对内毒素休克小鼠的保护作用。方法:雌性BALB/c小鼠经腹腔注射(ip)1μg脂多糖(LPS)和20 mg D-半乳糖胺(D-GalN)建立内毒素休克模型,30 min内ip给予2．5 mg·kg^(-1)新型α-MSH类似物,同时设置α-MSH,[Nle^4,D-Phe^7]α-MSH(NDP-MSH)和磷酸盐缓冲液对照。取小鼠眼眶血分离血清,以ELISA法测定TNF-α和IL-1β含量,用Griess试剂检测NO。观察小鼠生存情况,取主要脏器做常规组织病理检查。结果:新型α-MSH类似物能明显延长内毒素休克小鼠存活时间,其中位生存时间为32 h;显著降低血清TNF-α,IL-1β和NO水平(P＜0．01),并减轻重要脏器的炎症损伤。结论:新型α-MSH类似物对内毒素休克小鼠有显著的保护作用。

在羊驼皮肤黑色素细胞中α-黑素细胞刺激素对诱导一氧化氮合酶的影响

为研究α-黑素细胞刺激素(α-Melanocyte stimulating hormone,α-MSH)对诱导型一氧化氮合酶(NOS2)在羊驼皮肤黑素细胞中的影响。采用体外培养正常羊驼皮肤黑素细胞,检测不同浓度α-MSH(0、10-9、10-8、10-7mol/L)对羊驼皮肤黑素细胞中诱导型一氧化氮合酶(NOS2)基因表达量的影响;检测不同浓度一氧化氮供体(SNP)(0、10-5、10-4、10-3mol/L)对羊驼皮肤黑素细胞中阿黑皮素原(POMC,α-黑素细胞刺激素的前体)基因表达量的影响。结果表明:α-MSH处理羊驼皮肤黑素细胞5 d后,NOS2mRNA表达量有降低趋势,10-8mol/L较为明显;SNP处理5 d后,POMCmRNA表达量无明显变化。α-MSH能诱导羊驼皮肤黑素细胞NOS2mRNA基因表达量降低。

α-黑素细胞刺激素在不同实验动物表皮中的表达及意义

[目的]初步研究α-黑素细胞刺激素(α-melanocyte-sti mulating hormone,α-MSH)在不同实验动物表皮中的表达并阐明其意义,为色素障碍性皮肤病动物实验提供新的理论依据。[方法]对4组不同正常实验动物的表皮标本进行组织切片,应用免疫组织化学技术,观察α-MSH在4组不同实验动物表皮中的表达。[结果]α-MSH在白色昆明小鼠毛囊及白色FMN豚鼠表皮中呈阴性表达,在C57BL/6J小黑鼠毛囊黑素细胞及棕黄色HARTLY豚鼠表皮黑素细胞中呈阳性表达。[结论]白色昆明小鼠及白色FMN豚鼠适宜做色素增加动物实验研究,C57BL/6J小黑鼠及棕黄色HARTLY豚鼠适宜做色素减退动物实验研究;α-MSH可做为观测色素代谢障碍性疾病动物实验研究的一个重要指标。

新型α-黑素细胞刺激素类似物亲和力和生物学效应的测定

检测新型α-黑素细胞刺激素(α-MSH)类似物与受体的亲和力和生物学效应。构建黑皮质激素受体表达质粒,经测序鉴定后以磷酸钙-DNA共沉淀法转染HEK-293细胞,48h后加入含900μg.mL-1G418的细胞维持液,稳定表达后以流式细胞仪检测。采用放射性配体结合分析测定新型α-MSH类似物对受体的亲和力,并以[3H]环磷酸腺苷(cAMP)测定盒检测新型α-MSH类似物作用细胞后的cAMP水平。结果显示,新型α-MSH类似物对MC1R,MC3R,MC4R及MC5R的抑制常数Ki分别为(0.159±0.040),(35.430±6.743),(19.293±2.780)和(2.230±0.670)nmol.L-1。其对MC1R,MC3R,MC4R及MC5R的EC50值分别为(0.45±0.07),(7.80±0.65),(2.55±0.23)和(0.33±0.09)nmol.L-1。新型α-MSH类似物是MC1R和MC5R高选择性的激动剂。

α-黑素细胞刺激素对同种异体小鼠异位心脏移植排斥反应的抑制作用

目的观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对同种异基因小鼠移植心脏存活时间的影响,以了解其在移植免疫中的作用。方法小鼠颈部心脏移植的Cuff模型,腹腔给予α-MSH,观察移植心脏的存活时间和病理改变。结果移植小鼠给予α-MSH后,移植心脏的存活时间比对照组显著延长,心脏病理显著改善,其中以50μg组效果最佳。结论α-MSH能抑制同种异基因小鼠的心脏移植排斥反应。

α-黑素细胞刺激素基因修饰的树突状细胞延长小鼠移植心脏的存活时间

为观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)基因修饰的树突状细胞(DC)抑制同种异型基因小鼠心脏移植排斥反应的效果,以腺相关病毒(AAV)为载体将α-MSH基因导入BALB/c小鼠骨髓来源的未成熟DC,制备了α-MSH基因修饰的DC(α-MSH-DC)。在小鼠心脏移植前7 d,将α-MSH-DC输至受者C57BL/6小鼠体内,通过免疫组化方法观察供者α-MSH-DC在受者脾脏内存在的情况,用混合淋巴细胞反应(MLR)测定受者脾脏T细胞对供者同种抗原的反应性。通过颈部Cuff法小鼠异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,并用ELISA方法测定受者血清细胞因子水平的变化。结果显示,α-MSH-DC在受者脾脏内存在时间延长,能诱导受者脾脏T细胞的抗原特异性低反应性,使移植心脏存活天数延长至(19.3±2.35)d,较PBS对照组的(7.0±0.33)d明显延长(P<0.01)。使受者小鼠血清IL-2和IFNγ-水平显著降低(P<0.01),明显升高IL-4、IL-10水平(P<0.01)。表明移植前输入供者α-MSH基因修饰的DC能延长同种异型基因心脏移植的存活时间。

α-黑素细胞刺激素对缺血再灌注损伤大鼠肠黏膜免疫功能的影响

目的 :探讨α 黑素细胞刺激素 (α MSH )对缺血再灌注 (I/R)损伤大鼠肠黏膜免疫屏障的保护作用及机制。方法 :采用大鼠小肠缺血 45min再灌注模型 ,治疗组于再灌注 5min内尾静脉注射α MSH。于再灌注后 2h用免疫放射法测定血清、肠黏膜组织中分泌型免疫球蛋白A (sIgA)的含量 ;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法 (MTT)测定Peyer’s淋巴结 (PP)、上皮内淋巴细胞 (IEL)和固有层淋巴细胞 (LPL)增殖活力。结果 :肠I/R后血清和肠黏膜中sIgA含量下降 ,淋巴细胞增殖活性下降 (P <0 0 1) ;不同剂量的α MSH治疗组均能逆转I/R后sIgA含量下降和淋巴细胞增殖活力下降 ,差异有显著意义 (P <0 0 1) ,而不同剂量α MSH治疗组间各指标无显著性差异 (P >0 0 5 )。结论 :外源性α MSH可参与调节肠道相关淋巴组织免疫功能 。