利用DHPLC研究我国几个地方绵羊品种黑素细胞刺激素受体基因单核苷酸多态性(英文)

利用测序及变性高效液相色谱 (DHPLC)研究了蒙古羊、哈萨克羊、滩羊和藏绵羊黑素细胞刺激素受体(MSHR)基因单核苷酸多态性 (SNP)。结果表明 ,在扩增片断长度为 4 15bp范围内存在一个T317C突变 ,DHPLC可检测到该突变并被证明是一种高通量且简便的筛选方法。通过两次DHPLC可确定两个杂合子和一个纯合子 ,第一次DHPLC可迅速检测出由于形成异源双链而呈肩峰的杂合子 (TC) ,但不能区分两个均呈单峰的纯合子 (TT或CC)。第二次DHPLC将未知纯合子与已知序列的纯合子混合后进行 ,通过判定单峰或肩峰即可推断未知纯合子的基因型。所研究的 4个绵羊群体在该突变位点均处于Hardy Weinberg平衡状态。

卵泡刺激素受体基因多态性与多囊卵巢综合征关系的研究进展

多囊卵巢综合征(PCOS)是一种高度异质性生殖内分泌紊乱性疾病,对女性生活产生极大影响。卵泡刺激素(FSH)通过与分布在性腺上的特异性卵泡刺激素受体(FSHR)结合,起到促进和维持正常的性腺发育和生殖功能,FSHR是PCOS易感基因的位点之一。近年来,FSHR基因多态性相关研究较多,FSHR基因突变可降低FSH敏感性,雄激素水平升高,导致排卵功能障碍,影响辅助生殖等。本文对FSHR基因多态性及其对PCOS的影响进行综述,为PCOS发病风险的评估及其遗传学相关研究提供一定的理论依据。

α-黑素细胞刺激素基因修饰的树突状细胞延长小鼠移植心脏的存活时间

为观察α-黑素细胞刺激素(α-MSH)基因修饰的树突状细胞(DC)抑制同种异型基因小鼠心脏移植排斥反应的效果,以腺相关病毒(AAV)为载体将α-MSH基因导入BALB/c小鼠骨髓来源的未成熟DC,制备了α-MSH基因修饰的DC(α-MSH-DC)。在小鼠心脏移植前7 d,将α-MSH-DC输至受者C57BL/6小鼠体内,通过免疫组化方法观察供者α-MSH-DC在受者脾脏内存在的情况,用混合淋巴细胞反应(MLR)测定受者脾脏T细胞对供者同种抗原的反应性。通过颈部Cuff法小鼠异位心脏移植模型,观察心脏移植物存活时间,并用ELISA方法测定受者血清细胞因子水平的变化。结果显示,α-MSH-DC在受者脾脏内存在时间延长,能诱导受者脾脏T细胞的抗原特异性低反应性,使移植心脏存活天数延长至(19.3±2.35)d,较PBS对照组的(7.0±0.33)d明显延长(P<0.01)。使受者小鼠血清IL-2和IFNγ-水平显著降低(P<0.01),明显升高IL-4、IL-10水平(P<0.01)。表明移植前输入供者α-MSH基因修饰的DC能延长同种异型基因心脏移植的存活时间。

α黑素细胞刺激素基因转染对小鼠骨髓来源的树突状细胞成熟的影响

为观察转染α黑素细胞刺激素(-αMSH)基因的树突状细胞(DC)的功能和特性,以腺相关病毒(AAV)为载体将α-MSH基因导入小鼠骨髓来源的未成熟DC(-αMSH-DC),用ELISA检测-αMSH-DC培养上清中-αMSH及IL-12水平,用流式细胞仪分析-αMSH-DC表面分子的表达,以-αMSH-DC提呈OVA抗原刺激致敏T细胞,通过ELISA测定IL-2水平来观察其抗原提呈功能。结果显示,在-αMSH-DC培养上清中检测到-αMSH的分泌,-αMSH-DC表面分子表达下调,分泌IL-12的能力降低,抗原提呈功能被抑制。-αMSH-DC可部分抵抗LPS上调表面分子表达和促进IL-12分泌的作用。表明-αMSH基因可籍AAV载体导入未成熟DC,并有效地表达,α-MSH基因修饰的DC成熟受到抑制。

α-黑素细胞刺激素及黑皮质素受体-4在能量平衡和繁殖中的功能研究

阿片黑素促皮质激素原(POMC)是黑皮质激素的前体物质,在机体中广泛分布。近年来,POMC及其衍生物黑素细胞刺激素(MSH)和黑皮质素受体-4(MC4R)在能量稳态和繁殖活动中的作用备受关注。研究发现,POMC神经元及其加工后的产物对摄食和体重的调节具有重要作用。此外,POMC神经元在下丘脑中与GnRH神经元紧密接触,由其产生的神经递质和神经肽可能对GnRH神经元具有重要的输入作用,从而直接或间接地调控下丘脑–垂体–性腺轴(HPG)中繁殖相关激素的合成并影响生殖活动。本文综述了黑皮质素系统对能量稳态和繁殖活动的调控作用以及目前MC4R在硬骨鱼类中的药理学研究,以期其能够在动物的生长发育和繁殖中具有应用前景。

α-黑素细胞刺激素作用后高糖高脂下视网膜血管内皮细胞差异表达基因分析

目的探讨α-黑素细胞刺激素(α-MSH)对高糖高脂刺激下视网膜血管内皮细胞中mRNA及长链非编码RNA(lncRNA)表达的影响。方法对恒河猴视网膜血管内皮细胞系(RF/6A)进行培养,将细胞分为正常对照组、模型对照组、0.1μmol/Lα-MSH处理组、0.5μmol/Lα-MSH处理组和1.0μmol/Lα-MSH处理组。各组细胞进行CM-H2DCFDA染色,检测细胞抗氧化能力,筛选α-MSH的最佳工作浓度。正常对照组、模型对照组和α-MSH处理组细胞处理后24 h,收集各组细胞提取总RNA,经高通量RNA测序(RNA-seq)构建RNA测序文库并进行生物信息学分析。结果0.5μmol/Lα-MSH组细胞荧光强度明显低于模型对照组,差异有统计学意义(P<0.05),选择0.5μmol/L为α-MSH的最佳作用浓度并进行后续实验。RNA-seq结果显示,与模型对照组相比,α-MSH处理组中243个mRNAs表达下调,81个mRNAs表达上调,53个lncRNAs表达上调,6个lncRNAs表达下调。生物信息学分析结果显示,α-MSH处理组表达下调的基因中主要富集的通路包括转化生长因子-β(TGF-β)信号通路、局部黏附通路和细胞外基质(ECM)受体相互作用通路,主要参与的生物过程为调节小三磷酸鸟苷酶(small GTPase)介导的信号转导。α-MSH处理组中表达上调的共表达lncRNA主要富集通路包括ECM受体互作通路、缺氧诱导因子-1(HIF-1)通路等,主要参与轴突导向、RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正向调节等生物过程。结论α-MSH处理后,高糖、高脂刺激的视网膜血管内皮细胞主要表现为lncRNA表达上调及mRNA表达下调,提示α-MSH可能通过上调lncRNA的表达来下调下游基因的mRNA表达.

人恶性黑色素瘤A375细胞黑素刺激素受体(MC1R)的检测

目的检测人恶性黑色素瘤A375细胞膜上MC1R蛋白及其cDNA,为研究黑色素瘤细胞表面受体及靶向配体奠定基础。方法利用放射配体分析法检测人恶性黑色素瘤A375细胞膜上的MC1R蛋白;用RTPCR方法扩增人恶性黑色素瘤A375细胞MC1R的cDNA,并克隆至pMD18T质粒,进行酶切分析鉴定及扩增片段DNA序列测定。结果放射配体分析结果表明,125IαMSH可与人恶性黑色素瘤A375细胞膜特异结合。RTPCR结果显示,扩增产物的大小与MC1R的cDNA相符。测序结果证实扩增片段为MC1R基因的特异片段。结论证实人恶性黑色素瘤A375细胞膜上表达MC1R蛋白。MC1R基因的成功克隆为其进一步研究提供了必要条件。

卵泡刺激素受体基因作为产仔数候选基因的研究

分析了FSHR基因 2个位点 (FSHRA、FSHRB)的PCR -SSCP、PCR -RFLPS多态性 ,利用SAS软件分析了多态性与母猪产仔数间连锁关系。找到了 1个影响产仔数的新的变异位点FSHRB ,该位点多态性显著地影响猪产仔数性状 ,即基因型BB的产仔数显著地高于AB、AA基因型。

卵泡刺激素受体基因多态性与卵巢过度刺激综合征的相关性

目的:探索卵巢过度刺激综合征(OHSS)与卵泡刺激素受体基因(FSHR)307位点和680位点的相关性。方法:对202例接受IVF-ET治疗的女性不孕症患者的血液样本进行FSHR基因307位点和680位点的分型鉴定。结果:OHSS组患者的680这个位点中基因型频率AA,AG,GG分别为51.1%,38.3%,10.6%,等位基因频率A,G分别为70.2%,29.8%,基因型及等位基因频率分布均与非OHSS组比较差异有统计学意义,在307这个位点上未有类似发现。结论:该研究结果表明FSHR基因的Asn680Ser这个位点可能与OHSS发病相关,Thr307Ala这个位点需要进一步的研究。

长白猪雌激素受体和卵泡刺激素β基因多态性对繁殖性能的影响

本研究以84头长白猪为试验材料,采用PCR-RFLP方法检测雌激素受体(estrogen receptor,ESR)和卵泡刺激素β(follicle-stimulating hormoneβ,FSHβ)基因的多态性,并进一步分析这2个基因多态位点及其合并基因型对繁殖性能的影响。结果表明,ESR和FSHβ基因均存在AA、AB和BB 3种基因型,2基因座均处于Hardy-Weinberg平衡状态;单基因效应分析结果表明,ESR基因AB基因型个体部分繁殖性能指标显著高于AA基因型,AB基因型为ESR基因的有利基因型。初产母猪FSHβ基因中BB、AA、AB基因型个体的所有繁殖性能指标均呈递增趋势,而经产母猪中AA基因型个体的性能指标较高,但是差异不显著(P>0.05);ESR与FSHβ的合并效应分析结果表明,基因聚合效应并不是各个基因效应的简单相加,在繁殖性能已经稳定的第3胎次,AA-AB型个体的繁殖性能显著低于其他合并基因型个体,表明该基因型为不利的合并基因型,故在长白猪选种选育过程中应优先考虑被淘汰。

卵泡刺激素受体基因与多囊卵巢综合征关系的初步研究

目的:探讨卵泡刺激素受体基因第7、10(A)外显子基因突变与多囊卵巢综合征(PCOS)发病的关系。 方法:提取56例PCOS患者及38例对照者的外周血基因组DNA,采用PCR及RFLP(限制性片段长度多态性)方法研究FSHR第7、10(A)外显子基因多态性。 结果:PCOS组FSHR第7外显子49/49型96.43%,86/49型3.57%,第10(A)外显子128/128型98.21%,128/216型1.79%,与对照组相比较,其基因型分布差异无显著性(P>0.05)。PCOS组第7外显子49型等位基因频率为98.21%,86型等位基因频率为1.79%,第10(A)外显子128型等位基因频率为99.11%,216型等位基因频率为0.89%。结论:中国人群存在以上两位点突变,但突变率在PCOS组及对照组不存在差异。PCOS组LH /FSH比值、高雄激素血症与等位基因86型、216型存在一定的相关趋势。

西北地区汉族妇女卵巢反应性与卵泡刺激素受体基因多态性的关系

目的探讨西北地区汉族妇女控制性超排卵(COH)中卵巢反应性与卵泡刺激素受体(FSHR)基因Thr307Ala(rs6165)和Asn680Ser(rs6166)位点多态性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性酶切技术对卵巢高反应患者45例、低反应患者27例和正常反应患者69例的FSHR基因第10号外显子Thr 307Ala位点和Asn680Ser位点进行分型,并通过Fisher′s精确检验方法分析基因型和等位基因分布频率。结果 FSHR基因Thr307Ala基因型、等位基因分布频率在3组间差异无统计学意义(P>0.05)。Asn680Ser位点基因型、等位基因分布频率在卵巢高反应组与正常反应组间差异无统计学意义(P>0.05);Ser/Ser基因型频率在卵巢低反应组中占40.7%,与正常反应组比较差异有统计学意义(P<0.01);携带G等位基因者发生卵巢低反应的风险增加,OR值为2.37(95%CI=1.25,4.52)。结论FSHRAsn 680Ser基因多态性与西北地区汉族妇女COH中的卵巢低反应相关;Asn680Ser位点等位基因为G时,增加卵巢低反应的风险。

卵泡刺激素受体基因与卵巢功能的研究进展

卵泡刺激素(FSH)在人类生殖过程中发挥着重要作用,其对卵巢的作用主要是通过与卵巢颗粒细胞膜表面的特异性受体即卵泡刺激素受体(FSHR)结合来发挥的。FSHR基因结构的正常与否直接影响着卵巢的生殖和内分泌功能,FSHR启动子激活后能启动FSHR基因转录,并进一步引起FSHR基因转录后水平的变化,从而引起卵巢功能的改变。FSHR基因点突变既可以导致卵巢功能活化(如反复自发性卵巢过度刺激综合征),又可以引起卵巢功能失活(如女性卵巢早衰)。对FSHR基因的正常结构与卵巢功能的关系及FSHR基因点突变与卵巢功能改变的关系综述如下。

卵泡刺激素受体基因突变的研究

卵泡刺激素(FSH)是调节性腺功能的关键激素,其生理功能是通过靶细胞膜上的卵泡刺激素受体(FSHR)介导的。近年来分子遗传学的研究发现FSHR基因突变是造成性腺功能异常的原因之一。目前已确定9处功能失活突变和4处功能活化突变。突变对性腺功能的影响在两性存在差异,女性正常的卵巢功能有赖于FSH的效能,而男性在FSH低下甚至缺乏时仍保持生殖功能。

氟病区成人血清钙、镁含量与卵泡刺激素受体基因多态性的关系

目的：探讨不同氟暴露水平地区汉族人群卵泡刺激素受体（FSHR）基因rs1394205多态性与血清钙、镁含量的关系。方法：采用整群抽样方法分别在氟病区（305例）、改水区（250例）和对照区（465例）选择居住5 a以上18-55岁者为观察人群,采用Real-Time PCR方法检测FSHR基因rs1394205多态性;采用氟离子选择电极法检测人群尿氟含量,采用原子吸收分光光度法检测血清钙、镁含量。结果：不同氟暴露组男性人群之间血清钙、镁含量差异有统计学意义（F=8.713、6.553,P均〈0.05）,不同氟暴露组女性人群之间血清钙、镁含量差异有统计学意义（F=6.760、6.879,P均=0.001）。男性人群中,携带AG基因型者改水组血清钙含量低于对照组和病区组,携带GG基因型者改水组血清镁含量低于对照组和病区组（P均〈0.05）。女性人群中,携带AA、AG基因型者改水组血清镁含量低于对照组和病区组（P均〈0.05）。结论：氟暴露和FSHR基因rs1394205多态性的相互作用可能影响人群血清钙、镁含量。

中国女性卵泡刺激素受体基因多态性与卵巢过度刺激综合征的研究

目的探讨中国汉族人群中FSHR基因307位点和680位点多态性分布与使用卵泡刺激素治疗后产生OHSS反应的关系。方法采用PCR-RFLP,对471例中国汉族人群307位点和680位点的多态性进行分析。结果发生OHSS不良反应人群中307位点TT、TA和AA基因型频率分别为52.73%、40.00%和7.27%,680位点NN、NS和SS基因型频率分别为58.18%、36.36%和5.46%。汉族人群中307位点和680位点基因多态性分布与OHSS发生无统计学意义。结论 FSHR基因307和680位点基因多态性的分布与使用卵泡刺激素后产生OHSS不良反应的关系呈现一定趋势,AA、SS基因型患者OHSS发生率分别相对于其他两组均较低,但无统计学意义。

卵泡刺激素受体基因多态性对女性卵巢功能影响的研究进展

卵泡刺激素(FSH)是人类重要的生殖激素,被广泛应用于体外受精超促排卵。然而,在临床上发现使用FSH进行卵巢刺激的不孕症患者其卵巢反应不一。FSH通过与卵泡刺激素受体(FSHR)结合介导其生理功能,目前在卵泡刺激素受体基因中发现超过900个SNP位点,其中一些SNP位点可能与FSH刺激引起的卵巢反应差异相关,在辅助生殖超促排卵过程中应该考虑这些SNPs对于卵巢功能的影响。通过预测疾病的遗传因素,为即将进行卵巢刺激的患者测定其基因多态性,以此制定个体化的卵巢刺激方案,达到优化不孕症治疗的临床目的。本文从遗传药理学角度,综述卵泡刺激素受体基因多态性对女性生殖功能的影响,探讨其临床意义。

卵泡刺激素受体680位点基因多态性对体外受精中卵巢反应性的影响

控制性超排卵（COH）中卵巢对卵泡刺激素（FSH）反应性的高低是体外受精．胚胎移植（IVF—ET）中生成足量优质卵母细胞的基础。所以寻找影响卵巢反应性的因素，受到越来越多的关注。本实验将研究FSH受体基因多态性与卵巢反应性及妊娠结局的相关性。

卵泡刺激素受体的生化特性及其在卵巢中的表达与调控

卵泡刺激素的主要作用是促进和维持正常的性腺发育和生殖功能。其生理功能的发挥通过分布于性腺的特异性卵泡刺激素受体介导。近年 ,卵泡刺激素受体在卵巢中的表达倍受关注 ,并开始探讨卵巢癌细胞有无卵泡刺激素受体蛋白过度表达 ,从而为卵巢癌的基因治疗提供新的思路。现将卵泡刺激素受体的定位。

卵泡刺激素受体与卵巢癌

卵巢癌是女性生殖系统最常见恶性肿瘤之一,以高复发率、高死亡率为特点。卵巢癌病因至今尚不明。大量研究显示,卵泡刺激素(FSH)与卵巢癌的发生密切相关。FSH对卵巢的作用主要是通过与卵泡刺激素受体(FSH Receptor,FSHR)特异性结合而介导。近年研究发现,在FSHR基因第10外显子及启动子序列的单核苷酸多态性,以及外显子不同剪接机制所致的异构体,可能对FSHR表达及其与FSH的结合产生影响。而FSHR缺失或过度表达都可能影响正常的信号转导,从而促进肿瘤发生。