黑老虎叶提取物纯化及其在化妆品原料中的应用研究

目的:探讨黑老虎叶提取物在化妆品原料开发中的潜在应用。方法:以黄酮含量为评价标准,构建了大孔吸附树脂对黑老虎叶提取物的纯化流程,并结合动物实验、细胞实验及化学实验,开展提取物的急性毒性及其功能特性研究。结果:AB-8大孔吸附树脂对黑老虎叶黄酮具有良好的吸附和解吸性能;上样条件为:总黄酮浓度1.0 mg/mL的料液调节pH 3,以3 BV/h流速上样5 BV;洗脱条件为:用80%乙醇以3 BV/h流速洗脱5 BV;动物实验表明,提取物无急性毒性;细胞实验显示,在2.5~50.0μg/mL浓度范围内,提取物能显著减少H_(2)O_(2)引起的人皮肤成纤维细胞死亡,有效降低细胞中ROS、MDA水平,增强SOD、CAT活性;在0.1~2.0 mg/mL浓度范围内,提取物能显著降低小鼠B16F10细胞中TYR活性;提取物抑制HAase的IC_(50)为4.748μg/mL。结论:利用AB-8大孔吸附树脂纯化的黑老虎叶提取物没有表现出急性毒性,同时展现了抗衰老、美白、抗过敏等功效,在作为化妆品原料应用上具有一定开发潜力。

基于网络药理学研究瑶药黑老虎三萜类成分对类风湿关节炎的作用机制及试验验证

目的基于网络药理学和实验研究探讨瑶药黑老虎Kadsura coccinea(Lem.)A.C.Smith治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的作用机制。方法采用硅胶、C18反相柱色谱及半制备高效液相分离技术对黑老虎的有效成分进行分离纯化;采用波谱技术对分离得到的化合物进行结构鉴定;通过Swiss Target Prediction数据库筛选黑老虎成分靶点,在GeneCards数据库和MalaCards数据库挖掘RA相关靶点,进而筛选黑老虎作用于RA的靶点;制作蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络取其交集,并通过GO分析和KEGG富集分析;采用MTT试剂盒检测化合物对肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和白细胞介素(interleukin,IL)-6的释放情况,以及蛋白免疫印迹实验对预测结果进行验证。结果从黑老虎中提取分离出6个三萜类化合物,分别鉴定为heilaohuacid A(1),heilaohuacid G(2),seco-coccinic acid F(3),seco-coccinic acid G(4),schisandronic acid(5)和schisanlactone B(6)。MTT实验结果是化合物2,3,4,6能抑制RA-FLS细胞增殖,其IC50值为7.52~8.85μmol。6个化合物在浓度为10μmol和20μmol时均能抑制炎症因子TNF-α和IL-6的释放(P<0.05,P<0.01)。网络药理学预测得到109个共同作用靶标,通过与691个RA疾病相关靶标进行交集映射,获得其干预RA靶标38个,主要为丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶、TNF、丝裂原活化蛋白激酶1、前列腺素内过氧化物合酶2、丝裂原活化蛋白激酶14等。GO分析和KEGG富集分析得关键通路为白细胞介素(interleukin,IL)-17信号通路和TNF信号通路等。化合物3在浓度为20μmol能上调核因子κB抑制因子α(recombinant inhibitory subunit of NF kappa B-α,IκB-α)的表达水平(P<0.05)。结论本研究从网络药理学角度预测瑶药黑老虎三萜成分治疗RA的作用机制,初步证实其可上调IκB-α蛋白的表达,为瑶药黑老虎治疗RA提供了科学依据。

黑老虎种质资源与分子生物学研究进展

黑老虎是集药用、食用和观赏于一体的功能性林下经济植物。深入研究和评价黑老虎的不同种质资源,是保护其生物多样性、拓展其资源利用与加快其品种创新的关键。本文重点综述了黑老虎不同资源(含野生和栽培种)特性研究现状,叶绿体全基因组分析、分子鉴定与遗传多样性分析、功能基因研究和实验体系建立方面的研究进展,探讨了黑老虎遗传资源研究中存在的问题和分子生物学研究面临的挑战,并指出了今后的重点研究方向。

不同品系黑老虎田间节肢动物的群落结构与多样性

为探究不同品系黑老虎田间节肢动物群落的结构和多样性,本研究以黑老虎虎绿1号、粉红1号和紫黑1号3个品系为研究对象,采用网捕、糖醋液诱集和黄、蓝板诱集等方法,于2021年对林下药用植物应用技术湖南省工程研究中心黑老虎科研示范基地田间节肢动物进行了系统调查,调查期间共收集到节肢动物6441头,隶属于4纲15目54科67种。研究结果表明,尽管不同品系黑老虎田间节肢动物各类群多样性表现不一,但差异不显著;不同品系黑老虎田间节肢动物群落的多样性指数与节肢动物总类群的变化基本一致;黑老虎田间节肢动物群落以害虫为主导,其变化趋势决定了黑老虎田间整个节肢动物群落的变化趋势,而天敌昆虫有紧随其后伴随害虫的变化而变化的现象。黑老虎田间节肢动物群落结构总体较为稳定,不同品系黑老虎田间节肢动物群落在同一地域、同一时期、相同生长环境下差异不明显。

广东黑老虎炭疽病病原鉴定、生物学特性及其室内药剂毒力检测

[目的]明确黑老虎炭疽病原菌种类,筛选出适宜的防治药剂,为黑老虎炭疽病的识别和大田防治提供理论依据。[方法]采用组织块分离法对广东省云浮市黑老虎炭疽病原菌进行分离,基于科赫法则确定其致病菌,采用形态学和分子生物学相结合的方法对菌株进行种类鉴定,并采用菌丝生长速率法对其进行生物学测定及不同药剂的室内毒力检测。[结果]通过对病叶分离纯化共获得6种菌株,选取具有代表性的典型菌株A1进行形态鉴定以及ITS序列分析,确定黑老虎炭疽病原菌属炭疽菌属(Colletotrichum sp.)。通过对菌株A1进行生物学测定,明确其最适生长培养基为PDA培养基,最适生长温度28℃,菌株致死条件为53℃水浴处理10 min,菌丝最适宜生长pH为6.0,最适光照条件为连续黑暗(暗24 h),最佳碳源、氮源分别为麦芽糖和酵母粉。同时,在福美双、溴菌腈、多菌灵和嘧菌酯4种供试药剂中,多菌灵的抑菌效果最佳,半数效应浓度(EC50)值为0.14μg/mL;其次是福美双和溴菌腈,EC_(50)值分别为55.26和55.32μg/mL,抑菌效果较好;嘧菌酯的EC_(50)值为791.95μg/mL,EC_(50)值在100~1000μg/mL,抑菌效果不明显。[结论]广东省云浮市黑老虎炭疽病原菌为炭疽菌属。多菌灵、福美双及溴菌腈对黑老虎炭疽病原菌菌丝生长具有较好的抑制作用,可作为黑老虎炭疽病的候选田间防治药剂。

药食两用植物黑老虎组培快繁体系研究

为改变药食同源植物黑老虎野生资源日趋减少、难以满足市场需求的现状,对组培快繁体系中的培养基配制及组培瓶苗培育条件进行了研究,以期建立黑老虎组培快繁体系,为规模化种苗繁殖奠定基础。结果表明,以MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为初代培养基,以B5+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为增殖培养基,以1/2 MS+0.1 mg/L 6-BA+1.5 mg/L NAA+0.3%活性炭为生根培养基,先暗培养,再光照培养,生根率可达100%,且小苗主根粗,长势强。组培苗最佳炼苗时间为15 d,最佳移栽基质为塘泥∶蔗渣∶鸡粪∶过磷酸钙=3.9∶4∶2∶0.1,最佳遮阳模式为半遮阳,最佳培育期为60 d。

基于CiteSpace的黑老虎研究现状与热点可视化分析

为了解黑老虎的研究现状与热点,基于中国知网(CNKI)学术期刊数据库和Web of Science(WOS)核心合集数据库,筛选出177篇中文文献和96篇英文文献,运用CiteSpace对黑老虎研究的中、英文文献的发文量、作者、机构、国家(地区)、关键词等进行可视化分析。结果表明:黑老虎研究的发文量呈上升趋势,且中文文献多于英文文献;黑老虎研究的中文文献作者形成了以梁忠厚、李有清、周玮等为核心的研究团体,英文文献作者形成了以Sun Han Dong、Pu Jian Xin、Wang Wei和Li Bin等为核心的研究团体;湖南环境生物职业技术学院园林学院和中国科学院(Chinese Academy of Sciences)分别是发表中、英文文献数量最多的机构;中国是黑老虎研究发文量最多的国家;黑老虎中文文献倾向于研究黑老虎的整体开发利用,更注重实践应用;英文文献侧重于研究化学成分及其药理作用与机制,更倾向于理论研究。

施肥对黑老虎生长及开花结实的影响

为研究施肥对果用黑老虎生长及开花结实的影响,以生红土为对照,设置添加腐殖土和缓释肥不同配比共5种施肥处理的盆栽试验,处理5个月后调查黑老虎的株高,1 a后调查各处理基质的养分状况、叶片养分含量及植株分枝数和开花结实情况。结果显示:(1)在生红土中施入50%的腐殖土,具有显著调节土壤肥力的作用(P<0.001),土壤pH值由酸性转为中性,土壤有机质、全氮、水解性氮、有效磷和速效钾显著高于对照,且显著增加了叶片中的N、P、K含量;添加50%腐殖土的处理及同时添加50%腐殖土和2 kg·m^(-3)缓释肥的处理,叶片中的N、P、K含量比对照分别高出25.5%、122.5%、154.9%和28.5%、40.5%、52.4%,而且能调节其叶片中N、P、K养分的均衡性。这2个处理的N、P、K比分别为10︰1︰8和16︰1︰7,P和K的比例差异仅在1︰10以内,株高、分枝数、开花率、结实率、长势也都明显优于对照和缓释肥处理。(2)随缓释肥施用浓度增加,土壤pH值下降,酸性加重,土壤中有效磷、速效钾、全磷、全钾随缓释肥浓度增加而增加,水解性氮和全氮含量均低于对照;叶片中K随缓释肥浓度增加呈显著增加,N和P则随之增加而减少,N、P、K 3元素的比例差异增大,养分不均衡明显;缓释肥浓度超过4 kg·m^(-3)时黑老虎株高、分枝数、开花率、结实率、长势都较对照低,浓度达到6 kg·m^(-3)则抑制生长。研究结果表明:黑老虎适合在弱酸性至中性、有机质含量高的土壤环境中生长,施肥应以有机肥为主,在人工培育中应注意立地选择和土壤改良。

基于SSR标记的黑老虎种质资源的遗传多样性和遗传结构

【目的】揭示黑老虎5个群体70份种质资源的遗传多样性水平和遗传结构状况,为种质资源评价、保护及利用提供理论依据。【方法】用筛选出的17对引物进行所有样本SSR-PCR扩增,扩增产物经毛细管电泳后采用GenAlex v6.502、Ntsys V2.2及Structure 2.3.4等软件进行遗传多样性和遗传结构分析。【结果】17对引物的70份样本中共检测到147个等位基因,平均每对引物扩增出8.647个等位基因。17个位点的Shannon信息指数(I)平均值为1.421,期望杂合度(He)平均值为0.648,多态信息指数(PIC)平均值为0.612。5个群体中马关群体(MGH)的遗传多样性最高,I和He分别为1.070和0.544。群体遗传分化系数(Fst)平均值为0.323,有32.3%的变异来源于群体间。分子方差分析(AMOVA)显示群体间方差分量比为28.8%,群体间的遗传变异占总变异量的28.8%。17个位点群体内近交系数(Fis)的平均值为0.161(Fis>0),黑老虎存在较强的近亲交配,5个群体中只有广西群体(GXH)Fis<0。基因流(Nm)为0.876,属中等水平。UPGMA聚类和STRUCTURE分析将70份黑老虎种质资源划分成了3个类群:类群Ⅰ由来自MGH的样本资源组成,类群Ⅱ主要由屏边群体(PBH)的样本资源组成,类群Ⅲ主要由GXH、贵州群体(GZH)及湖南群体(HNH)的样本资源组成。【结论】黑老虎种质资源具有丰富的遗传多样性,群体间存在极高的遗传分化,遗传变异主要来源于群体内的个体。大部分种质的遗传背景比较单一,同一群体的不同种质遗传组分基本相同。在黑老虎育种及资源保护和开发工作中,应在尽量涵盖全部群体类别的基础上,特别重视遗传多样性丰富的群体以及各群体内不同类型个体的选择、保存和利用。

黑老虎林下中草药控草关键技术

技术来源:2024年山东协作重庆省级财政援助资金项目“黑老虎细胞工程繁育技术与林下中草药控草关键技术示范应用”(项目编号:渝农发[2024]64-04)。技术背景:果园林下行间杂草通常采用人工刈割或行间定向化学除草方式进行防治,但人工除草管理费工费时,劳动强度大;化学除草易导致黑老虎根系损伤,且产生农药残留,产品品质下降。

黑老虎果毒理实验及其对血脂的调节作用

研究成熟黑老虎果的毒性及其对血脂的调节作用。对实验小鼠进行急性毒理实验,同时进行30d喂养实验,并观察小鼠血脂的变化。结果表明:雌雄小鼠经口最大耐受剂量(MTD)>20mL/kg(以体质量计),属无毒级;30d喂养实验各项观察指标正常,黑老虎果对小鼠的体质量、血液、脏器等均无显著影响;该果能明显降低小鼠血液中胆固醇水平。可以认为,成熟黑老虎果是值得开发的无毒且可调节血脂的珍稀野生水果。

木质藤本植物黑老虎的居群结构与动态

为了了解木质藤本药食兼用植物黑老虎的居群结构及动态，采用典型样地法，以径级结构代替年龄结构及方差均值比率法研究了云南分水岭国家级自然保护区、云南大围山自然保护区和云南无量山自然保护区等3个黑老虎居群的年龄结构、高度结构和空间分布格局，编制了特定时间生命表，绘制了存活曲线。结果表明：黑老虎3个居群的年龄结构分为5级，总体呈倒金字塔形，年龄结构中都无I级幼苗，幼藤储备也很少，中成年藤和老年藤的比例占到了60％～80％．均属于衰退型居群：其高度结构受支柱木和林冠层高度的影响，不同居群的高度结构包括的级数不同，但发育都是连续的；3个居群的分布格局不同，分水岭居群呈现集群分布，无量山居群和大围山居群呈随机分布，当前的生长可分为幼藤、中成年藤和老藤3个时期，存活曲线呈现凸形，正处于衰退状态。极弱的更新能力和较少的居群数量预示黑老虎居群的生存和繁育都面临极大的挑战，且具有濒危植物所具有的特征．应加强保护和人工引种驯化。

黑老虎果皮体外抑菌活性的初步研究

目的研究黑老虎果皮及其提取物的体外抑菌效果,确定黑老虎果皮对伤寒沙门氏菌的最小抑菌浓度、最小杀菌浓度和有效部位。方法采用滤纸扩散法观察黑老虎果皮及其乙醇提取液和各相萃取液的抑菌作用;用二倍稀释法测定最小抑菌浓度和最小杀菌浓度。结果黑老虎果皮及其乙醇提取物对伤寒沙门氏菌有抑制作用,最小抑菌浓度为31.25mg/ml,最小杀菌浓度为125 mg/ml,抑菌物质主要存在于乙醚萃取相中。结论黑老虎果皮对伤寒沙门氏菌有显著地抑制作用。

黑老虎果实的加工特性与营养成分

以湘西南主栽黑老虎品种“湘黑-0701”的果实为材料,研究其果皮、果肉果汁、种子和果芯4部分的基本加工特性和主要营养成分。结果表明:果皮在聚合果中占比(42.48%~47.70%)最大,出汁率低;果肉果汁在聚合果中占比(35.01%~37.47%)较大,且果肉果汁较为浑浊,L*、a*和b*值均最小,总糖质量分数(5.27%)和还原糖质量分数(2.34%)最高;种子苦涩味明显且含有厚实种壳,在聚合果中占比(7.65%~11.16%)小,灰分质量分数(7.20%)、蛋白质质量分数(11.14%)和粗脂肪质量分数(21.70%)均最高;果芯在聚合果中占比(8.21%~11.21%)小。果皮、果肉果汁、种子和果芯4个部分中的矿质元素均以钾含量最高,分别达3952.17、2064.10、4900.43、2937.40 mg/kg;维生素含量则以胆碱含量最高,其含量分别达590.33、621.67、692.33、248.33 mg/(100 g)。鉴于黑老虎各部分加工特性和主要营养成分的差异,可分别用于不同类型健康产品的开发。

壮药黑老虎根提取物对大鼠非酒精性脂肪肝病的作用及机制

目的探讨壮药黑老虎根对非酒精性脂肪肝模型大鼠调脂保肝的作用及机制。方法 SD大鼠60只随机分为对照组、模型组、黑老虎高、中、低剂量(生药6.0、3.0、1.5 g/kg)组以及辛伐他汀(4 mg/kg)阳性对照组。除对照组外,其他各组灌胃给予高脂、高糖乳剂制备非酒精性脂肪肝大鼠模型,造模同时各给药组灌胃给予相应药物,对照组和模型组给予生理盐水,连续8周,测定各组大鼠血脂水平、游离脂肪酸(FFA),以及肝功能、肝胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,并计算肝指数。结果与模型组比较,黑老虎提取物能显著降低非酒精性脂肪肝大鼠血脂、FFA、肝脂质、肝功能水平、肝指数和肝MDA水平(P<0.05,P<0.01),显著升高肝SOD活性(P<0.05,P<0.01),并具有一定的量效关系。结论黑老虎提取物对大鼠非酒精性脂肪肝具有调节脂质和保护肝脏的作用,其作用机制可能与其减少脂质在肝脏的沉积、减轻过氧化损伤有关。

广西黑老虎中微量元素测定

采用原子吸收光谱法测定广西黑老虎中锰、铁、铜、锌、镁、钙等6种微量元素,并与笋干和16种蔬菜中6种微量元素含量进行比较,结果发现,黑老虎中锰、铁、铜、锌、镁、钙等6种微量元素含量均较高,其中锰、钙、铜、锌含量高于笋干,锰、铁、铜、锌含量远远高于16种蔬菜中微量元素的含量,钙含量高于部分蔬菜含量。提示广西黑老虎中含有丰富的人体所需微量元素,作为药用植物,具有极高的药用价值。

黑老虎实生容器苗苗木分级标准研究

为解决人工培育藤本植物黑老虎的苗木质量问题,采用相同培育措施下不同种源8月龄的黑老虎实生容器苗的藤高和地径作为其苗木质量的数量评价指标。利用藤高、地径标准化值总和的一维图和SPSS聚类树状图互为参考,对黑老虎苗木进行逐步分级、修正达到最终分级,提出黑老虎不同种源的实生容器苗合格苗木标准为:屏边种源,H≥44.4 cm,D≥0.39 cm;河口种源,H≥22.2 cm,D≥0.40 cm;普文种源,H≥24.1 cm,D≥0.48 cm;景东种源,H>14.7 cm,D≥0.38 cm;勐海种源,H>21.2 cm,D≥0.41 cm;大渡岗种源,H>19.0cm,D≥0.47 cm。不同黑老虎种源苗木在相同培育条件下藤高、地径差异极显著,出圃苗木应区别对待。

云南引种黑老虎试验初报

黑老虎为集药、食、观赏等为一体的大型木质藤本植物,十分珍贵。云南的黑老虎种质资源丰富,但野生资源十分稀少,尚未进行人工培育。本文通过从贵州引进由野生变为栽培种的黑老虎分别在昆明和蒙自2地开展引种栽培研究,引种栽培4年中观察黑老虎对环境的适应、生长和生殖的变化。引种试验结果表明,生长1年后的幼藤能耐昆明和蒙自的冬季低温,正常成活;在昆明和蒙自全光照下引种栽培的黑老虎能正常开花结实,幼年期仅有1-2年,后代能育成正常植株。试验结果初步表明,黑老虎在昆明和蒙自露天引种栽培成功,在2地开展黑老虎的人工培育是可行的。

云南黑老虎不同种源氨基酸和其他指标的分析与评价

为探讨黑老虎(Kadsura coccinea)作为果用食物的营养价值,对采自云南省不同产地的野生黑老虎果实分别测定其果皮和果肉中的维生素C、可溶性固形物、氨基酸、粗纤维、蛋白质、总糖等含量,并进行比较分析。结果表明:野生黑老虎果实含有丰富的人体必需的氨基酸,4个种源中,以勐海的黑老虎果肉中各人体必需氨基酸总含量最高,为0.256%,其次是屏边种源,为0.106%,景东种源为0.094 3%,普文种源氨基酸总含量最少,为0.027 4%。黑老虎果实还含丰富的维生素C、粗纤维、蛋白质、总糖等。不同产地之间或单株之间各营养指标变化范围大,变异系数较高,优良种源或优良单株可选择性较强。果肉的养分灰关联度以勐海种源和第2单株最高,将作为备选优良种源和优良单株。

常绿木质藤本植物黑老虎基因组SSR特征分析及引物开发

【目的】开发黑老虎SSR标记,为其群体遗传学研究以及种质资源收集、保存、评价以及良种选育提供依据。【方法】基于高通量测序获取候选SSR位点,设计引物进行PCR扩增及其产物多态性检测;以湖南会同、城步和桂东3个天然群体66个黑老虎植株为供试材料,选取多态位点开展遗传多样性分析,并应用5个近缘种25个植株探讨SSR标记的通用性。【结果】通过高通量测序检索到152207个候选SSR位点,以二核苷酸重复比例(57.69%)最大,其次为单核苷酸(17.30%)和四核苷酸重复(10.68%);单、二、三、四、五和六核苷酸重复单元分别以A/T(98.06%)、AC/GT(57.30%)、AAG/CTT(41.91%)、AAAT/ATTT(29.55%)、AAAAT/ATTTT(29.18%)和ACACAT/ATGTGT(40.31%)最为普遍。从160对SSR引物中筛选出28对,能成功进行PCR扩增且获得多态位点;3个天然群体的遗传多样性分析结果表明,28个位点共有168个等位基因,每位点等位基因数为2~14,实际杂合度和期望杂合度分别为0.000~0.900和0.000~0.860;会同、城步和桂东群体分别有9、13和7个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05),未发现位点间连锁不平衡现象(P≥0.05)。28个位点中,有24和14个可应用于南五味子和异形南五味子,而对于翼梗五味子、华中五味子和狭叶五味子,则通用性偏低,仅6~9个位点得以成功扩增。【结论】开发出的28个SSR标记,可应用于黑老虎及其近缘种的遗传多样性分析、种质资源评价、种质鉴定以及分子标记辅助育种等。