维药异常黑胆质成熟剂对增生性瘢痕及转化生长因子β/Smad信号通路的影响

背景:近年来,研究发现异常黑胆质成熟剂具有良好的减轻瘢痕增生的作用,但具体机制尚未清楚,考虑异常黑胆质成熟剂是否是通过影响转化生长因子β/Smad信号通路的表达来抑制瘢痕增生的。目的:验证维药异常黑胆质成熟剂对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及对转化生长因子β/Smad信号通路的影响。方法:用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞,将成纤维细胞分为6组:1空白对照组:加入等体积的培养液。2异常黑胆质成熟剂处理组:分成5组,分别加入质量浓度为0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 g/L的异常黑胆质成熟剂。对各组细胞采用相应药物进行干预,采用MTT、流式细胞术、免疫细胞化学方法检测其在正常状况和应用维药异常黑胆质成熟剂后细胞增殖与转化生长因子β/Smad信号通路的改变。结果与结论:与空白对照组相比,异常黑胆质成熟剂对增生性瘢痕来源成纤维细胞的增殖有抑制作用,且在0.2-0.8 g/L质量浓度范围之间,随着质量浓度增加,抑制作用呈增强趋势。细胞免疫化学结果测定表明,异常黑胆质成熟剂干预后减少了成纤维细胞中转化生长因子β1的含量,增加了细胞中Smad7的含量。提示异常黑胆质成熟剂抑制瘢痕的作用可能是通过转化生长因子β/Smad通路,使成纤维细胞增殖受阻而发挥作用的。

维药异常黑胆质成熟剂总黄酮杀伤K562/ADR细胞株作用研究

目的探讨维药异常黑胆质成熟剂总黄酮（ASMq）对人慢性骨髓性白血病细胞（K562）及人白血病阿霉素耐药株（K562/ADR）的细胞毒性作用。方法对K562细胞株及K562/ADR细胞株细胞进行培养,在培养过程中注意K562/ADR细胞株对阿霉素的耐药性。取对数生长期K562、K562/ADR细胞株,96板孔中加入RPMI-1640培养液配制5×104个/m L细胞悬液100μL/每孔,37℃、5%CO2培养24 h贴壁,然后加入不同浓度（0、50、100、200、400、800和1600μg/m L）的ASMq,在37℃共培养48 h,每组5个重复,按照CCK-8说明书检测细胞活性。结果 K562细胞株对不同浓度的ASMq的细胞毒性的敏感性不同,差异有统计学意义（P〈0.05）;K562/ADR细胞株对0~1 600μg/m L浓度的ASMq的细胞毒性的敏感性差异无统计学意义（P〉0.05）;结论 ASMq对K562细胞具有细胞毒性作用,为临床治疗血液肿瘤提供了新的线索。

异常黑胆质病证的维医研究进展

体液论是维吾尔医药学最基本、最重要的学说。这一学说认为许多复杂性疾病常由异常黑胆质所致,其在维吾尔族、哈萨克族等新疆主体民族发病率高,并具有一定的族群发病特点。在长期医学实践中,维医对这些复杂性疾病形成了独特的辨证诊断方法及特色方药。本文就维医异常黑胆质病证的系统研究进展做一综述。

维药异常黑胆质成熟剂总酚对宫颈癌细胞体外生长的影响

目的:探讨维药异常黑胆质成熟剂总酚治疗人宫颈癌的可行性。方法:分别用不同浓度的异常黑胆质成熟剂总酚作用于人宫颈癌Hela细胞及SiHa细胞,于作用后24、48、72、96 h,用倒置显微镜观察细胞形态学变化,MTT比色法测定各组细胞的抑制率和半数抑制浓度(IC50)。结果:在25～125μg/mL浓度区间,总酚对Hela细胞的增殖有明显的抑制作用;在75～175μg/mL浓度区间,总酚对SiHa细胞的增殖有明显的抑制作用,且对2种细胞的抑制作用都呈明显的量效关系和时效关系(P<0.01);总酚作用于Hela细胞后48 h的IC50=(125.26±16.15)μg/mL,而作用于SiHa细胞后48 h的IC50=(134.51±2.55)μg/mL。两者比较差异无统计学意义(P>0.05);两种细胞经总酚作用后均出现明显的凋亡特征,且随着药物浓度增高及作用时间延长细胞形态学变化更明显。结论:异常黑胆质成熟剂总酚能抑制宫颈癌Hela细胞及SiHa细胞体外生长,且对两种宫颈癌细胞的抑制作用基本相同。故异常黑胆质成熟剂总酚可作为临床治疗宫颈癌的药物进一步深入研究。

异常黑胆质成熟剂和清除剂抗氧化作用的ESR研究

[目的 ]探讨异常黑胆质成熟剂和清除剂抗氧化的作用机理。 [方法 ]采用电子顺磁共振技术(ESR)分别检测异常黑胆质成熟剂和清除剂对超氧阴离子自由基 (O-·2 ) ,羟自由基 (OH·)的清除作用。 [结果 ]异常黑胆质成熟剂和清除剂均能有效清除O-·2 、OH·,但其作用强度不同 ,清除剂作用大于成熟剂。 [结论 ]异常黑胆质成熟剂和清除剂是维医药中两种有效的天然抗氧化剂 ,其抗氧化作用可能是治病的重要机理之一。

维吾尔药异常黑胆质成熟剂对乳腺癌患者放疗前后免疫细胞分布的影响

目的探讨维吾尔药异常黑胆质成熟剂对维吾尔族异常黑胆质型乳腺癌患者放疗后T细胞及自然杀伤(NK)细胞的影响趋势。方法对40例维吾尔族异常黑胆质型乳腺癌患者放疗前后分别用流式细胞仪检测T细胞及NK细胞水平,并随机分为药物干预组和对照组,比较2组T细胞亚群及NK细胞的分布特点。结果药物干预组及对照组放疗前一般临床资料及T细胞、NK细胞水平差异均无统计学意义;对照组放疗前后比较发现:放疗后CD4+、CD4+/CD8+、NK明显均低于放疗前(P<0.05),药物干预组放疗后CD4+、NK高于放疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论异常黑胆质成熟剂可明显改善异常黑胆质型乳腺癌患者放疗导致的细胞免疫功能低下,具有放射防护作用。

异常黑胆质成熟剂提取物总黄酮防治萎缩性瘢痕机制研究

目的探讨维药异常黑胆质成熟剂(abnormal savdamunziq,ASMq)对体外培养萎缩性瘢痕细胞增殖的抑制作用及其通过TGF-β1/Smad通路介导的作用机制,为萎缩性瘢痕的治疗提供理论依据。方法对酶消法消化手术切取的萎缩性瘢痕细胞进行培养,将其分成空白对照组和ASMq处理组(0.25、0.5、0.75和1.0mg/mL的药物干预处理),用倒置显微镜观察其细胞形态及数量变化;应用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;采取QtimePCR和Western blot法检测TGF-β1/Smad通路相关mRNA及蛋白的表达。结果与空白对照组比较,AMSq处理组在浓度为0.25mg/mL至1.0mg/mL的范围内,随着浓度的递增,细胞数不断减少;TGF-β1、CollagenⅠ和CollagenⅢmRNA表达量呈递减趋势,Smad7mRNA的表达逐渐增多,差异有统计学意义(P<0.05);与空白对照组比较,随着ASMq浓度增加,TGF-β1、CollagenⅠ和CollagenⅢ蛋白表达量减少,随着ASMq浓度逐渐增加,抑制性Smad7蛋白表达量增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ASMq可通过增强负反馈因子Smad7在TGF-β1/Smad通路中的作用,起到抑制萎缩性瘢痕细胞增殖及其表达各类胶原效应。

异常黑胆质成熟剂对异常黑胆质型肝癌病证模型大鼠Id4和p21 mRNA表达水平的影响

目的探讨维药异常黑胆质成熟剂在异常黑胆质型肝癌病证大鼠模型中的抗肝癌作用。方法 90只清洁级雄性Wistar大鼠按随机数字表法分成正常组、对照肝癌组、异黑肝癌组和成熟剂高、中、低剂量组6组,每组各15只。正常组正常饲养,对照肝癌组正常饲养21 d后给予二乙基亚硝胺(DEN)20周诱导肝癌。异黑肝癌组和成熟剂高、中、低剂量组大鼠通过干寒属性饲料、干寒气候环境、足底电刺激,夹尾以及强迫游泳等多因素复合作用21 d建立异常黑胆质证载体动物模型,再加用DEN20周诱导建立异常黑胆质型肝癌病证模型;DEN诱导的同时,成熟剂高、中、低剂量组用异常黑胆质成熟剂按高、中、低(6.0、3.0、1.5 g/kg)剂量进行干预。提取肝组织中m RNA,利用基因芯片技术筛选出的大鼠肝脏差异表达的Id4和p21候选基因并用RT-qPCR法验证。结果与正常组比较,对照肝癌组肝组织Id4基因表达下调(P<0.01);与对照肝癌组比较,异黑肝癌组肝组织Id4基因表达下调(P<0.01);与异黑肝癌组相比,成熟剂高、中、低剂量肝组织Id4基因表达均上调,其中成熟剂高、中剂量组升高显著(P<0.01)。与正常组相比,对照肝癌组肝组织p21基因表达上调(P<0.01);与对照肝癌组比较,异黑肝癌组肝组织p21基因表达上调(P<0.05);与异黑肝癌组相比,成熟剂高、中、低剂量肝组织p21基因表达均下调,其中成熟剂中、低剂量组下降明显(P<0.01)。结论异常黑胆质成熟剂可影响异常黑胆质型肝癌病证模型大鼠肝脏Id4和p21基因的m RNA表达水平。

异常黑胆质成熟剂提取物对正常大鼠凝血时间及TXB_2和6-keto-PGF1 α水平的影响

目的观察异常黑胆质成熟剂提取物对大鼠凝血时间及TXB2和6-keto-PGF1α水平的影响。方法(1)采用玻片法测定体外凝血时间;(2)放射免疫法测定血浆TXB2和6-keto-PGF1α的含量。结果异常黑胆质成熟剂提取物5.94g(生药)/kg的凝血时间明显延长;可明显升高6-keto-PGF1α的含量,却不能抑制TXB2的释放,但可明显降低TXB2/6-keto-PGF1α的比值。结论异常黑胆质成熟剂提取物能够有效抑制血小板聚集,其机制可能与升高6-keto-PGF1α的含量相关。

维药异常黑胆质成熟剂总黄酮对K562/ADR细胞的耐药逆转作用及mRNA表达的影响

目的异常黑胆质成熟剂总黄酮ASMq对白血病K562/ADR多药耐药逆转作用机制研究及其对耐药株m RNA表达的影响。方法不同浓度的ASMq联合不同浓度的ADR作用于K562/ADR细胞株,用MTT法检测ASMq对K562/ADR的细胞毒活性及对耐药细胞株的抑制率,用RT-PCR方法分析对K562/ADR细胞ABCB-1及ABCC-1和BCL-2表达的影响。结果异常黑胆质成熟剂总黄酮ASMq对K562/ADR细胞株增值表现为抑制作用,对K562/ADR细胞耐药基因ABCC-1、ABCB-1及BCL-2同样表达抑制作用。结论异常黑胆质成熟剂总黄酮通过抑制ABCB-1、ABCC-1、BC-L2基因表达,发挥对K562/ADR细胞株耐药逆转的作用。

基于NMR代谢组学方法研究异常黑胆质成熟剂对抑郁症大鼠血浆代谢的影响

目的从代谢组学角度探讨异常黑胆质成熟剂（ASMq）对抑郁症大鼠血浆代谢物的影响。方法选取60只雄性SD大鼠,进行21d慢性不可预见性温和应激（CUMS）诱导建立抑郁症大鼠模型（接受应激组）,并通过体质量测量、糖水消耗实验、矿场实验进行宏观评价。造模成功后,将接受应激组大鼠随机分为5组：ASMq高、中、低剂量组（给药剂量分别为6.0、3.0、1.5 g/kg）及阳性对照组（氟西汀3.5 g/kg）、模型对照组（生理盐水1.5 mL/100g）,每组12只。另设正常对照组（12只,不接受任何应激,正常饲养）。末次给药1h后颈椎脱臼处死大鼠,采用核磁共振技术检测6组大鼠血浆代谢物的变化。结果与抑郁模型对照组比较,ASMq低、中、高剂量组大鼠血浆中肉毒碱、乳酸、β-羟丁酸、肌酸、丙酮酸、丙氨酸、极低密度脂蛋白（VLDL）、络氨酸、糖蛋白、苯丙氨酸、丙酮、甲酸、不饱和脂类含量下降,差异有统计学意义（P〈0.05）。β-葡萄糖、组氨酸、苯丙氨酸、α-葡萄糖含量显著升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 ASMq可能通过对抑郁症大鼠的糖代谢、脂代谢、氨基酸代谢起到一定的调控和改善作用而提高机体兴奋性,治疗抑郁症。

异常黑胆质体液成熟剂散剂质量标准的研究

目的:建立异常黑胆质体液成熟剂散剂的质量标准。方法:采用薄层色谱法,对异常黑胆质体液成熟剂散剂中的全方药味分别进行定性鉴别。结果:建立了异常黑胆质体液成熟剂散剂中甘草的薄层色谱鉴别方法。结论:建立的甘草薄层色谱鉴别方法重现性好,专属性强,可用于该制剂的质量控制。

异常黑胆质成熟剂总酚与顺铂、多西他赛联用对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的观察异常黑胆质成熟剂总酚(简称总酚)与顺铂、多西他赛联用对体外培养的人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法取对数生长期HeLa细胞接种于96孔板,加入0、50、75、100、125μg/ml总酚,然后加入0.1、1、5μg/ml顺铂或5、10、20μg/ml多西他赛,培养24、48、72 h,每孔设只加相同浓度顺铂或多西他赛的对照孔和只加培养液的对照孔。用MTT法检测细胞增殖抑制率。取对数生长期的HeLa细胞接种到培养瓶中,分别加入5μg/ml顺铂、20μg/ml多西他赛、50μg/ml总酚、5μg/ml顺铂+50μg/ml总酚、20μg/ml多西他赛+50μg/ml总酚,并设对照组,培养48 h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光倒置显微镜下观察细胞生长情况。结果用总酚联合顺铂、多西他赛培养的HeLa细胞与相同浓度顺铂、多西他赛培养者相比,细胞增殖抑制率和凋亡率更高(P均<0.05),形态学改变更明显。结论总酚与顺铂、多西他赛联用能显著抑制HeLa细胞的增殖,促进其凋亡。总酚与顺铂、多西他赛联用有协同作用。

维吾尔药异常黑胆质成熟剂总黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及胶原蛋白表达的影响

目的:探讨维吾尔药异常黑胆质成熟剂总黄酮(Abnormal savda munziq-total flavonoids,ASMq-TF)对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞(Hypertrophic scar fibroblasts,HFs)增殖抑制作用及对相关胶原蛋白合成的影响。方法:对HFs进行体外培养并给予不同浓度的ASMq-TF处理,然后,通过CCK-8检测其细胞增殖情况,通过RT-PCR和Western blot实验检测相关胶原蛋白表达。结果:ASMq-TF能够显著抑制HFs的增殖及抑制胶原蛋白的表达。讨论:本实验结果表明ASMq-TF通过促进SMAD7合成及减少CollagenⅠ分泌等抑制HFs增殖。

维吾尔医学异常黑胆质体液结肠癌患者肠道菌群的分布情况研究

目的通过先进的分子生物学方法分析维吾尔医学异常黑胆质结肠癌患者肠道菌群分布情况及多样性。方法对结肠癌患者进行维吾尔医学体液分型并挑取其中异常黑胆质患者,采集患者粪便样品,提取细菌总DNA并设计一对通用引物扩增16SrDNA的V6-V8可变区进行变形梯度凝胶电泳（DGGE）,从DGGE指纹图谱中比较各个结肠癌患者肠道菌群分布情况。结果通过试验得到了维吾尔族异常黑胆质结肠癌肠患者肠道菌群结构特征的DNA指纹图谱,从指纹图谱上选择一些特异性条带切下来回收,测序,测序出来的序列在基因库进行比对做出进化树了解菌群之间的亲缘性。结论异常黑胆质结肠癌患者肠道菌群基因序列的亲缘性结果显示肠道菌群的多样性明显少其中肠道优势菌比例低。

异常黑胆质成熟剂总酚与顺铂、多西他赛联合对人宫颈癌SiHa细胞的影响

目的研究异常黑胆质成熟剂水提物总酚与顺铂、多西他赛联合对体外培养的人宫颈癌SiHa细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法总酚分别与顺铂、多西他赛联合作用于SiHa细胞,采用MTT法检测细胞增殖抑制情况,倒置相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术检测SiHa细胞Bcl-2、端粒酶表达水平。结果总酚-顺铂组、总酚-多西他赛组的细胞增殖抑制率分别明显高于顺铂组、多西他赛组(P<0.05),且细胞体积变小、变圆,可见较多脱落圆形死亡细胞,细胞Bcl-2、端粒酶表达水平显著降低(P<0.05)。结论异常黑胆质成熟剂总酚与顺铂、多西他赛联合可能通过降低Bcl-2和端粒酶表达水平而抑制SiHa细胞的增殖。

维汉两民族异常黑胆质型冠心病患者部分血栓前状态指标改变的比较

目的 探讨维汉两民族异常黑胆质型冠心病患者部分血栓前状态指标间的差异。方法 选择年龄在40-75岁间，无亲缘关系的81例异常黑胆质型冠心病患者（男性62例、女性19例，平均年龄58岁）、93例非异常黑胆质型冠心病患者（男性74例、女性19例，平均年龄57岁）、132例健康人（男性82例、女性50，平均51岁），采用流式细胞仪检测法、全自动细胞仪检测法、用全自动血凝分析仪，全自动生化自动仪检测外周血中白细胞计数、血小板计数、D二聚体、凝血酶原时间、部分凝血酶时间、纤维蛋白原，并对结果进行分析。结果 维吾尔族冠心病患者中异常黑胆质证占46.39％,非异常黑胆质证占53.61％，与正常对照组相比，异常黑胆质证组和非异常黑胆质（异常血液质、异常黏液质、异常胆液质）证组D-二聚体、PT、APTT、FIB等指标间存在统计学差异（P〈0．05）,与异常黑胆质证组与非异常黑胆质证组相比D-二聚体有统计学差异（P〈0．05）。汉族冠心病患者中异常黑胆质证占46.75％,非异常黑胆质证占53.25％，与正常对照组相比，异常黑胆质证组和非异常黑胆质（异常血液质、异常黏液质、异常胆液质）证组PLT、D-二聚体、APTT、FIB等指标间存在统计学差异（P〈0．05）;与异常黑胆质证组与非异常黑胆质证组相比D-二聚体、FIB有统计学差异（P〈0．05）。维汉两民族异常黑胆质型冠心病患者血栓前状态指标间无统计学差异。结论 异常黑胆质证可能是冠心病的维医重要证型，而血栓前状态是冠心病和维吾尔医学异常黑胆质证发病的共同分子机制之一；维吾尔族和汉族异常异常黑胆质型冠心病患者分别均存在明显的血栓前状态，但维汉两民族异常黑胆质型冠心病患者血栓前状态指标间无统计学差异，可推测异常黑胆质型冠心病患者的血栓前状态指标无明显的民族差异。

异常黑胆质成熟剂总酚与化疗药联合对人宫颈癌SiHa细胞体外生长的影响

目的探讨异常黑胆质成熟剂总酚与顺铂、多西他赛联合应用对体外培养的人宫颈癌SiHa细胞生长的影响以及作用机制。方法异常黑胆质成熟剂总酚分别与顺铂、多西他赛联合作用人宫颈癌SiHa细胞后,采用MTT法检测细胞增殖抑制情况,荧光倒置显微镜下观察不同用药组细胞生长及被抑制情况。结果 (1)异常黑胆质成熟剂总酚联合顺铂、多西他赛与相同浓度顺铂、多西他赛单用处理SiHa细胞相比,前者对细胞的增殖抑制作用更强(P<0.05);顺铂、多西他赛浓度不变时,随着总酚浓度的升高,抑制作用增大(P<0.05);随着时间的延长(24、48、72h),抑制率也逐渐升高(P<0.05)。(2)在75～175μg/mL浓度范围内,异常黑胆质成熟剂总酚对SiHa细胞的增殖有明显的抑制作用,并且随着药物浓度的增加和作用时间的延长,细胞的抑制率明显升高(P<0.01)。(3)SiHa细胞经异常黒胆质成熟剂总酚作用后均出现明显的凋亡特征,且随着药物浓度的增高,作用时间的延长,细胞形态学变化更明显。结论异常黒胆质成熟剂总酚与化疗药物联合应用能抑制宫颈癌SiHa细胞体外生长,并呈明显的量效关系和时效关系。

维吾尔族传统医学异常黑胆质证的研究概况

黑胆质(sewda)是维吾尔医学体液(hilit)论中的4种体液之一,维吾尔医学认为黑胆质异常易导致肿瘤、糖尿病、哮喘、高血压等多种复杂病症。鉴于异常黑胆质在复杂疾病中的重要作用,哈氏与努氏根据维医理论,采用多因素复合方法成功建立异常黑胆质载体动物模型,这为研究异常黑胆质的本质及其引起的各类病症研究奠定了基础。现代医学研究发现异常黑胆质的形成与机体神经-内分泌-免疫功能紊乱密切相关,本文就近年对维医体液论,特别是其中的异常黑胆质及其引起的相关病症、异常黑胆质载体动物模型的建立方法及证本质研究等做一综述。

ACE基因多态性与维吾尔族异常黑胆质型高血压病的相关性

目的探讨维吾尔族血管紧张素转化酶(angioten-sin converting enzyme,ACE)基因插入/缺失(insertion/deletion,I/D)多态性与异常黑胆质型高血压病的关系.方法将维吾尔族不同异常体液人群138例分成异常黑胆质型高血压组和非异常黑胆质型高血压组,采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性技术进行I/D位点多态性检测.结果异常黑胆质型高血压组和非异常黑胆质型高血压组基因型分布ID、II和DD分别为68.33%、23.33%、8.34%和64.10%、11.54%、24.36%,差异有统计学意义(P<0.05);异常黑胆质型高血压组等位基因I、D频率为57.5%、42.5%,而非异常黑胆质型高血压组为43.6%、56.4%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 ACE基因ID、II基因型及I等位基因可能是维吾尔族异常黑胆质型高血压病发病的遗传危险因素之一.