含荧光素酶基因的黑胸大蠊浓核病毒重组质粒的构建与表达

A luciferase gene has been inserted into the recombinant plasmid PfDNV-pUC119 which contained partly deletion of genome of Periplanete fuliginosa densovirus (PfDNV). The recombinant plasmid with luciferase gene was co-transfected with pfDNV-pUC119 into Periplanele fuliginosa larvae and had a high luciferase gene expression in enteron of the transfected larvae.

黑胸大蠊浓核病毒分类的相关研究

黑胸大蠊浓核病毒(pfDNV)是在我国首先发现并正式分类鉴定的蟑螂浓核病毒。该病毒属细小病毒科(Parvoviridae),浓核病毒亚科(Densovirinae)。但对该病毒的归属问题却一直没有确定,本文对此予以探讨。pfDNV的最新研究进展包括两个方面:全基因组核苷酸序列的测定,以及利用低温电镜技术和像重构方法对该病毒的三维重构(分辨率23)。在此基础上,本文将pfDNV与其它病毒在基因组结构和三维结构方面进行了全面的对比分析,其结果并不支持目前对pfDNV的分类,因此建议对该病毒重新进行分类。

黑胸大蠊浓核病毒磷脂酶A_2功能区的克隆及其表达

通过RT-PCR扩增获得PfDNV结构蛋白基因VP1含磷脂酶A2(PLA2)功能区片段,将其连接到pMD18-T载体上并亚克隆到原核表达载体pET28a和pET26b,构建阅读框架正确的重组表达载体pET28a-PLA和pET26b-PLA,转化大肠杆菌BL21-codonplus(DE3)-RIL,经IPTG诱导,SDS-PAGE显示得到了目的融合蛋白,以抗组氨酸的单克隆抗体对经Ni-NTA亲和层析柱纯化的目的蛋白进行了westernblot鉴定,结果表明成功表达PfDNV结构蛋白PLA2,对于研究该酶的生物学特性及其在病毒对细胞侵染过程中的功能奠定了基础。

黑胸大蠊浓核病毒NS2蛋白的表达、抗体制备及亚细胞定位

ns2是黑胸大蠊浓核病毒的一个非结构基因,所编码的蛋白质大小为30kD,是一个功能未知的基因。为了对该基因进行深入的功能研究,从感染了黑胸大蠊浓核病毒的蟑螂的后肠组织中通过RT-PCR得到ns2基因编码序列,将其构建于原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得融合表达产物。此融合蛋白经分离纯化后,免疫新西兰大白兔,制备其多克隆抗体。采用Western印迹技术,用该抗体检测ns2基因的真核表达产物,证明该抗体有较好的针对NS2蛋白的专一性,可用于对NS2结构和功能的研究。同时,将此编码序列克隆至果蝇细胞表达载体pAC,得到重组质粒后转染果蝇S2细胞表达重组蛋白,通过共聚焦显微镜用该抗体检测该蛋白在S2细胞中的亚细胞定位,发现NS2蛋白主要定位于细胞质,核内仅有少量分布。

黑胸大蠊浓核病毒NS2蛋白亚细胞定位

黑胸大蠊浓核病毒（Periplaneta fuliginosa densonucleosis virus,PfDNV）是胡远扬等人在国内首次报道,并在国内外第一个正式分类鉴定的蟑螂浓核病毒[1],ICTV第八次会议正式将其独立列为一个属：Pefudensovirus。

蟑螂浓核病毒全核苷酸序列与基因组结构

测定了黑胸大蠊浓核病毒（ＰｆＤＮＶ）复制型（ＲＦ） ＤＮＡ的核苷酸序列，确定ＰｆＤＮＶ基因组全长为５４５４个核苷酸，基因组两末端存在典型的发夹结构和倒置重复序外．ＰｆＤＮＶ基因组正链有４个大的可读框（ＯＲＦ），负链含３个大的可读框，并且可读框都集中在每条链的 ５’端．两个可能的功能性启动子分别位于图距单位 ３和 ９７处．基因组存在基因重叠现象和内含子区域．并对 Ｐｆ ＤＮＶ基因组与同科其他细小病毒进行了同源性比较．推测 ＰｆＤＮＶ基因组正链编码非结构蛋白，负链编码结构蛋白。