萝卜黑腐病的病原鉴定及室内药剂筛选

在天津萝卜种植区发现一种严重危害萝卜的腐烂病,从发病组织中分离到5株细菌菌株,经过形态观察、致病性测定和16S rDNA序列分析研究病原种类,并采用抑菌圈法评价病原对20种常见杀菌剂的室内抑菌效果,以期为该病害的诊断和防治提供参考依据。结果表明,病原为野油菜黄单胞杆菌野油菜黑腐病致病变种(Xanthomonas campestris pv. campestris);不同杀菌剂间抑菌效果存在差异,供试的20种杀菌剂中13种杀菌剂对该病原有抑制作用,其中仅0.3%四霉素水剂和80%乙蒜素乳油对病原的抑制效果优于98%硫酸链霉素原药,27.12%碱式硫酸铜悬浮剂等7种杀菌剂对病原无抑制效果。

卫青萝卜黑腐病病原鉴定及防治药剂的筛选

近年来,天津地区青萝卜产区出现萝卜病害新症状,当地农民称之为“黑梗病”,其发病早、蔓延快,已成为天津地区青萝卜生产上棘手难防的病害之一。为准确地鉴定诱发萝卜“黑梗病”的致病菌,明确病害种类,筛选出高效、低毒的防控药剂,调查了卫青萝卜“黑梗病”田间发生情况,通过形态学、致病性测定及分子生物学鉴定相结合的方法鉴定了“黑梗病”的致病菌属性;针对靶标病原菌,采用药剂抑菌圈法对19种药剂进行了室内毒力测定及田间药效试验。结果表明,引起当地卫青萝卜“黑梗病”的致病菌为野油菜黄单胞杆菌野油菜致病变种Xanthomonas campestris pv.campestris(Pam.)Dowson,是萝卜黑腐病的新症状表现;并且发现病原菌存在致病力分化,筛选到强致病力菌株LB-B。采用强致病力菌株LB-B,通过室内毒力测定及田间药效试验,明确了参试杀菌剂对病菌的毒力系数,其中有10种药剂对萝卜黑腐病存在不同程度的抑制作用,以0.3%四霉素水剂和10%丙硫唑悬浮剂的综合表现最好,高质量浓度1000 mg·L^(-1)对致病菌的抑菌率达89.52%以上,EC50分别为174.04 mg·L^(-1)和156.69 mg·L^(-1),田间防治效果稳定、持效期长,为萝卜黑腐病的有效防治提供了候选药剂。

双重PCR区分检测花生黑腐病菌和花生基腐病菌

黑腐病和基腐病是威胁花生生产的重要病害。两种病害在田间发病症状十分相似,凭症状区分诊断困难。本研究利用calmodulin(cmdA)基因序列设计特异性引物,通过优化反应体系和反应条件,针对花生黑腐病菌和基腐病菌进行了双重PCR的区分检测。结果表明,在反应体系浓度为1.8×、引物浓度为0.2μmol/L、退火温度为62℃、反应循环数为37的条件下,可特异性地分别扩增出两条目的条带(274 bp和409 bp),检测灵敏限度为100 pg/μL。成功建立了可准确、快速区分检测花生黑腐病菌和花生基腐病菌的双重PCR,可为准确诊断和及时防控花生两种易混淆的病害提供科学的参考。

荧光假单胞菌YG-1对烟草根黑腐病菌的体外拮抗

为丰富烟草根黑腐病菌高效拮抗菌资源,从玉溪烟草种植区根际土壤中分离烟草根黑腐病高效拮抗菌,结合生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定高效拮抗菌,测定菌株发酵液挥发性物质及发酵液粗提物对根黑腐病菌的拮抗活性。结果表明,筛选得到的12株拮抗菌中YG-1表现出最强的拮抗活性,经生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定为荧光假单胞菌(Pseudomonas fluroescens)。菌株YG-1发酵液挥发性物质可有效抑制烟草根黑腐病菌的生长,使菌丝扭曲畸形,并且降低产孢量,经GC-TOF-MS测定,YG-1发酵液含有酸、醛、酯以及一些含硫化合物,其中酸类物质和含硫化合物抑菌效果强。菌株YG-1发酵液粗提物能破坏烟草根黑腐病菌孢子质膜,当粗提物质浓度为0.25 mg/mL时,孢子失膜率达55.42%,同时检测到有明显的离子和核酸渗漏。拮抗菌YG-1具备开发为生防菌剂的潜力。

解淀粉芽孢杆菌OMR1-7菌株对拟石莲花属多肉植物黑腐病的生防效果

【目的】明确解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)对拟石莲花属(Echeveria)多肉植物黑腐病病原菌——尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的生防效果。【方法】从小粒野生稻(Oryza minuta)根部分离和鉴定了1株内生解淀粉芽孢杆菌OMR1-7菌株,测定其对拟石莲花属多肉植物品种血色罗密欧黑腐病菌F.oxysporum KMEARM-2菌株和静夜黑腐病菌F.oxysporum KMJY6菌株的拮抗效果、产铁载体和生物膜能力、定殖能力以及温室防效。【结果】OMR1-7菌株对2种黑腐病菌菌丝抑制率分别为57.15%和74.29%,菌体抑制率分别为84.82%和86.15%。该菌株可造成2种黑腐病菌的侵染结构畸形,产孢量减少。该菌株产铁载体相对量为80.98%,具有较强的铁元素竞争能力,且能够产生生物膜,在血色罗密欧和静夜植株的根、茎、叶内稳定定殖,预防黑腐病菌的侵入和蔓延。OMR1-7菌株对血色罗密欧和静夜黑腐病具有良好的生防效果,温室防效分别为80.08%和78.89%。【结论】研究结果将为拟石莲花属多肉植物黑腐病的生物防治提供微生物菌种资源,为相关生防菌剂及制剂研发提供参考。

花椰菜黑腐病防治关键技术

黑腐病是花椰菜的一种重要病害,一旦发生,感染面积较大,严重影响花椰菜的产量和品质。黑腐病除危害花椰菜外,还危害白菜、甘蓝、萝卜等十字花科蔬菜。1.发病规律。黑腐病属细菌性病害,病原菌可在种子内或随病残体在土壤中越冬,从水孔或伤口侵入。大多数花椰菜品种定植后到莲座期不容易感染黑腐病,进入莲座期后一般14片叶左右开始发病,结球期天气渐凉,发病率降低。进入莲座期后,遇到高温、多雨时容易感病。

青花菜抗黑腐病育种研究进展

综述了黑腐病病原菌的鉴定分类、青花菜黑腐病病原菌的侵入途径与症状、抗性种质资源鉴定及生物技术等研究进展,探讨了现存问题与未来需要加强研究的地方,为青花菜抗黑腐病育种提供参考。

烟草根黑腐病拮抗菌的分离鉴定和生防作用特性研究

为挖掘对烟草根黑腐病菌有较强拮抗效果,且可在烟株根部稳定定殖的生防菌资源,以烟草根黑腐病菌为靶标,利用稀释涂布法和平板对峙法分离筛选出高效拮抗活性菌株,对其进行系统发育分析以及粗脂肽抑菌活性检测;并运用PCR技术检测拮抗细菌的脂肽编码基因,利用趋化性及生物膜成膜等试验研究烟草根系分泌物及其产生的各种有机酸对拮抗菌根部定殖的影响。结果表明:从烟草根际土壤中分离得到两株Thielaviopsis basicola高效拮抗菌株S2-1和SNSY15-5,分子鉴定表明,S2-1和SNSY15-5均为芽孢杆菌属细菌;拮抗菌S2-1和SNSY15-5脂肽粗提物对T.basicola毒力较强,EC 50值分别为1.93和2.56 mg·mL^(-1),SNSY15-5含有参与脂肽类家族细菌素(bmyB)、生物素操纵子(bioA)和假定蛋白(yngG)合成的基因;S2-1菌株中含有参与脂肽类家族生物素操纵子(bioA)合成的基因;烟草品种K326根系分泌物产生的苹果酸对S2-1和SNSY15-5有较强的吸引作用,S2-1和SNSY15-5在苹果酸中的数量分别达到63.35×10^(4) CFU·mL^(-1)和42.35×10^(4) CFU·mL^(-1),K326烟草根系分泌物及其草酸可促进S2-1生物膜形成,而K326烟草根系分泌物及其柠檬酸则促进SNSY15-5生物膜形成。该研究结果为开发效果稳定的微生物菌剂提供理论基础。

基于改进UNet++模型的葡萄黑腐病病斑分割和病害程度分级

为了解决葡萄病害图像边缘分割模糊和发病初期分割难的问题,基于PlantVillage数据集中的葡萄黑腐病图像,提出一种基于改进UNet++的葡萄黑腐病病斑分割模型。该模型在提取图像特征时:一方面,采用自适应软阈值化方法消除噪声影响,提高葡萄病斑边缘的分割精度;另一方面,采用长、短连接结合的方式构建UNet++中的跳跃式连接结构,降低模型的计算复杂度。同时,在模型的横向输出层中融合多尺度特征,增强病斑的语义信息,进一步提高目标分割精度。在该模型的损失函数中,将Dice损失函数和交叉熵损失函数进行线性加权组合,以解决病斑像素面积与叶片面积不平衡的问题。采用五折交叉验证进行模型训练与测试。结果显示,本文模型的像素准确率达到98.433%,平均交并比达到92.056%,病斑交并比为81.230%,Dice系数为0.941,均优于传统的UNet++模型。采用病斑占叶面积的比例对病害程度进行分级。结果表明,本文模型对病害等级的划分准确率达97.41%。该模型能精确实现对葡萄黑腐病病斑边缘和小病斑的分割,以及病害程度分级,具有良好的稳健性。

结球甘蓝黑腐病抗性评价及鉴定方法比较研究

黑腐病是由野油菜黄单胞菌野油菜致病变种引起的细菌性病害,是为害结球甘蓝的产量与品质的主要病害之一.尽管黑腐病的病原菌有多个生理小种,但是世界上黑腐病的发生主要是由Xcc1和Xcc4引起的,而甘蓝中抗Xcc1和Xcc4的种质资源相对较少.为了明确重庆地区的黑腐病病原菌,筛选抗黑腐病的甘蓝种质,本研究首先利用分子标记辅助鉴定重庆地区病原菌,然后采用离体整叶喷雾接种法评价30份甘蓝资源的抗病性,对筛选出的抗病种质采用离体叶片打孔喷雾法和滴接法复检,以及分子标记辅助鉴定.结果发现,重庆地区黑腐菌为Xcc1生理小种;离体整叶喷雾接种法接种16 d后,1份甘蓝材料(S18)表现为抗病,6份为耐病(S18S,S232,S23S,165,167,169);相比离体叶片打孔喷雾法,打孔滴接法能更准确区分抗病材料(S18)和耐病材料(S232);抗病材料(S18)和耐病材料(S232)均不含来自埃塞俄比亚芥抗黑腐病标记,但是它们同时具有BR6-InDel分子标记.该研究结果确定了重庆地区黑腐病病原菌生理小种为Xcc1,筛选出了抗该生理小种的甘蓝种质,明确了快速鉴定黑腐病抗性的方法,可为甘蓝抗黑腐病的种质创新和新品种选育提供技术支撑.

烟草根黑腐病化学防治药剂及复配增效配方的筛选

目的:筛选防治烟草根黑腐病菌的有效单一药剂及其复配制剂。方法:采用菌丝生长速率法测定7种商品化杀菌剂对烟草根黑腐病菌的室内毒力活性,筛选出防效较好的单一杀菌剂;在此基础上,对防效较好的单一杀菌剂进行复配,并对复配药剂开展烟草根黑腐病菌的室内毒力测定试验。结果:室内杀菌剂毒力测定结果表明,咪鲜胺、甲基硫菌灵2种杀菌剂对烟草根黑腐病菌均具有较强的抑制作用;且咪鲜胺和甲基硫菌灵按1∶1复配时,对烟草根黑腐病菌毒力有明显的协同增效作用,EC_(50)为0.19 mg/L。结论:咪鲜胺和甲基硫菌灵单剂及其复配药剂均对烟草根黑腐病菌的菌丝生长具有抑制效果,该结果为后续烟草根黑腐病田间防效试验提供了理论依据。

结球甘蓝遗传图谱的构建及抗黑腐病QTL定位

为了进一步明确结球甘蓝抗黑腐病性状的遗传基础,选育优质抗病品种,以结球甘蓝高抗黑腐病1号生理小种材料4674为父本,高感材料4673为母本,杂交获得F_(1),F_(1)自交获得152个单株的F_(2)群体。采用苗期喷雾法对F_(2)群体进行接病,12~14 d后,按照甘蓝苗期鉴定方法对F_(2)群体进行表型鉴定。从404个分子标记中筛选得到175个多态性好且条带清晰的标记。随后,使用这175个分子标记对F_(2)群体进行基因型检测和遗传连锁图谱的构建。最后,结合抗病性表型鉴定数据和遗传图谱对甘蓝抗黑腐病性状的QTL进行标记定位。结果表明:有154对分子标记连锁到9条染色体上,其中包括110对InDel标记和44对SSR标记,覆盖长度714.29 cM,标记间平均图距4.64 cM。共定位到7个QTL位点,其中有3个为主效位点,分别是qBR-7-2、qBR-7-3和qBR-4-3,位于7号染色体的CG842110~CG842482及M29~M39标记间和4号染色体上的CD838151~BOE417,LOD值分别为5.75,3.20,3.47,可解释的表型贡献率分别为16.0%,9.2%,10.0%。

基于改进YOLOF的葡萄叶片黑腐病检测方法研究

葡萄在生长过程中易感染各种病害,导致产量和品质下降,对病害的准确识别是防治病害的基础和关键。本文提出了一种基于YOLOF的改进算法,将EfficientNet网络应用于YOLOF算法的主干网络,对葡萄叶片黑腐病病害进行检测。结果表明:改进后的算法识别黑腐病病害的准确率达89.4%,较原YOLOF算法提升了3.1个百分点,为检测葡萄叶部病害提供了一种新的思路。

影响甜菜黑腐丝囊霉的几种生态学和生物学因子(英)

通过对河西灌区甜菜(Beta vulgaris L.)黑腐病(Sugar Beet Black Rot)为期3 a的研究,探讨了甜菜栽培品种与病害发病率及病原菌黑腐丝囊霉(Aphanomyces cochlioides)分离频率的关系以及3种环境因子即温度、pH值、不同天然培养基与甜菜黑腐丝囊霉的关系。结果表明:各栽培品种在田间的发病率与室内病原分离频率不同,其中工农2号田间发病率为1.3％,室内分离频率为93％,工农5号分别为1％和7.2％,宁甜301分别为2％和6.1％,工农2号具有更大的耐病性;甜菜黑腐丝囊霉的生长温度范围为5～30℃,最适温度为25～27℃,对高温敏感,33℃为其致死温度;甜菜黑腐丝囊霉可在pH 3.5～11范围内生长,最适pH为5～9.9;甜菜黑腐丝囊霉在PDA、玉米粉琼脂、甜菜汁、麦芽糖-胨、麦芽糖酵母汁及燕麦琼脂培养基上均可生长,其中在甜菜汁培养基上生长最好.

及时防治莲叶脐黑腐病

近年来,莲叶脐黑腐病已成为湘莲叶部主要病害,在各湘莲种植区普遍发生,发生严重的田块,40%~50%的叶片发病,影响莲子产量。由于该病害是近几年才在湖南省莲区出现,许多莲农对该病害认识不足,甚至误认为是福寿螺为害,以致于不能及时采取防治措施。现将该病害的发病症状、为害特点和防治方法作如下介绍。

不同抗性甘蓝品种对黑腐病的生理响应

为了探明不同甘蓝品种对黑腐病的抗性与生理生化指标之间的关系,为深入研究甘蓝对黑腐病的抗病机理和加快抗病品种的选育提供依据,本试验对5个抗性不同的甘蓝品种幼苗接种黑腐病菌,并在接种后不同时期取样,测定根长、根系鲜重、根系活力、叶片POD活性、叶片SOD活性、叶片PAL活性.结果表明,接种黑腐病菌后根长和根系鲜重均低于未接种植株,抗病品种受病原菌侵染的影响小于感病品种;根系活力提升,抗病品种根系活力增加率高于感病品种;叶片POD活性、SOD活性和PAL活性升高,抗病品种酶活性增加率普遍高于感病品种.

利用AFLP-银染法筛选与抗甘蓝黑腐病性状连锁的分子标记

利用ＡＦＬＰ－银染法在一对花椰菜抗、感黑腐病的近等基因系中筛选到四个与抗黑腐病性状、一个与感黑腐病性状连锁的ＤＮＡ 分子标记．对其中一个４００ｂｐ 的抗病标记进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交检测，结果表明该标记在抗病品系中存在明显的杂交信号，而在感病品系中无杂交信号．该标记测序后，通过Ｇｅｎｂａｎｋ 进行同源性检测，发现其与拟南芥菜ＢＡＣ克隆Ｆ７Ｎ２２ 部分序列有７５％ 的同源性．该ＢＡＣ克隆位于拟南芥菜５ 号染色体的黑腐病抗性基因（ｒｘｃ２）附近．这意味着该标记可能与甘蓝黑腐病抗性基因紧密连锁．

花生黑腐病菌的生物学特性

在实验室条件下观察了花生黑腐病菌(Cylindrocladium parasiticum)的菌丝生长和产孢等生物学特性。结果表明:花生黑腐病菌在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)、V-8汁(V8)、酵母蛋白胨葡萄糖(YPDA)、燕麦琼脂(OMA)和合成真菌(SF)等培养基上均能生长,其中以燕麦琼脂培养基最适宜菌丝生长,而V8汁培养基(V8)比较适宜微小菌核形成、分生孢子产生和子囊壳的形成;花生黑腐病菌能够利用葡萄糖、果糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖和淀粉等碳源进行生长,其中葡萄糖、乳糖和淀粉最适宜菌丝生长和微小菌核形成,但这些碳源均不适宜分生孢子和子囊壳的产生;花生黑腐病菌能够利用硝酸钠、尿素、硫酸铵、酵母粉和蛋白胨等氮源,其中硝酸钠最适宜菌丝生长和微小菌核形成,尿素最适宜分生孢子的形成,而子囊壳则仅仅在以硝酸钠为氮源的培养基中少量产生;花生黑腐病菌在10～30℃温度范围内均能生长,但菌丝生长和产孢都以25～30℃最适宜;光照时间对花生黑腐病菌的菌丝生长没有影响,但光暗交替有利于分生孢子的形成;花生黑腐病菌在pH值4.0～10.0时均能生长,但以中性偏酸比较适宜。

纳米银对甘蓝黑腐病菌抑制作用的研究

测定纳米银对甘蓝黑腐病菌的抑制作用。结果表明:纳米银对甘蓝黑腐病菌的毒力(EC50)为0.020 9μg/mL;当处理质量浓度为0.02μg/mL时,甘蓝黑腐病菌的呼吸强度和群体的生长数量均受到明显的抑制;剂量为0.1μg/mL的纳米银可使甘蓝黑腐病菌细胞膜受损,电导率明显提高。盆栽试验结果表明:质量浓度为30μg/mL的纳米银对小白菜黑腐病的防治效果可达67.67%。

花椰菜幼苗叶片抗氧化酶系统与抗黑腐病关系的研究

在盆栽条件下,花椰菜抗病品种雪峰和感病品种2003X-106的幼苗在接种黑腐病菌后,叶片组织内O2-·产生速率, SOD、POD、PAL活性,MDA含量和膜透性都有不同程度的提高和增加。与2003X-106相比,雪峰的O2-·产生速率和SOD、 PAL活性的增加更为显著,POD活性也要高于2003X-106;而MDA含量和电导率的增幅要明显低于2003X-106。表明抗 病品种雪峰比感病品种2003X-106具有更强的抗黑腐病能力和抗氧化能力。