使用3D-LUT的黑色生成算法

针对高品质彩色打印的应用需求,提出一种改进的GCR黑色生成算法。首先提出生成打印样本集的改进方法,然后介绍了使用3D-LUT建立打印机模型时的关键问题,最后给出了传统GCR方法和新方法的结果对比。相比传统方法,新方法明显增大了低明度部分色域,提高了打印机色彩再现能力减小了校正误差。,

山羊皮肤组织miRNA测序与miR-129-5p调控黑色素生成的功能研究

旨在筛选对黑色素生成起调节作用的小RNA,并探究其对山羊肤色及毛色的调控机制。本研究采集了健康酉州乌羊(Youzhou dark goat, YZDG)、川东白山羊(Chuandong white goat, CDWG)100日龄胎羊皮肤样本(n=3),和健康2~3周岁大足黑山羊(Dazu black goat, DBG)、内蒙古绒山羊(Inner Mongolia cashmere goat, IMCG)个体皮肤样本(n=3),利用组织切片染色技术观察皮肤中黑色素沉积情况;通过小RNA测序技术筛选差异miRNAs;培养B16-F10皮肤黑色素瘤细胞,利用细胞转染、qPCR、Western Blot、黑色素含量检测等技术验证miR-129-5p对黑色素生成的影响。结果显示,黑色素颗粒明显在YZDG胎羊皮肤和DBG毛囊的毛球、毛干、外根鞘等部位沉积,而在CDWG胎羊皮肤和IMCG表皮、毛囊中没有被观察到。经测序分析,在肤色差异的YZDG和CDWG中筛选到62个差异表达miRNAs,其中31个在乌皮山羊中上调,31个下调。在毛色差异的DBG和IMCG中,筛选到38个差异表达miRNAs,其中10个在黑色被毛山羊中表达上调,28个表达下调。两组测序结果均显示miR-129-5p在乌皮和黑色被毛山羊皮肤中高表达(P<0.05)。在细胞中过表达miR-129-5p后,相比于对照组,mimics组细胞黑色素沉积量提高了18.9%(P<0.05),TYR、TYRP1基因表达量分别上调57.3%和16.5%(P<0.05),蛋白表达量分别显著上调49.2%和40.2%(P<0.05);但MITF基因及其蛋白表达量无显著变化(P>0.05)。在抑制miR-129-5p后,inhibitor组TYR基因mRNA表达下调38.9%、蛋白表达水平下调21.1%(P<0.05);TYRP1、MITF蛋白表达水平分别下调25.3%及28.4%(P<0.05)。本研究发现,miR-129-5p在不同肤色及毛色的山羊皮肤中差异表达,且可通过调控TYR、TYRP1等关键基因的表达影响黑色素的生成,是山羊肤色和毛色形成过程的重要调节因子。

来源于裂壶藻渣的外泌体制备、鉴定及其抗黑色素生成功效初探欧阳贵锦

[目的]初步探究来源于海洋微藻裂壶藻(Schizochytrium limacinum)的外泌体的医美功能.[方法]从提取藻油后的裂壶藻废渣中提取外泌体,通过透射电子显微镜(TEM)和纳米流式分析仪(NanoFCM)对其进行结构鉴定,采用二喹啉甲酸(BCA)法测定其中的蛋白浓度,并建立黑点青鳉(Oryzias melastigma)模型测试外泌体抗黑色素生成功效.[结果]TEM结果可见裂壶藻源外泌体呈典型的圆形或椭圆形杯状形态,NanoFCM测得外泌体浓度2.96×10^(12)mL^(-1),粒径为(90.8±19.9)nm;黑点青鳉实验证实裂壶藻源外泌体导致黑色素斑数量减少,具有显著的抗黑色素生成功效,且抑制率与浓度呈正相关.[结论]本研究建立了裂壶藻渣源外泌体的制备方法和抗黑色素生成功效测试模型,为其高值化利用及美白功效评价提供了新的方向和策略.

川芎、益母草有效成分配伍对酪氨酸酶活性、黑色素生成的抑制效应研究

目的:探索川芎与益母草有效成分配伍对酪氨酸酶活性和黑色素生成的影响。方法:采用左旋多巴氧化法测定川芎水煎液和益母草水煎以及川芎总生物碱和益母草总生物碱不同质量配比对酪氨酸酶活性的抑制作用,筛选出最佳组合进行后续实验。MTT法检测所筛选出的组合对B16细胞存活率的影响。随后实验分为细胞对照组、α-MSH诱导模型组和模型+所筛选出的最佳组合(50、100、200μg·mL^(-1))、模型+阳性组(曲酸,100μg·mL^(-1))。NaOH裂解法和多巴氧化法检测细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性。结果:通过筛选得出川芎总生物碱和益母草总生物碱质量比为1:2的组合效果最佳。药物配伍25、50、100、200、250μg·mL^(-1)对B16细胞无明显抑制作用。与空白组相比,模型组B16细胞中酪氨酸酶活性、黑色素水平增高(P<0.05,P<0.01),各剂量药物干预后,小鼠黑色素瘤细胞B16中酪氨酸酶活性、黑色素水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:川芎总生物碱和益母草总生物碱质量比为1:2的组合对酪氨酸酶抑制效果最佳,且能显著抑制B16细胞内酪氨酸酶活性和黑色素的生成。

黑色素的生成代谢机制及研究方法进展

随着时代的发展,“以白为美”思潮在近几年迎来了高涨期,美白市场空前繁荣。黑色素合成代谢过程在很大程度上调控着皮肤的颜色,因此美白剂的开发主要依赖于活性物质对黑色素的调节作用。本文将黑色素的合成、转运以及代谢过程细分为以下五个步骤:1)黑素细胞内黑素小体的装配;2)黑素小体的成熟及黑素的合成;3)成熟的黑素小体向黑素细胞树突状远端移动;4)黑素小体转移至角质形成细胞;5)黑素小体在角质形成细胞中的再分布或降解、排出。结合以上五个步骤的最新研究进展对其关键机制、重要标志物以及检测方法进行总结阐述,为美白剂的开发提供更加具体且科学的理论基础及开发思路。

蜕皮甾酮对皮肤光老化和黑色素生成的影响

目的观察蜕皮甾酮对皮肤光老化和黑色素生成的影响。方法①实验分为正常对照组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,各组分别处理角质形成细胞(HaCaT细胞)、黑素细胞(B16F10细胞)和人真皮成纤维细胞(HDF细胞)后,MTT法检测细胞活力。②实验分为正常对照组、UVB组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,Annexin V-FITC/PI双标法检测HaCaT细胞凋亡情况,Hoechst 33258染色法检测凋亡细胞的形态,Western blot法检测HaCaT细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、环氧化酶-2(COX-2)、沉默调节蛋白1(Sirt-1)表达情况。③实验分为正常对照组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,Western blot法检测HaCaT细胞中透明质酸合成酶2(HAS-2)、转谷氨酰胺酶1(TGM1)和HDF细胞中Ⅰ型胶原蛋白Iα1肽链(COL1A1)表达情况。④实验分为正常对照组、黑色细胞刺激素组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组、熊果苷组,采用分光光度仪检测B16F10细胞黑色素生成及分泌情况。⑤实验分为正常对照组、左旋多巴组、1.0μmol/L蜕皮甾酮组、1.5μmol/L蜕皮甾酮组、2.0μmol/L蜕皮甾酮组,采用分光光度仪检测各组蘑菇酪氨酸酶活性。结果不同浓度的蜕皮甾酮对HaCaT细胞、B16F10细胞、HDF细胞活力均无明显影响。蜕皮甾酮各组HaCaT细胞凋亡率及HaCaT细胞中MMP-1、MMP-9、COX-2蛋白相对表达量均明显低于UVB组(P均<0.05),HaCaT细胞中Sirt-1蛋白相对表达量均明显高于UVB组(P均<0.05)。蜕皮甾酮各组HaCaT细胞中HAS-2、TGM1蛋白相对表达量和HDF细胞中COL1A1蛋白相对表达量均明显高于正常对照组(P均<0.05)。蜕皮甾酮各组和熊果苷组B16F10细胞黑色素生成和分泌吸光度值均明显低于黑色细胞刺激素组(P均<0.05)。蜕皮甾酮各组蘑菇酪氨酸酶活性均明显低于左旋多巴组(P均<0.05)。结论蜕皮甾酮可能具有延缓皮肤光衰老、抗皱和抗黑色素生成作用。

苯硫脲对斑马鱼黑色素生成及早期发育的影响

为探索苯硫脲抑制斑马鱼黑色素生成的最佳浓度及苯硫脲对斑马鱼早期发育的影响,用0.05～2.0 mmol/L苯硫脲处理28-体节期斑马鱼胚胎,用1.0～15 mmol/L苯硫脲处理受精后2、10、24 h的斑马鱼胚胎。结果表明,在不同的发育时期,抑制黑色素生成的苯硫脲最佳浓度是不同的;且发育时期越早,斑马鱼对苯硫脲毒性越敏感;苯硫脲低于0.2 mmol/L时对斑马鱼孵化、存活和早期发育无显著影响;0.2 mmol/L苯硫脲导致斑马鱼孵化率降低;0.5～2.0 mmol/L苯硫脲导致斑马鱼的孵化率和存活率均降低,并引起斑马鱼畸形。

GPNMB通过调控MITF下游色素相关基因表达影响黑色素细胞色素的生成

【目的】探究GPNMB是否会通过调控MITF及其下游色素相关基因的表达来影响黑色素细胞中色素的生成,为进一步阐明GPNMB对黑色素细胞中色素生成的具体机制提供理论依据。【方法】首先对小鼠GPNMB核酸序列进行检索,通过对GPNMB和慢病毒表达载体序列分析来筛选出合适的酶切位点,在此选取SalⅠ和XbaⅠ作为酶切位点。并对GPNMB基因序列设计含有SalⅠ和XbaⅠ酶切位点的全长引物,克隆GPNMB基因全长序列,将含有酶切位点的GPNMB基因片段与T载体进行连接,送华大基因测序。将构建成功的T载体提取质粒,双酶切后将其与含有绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒表达载体相连接,送华大基因进一步测序确认。使用质粒中提试剂盒获得大量去内毒素的GPNMB慢病毒真核表达载体。通过体外培养小鼠黑色素细胞,选择细胞对数生长期利用细胞转染技术过量表达GPNMB。观察转染后黑色素细胞形态特征变化和绿色荧光蛋白的表达量,收集黑色素细胞,并对其进行转染效率验证,黑色素含量进行测定,以及经Real-time PCR和Western blot检测转染后PMEL、MITF、TYR、TYRP1、TYRP2和OA1的mRNA和蛋白的表达量。【结果】与正常组(Control)相比试验组(Vector-GFP-GPNMB)、空载组(Vector-GFP)中黑色素细胞的形态特征无明显变化,并且试验组、空载组的绿色荧光蛋白表达量显示5μg DNA/孔转染效率最高。相对于空载组和正常组,试验组的GPNMB mRNA和蛋白水平都显著的升高(P<0.01)。与空载组相比,试验组黑色素含量升高1.34倍,差异显著(P<0.01)。Real-time PCR检测结果显示,MITF mRNA显著降低2.25倍(P<0.01);PMEL mRNA显著升高1.59倍(P<0.05);TYRP1 mRNA显著升高2.35倍(P<0.01);TYRP2 mRNA显著升高1.60倍(P<0.01);TYR mRNA升高1.65倍和OA1 mRNA升高1.5倍,但变化不明显。Western blot检测结果显示,MITF蛋白显著降低1.59倍(P<0.01);TYR蛋白显著升高1.23倍(P<0.01);TYRP2蛋白显著升高4.35倍(P<0.01);OA1蛋白显著升高1.31倍(P<0.05);TYRP1蛋白升高1.05倍,但变化不明显。【结论】GPNMB过量表达使MITF下游基因PMEL、TYR、TYRP1、TYRP2和OA1的表达量增加,却使MITF的表达量降低,由此表明GPNMB可能受非MITF调控路径调节PMEL、TYR、TYRP1、TYRP2和OA1的表达,从而影响黑色素的生成。

茶叶提取物EGCG和GCG及ECG对B16细胞内黑色素生成的抑制作用

为研究茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)、没食子儿茶素没食子酸酯(gallocatechingallate,GCG)和表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)对体外培养B16小鼠黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响,分别用不同浓度的EGCG、GCG、ECG和熊果苷(Arbutin,AR)处理细胞,观察效应物对细胞形态的影响,用溴化二苯四偶氮法(MTT法)测定茶叶提取物对细胞增殖率的影响,以左旋多巴(L–DOPA)为底物,测定细胞内酪氨酸酶的活性,采用氢氧化钠裂解法测定细胞内黑色素的含量。结果显示,EGCG、ECG、GCG能显著抑制B16细胞的黑色素生成和酪氨酸酶的活性,且呈剂量依赖关系;当浓度为60μg/mL时,细胞增殖率均低于50%,酪氨酸酶活性与对照组相比分别降低了26.67%、27.27%和32.71%,黑色素生成抑制率均在30%以上。结果表明,茶叶提取物能通过多种途径抑制黑色素生成,且GCG的作用效果最优,ECG的作用效果次之,三者的作用效果均优于熊果苷的作用效果。

关于微小RNA调控表皮黑色素生成的研究进展

中国传统医学认为"黑色入肾",黑色素能滋阴、养血、补肾及添精功能。因此,天然黑色食品在当代国内外食品消费市场中占据着越来越重要的位置。黑色素(melanins)是一种以吲哚为主体的含硫异聚物,它的含量及分布不仅决定了人类及动物的肤色,同时也是影响畜禽被毛、羽毛颜色等重要经济性状的主要因素;而且能吸引可见光和紫外线的辐射,使体内细胞免受辐射损伤[1];

丁香精油对黑色素细胞抗氧化特性及黑色素生成的影响

目的:考察丁香精油对体外培养的黑色素细胞抗氧化特性的变化及对黑色素生成抑制作用,为精油在食品、化妆品等领域的应用提供理论支撑。方法:通过测定精油作用后细胞增殖活力,选择合适的药物浓度。然后用不同浓度精油作用细胞,测定细胞内T-SOD、ROS的含量、黑色素含量和酪氨酸酶相对活性。结果:MTT法可知丁香精油最大无毒浓度为0.084mg/mL,用于后续试验,可显著抑制黑色素细胞生长,抑制率与药物浓度正相关。细胞经药物作用48h后,细胞内T-SOD增加,ROS下降,黑色素含量和酪氨酸酶活性下降。结论:丁香精油具有抗氧化性及抑制黑色素细胞黑色素生成的功效。

四氢姜黄素抗氧化、抑制黑色素生成及其作用机制

目的评价四氢姜黄素(tetrahydrocurcuminoids,THC)的抗氧化作用及对黑色素生成的影响,并探索其抑制黑色素生成的作用机制。方法抗氧化作用评价采用人类永生化表皮细胞(HaCaT细胞)模型,ELISA法检测HaCaT细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、乳酸脱氢酶(LDH)活性水平;DPPH法、T-AOC法检测THC总抗氧化活性。抑制黑色素生成试验采用小鼠黑色素瘤细胞B16F10模型,CCK8法测定THC对小鼠B16F10细胞增殖活性的影响,NaOH裂解法及多巴氧化法分别测定B16F10细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性;划痕实验探究THC对B16F10细胞迁移的影响,Western blot测定黑色素生成相关蛋白小眼转录因子(MITF)的表达。结果THC可增加HaCaT细胞的SOD、GSH-PX水平,降低LDH含量,同时可增加对DPPH自由基的清除率和对Fe^(3+)的还原能力;THC可抑制小鼠B16F10细胞增殖和迁移,降低B16F10细胞内黑色素含量,降低酪氨酸酶活性,抑制MITF的表达。结论四氢姜黄素具有抗氧化作用,可抑制黑色素生成,其作用机制与抑制MITF的表达有关。

人KRT2促进体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞的黑色素生成

基因表达谱显示,绵羊角蛋白2(keratin2,Krt2)的mRNA在不同毛色皮肤的表达不同,暗示Krt2基因可能对皮肤黑色素生成有一定的影响。为探索角蛋白2对体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞黑色素生成的影响,首先采用PCR扩增产物测序,结合DNAMAN软件比对分析发现,羊驼Krt2编码序列(c DNA)与NCBI公布的人KRT2高度同源(91%);将人KRT2添加于培养的羊驼皮肤黑色素细胞,观察人KRT2对羊驼皮肤黑色素细胞黑色素的生成作用。免疫组织化学显示,外源性的人KRT2处理羊驼皮肤黑色素细胞72 h后,黑色素细胞的细胞质中Krt2表达增强。实时定量PCR及Western印迹实验揭示,与胎牛血清清蛋白处理的羊驼皮肤黑色素细胞比较,1 ng/m L、10 ng/m L和100 ng/m L人KTR2处理的羊驼皮肤黑色素细胞酪氨酸酶(Tyr)、酪氨酸相关蛋白-1(Tyrp1)、小眼畸形相关转录因子(Mitf)基因表达明显上调(P<0.05);尤其在添加10 ng/m L KTR2的细胞中,3个基因的mRNA相对表达水平升高尤其显著,分别是对照细胞的4倍、10倍和12.9倍(P<0.01),蛋白质相对表达水平分别是对照细胞的2倍、2.1倍和1.7倍(P<0.01)。分光光度法测量A490结果证明,1 ng/m L、10 ng/m L和100 ng/m L人KTR2处理的羊驼皮肤黑色素细胞产生的黑色素含量分别是对照细胞的1.3倍(P<0.05)、1.8倍(P<0.01)和1.5倍(P<0.05)。上述结果说明,人KTR2处理可通过刺激羊驼皮肤黑色素细胞黑色素合成相关信号通路,促进黑色素的合成。

MicroRNA-411a-3p靶向钙/钙调素依赖蛋白激酶4调控羊驼黑色素细胞中的黑色素生成（英文）

羊驼是重要的毛用型经济动物,具有22种天然色。毛色由皮肤中黑色素细胞产生的黑色素颗粒的分布和转运所决定的。然而,羊驼色素形成或毛色形成的分子机制复杂,由多个基因、miRNA和lncRNA调控。但是,miR-411a-3p对羊驼色素形成起调控作用未见报道。为研究miR-411a-3p在黑色素产生过程中的调控作用,本文将构建的miR-411a-3p载体转染到羊驼黑色素细胞中,并对毛色基因的表达进行研究。经生物信息学预测,钙/钙调素依赖蛋白激酶4(calcium-calmodulin dependent protein kinase 4,CaMK4)可能是miR-411a-3p的靶基因之一。双荧光素酶报告基因结果显示,与对照组相比,双荧光报告酶活性下降(34.78±16.09)%(P<0.01),其下降趋势明显,说明CaMK4可能是miR-411a-3p的靶基因之一。miR-411a-3p通过结合CaMK4的3'untranslated region(3'-UTR)直接调控CaMK4的表达。在羊驼黑色素细胞中转染miR-411a-3p后,CaMK4、CDK5和TYRP1在转录水平的表达量与NC组相比具有显著下降趋势,其中TYRP1下降趋势尤为显著(53.66±2.11)%(P<0.01)。Western印迹检测CaMK4、CDK5、TYRP1、p-CREB在蛋白质水平的表达与NC组相比下降趋势明显,尤其是CDK5和p-CREB基因下降极为显著,分别为(70.26±4.84)%(P<0.01)和(70.11±9.05)%(P<0.01)。Masson-Fontana法检测黑色素颗粒,结果显示,miR-411a-3p抑制黑色素细胞产生黑色素颗粒。通过紫外分光度法检测真黑素(eumelanin,EM)和褐黑素(phenomelanin,PM)显示,EM和PM的含量均被下调。结果表明,miR-411a-3p靶向抑制CaMK4表达,从而改变CREB的表达以控制黑色素的产生,此研究结果对哺乳动物毛色形成机制有重要意义。

DKK3调控羊驼黑色素细胞中黑色素生成

Dickkopf-3(DKK3),Wnt/β-catenin信号通路中一个重要的抑制因子,可能参与调控黑色素生成过程。本文研究了DKK3在羊驼黑色素细胞中黑色素生成的作用。在羊驼黑色素细胞中,过表达DKK3显著下调Wnt1,Lef1,Myc和黑色素生成相关基因MITF及其下游基因TYR,TYRP1和TYRP2的表达,在mRNA和蛋白质水平均明显下降(P<0.05);总黑素,褐黑素和真黑素的含量分别下降80.30%、72.17%和64.60%(P<0.05)。相反,在羊驼黑色素细胞中转染siRNA-DKK3,一种小干扰RNA,可以显著上调Wnt1,Lef1,Myc和黑色素生成相关基因MITF及其下游基因TYR,TYRP1和TYRP2在mRNA和蛋白质水平的表达(P<0.05);总黑素、褐黑素和真黑素的含量分别增加1.65倍、1.25倍和1.21倍(P<0.05)。这些结果表明,DKK3可以通过Wnt/β-catenin信号通路介导MITF下调羊驼黑色素细胞中黑色素的生成。

LncRNA-177922靶向MAPK15调节B16-F10黑色素瘤细胞黑色素生成、增殖、迁移和自噬(英文)

黑色素瘤是一种预后较差的侵袭性癌症。了解黑色素瘤的分子机制和诊断标志物对黑色素瘤的防治极为重要。LncRNAs在肿瘤的发生发展中发挥重要作用。与正常黑色素细胞相比,LncRNA-177922在B16-F10黑色素瘤中高表达。丝裂源活化蛋白激酶15 (mitogen-activated protein kinase 15, MAPK15)的缺失影响肿瘤的发生和进展。本研究中,LncRNA-177922在B16-F10细胞中过表达,结果显示,黑色素生成、增殖、迁移相关基因的mRNA和蛋白质水平显著上调(P<0.05),自噬相关基因的mRNA水平和蛋白质丰度下调(P<0.05),PI3K/AKT/mTOR通路被激活。同时,进一步验证了细胞迁移、增殖和自噬的表型。结果提示,LncRNA-177922靶向MAPK15通过交叉点细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)参与调控黑色素生成、增殖、迁移、自噬等B16-F10细胞的生物学特性,可能是一个新的治疗靶点和诊断标志物。

LncRNA00067110通过靶向Cabyr调控B16-F10细胞增殖、凋亡和黑色素生成

长非编码RNA(lncRNA)是一类转录长度大于200个核苷酸的非编码RNA。现已证明,多个lncRNA是潜在的癌症治疗靶点。LncRNA00067110是从小鼠黑色素瘤B16-F10细胞和正常黑色素细胞转录物组图谱中发现的差异表达基因。为研究lncRNA00067110是否调控B16-F10细胞的增殖、凋亡和黑色素生成,本文通过LncTar预测和双荧光酶活性验证了钙结合酪氨酸磷酸化调节蛋白(Cabyr)和lncRNA00067110存在靶向关系。通过构建lncRNA00067110的过表达载体,转染B16-F10细胞,经过对B16-F10细胞的转录图谱分析,并对细胞增殖、凋亡和黑色素生成的表型以及相关基因表达变化进行了检测。结果显示,lncRNA00067110靶向Cabyr,在过表达lncRNA00067110的B16细胞中,17个基因呈差异表达。其中,Cabyr的表达被上调,细胞增殖相关基因MEK/ERK/MNK/CREB和黑色素生成相关基因TYR家族成员及CREB的mRNA和蛋白质水平显著被下调,凋亡相关基因AKT和Bcl-2的mRNA水平和蛋白质丰度被上调。进一步通过细胞增殖和凋亡的表型的变化验证了lncRNA00067110的功能。结果提示,lncRNA00067110通过靶向Cabyr,调控相关基因表达,从而抑制B16-F10细胞的增殖和黑色素生成,并诱导黑色素瘤细胞的凋亡,可能成为治疗和抑制黑色素瘤的新的靶点。

栀子叶乙醇提取物对B16黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响

目的探讨栀子叶70%乙醇提取物对B16黑色素瘤细胞黑色素生成及酪氨酸酶活性的影响。方法将B16黑色素瘤细胞分为空白组、模型组、阳性对照组和栀子叶70%乙醇提取物组[低浓度组(100 mg/L)、中浓度组(200 mg/L)、高浓度组(400 mg/L)]。栀子叶70%乙醇提取物处理α-促黑色素细胞激素(α-MSH)诱导的B16黑色素瘤细胞72 h,MTS检测细胞增殖活性,酶标法测定B16黑色素瘤细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性。结果100~400 mg/L浓度的栀子叶70%乙醇提取物对B16黑色素瘤细胞的增殖没有影响;模型组B16黑色素瘤细胞内黑色素的含量和酪氨酸酶活性明显高于空白组,差异有高度统计学意义(P<0.001);栀子叶70%乙醇提取物中浓度组和高浓度组的B16黑色素瘤细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。阳性对照组的B16黑色素瘤细胞内黑色素含量和酪氨酸酶活性显著低于模型组,差异有高度统计学意义(P<0.001)。结论栀子叶70%乙醇提取物能有效抑制α-MSH诱导的B16黑色素瘤细胞黑色素的生成,其机制可能与其抑制酪氨酸酶的活性有关。

石斛多糖提取和对体外黑色素抑制、抗干燥损伤的影响

用正交试验法优化铁皮石斛多糖的提取工艺条件,并探究了石斛多糖对B16细胞黑色素生成和HaCaT细胞内干燥损伤的影响。通过单因素实验考察了料液比、提取时间、提取次数和提取温度对多糖提取率的影响,进而进行正交试验,优化铁皮石斛多糖提取工艺条件;通过B16细胞实验,测定石斛多糖对细胞增殖率、细胞内酪氨酸酶的活性以及细胞内黑色素含量的影响;通过建立HaCaT细胞干燥损伤模型,测定多糖对细胞干燥损伤的影响。各因素对铁皮石斛多糖提取率影响的顺序为:提取次数>料液比>提取温度>提取时间,最佳提取条件是提取时间为60 min、料液比为1∶20、提取次数2次和提取温度为60℃,此工艺下石斛多糖的提取率为12.45%;石斛多糖(10,62.5,125,250,500μg/mL)对B16细胞活力无影响,在多糖质量浓度为500μg/mL时,酪氨酸酶活性为69.30%,黑色素含量为66.20%。石斛多糖(10,62.5,125,250,500μg/mL)对HaCaT细胞活力无影响,在多糖质量浓度为125μg/mL时,干燥损伤细胞的存活率提高了15.51%,达到了86.58%。本文优选建立了铁皮石斛多糖的最佳提取工艺,并发现石斛多糖可通过抑制细胞内酪氨酸酶活性来减少黑色素含量,建立HaCaT细胞干燥损伤模型,石斛多糖可以提高细胞在干燥损伤中的存活率,减少细胞干燥损伤造成的死亡。