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佛罗里达红罗非鱼黑色素浓集激素1基因的克隆与表达分析
被引量:
3
1
作者
陈诏
徐鸿飞
+4 位作者
赵何勇
刘康
李华
何金钊
韦玲静
《南方水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期73-82,共10页
采用同源克隆技术获得了佛罗里达红罗非鱼(Oreochromis sp.)前原黑色素浓集激素1(prepro-melanin concentrating hormone 1,pmch1)基因c DNA全长序列,将其命名为flpmch1;并通过实时荧光定量PCR(q RTPCR)分析天生黑斑佛罗里达红罗非鱼组...
采用同源克隆技术获得了佛罗里达红罗非鱼(Oreochromis sp.)前原黑色素浓集激素1(prepro-melanin concentrating hormone 1,pmch1)基因c DNA全长序列,将其命名为flpmch1;并通过实时荧光定量PCR(q RTPCR)分析天生黑斑佛罗里达红罗非鱼组织表达谱和低温胁迫后其各组织表达差异。结果表明,flpmch1 c DNA序列全长629 bp,开放阅读框411 bp,编码136个氨基酸,存在12个潜在磷酸化位点和1个长度为199 bp的Cp G岛。Flpmch1与24个物种Pmch1氨基酸序列比对结果表明,Flpmch1与尼罗罗非鱼(O.niloticus)、奥利亚罗非鱼(O.aureus)、莫桑比克罗非鱼(O.mossambicus)、布氏新亮丽鲷(Neolamprologus brichardi)的Pmch1相似性最高。系统进化树分析显示硬骨鱼纲Pmch聚成一个大支,Flpmch1与尼罗罗非鱼Pmch1进化地位最接近。组织表达谱分析显示,flpmch1 m RNA在多个组织中均有表达,其中在脑中表达量最高,且粉白色皮肤中的表达量显著高于黑色皮肤(P<0.01)。低温胁迫后flpmch1 m RNA各组织表达量较对照组均呈下调表达。推断flpmch1可能参与了佛罗里达红罗非鱼天生黑斑的形成和过冬黑化过程。
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关键词
佛罗里达红罗非鱼
黑色素浓集激素1
基因克隆
低温胁迫
组织表达
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职称材料
MCHR1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定
2
作者
赵志武
师磊
+3 位作者
陈显久
王君实
马敏
燕炯
《中国生化药物杂志》
CAS
2015年第2期14-16,20,共4页
目的构建有效针对小鼠黑色素浓集激素受体1(melanin-concentrating hormone receptor 1,MCHR1)的shRNA(small hairpin RNA)真核表达载体。方法设计合成3条小鼠MCHR1基因的shRNA序列以及1条无同源性的shRNA序列作为阴性对照,与质粒重组构...
目的构建有效针对小鼠黑色素浓集激素受体1(melanin-concentrating hormone receptor 1,MCHR1)的shRNA(small hairpin RNA)真核表达载体。方法设计合成3条小鼠MCHR1基因的shRNA序列以及1条无同源性的shRNA序列作为阴性对照,与质粒重组构建sh-MCHR1干扰载体,并进行菌液PCR和DNA测序鉴定;脂质体法转染小鼠3T3-L1细胞后观察MCHR1 mRNA和蛋白表达的变化。结果经菌液PCR及DNA测序鉴定表明各shRNA载体构建成功;转染3T3-L1细胞后,与空载体组相比,阴性对照组MCHR1 mRNA和蛋白的表达均无明显差异,但实验组3种干扰载体均能显著抑制MCHR1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),且3种载体的抑制程度有一定的差异,以sh-MCHR1-1载体沉默效果最佳。结论 sh-MCHR1干扰载体构建成功,为进一步探究MCHR1与肥胖症之间的关系奠定了实验基础。
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关键词
黑色素
浓
集
激素
受体1
RNA干扰
shRNA载体
3T3-L
1
前脂肪细胞
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职称材料
人MCHR1真核表达载体构建及稳定转染HEK293细胞系的建立
3
作者
袁成福
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期612-615,共4页
目的构建人MCHR1真核表达载体,转染HEK293细胞,建立稳定转染的HEK293细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR1基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后...
目的构建人MCHR1真核表达载体,转染HEK293细胞,建立稳定转染的HEK293细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR1基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染HEK293细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的HEK293细胞系,用RT-PCR、Western-blot检测MCHR1的表达。结果构建了pcDNA3.1(+)/MCHR1真核表达载体,建立了稳定转染的HEK293细胞系,并成功地表达了目的基因。结论真核表达载体成功构建和稳定转染HEK293细胞系的建立为进一步研究MCHR1的功能奠定了良好的实验基础。
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关键词
黑色素
浓
集
激素
受体(MCHR1)
真核表达载体
转染
HEK293细胞系
基因表达
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职称材料
题名
佛罗里达红罗非鱼黑色素浓集激素1基因的克隆与表达分析
被引量:
3
1
作者
陈诏
徐鸿飞
赵何勇
刘康
李华
何金钊
韦玲静
机构
广西壮族自治区水产引育种中心
出处
《南方水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期73-82,共10页
基金
广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室开放课题(GXKL-AQUA-2014-07)
广西科技计划项目(桂科AB16380029)
广西壮族自治区海洋和渔业厅2018年预算项目<红罗非鱼>选育与示范
文摘
采用同源克隆技术获得了佛罗里达红罗非鱼(Oreochromis sp.)前原黑色素浓集激素1(prepro-melanin concentrating hormone 1,pmch1)基因c DNA全长序列,将其命名为flpmch1;并通过实时荧光定量PCR(q RTPCR)分析天生黑斑佛罗里达红罗非鱼组织表达谱和低温胁迫后其各组织表达差异。结果表明,flpmch1 c DNA序列全长629 bp,开放阅读框411 bp,编码136个氨基酸,存在12个潜在磷酸化位点和1个长度为199 bp的Cp G岛。Flpmch1与24个物种Pmch1氨基酸序列比对结果表明,Flpmch1与尼罗罗非鱼(O.niloticus)、奥利亚罗非鱼(O.aureus)、莫桑比克罗非鱼(O.mossambicus)、布氏新亮丽鲷(Neolamprologus brichardi)的Pmch1相似性最高。系统进化树分析显示硬骨鱼纲Pmch聚成一个大支,Flpmch1与尼罗罗非鱼Pmch1进化地位最接近。组织表达谱分析显示,flpmch1 m RNA在多个组织中均有表达,其中在脑中表达量最高,且粉白色皮肤中的表达量显著高于黑色皮肤(P<0.01)。低温胁迫后flpmch1 m RNA各组织表达量较对照组均呈下调表达。推断flpmch1可能参与了佛罗里达红罗非鱼天生黑斑的形成和过冬黑化过程。
关键词
佛罗里达红罗非鱼
黑色素浓集激素1
基因克隆
低温胁迫
组织表达
Keywords
Florida red tilapia
melanin-concentrating hormone
1
gene cloning
cold stress
tissue expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S917.4 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
MCHR1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定
2
作者
赵志武
师磊
陈显久
王君实
马敏
燕炯
机构
山西医科大学公共卫生学院
山西医科大学基础医学院
出处
《中国生化药物杂志》
CAS
2015年第2期14-16,20,共4页
文摘
目的构建有效针对小鼠黑色素浓集激素受体1(melanin-concentrating hormone receptor 1,MCHR1)的shRNA(small hairpin RNA)真核表达载体。方法设计合成3条小鼠MCHR1基因的shRNA序列以及1条无同源性的shRNA序列作为阴性对照,与质粒重组构建sh-MCHR1干扰载体,并进行菌液PCR和DNA测序鉴定;脂质体法转染小鼠3T3-L1细胞后观察MCHR1 mRNA和蛋白表达的变化。结果经菌液PCR及DNA测序鉴定表明各shRNA载体构建成功;转染3T3-L1细胞后,与空载体组相比,阴性对照组MCHR1 mRNA和蛋白的表达均无明显差异,但实验组3种干扰载体均能显著抑制MCHR1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),且3种载体的抑制程度有一定的差异,以sh-MCHR1-1载体沉默效果最佳。结论 sh-MCHR1干扰载体构建成功,为进一步探究MCHR1与肥胖症之间的关系奠定了实验基础。
关键词
黑色素
浓
集
激素
受体1
RNA干扰
shRNA载体
3T3-L
1
前脂肪细胞
Keywords
melanin-concentrating hormone receptor
1
RNA interference
shRNA vector
3T3-Ll preadipocytes
分类号
R153 [医药卫生—营养与食品卫生学]
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职称材料
题名
人MCHR1真核表达载体构建及稳定转染HEK293细胞系的建立
3
作者
袁成福
机构
湖北民族学院医学院生物化学教研室
出处
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第6期612-615,共4页
文摘
目的构建人MCHR1真核表达载体,转染HEK293细胞,建立稳定转染的HEK293细胞系。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR1基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染HEK293细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的HEK293细胞系,用RT-PCR、Western-blot检测MCHR1的表达。结果构建了pcDNA3.1(+)/MCHR1真核表达载体,建立了稳定转染的HEK293细胞系,并成功地表达了目的基因。结论真核表达载体成功构建和稳定转染HEK293细胞系的建立为进一步研究MCHR1的功能奠定了良好的实验基础。
关键词
黑色素
浓
集
激素
受体(MCHR1)
真核表达载体
转染
HEK293细胞系
基因表达
Keywords
melanin-concentrating hormone receptorl(MCHR
1
)
eukaryotic expression vector
stable trans- fected HEK293 cell line
gene expression
分类号
R338.2 [医药卫生—人体生理学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
佛罗里达红罗非鱼黑色素浓集激素1基因的克隆与表达分析
陈诏
徐鸿飞
赵何勇
刘康
李华
何金钊
韦玲静
《南方水产科学》
CAS
CSCD
北大核心
2018
3
下载PDF
职称材料
2
MCHR1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定
赵志武
师磊
陈显久
王君实
马敏
燕炯
《中国生化药物杂志》
CAS
2015
0
下载PDF
职称材料
3
人MCHR1真核表达载体构建及稳定转染HEK293细胞系的建立
袁成福
《西安交通大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
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