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黑色素瘤抗原-1基因在肝细胞癌中的表达 被引量:19
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作者 蔡胜利 陈红松 +11 位作者 王瑜 赵海涛 彭吉润 庞学文 龚顺友 朱继业 丛旭 王宇 芮静安 冷希圣 杜如昱 陈慰峰 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第9期668-672,共5页
目的 检测黑色素瘤抗原 1(MAGE 1)mRNA在肝细胞癌 (HCC)中的表达 ,为用MAGE 1基因编码蛋白作为疫苗对HCC患者进行免疫治疗提供依据。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法对 4 5例HCC患者癌组织和相应癌旁肝组织以及 16例肝硬... 目的 检测黑色素瘤抗原 1(MAGE 1)mRNA在肝细胞癌 (HCC)中的表达 ,为用MAGE 1基因编码蛋白作为疫苗对HCC患者进行免疫治疗提供依据。方法 用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法对 4 5例HCC患者癌组织和相应癌旁肝组织以及 16例肝硬化组织和 12例正常肝组织的MAGE 1mRNA表达情况进行研究 ,对 6例RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA序列测定 ,并以测序证实为MAGE 1基因的cDNA片段为模板合成 [α32 P]标记的探针 ,进行Southernblot分析。同时用ELISA方法对其中 4 3例HCC患者进行人类白细胞抗原 (HLA)class1 A及B位点分型。结果  4 5例HCC患者中 ,3 2例表达MAGE 1mRNA ,而相应癌旁组织及非HCC患者肝组织均不表达 ;DNA测序 ,6例PCR产物中的目的基因片段均证明为MAGE 1cDNA序列 ,其中 3例均有 3个相同位置碱基的点突变 ,导致 2个氨基酸残基改变 ;5例电泳阳性癌组织的RT PCR产物Southernblot结果也为阳性 ,而癌旁组织均为阴性 ;HCC患者中常见HLA类型为A2 ( 5 3 5 % ) ,A11( 2 5 6% ) ,A2 4( 2 0 9% ) ,A33( 2 0 9% ) ,B13( 2 8 3 % ) ,B35( 2 3 2 % ) ;MAGE 1的表达与肿瘤直径、α FP水平等临床指标无相关关系。结论 MAGE 1在肝细胞癌中呈高比例表达 。 展开更多
关键词 黑色素瘤 肝细胞癌 抗原1-基因 基因表达
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胃癌组织中黑色素瘤抗原基因-1,3基因的表达及其意义 被引量:1
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作者 刘炳亚 陈雪华 +5 位作者 李建芳 张奕 瞿颖 顾琴龙 朱正纲 林言箴 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期571-574,共4页
目的 了解胃癌组织中黑色素瘤抗原基因 (MAGE) 1、3基因的表达 ,并探讨其作为免疫治疗的靶抗原在胃癌中的应用价值。方法 采用RT PCR法检测 36例胃癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁“正常”黏膜中MAGE 1、3基因的表达情况 ,并以 37例慢... 目的 了解胃癌组织中黑色素瘤抗原基因 (MAGE) 1、3基因的表达 ,并探讨其作为免疫治疗的靶抗原在胃癌中的应用价值。方法 采用RT PCR法检测 36例胃癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁“正常”黏膜中MAGE 1、3基因的表达情况 ,并以 37例慢性胃炎患者的胃镜活检组织和 4株胃癌细胞株作为对照。结果  36例胃癌组织中 ,MAGE 1表达阳性率为 72 .2 2 % (2 6 / 36例 ) ,MAGE 3表达阳性率为 6 9.4 4 % (2 5 / 36例 ) ,MAGE 1、3表达双阳性率为 5 2 .78% (19/ 36例 ) ,MAGE 1、3任一基因表达阳性者 32例 ,阳性率为 88.89% (32 / 36例 )。癌旁“正常”黏膜中MAGE 1、3基因表达阳性率分别为 4 7.2 2 % (17/ 36例 )和 4 4 .4 4 % (16 / 36例 ) ,MAGE 1、3表达双阳性率为 30 .5 6 % (11/ 36例 )。 37例慢性胃炎组织中 ,MAGE 1、3表达阳性率分别为 2 9.73% (11/ 37例 )和2 7.0 3% (10 / 37例 ) ,MAGE 1、3表达双阳性率为 8.11% (3/ 37例 )。胃癌组织MAGE 1、3基因表达阳性率均高于癌旁“正常”黏膜组织和慢性胃炎患者。 4株胃癌细胞株MAGE 1、3基因表达均为阳性。结论 基于MAGE 1、3基因在胃癌中的高表达率 ,可利用其作为靶分子进行免疫治疗 。 展开更多
关键词 胃癌 黑色素瘤抗原基因-1 黑色素瘤抗原基因-3 基因表达
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人黑色素瘤相关抗原基因-12基因疫苗对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及体内抗体水平的影响 被引量:2
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作者 楚荷莹 王华启 +4 位作者 陈闪闪 赵国强 王建辉 雷小婷 张国俊 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2008年第2期255-257,共3页
目的:研究人黑色素瘤相关抗原基因-12(MAGE-12)基因疫苗pEGFP-C3-MAGE-12对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及体内抗体水平的影响。方法:小鼠80只,随机分为4组,每组20只。疫苗组、空质粒组和生理盐水(NS)组接种Lewis肺癌瘤组织制备Lewis肺癌小鼠... 目的:研究人黑色素瘤相关抗原基因-12(MAGE-12)基因疫苗pEGFP-C3-MAGE-12对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长及体内抗体水平的影响。方法:小鼠80只,随机分为4组,每组20只。疫苗组、空质粒组和生理盐水(NS)组接种Lewis肺癌瘤组织制备Lewis肺癌小鼠模型。接种癌组织前14d、7d、0d,疫苗组按每次每只0.2mL(75ng/L)于右下肢内侧肌肉群内注射pEGFP-C3-MAGE-12;空质粒组和NS组每只每次注入pEGFP-C3空质粒或NS;空白对照组小鼠不做任何处理。每3d观察并记录1次肿瘤大小。接种瘤组织后14d每组取10只小鼠,ELISA法检测血清MAGE-12-Ab,余小鼠(每组10只)自然死亡,记录生存时间。结果:3组7d成瘤率均为100%。空质粒组、NS组及疫苗组生存期分别为(27.0±0.3)d,(27.2±0.3)d和(28.9±0.6)d;肿瘤体积分别为(179.775±9.085)mm3,(173.172±9.085)mm3和(144.923±9.528)mm3;疫苗组血清MAGE-12-Ab水平为(711.16±174.78),其他3组未检测到MAGE-12-Ab;与空质粒组、NS组比较,疫苗组生存期短(P<0.05),肿瘤体积小(P<0.05),体内抗体水平高(P<0.05)。结论:MAGE-12基因疫苗具有免疫治疗作用。 展开更多
关键词 黑色素瘤相关抗原基因-12 肺癌 免疫治疗 小鼠
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黑色素瘤抗原基因-1,3基因在肺癌组织中的表达及其意义 被引量:2
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作者 白黎智 姜志良 +1 位作者 王林 朴斐 《临床军医杂志》 CAS 2005年第3期294-296,共3页
目的了解肺癌组织中和黑色素瘤抗原基因(MAGE)1,3基因的表达,并探讨其作为免疫治疗的靶抗原在肺癌中的应用价值。方法采用RTPCR法检测72例肺癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁“正常”组织中MAGE1,3基因的表达情况。结果72例肺癌组织中,MAGE... 目的了解肺癌组织中和黑色素瘤抗原基因(MAGE)1,3基因的表达,并探讨其作为免疫治疗的靶抗原在肺癌中的应用价值。方法采用RTPCR法检测72例肺癌患者的肿瘤组织和相应的癌旁“正常”组织中MAGE1,3基因的表达情况。结果72例肺癌组织中,MAGE1表达阳性率为72%(52/72例)MAGE3表达阳性率为69%(50/72例)MAGE1,3表达双阳性率为52%(38/72例),MAGE1,3任一基因表达阳性者64例,阳性率为89%(64/72例)。癌旁"正常"组织中MAGE1,3基因表达阳性率分别为47%(34/72例)和44%(32/72例),MAGE1,3表达双阳性率为31%(22/72例)。肺癌组织MAGE1,3基因表达阳性率均高于癌旁“正常”组织,5株肺细胞株MAGE1,3基因表达均为阳性。结论基于MAGE1,3基因在肺癌中的高表达率,可利用其作为靶分子进行免疫治疗,同时也可作为一种有临床价值的随访指标。 展开更多
关键词 肺癌组织 3基因 抗原基因-1 MAGE-1 其意义 表达及 黑色素瘤抗原基因 基因表达 PCR法检测 免疫治疗 阳性率 应用价值 肿瘤组织 肺癌患者 表达情况 临床价值 抗原 癌旁 RT- 阳性者 细胞株 表达率 靶分子
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黑色素瘤抗原编码基因家族新成员MAGE-D1的组织表达谱研究 被引量:3
5
作者 张成岗 贺福初 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期165-171,共7页
MAGE D1是黑色素瘤抗原编码基因家族 (MAGE)中MAGE D亚家族的新成员 .为了研究该基因的性质及其可能功能 ,采用Northernblot和Dotblot杂交技术研究了其组织表达谱 .结果发现 ,该基因在多种肿瘤组织和正常组织中均广泛表达 .在所检测的 ... MAGE D1是黑色素瘤抗原编码基因家族 (MAGE)中MAGE D亚家族的新成员 .为了研究该基因的性质及其可能功能 ,采用Northernblot和Dotblot杂交技术研究了其组织表达谱 .结果发现 ,该基因在多种肿瘤组织和正常组织中均广泛表达 .在所检测的 4 8种肿瘤组织中 ,经与对应正常组织进行比较发现 ,该基因在 13种肿瘤组织中的表达显著增高 ,而在 7种肿瘤组织中的表达则显著降低 .进一步分析提示该基因在多种胚胎组织中的表达高于成年组织 .由于MAGE A、 B、 C亚家族均具有在肿瘤组织 睾丸中特异表达的特点 ,而作为MAGE D亚家族成员的MAGE D1并非在肿瘤组织中特异表达 ,提示需要对MAGE基因家族进行深入的功能研究 . 展开更多
关键词 黑色素瘤 抗原编码基因家族 MAGE-D1 组织表达谱
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人黑色素瘤抗原MAGE-A10的基因克隆及原核表达 被引量:1
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作者 李林 欧阳为明 +5 位作者 陈丽华 庄然 谢鑫 方亮 杨安钢 金伯泉 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第9期805-807,共3页
目的 :扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE A1 0(melanomaantigenA1 0 )cDNA ,构建原核表达载体并在大肠杆菌表达 .方法 :从人黑色素瘤细胞系LiBr中提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE A1 0cDNA ,插入载体pMD1 8 T中 .测序正确后 ,克隆至原... 目的 :扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE A1 0(melanomaantigenA1 0 )cDNA ,构建原核表达载体并在大肠杆菌表达 .方法 :从人黑色素瘤细胞系LiBr中提取总RNA ,用RT PCR从中扩增出MAGE A1 0cDNA ,插入载体pMD1 8 T中 .测序正确后 ,克隆至原核表达载体pGEX 4T 3中 ,构建重组表达载体pGEX 4T 3 MAGE A1 0 ,转化大肠杆菌BL2 1株进行表达 .经IPTG诱导表达 ,谷胱甘肽亲和层析获得重组目的蛋白 .结果 :成功获得MAGE A1 0编码基因并构建原核表达载体 ,测序结果与GenBank收录序列相一致 .可以获得部分可溶性的原核重组蛋白 ,经亲和层析和分析 ,证实融合蛋白占总量的 5 8.9% .SDS PAGE分析其相对分子质量 (Mr)为 6 70 0 0 ,Westernblot证实为目的蛋白 .结论 :成功获得MAGE A1 0cDNA ,构建得原核表达载体并获得高效表达 .本研究为制备MAGE A1 0mAb及研究MAGE A1 0可能参与肿瘤发生发展的机制奠定了基础 . 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原 逆转录-聚合酶链反应 基因克隆 基因表达
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黑色素瘤抗原-1、3基因在肝内胆管细胞癌中的表达及临床意义
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作者 卢欣 赵海涛 +4 位作者 桑新亭 毛一雷 陈蓉蓉 钟守先 黄洁夫 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期197-200,共4页
目的研究黑色素瘤抗原(MAGE)-1和MAGE-3基因在肝内胆管细胞癌(IHCC)组织中的表达,探讨MAGE-1、MAGE-3基因与IHCC患者临床指标的关系。方法RT-PCR方法检测20例IHCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1、MAGE-3基因表达,对全部RT-PCR扩增产物... 目的研究黑色素瘤抗原(MAGE)-1和MAGE-3基因在肝内胆管细胞癌(IHCC)组织中的表达,探讨MAGE-1、MAGE-3基因与IHCC患者临床指标的关系。方法RT-PCR方法检测20例IHCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-1、MAGE-3基因表达,对全部RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为MAGE-1、MAGE-3基因。分析MAGE-1、MAGE-3基因表达与患者性别、年龄、肿瘤直径、有无包膜、肿瘤形态以及乙肝病毒表面抗原等临床指标的关系。结果20例IHCC患者癌组织中MAGE-1、MAGE-3基因表达的阳性率分别为35%和45%,显著高于癌旁组织(0)(P<0·01)。IHCC患者癌组织中MAGE-1、MAGE-3基因表达的阳性率与患者性别、年龄、肿瘤直径、有无包膜以及乙型肝炎病毒感染等指标均无关(P>0·05);MAGE-3基因表达的阳性率与肿瘤形态有关(P<0·05)。结论MAGE-1、MAGE-3基因在IHCC患者肝癌组织中特异性高表达,MAGE-1、MAGE-3基因可能成为IHCC患者免疫治疗的攻击靶点。 展开更多
关键词 肝内胆管细胞癌 黑色素瘤抗原-1 3基因 聚合酶链反应
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Egr-1基因调控序列连接OSM cDNA表达质粒的构建及其在黑色素瘤细胞中的表达 被引量:9
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作者 吕星 邢瑞云 +2 位作者 孙志贤 裴雪涛 吴祖泽 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第1期1-5,共5页
OSM是一种对黑色素瘤细胞显示抑制作用的细胞因子.为进行OSM针对黑色素瘤的基因-放射治疗研究,构建了小鼠Egr-1基因调控序列引导入OSMcDNA真核表达质粒(pEO),pEO质粒转染小鼠B-16黑色素瘤细胞,经G... OSM是一种对黑色素瘤细胞显示抑制作用的细胞因子.为进行OSM针对黑色素瘤的基因-放射治疗研究,构建了小鼠Egr-1基因调控序列引导入OSMcDNA真核表达质粒(pEO),pEO质粒转染小鼠B-16黑色素瘤细胞,经G418和抗人OSM抗体的筛选,获得了稳定表达OSM的克隆细胞(pEO-1细胞),OSM表达量可达5.97ng每105细胞天,分子量为32kD.pEO-1细胞用一定浓度H2O2处理后OSM表达量可提高62%。 展开更多
关键词 EGR-1基因 抑瘤蛋白 黑色素瘤 基因-放射治疗
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4-1BBL联合Hsp70-肿瘤抗原肽抑制小鼠黑色素瘤肺转移 被引量:4
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作者 邱惠 张桂梅 +3 位作者 张慧 袁野 李东 冯作化 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期781-786,共6页
背景与目的正调节性共刺激分子表达偏低是肿瘤逃避机体免疫系统攻击的重要原因之一,增加这些分子的表达是促进抗肿瘤免疫的研究热点。小鼠黑色素瘤B16-F1细胞株是弱免疫原性癌细胞株。本研究旨在观察4-1BBL联合Hsp70-抗原肽对小鼠黑色... 背景与目的正调节性共刺激分子表达偏低是肿瘤逃避机体免疫系统攻击的重要原因之一,增加这些分子的表达是促进抗肿瘤免疫的研究热点。小鼠黑色素瘤B16-F1细胞株是弱免疫原性癌细胞株。本研究旨在观察4-1BBL联合Hsp70-抗原肽对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制作用,并探讨其机制。方法建立小鼠黑色素瘤肺转移模型,Hsp70-B16抗原肽小鼠皮下免疫,同时从尾静脉注射4-1BBL表达质粒p4-1BBL。于接种后第17天,解剖小鼠取肺组织,解剖显微镜下计数黑色素瘤肺转移结节的数目,并检测小鼠部分免疫学指标及肝、肾功能。结果4-1BBL联合Hsp70-B16抗原肽治疗组小鼠黑色素瘤肺转移结节数降至50±8,明显少于二者单独治疗组的500±80和450±40;联合治疗组小鼠血清IL-2和IFN-γ的分泌水平分别增加了4倍和3倍,与对照组相比均存在显著性差异(P<0.01);单独应用4-1BBL基因或与Hsp70-B16抗原肽联合应用对小鼠肝、肾的功能均无明显影响。结论表达4-1BBL联合应用Hsp70-B16抗原肽主要通过增强外周T淋巴细胞功能活性而有效抑制小鼠黑色素瘤肺转移。 展开更多
关键词 4-1BBL Hsp70-抗原 联合作用 黑色素瘤/免 疫疗法 肺肿瘤/继发性 小鼠
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黑色素瘤抗原基因-3在直肠癌的表达及意义 被引量:5
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作者 李新明 陶凯雄 +4 位作者 王国斌 张宁 吴相柏 张景辉 田源 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2006年第3期308-310,320,共4页
目的检测黑色素瘤抗原基因3(MAGE3)在直肠癌中的表达,探索其与直肠癌临床病理的关系及其在直肠癌免疫治疗中的应用价值。方法采用RT PCR法,对33例直肠癌患者的癌组织及其相应距肿瘤边缘(5±1)cm的癌旁组织和手术切缘(乙状结肠端)以... 目的检测黑色素瘤抗原基因3(MAGE3)在直肠癌中的表达,探索其与直肠癌临床病理的关系及其在直肠癌免疫治疗中的应用价值。方法采用RT PCR法,对33例直肠癌患者的癌组织及其相应距肿瘤边缘(5±1)cm的癌旁组织和手术切缘(乙状结肠端)以及3例直肠息肉标本(无瘤)的MAGE3的表达情况进行检测,并对RT PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果33例直肠癌组织中,MAGE3基因的表达阳性率为42.42%(14/33),在癌旁组织和手术切缘组织中,MAGE3基因的表达阳性率分别为18.18%(6/33)和15.15%(5/33),3例直肠息肉标本未见MAGE3表达。肿瘤组织MAGE3基因表达阳性率均显著高于癌旁组织和手术切缘组织(P<0.05);而与患者年龄、性别、肿瘤组织学类型、Dukes分期及淋巴结转移无关(P>0.05)。结论基于MAGE3基因在直肠癌中的高表达率,MAGE3表达的蛋白可以作为一种有前途的靶点用于免疫治疗,同时有望成为一种筛查和随访指标。 展开更多
关键词 直肠癌 黑色素瘤抗原基因-3 基因表达
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B7-1(CD80)基因的克隆及其在小鼠黑色素瘤细胞中的表达 被引量:2
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作者 隋拥君 丁广治 +2 位作者 唐佩弦 侯春梅 毛宁 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期164-167,共4页
应用RT-PCR技术从人B淋巴瘤细胞系Raji中克隆到B7-1(CD80)cDNA,并经测序证实。将其插入至真核表达载体pLXSN中,用脂质体转染小鼠黑色素瘤细胞B16,G418筛选,并经流式细胞仪检测,得到了细胞表... 应用RT-PCR技术从人B淋巴瘤细胞系Raji中克隆到B7-1(CD80)cDNA,并经测序证实。将其插入至真核表达载体pLXSN中,用脂质体转染小鼠黑色素瘤细胞B16,G418筛选,并经流式细胞仪检测,得到了细胞表面表达B7-1的重组克隆。PCR从其基因组DNA中扩增到B7-1基因,提示B7-1cDNA已整合至宿主细胞的基因组DNA中。本文为研究B7-1在肿瘤免疫中所起的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 B7-1(CD80) 基因克隆 基因表达 黑色素瘤
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黑色素瘤相关性抗原E1基因的克隆与测序 被引量:1
12
作者 王莉 郭斌 +3 位作者 郭爱林 李青 孙博 樊代明 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2003年第3期232-234,共3页
目的 克隆表达人黑色素瘤相关性抗原MAGE E1片段 ,以便研究其对神经系统恶性肿瘤的生物学作用。方法 从人胶质瘤细胞系BT 32 5中提取mRNA ,用RT PCR法从中扩增出MAGE E1片段 ,采用DNA重组技术将其克隆于 pGEM TEasy载体中并测序。 结... 目的 克隆表达人黑色素瘤相关性抗原MAGE E1片段 ,以便研究其对神经系统恶性肿瘤的生物学作用。方法 从人胶质瘤细胞系BT 32 5中提取mRNA ,用RT PCR法从中扩增出MAGE E1片段 ,采用DNA重组技术将其克隆于 pGEM TEasy载体中并测序。 结果 RNA体外扩增得到的片段为 4 0 0bp ,PGEM MAGE E1经酶切鉴定正确 ,测序结果与Genebank比较完全相同。 展开更多
关键词 黑色素瘤 相关性抗原E1基因 克隆 测序
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小鼠B7-1基因转染的黑色素瘤细胞免疫原性探讨 被引量:1
13
作者 刘然义 屈伸 过建莉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期186-188,共3页
目的探讨 B7- 1分子对肿瘤细胞免疫原性的影响。方法将小鼠 B7- 1基因转染的黑色素瘤细胞 ( B16 - m B7.1)与野生型及空载体转染细胞 ( B16 - wt和 B16 - neo)的免疫原性在体内外进行了比较。同源淋巴细胞肿瘤细胞混合培养( MTL Cs)后... 目的探讨 B7- 1分子对肿瘤细胞免疫原性的影响。方法将小鼠 B7- 1基因转染的黑色素瘤细胞 ( B16 - m B7.1)与野生型及空载体转染细胞 ( B16 - wt和 B16 - neo)的免疫原性在体内外进行了比较。同源淋巴细胞肿瘤细胞混合培养( MTL Cs)后测定淋巴细胞增殖指数和 CTL s活性 ;将 B16 - neo和 B16 - m B7.1细胞接种于小鼠皮下 ,观察肿瘤生长速度。结果B16 - m B7.1在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导 CTL s的能力明显强于对照细胞 ( P<0 .0 5 ) ;尽管 B16 - m B7.1与 B16 - neo细胞在体外增殖能力一致 ,但 B16 - B7.1细胞体内生长速度明显减慢 ( P<0 .0 5 )。结论 B16 - B7.1分子在 展开更多
关键词 B7-1 黑色素瘤 免疫原性 基因转染
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鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转染小鼠黑色素瘤B16F1细胞 被引量:2
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作者 刘金辉 Glenn Larsen 《江西医学院学报》 CAS 2002年第5期10-12,共3页
目的 :探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6B16F1细胞 ,连续 5d换细胞培养液 ,并检测其中的mGM CSF含... 目的 :探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6B16F1细胞 ,连续 5d换细胞培养液 ,并检测其中的mGM CSF含量。采用 [3 HTdR]渗入法 ,测定DA1G细胞和转染后第一天收获的以 1:10对倍稀释到 1:6 40的上清液及 [3 HTdR]混合培养后 ,渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm) ,以分析表达产物的生物活性。结果 :转染B16F1细胞的mGM CSF基因得到有效表达。但随着时间的推移 ,表达由第 1天的 135ng/ml下降到第 5天的 42 .2ng/ml。渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm)随上清液的稀释而逐步下降 ,由 1:10稀释度的9371下降到 1:6 40时的 32 5 1。和DMEM混合培养的DA1G细胞的 [3 HTdR]渗入量 (cpm)仅为 472。结论 :脂质体作为基因转移载体可有效地介导mGM CSF基因转染B16F1细胞 。 展开更多
关键词 黑色素瘤B16F1细胞 脂质体 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 基因转移 基因表达
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溶剂诱导黑色素瘤抗原基因-2特定表位多肽异构的LC/MS研究
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作者 周伟 吴玉章 +3 位作者 边疆 贾正才 唐艳 邹丽云 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期449-453,共5页
研究乙醇、甲醇两种常用溶剂系统对固相合成的黑色素瘤抗原基因 2 (MAGE 2 )的特定表位多肽 (171 179)异构的影响。分别运用乙醇、甲醇溶剂体系以及极性溶剂二甲基亚砜 (DMSO)作对照预处理固相合成的黑色素瘤抗原特异性MAGE 2表位多肽 ... 研究乙醇、甲醇两种常用溶剂系统对固相合成的黑色素瘤抗原基因 2 (MAGE 2 )的特定表位多肽 (171 179)异构的影响。分别运用乙醇、甲醇溶剂体系以及极性溶剂二甲基亚砜 (DMSO)作对照预处理固相合成的黑色素瘤抗原特异性MAGE 2表位多肽 (171~ 179) ,然后用反相高效液相色谱 /质谱联用技术 (RP HPLC/MS)对合成的表位多肽的m/z进行Q1正离子监测扫描分析 ,观察其在不同溶剂系统预处理下的异构情况 ,以选择合理的预处理条件。结果发现采用乙醇及甲醇溶样时MAGE 2表位多肽有异构体产生 ,极性溶剂DMSO溶样的表位多肽未有异构现象发生 ,采用 5 0 % (体积分数 )的乙醇及 5 0 % (体积分数 )的甲醇时也未监测到异构体产生 ;同时发现将已发生异构的乙醇及甲醇溶样溶液用三氟乙酸酸化处理后 ,异构多肽可发生较大的逆转。 展开更多
关键词 液相色谱/质谱联用 黑色素瘤抗原基因-2 表位多肽 异构体 溶剂诱导 黑色素瘤 免疫治疗
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共表达MAGE-1与EGFP基因的小鼠黑色素瘤细胞系的建立
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作者 陈广生 叶菁 +4 位作者 宋宏萍 张秀敏 黄亚渝 马加海 隋延仿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期212-214,共3页
目的 :构建黑色素瘤抗原 1(MAGE 1)基因的真核表达载体 ,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中进行表达。方法 :采用分子生物学的手段 ,构建了MAGE 1与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因共表达的质粒pIRES2 EGFP MAGE 1,通过脂质体以共表达质粒转染... 目的 :构建黑色素瘤抗原 1(MAGE 1)基因的真核表达载体 ,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中进行表达。方法 :采用分子生物学的手段 ,构建了MAGE 1与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因共表达的质粒pIRES2 EGFP MAGE 1,通过脂质体以共表达质粒转染B16细胞 ,用荧光显微镜检测细胞中EGFP的表达 ,用免疫组化染色法检测细胞中MAGE 1的表达。结果 :成功地构建了真核表达载体pIRES2 EGFP MAGE 1。以其转染B16细胞后 ,经荧光显微镜及免疫组化染色法检测 ,可见细胞内有EGFP及MAGE 1的表达。结论 :成功地建立了可共表达MAGE 1与EGFP基因的B16细胞 ,为MAGE 1在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原-1 增强型绿色荧光蛋白 黑色素瘤
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黑色素肿瘤抗原基因-1、3在直肠癌肝转移组织的表达 被引量:1
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作者 裴斐 李新明 +1 位作者 史火喜 张景辉 《咸宁学院学报(医学版)》 2010年第2期96-99,共4页
目的探索黑色素肿瘤抗原基因-1、-3(MAGE-1、MAGE-3)在直肠癌肝转移组织中的表达与直肠癌肝转移的相关性。方法采用RT-PCR法,对30例直肠癌肝转移患者的癌组织和30例直肠癌非肝转移患者的癌组织的MAGE-1、MAGE-3的表达情况进行检测,并对R... 目的探索黑色素肿瘤抗原基因-1、-3(MAGE-1、MAGE-3)在直肠癌肝转移组织中的表达与直肠癌肝转移的相关性。方法采用RT-PCR法,对30例直肠癌肝转移患者的癌组织和30例直肠癌非肝转移患者的癌组织的MAGE-1、MAGE-3的表达情况进行检测,并对RT-PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果 30例直肠癌肝转移患者癌组织中,MAGE-1基因的表达阳性率为46.67%,MAGE-3基因的表达阳性率为56.67%,MAGE-1、MAGE-3都表达的阳性率为36.67%,至少表达其中一种的阳性率为66.67%;30例直肠癌非肝转移患者癌组织中,MAGE-1基因的表达阳性率为26.67%,MAGE-3基因的表达阳性率为40.00%,MAGE-1、MAGE-3都表达的阳性率为23.33%,至少表达其中一种的阳性率为43.33%。直肠癌肝转移患者癌组织中MAGE-1、MAGE-3基因表达阳性率均显著高于直肠癌非肝转移患者癌组织(P<0.05)。结论 MAGE-1,MAGE-3有望作为一种新的指标用于直肠癌的转移和预后监测。 展开更多
关键词 直肠癌 黑色素肿瘤抗原基因.1 黑色素肿瘤抗原基因-3 基因表达
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MAGE-1与人HSP70融合基因真核表达载体的构建及在小鼠黑色素瘤细胞内的表达
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作者 陈广生 隋延仿 +4 位作者 叶菁 宋宏萍 黄亚渝 马加海 张秀敏 《现代肿瘤医学》 CAS 2006年第6期644-646,共3页
目的:构建MAGE-1(melanomaantigen1)与人HSP70(heatshockprotein70)融合基因的真核表达载体PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70,并观察在小鼠黑色素瘤细胞内的表达,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础。方法:HSP70基因经酶切后连入真核表达载体PIRES2-EG... 目的:构建MAGE-1(melanomaantigen1)与人HSP70(heatshockprotein70)融合基因的真核表达载体PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70,并观察在小鼠黑色素瘤细胞内的表达,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础。方法:HSP70基因经酶切后连入真核表达载体PIRES2-EGFP,再通过PCR方法扩增MAGE-1基因,测序后插入PIRES2-EGFP-HSP70中HSP70基因的5'端,构建了MAGE-1与人HSP70融合基因表达载体PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70。结果:扩增了MAGE-1基因,测序结果表明与GenBank公布的序列一致,成功地构建了PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70真核表达载体。结论:成功地构建MAGE-1与人HSP70融合基因的真核表达载体PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70,并在小鼠黑色素瘤细胞系稳定表达,为进一步DNA肿瘤疫苗研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原1 人热休克蛋白70 融合基因 动物实验
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黑色素瘤抗原-1诱导特异性抗肝癌免疫应答
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作者 黄明宜 刘宾 何炜 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2013年第3期376-380,共5页
目的:探讨黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)对特异性抗肝癌免疫应答反应的影响。方法:分别用转染pcD-NA3.1-MAGE-1(重组子)、pcDNA3.1(空质粒)以及未行转染的人肝癌细胞SMMC-7721冻融抗原致敏树突状细胞(DC),诱导T淋巴细胞增殖分化为细胞毒性T淋... 目的:探讨黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)对特异性抗肝癌免疫应答反应的影响。方法:分别用转染pcD-NA3.1-MAGE-1(重组子)、pcDNA3.1(空质粒)以及未行转染的人肝癌细胞SMMC-7721冻融抗原致敏树突状细胞(DC),诱导T淋巴细胞增殖分化为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。乳酸脱氢酶释放法检测CTL对SMMC-7721细胞的杀伤活性。48只C57BL小鼠随机分为重组子组、空质粒组和PBS组,每组16只。用pcDNA3.1-MAGE-1预先免疫重组子组小鼠,1次/10d,第3次免疫后第5天ELISA法检测各组8只小鼠脾细胞培养液中IFN-γ和IL-2的含量,第6天各组8只小鼠接种鼠源性肝癌细胞H22,观察其生存时间。结果:未转染、空质粒和重组子组诱导的CTL对靶细胞的杀伤率以及各组小鼠股四头肌MAGE-1mRNA表达的比较差异有统计学意义(F=139.601和538.650,P﹤0.001),重组子组高于未转染和空质粒组。PBS组和空质粒组小鼠脾细胞培养液中IFN-γ和IL-2的含量为0,重组子组小鼠脾细胞培养液中IFN-γ含量为(372.33±10.08)ng/L,IL-2含量为(108.67±12.81)ng/L。3组小鼠荷瘤生存时间比较差异有统计学意义(F=31.837,P<0.001),重组子组小鼠生存时间明显延长。结论:MAGE-1可诱导特异性抗肿瘤免疫应答,从而显著延长荷瘤小鼠的生存时间。 展开更多
关键词 黑色素瘤抗原-1 树突状细胞 细胞毒性T淋巴细胞 免疫疗法 肝细胞癌 小鼠
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信号转导及转录激活因子3、垂体同源框1及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义 被引量:1
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作者 马潇潇 郭春香 陈官芝 《癌症进展》 2022年第10期1050-1052,1056,共4页
目的探讨信号转导及转录激活因子3(STAT3)、垂体同源框1(PITX1)及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(Gli-1)在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义。方法选取89例皮肤恶性黑色素瘤患者的肿瘤组织及癌旁组织。对患者进行随访,根据预后情况分为... 目的探讨信号转导及转录激活因子3(STAT3)、垂体同源框1(PITX1)及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(Gli-1)在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义。方法选取89例皮肤恶性黑色素瘤患者的肿瘤组织及癌旁组织。对患者进行随访,根据预后情况分为预后良好及预后不良。采用免疫组化法检测STAT3、PITX1、Gli-1蛋白表达情况,分析皮肤恶性黑色素瘤患者预后的影响因素。结果肿瘤组织中STAT3、Gli-1蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织,PITX1阳性表达率明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。预后不良患者肿瘤组织中STAT3、Gli-1蛋白阳性表达率均高于预后良好患者,PITX1阳性表达率低于预后良好患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。肿瘤直径≥5 cm、STAT3阳性、PITX1阴性、Gli-1阳性均为皮肤恶性黑色素瘤患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。结论STAT3、PITX1及Gli-l蛋白在皮肤恶性黑色素瘤中存在异常表达,通过检测其水平能为临床治疗及预后提供新的思路与依据。 展开更多
关键词 皮肤恶性黑色素瘤 信号转导及转录激活因子3 垂体同源框1 胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1 临床意义
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