肝癌患者及正常人群中黑色素瘤相关抗原1的基因多态性

目的 研究黑色素瘤相关抗原1(MAGE-1)在中国肝癌患者中的表达,并阐明MAGE-1基因变异是肿瘤细胞内的突变还是单核苷酸多态性(SNP),以及基因变异在人群中的分布状况。 方法 提取19例原发性肝癌(HCC)患者的癌组织、癌旁组织总RNA,用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测组织MAGE-1基因mRNA的表达,并通过PCR产物测序分析编码基因是否存在变异,提取HCC患者癌组织、癌旁组织和外周血细胞基因组DNA,以及23例正常献血员外周血细胞基因组DNA,分析MAGE-1编码基因的变异状况并利用软件对变异抗原蛋白的生物学意义进行了初步探讨。 结果 癌组织中MAGE-1表达阳性率为47.4％(9/19),癌旁组织无表达。序列测定显示,MAGE-1 cDNA编码基因存在3种类型:一类是Ⅰ型(GenBank M77481),发生率为11.1％(1/9);另一类型(C159T,A272G,G393A)发生率为55.6％(5/9),称之为TGA型,导致编码的2个氨基酸的改变分别是T32A和R72Q;第三种类型(A272G,C991T,A1125G)发生率为33.3％(3/9),仅A272G引起一个氨基酸的替换(T32A),称之为GTG型。经对基因组DNA分析,证实以上3种基因类型不是肝癌组织的基因突变,而是SNP,其在肝癌患者和正常献血员中分布的比例分别为:Ⅰ型占26.3％(5/1 9)和60.9％(14/23);TGA型占57.9％(11/19)和47.8％(11/23),GTG型占21.

黑色素瘤相关抗原MAGEA1的定位及其相互作用蛋白质的鉴定

黑色素瘤相关抗原家族A1蛋白(melanoma associated antigen family A1,MAGEA1)在生殖细胞和多种组织学来源的肿瘤中有表达,但其作用机制尚不清楚。本研究通过构建带Flag和GFP标签的MAGEA1真核表达重组质粒,将其转染至HeLa、HEK293T细胞内。利用Western印迹、免疫细胞荧光法、免疫共沉淀、细胞核蛋白质与细胞质蛋白质分离和线粒体提取等技术,检测其在细胞内的表达与定位以及与其他蛋白质的相互作用情况。免疫细胞化学和蛋白质印迹结果显示,过表达的MAGEA1主要定位于细胞质,并部分与线粒体共定位。通过免疫共沉淀验证了MAGEA1与TRIM31、SNW1、HDAC1之间存在相互作用,并且发现MAGEA1可能主要与位于细胞质中的HDAC1相互作用。以上研究表明,MAGEA1可能参与不同的细胞内调节途径,部分与线粒体共定位;与TRIM31、SNW1、HDAC1相互作用,且可能主要与位于细胞质中的HDAC1蛋白相互作用,推测其可能参与到蛋白质泛素化和Notch信号通路。本研究的结果为后续深入研究MAGEA1的作用机制奠定了实验基础。

MAGE-A1在肿瘤诊断及免疫治疗中的研究进展

癌-睾丸抗原(cancer-testis antigens,CTAs)是一组在睾丸和胎盘及恶性肿瘤中表达的肿瘤相关抗原,其高表达可促进肿瘤的发生和发展,与肿瘤不良预后相关,已成为多种肿瘤的生物标志物和免疫治疗的理想靶点。在CTAs中,发现最早和研究最广泛的家族是黑色素瘤相关抗原A(melanoma-associated antigen A,MAGE-A)家族,MAGE-A家族有12个成员(MAGE-A1到MAGE-A12)。本文着重于MAGE-A1的研究,主要对MAGE-A1在肿瘤诊断及免疫治疗方面的进展进行综述。

采用RACE技术获得全长人新基因MAGE-D1

c DNA末端快速扩增 (RACE)技术是快速获得新基因 5′和 3′端未知序列的有效手段 .鉴于新报导的人肿瘤基因 MAGE家族成员之一 MAGE- D1的 c DNA序列不完全 ,从而拟用 RACE技术获得 MAGE- D1的全长 c DNA序列 .结果显示 ,MAGE- D1的 c DNA全长为 2 80 0个碱基 ,编码778个氨基酸 .同时对 RACE技术应用时的一些关键问题进行了讨论 .

MAGE-C1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨黑色素瘤相关抗原-C1(melanoma-associated antigen-C1,MAGE-C1)在乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法:选取2008年1月至2008年12月河北医科大学第四医院乳腺中心行手术切除的乳腺癌、正常乳腺组织及良性乳腺病变组织各60例,用RT-PCR和免疫组织化学染色法分别检测3种组织中MAGE-C1 mRNA和蛋白的表达水平,分析MAGE-C1表达与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)干预乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,RT-PCR法检测药物干预前后细胞中MAGE-C1 mRNA表达的变化。结果:乳腺癌组织中MAGE-C1 mRNA及蛋白表达阳性率分别为43.3%(26/60)和38.3%(23/60),乳腺正常组织及良性病变组织中均未发现MAGE-C1 mRNA和蛋白的表达。MAGE-C1表达与乳腺癌患者的组织学分级相关(χ2=6.233,P<0.05)。MAGE-C1表达阳性的患者,其无复发生存率低于MAGE-C1表达阴性的患者(χ2=4.213,P<0.05)。MAGE-C1表达(HR=3.980,P<0.05)和临床分期(HR=3.637,P<0.05)是影响乳腺癌患者预后的独立危险因素。单独或联合应用5-Aza-CdR和TSA对乳腺癌细胞中MAGE-C1的表达均无影响(P>0.05)。结论:MAGE-C1是肿瘤特异性抗原,其表达与乳腺癌患者的不良预后密切相关。

MAGE-D1对大鼠牙胚来源外胚间充质干细胞增殖迁移能力的影响

目的研究黑色素瘤相关抗原D1(Melanoma associated antigens,MAGE-D1)对大鼠牙胚来源的外胚间充质干细胞(Ectomensenchymal stem cells,EMSCs)增殖及迁移能力的影响。方法取SD大鼠孕19. 5 d胎鼠牙胚组织,组织块法培养牙胚来源外胚间充质干细胞,流式细胞仪进行外胚间充质干细胞表面分子鉴定CD14、CD29、CD44、CD45、CD90、CD105、CD146、CD166和p75NTR,MAGE-D1 siRNA转染入外胚间充质干细胞,实验组分为:对照组(Control)和MAGE-D1 siRNA组(MAGEsiRNA-EMSCs),CCK8法和划痕法分别检测两组细胞增殖能力与迁移能力,Real Time-PCR及Western blot检测迁移及WNT通路相关基因MAGE-D1、β-catenin、E-cadherin的mRNA及蛋白表达量。结果组织块法成功培养出牙胚来源的外胚间充质干细胞,经流式细胞仪检测细胞阳性表达CD14(92. 16%)、CD29(94. 53%)、CD44(99. 51%)、CD90(95. 18%)、CD105(34. 22%)、CD146(92. 39%)、CD166(98. 15%)和p75NTR(88. 56%),阴性表达CD45(0. 5%);CCK8法检测MAGE-D1 siRNA组EMSCs增殖能力受到抑制;划痕试验法检测MAGE-D1 siRNA组细胞48 h迁移量高于对照组细胞;Real Time-PCR检测Mage-D1、β-catenin和E-cadherin表达量,MAGE-D1 siRNA组EMSCs MAGE-D1和E-cadherin表达较对照组低,而β-catenin表达较高,Western blot检测MAGE-D1、β-catenin和E-cadherin表达水平趋势与Real Time-PCR结果相一致。结论抑制EMSCs中MAGE-D1的表达上调β-catenin,下调E-cadherin,能够提高细胞的迁移能力,但是其导致增殖能力降低,MAGE-D1可能作为EMSCs迁移增殖能力的关键因子。

Mage-H1在PC12细胞分化前后的表达变化及其对细胞周期的影响

目的:探讨黑色素瘤相关抗原H1(Mage-H1)在细胞增殖和分化调控中的作用。方法:神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导PC12细胞分化后用相差显微镜对其形态学进行观察。通过RT-PCR、Western blotting检测分化前后Mage-H1表达变化情况。流式细胞技术分析PC12细胞瞬时表达Mage-H1对细胞周期的影响。结果:经NGF诱导8d后,92%以上PC12细胞属于已分化细胞。分化后的PC12细胞与对照组相比,Mage-H1表达上调。PC12细胞瞬时表达Mage-H1后被明显阻滞在G0-G1期。结论:Mage-H1可抑制PC12细胞增殖并促进细胞的分化。

MageD1在口腔鳞癌中的表达及其促进凋亡作用的研究

目的:检测口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞系中黑色素瘤相关抗原D1(Mage D1)的表达,并在口腔鳞癌细胞系HN6中通过转染慢病毒的方法过表达Mage D1,探讨其对细胞凋亡的影响。方法:收集临床标本,通过Western blot和RT-PCR的方法检测口腔鳞癌以及HN6细胞系中Mage D1的表达量,用载有Mage D1的慢病毒转染HN6细胞,检测转染效果和Bax、CleavedCasepase3等凋亡相关蛋白的表达,并采用裸鼠荷瘤实验研究肿瘤体内生长的情况。结果:Mage D1在口腔鳞癌组织及HN6细胞株中较正常组织呈低表达,Western blot及RT-PCR结果表明,Mage D1成功转染并得到稳定过表达Mage D1的Lv-Maged1细胞,并且过表达Mage D1的HN6细胞中Cleaved-Casepase3和Bax的表达量高于HN6细胞,荷瘤实验证明Mage D1具有抑制肿瘤生长作用(P<0.05)。结论:Mage D1在口腔鳞癌组织及细胞系中表达降低,过表达Mage D1能促进肿瘤细胞凋亡。