乳腺癌组织中黑色素瘤相关抗原C2的表达及其机制

目的探讨黑色素瘤相关抗原C2(MAGE-C2)在乳腺正常组织、良性病变组织和癌组织中的表达、表达机制及临床意义。方法分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法检测60例乳腺正常组织、60例乳腺良性病变组织和60例乳腺癌组织中MAGE-C2 mRNA和蛋白的表达,分析其与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。以DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)干预人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231后,采用RT-PCR法检测MAGE-C2 mRNA表达的变化。结果乳腺癌组织中MAGE-C2 mRNA阳性表达率为61.7%(37/60),MAGE-C2蛋白阳性表达率为58.3%(35/60),乳腺正常组织和良性病变组织中未见MAGE-C2 mRNA及蛋白的表达。MAGE-C2蛋白表达与乳腺癌的病理类型、组织学分级、脉管瘤栓有关(均P<0.05)。MAGE-C2蛋白表达阳性乳腺癌患者的无复发生存率低于MAGE-C2蛋白表达阴性的患者(χ^(2)=4.467,P=0.035)。多因素Cox回归分析显示,临床分期(HR=4.715,P=0.004)、淋巴结转移(HR=3.827,P=0.023)和MAGE-C2蛋白表达(HR=4.229,P=0.026)是乳腺癌患者无复发生存的独立影响因素。对照组和TSA组乳腺癌细胞中未见MAGE-C2 mRNA表达,5-aza-CdR组乳腺癌细胞中可见MAGE-C2 mRNA表达(MCF-7细胞为0.2914±0.0274,MDA-MB-231细胞为0.4808±0.0288),联合应用5-aza-CdR和TSA可使乳腺癌细胞中MAGE-C2 mRNA表达进一步增加(MCF-7细胞为1.0357±0.0644,MDA-MB-231细胞为1.6013±0.0675)。结论MAGE-C2是肿瘤特异性抗原,其表达与乳腺癌患者的不良预后有关,DNA甲基化和组蛋白乙酰化可能是调控MAGE-C2基因表达的重要机制。

黑色素瘤相关抗原MAGE-C2:肿瘤免疫治疗新靶点

癌睾丸抗原（Cancer testis antigen,CTA）是一类在多种肿瘤组织表达、而在睾丸或胎盘以外的正常组织几乎不表达的抗原。CTA其表达的独特性,被认为是一类能用于肿瘤免疫治疗的理想抗原。目前一些CTA疫苗已用于临床试验,并收到了一定的疗效,显示了良好的开发前景,如NY-ESO-1[1]、MAGE-A3[2]等。

丝裂霉素C与表达Smac/DIABLO的肿瘤靶向腺相关病毒联用对抗恶性黑色素瘤的效果

目的探讨重组腺相关病毒(rAAV)介导促凋亡因子Smac/DIABLO是否能提高恶性黑色素瘤细胞对丝裂霉素(MMC)的敏感性。方法将携有目的基因的rAAV加入到培养液中转染肿瘤细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(EGFP)的表达,RT-PCR检测Smac/DIABLO基因的表达,MTT法测定肿瘤细胞增殖,流式细胞术测定肿瘤细胞的凋亡;动物在体实验测定抗肿瘤效果。结果 rAAV转染96h后几乎所有细胞表达明亮的黄绿色荧光。RT-PCR检测发现转染48h后目的基因Smac/DIABLO稳定表达。MTT检测显示rAAV-hTERT/Smac/DIABLO+MMC对肿瘤细胞的抑制率最高(P<0.05)。流式细胞检测结果显示,rAAV-hTERT/Smac/DIABLO+MMC组肿瘤细胞的凋亡率明显高于生理盐水(HBSS)组、MMC组和rAAV-hTERT/Smac/DIABLO组(P<0.01)。动物实验结果表明,rAAV-hTERT/Smac/DIABLO+MMC有非常强的抑制肿瘤作用,其抗癌效果优于HBSS、MMC、rAAV-hTERT/EGFP和rAAV-hTERT/Smac/DIABL组。结论 rAAV-hTERT/Smac/DIABLO在体内、体外均能提高肿瘤细胞对MMC的敏感性。此作用与Smac/DIABLO的促凋亡作用有关。

黑色素瘤相关抗原3、zeste 2多梳抑制复合物2亚基增强子在宫颈癌组织中的表达及与患者预后的关系

目的 探讨黑色素瘤相关抗原3(MAGEA3)、zeste 2多梳抑制复合物2亚基增强子(EZH2)在宫颈癌组织中的表达及与患者预后的关系。方法 选取45例宫颈癌患者的宫颈癌组织、18例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者的CIN组织和17例健康体检者的正常宫颈组织,采用免疫组化法检测MAGEA3、EZH2的表达情况。MAGEA3、EZH2表达的相关性采用Spearman相关分析;宫颈癌患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果 宫颈癌组织中MAGEA3、EZH2的阳性表达率均高于正常宫颈组织和CIN组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。淋巴结转移、肌层浸润深度﹥1/2、临床分期为ⅡA期、组织学分级为G3级宫颈癌患者宫颈癌组织中MAGEA3、EZH2的阳性表达率分别高于无淋巴结转移、肌层浸润深度≤1/2、临床分期为Ⅰ期、组织学分级为G1~2级的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。宫颈癌组织中MAGEA3的表达与EZH2的表达呈正相关(r=0.337,P﹤0.05)。MAGEA3、EZH2阳性表达宫颈癌患者的3年生存率均高于阴性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,淋巴结转移、肌层浸润深度﹥1/2、临床分期为ⅡA期、组织学分级为G3级均是宫颈癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论 MAGEA3、EZH2在宫颈癌组织中表达上调,且阳性表达患者预后较差,淋巴结转移、肌层浸润深度﹥1/2、临床分期为ⅡA期、组织学分级为G3级均是宫颈癌患者预后的独立危险因素。

RAC2对黑色素瘤细胞辐射敏感性的影响

黑色素瘤具有恶性程度高、转移早、死亡率高等特点,而且对常规放射治疗不敏感,因此,提高黑色素瘤细胞的辐射敏感性对于此种疾病的治疗具有重要意义。本研究中构建了辐射诱导型过表达Ras相关的C3肉毒素底物2(RAC2)和敲低RAC2的黑色素瘤细胞系,通过测定其辐照后的克隆存活率、γH2AX foci水平、ROS产额以及NADPH氧化酶活性研究了RAC2基因对于黑色素瘤细胞辐射敏感性的影响及可能的作用机制,发现RAC2能通过增强NADPH氧化酶活性和提高ROS产额显著增强黑色素瘤细胞的辐射敏感性。

老年结直肠癌患者组织AIM2、hnRNP AB与血清CEA及病理参数的相关性

目的探讨老年结直肠癌患者组织黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)、核不均一核糖核蛋白AB(hnRNP AB)和血清癌胚抗原(CEA)及病理参数的相关性。方法采集2017年6月至2020年6月收治的78例老年结直肠癌患者的癌组织及癌旁正常组织标本。采用免疫组化SP法检测癌组织及癌旁正常组织标本中的AIM2、hnRNP AB阳性表达情况,采用电化学发光法检测患者术前血清CEA水平。收集患者的临床病理参数,分析结直肠癌组织组织中AIM2、hnRNP AB表达及术前血清CEA与临床病理参数的关系。采用Kendall相关分析结直肠癌组织中AIM2、hnRNP AB表达与术前血清CEA的相关性。结果免疫组化显示,AIM2主要分布于肿瘤组织细胞质内,hnRNP AB主要分布于细胞核内;78例肿瘤组织中AIM2阳性29例(37.18%),明显低于癌旁组织的63例(80.77%),hnRNP AB阳性55例(70.51%),明显高于癌旁组织的17例(21.79%),术前CEA水平阳性34例(43.59%),明显高于癌旁组织的5例(6.41%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结直肠癌组织中AIM2、hnRNP AB表达及术前血清CEA水平均与性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、分化程度、大体分型、远处转移等无关(P>0.05),而与浸润程度、TNM分期、淋巴结转移等有关(P<0.05)。Kendall相关分析显示,结直肠癌组织中AIM2表达与术前血清CEA水平呈负相关(r=-0.211,P<0.01),而结直肠癌组织中hnRNP AB表达与术前血清CEA水平呈正相关(r=0.291,P<0.01)。结论老年结直肠癌患者组织AIM2、hnRNP AB表达与血清CEA水平密切相关,浸润程度越深,TNM分期越晚,发生淋巴结转移的结直肠癌组织中AIM2表达降低、hnRNP AB表达升高,AIM2、hnRNP AB可能成为结直肠癌靶向治疗的新靶点。

食管癌患者外周血MAGE-C2抗原特异性CD8^+ T细胞的功能及临床意义

目的:评价食管癌患者外周血恶性黑色素瘤相关抗原(melanoma-associated antigen,MAGE)-C2抗原特异性CD8^+ T细胞的功能,并分析其与临床病理参数的相关性。方法:密度梯度离心法获取130例食管癌初治患者(收集自2014年11月至2015年11月郑州大学第一附属医院胸外科)的PBMC,流式细胞术、RT-PCR方法筛选HLA-A2*0201和MAGE-C2共阳性的患者,其PBMC培养7、14 d后加MAGE-C2(336-344)抗原肽1μg/ml、IL-2 100μg/ml和CD3/CD28 Dynabeads 2μl处理,诱导扩增抗原特异性CD8^+ T细胞,流式细胞术检测CD8^+ T细胞表面CD107a和胞内IFN-γ的水平,并分析其与临床参数的相关性。结果:筛选出52例HLA-A2*0201和MAGE-C2共阳性的患者,MAGE-C2(336-344)处理其PBMC后,MAGE-C2(336-344)处理组CD8^+ T细胞中CD107a^+IFN-γ^+,CD107a^+IFN-γ^-和CD107a^-IFN-γ^+细胞的比例明显升高(P<0.05);CD107a的表达在早期、未发生淋巴结转移和高分化的食管癌患者明显高于晚期、发生淋巴结转移和低分化的癌症患者(P<0.05);IFN-γ的表达在高分化的食管癌患者明显高于低分化的食管癌患者(P<0.05)。结论:成功诱导扩增MAGE-C2抗原特异性CD8^+ T细胞,并发现其功能与食管癌的分期和淋巴结转移相关,似可作为一种理想的免疫治疗靶点。

4例犬恶性黑色素瘤病理学和PNL-2免疫组织化学染色检查

为了对4例疑似犬肿瘤的临床病例进行确诊,本文对临床送检的4例疑似犬肿瘤的肿物样本进行组织切片制作,经苏木精-伊红(H.E.)染色后,镜下可见增生的细胞排列呈束状、片状、巢状和螺纹状等,细胞呈梭形或多角形,部分细胞胞浆内含有黑色素颗粒,符合黑色素细胞肿瘤的特征;为了进一步观察细胞形态并对肿物进行确诊,使用黑色素瘤相关抗原(PNL-2)对肿瘤细胞进行免疫组织化学(IHC)染色,并用二氨基联苯胺(DAB)和3-氨基-9-乙基卡唑(AEC)显色液对其显色,结果均为恶性黑色素瘤(MM)。本试验通过对肿物的细胞形态学特征和IHC染色结果综合分析,将4例病例诊断为MM。试验结果不仅为犬MM的病理诊断提供参考,还为比较医学中MM的确诊提供参考依据。

高度特异性人补体C1q／TNF相关蛋白-2抗体的制备及验证

人体中已发现13种与脂联素在结构和功能上相类似的蛋白，这类蛋白被称为hCTRP（humanC1q／TNF—relatedpro—tein）。在已发现的CTRP中，CTRP2与脂联素最为相似，

子宫颈鳞癌AIM2和血清SCC表达与预后相关性分析

目的:探究子宫颈鳞癌患者黑色素瘤缺乏因子2(AIM2)与血清鳞状上皮细胞癌相关抗原(SCC)表达水平及其临床意义。方法:选择2013年6月1日至2015年6月30日于徐州市中心医院妇科接受手术治疗的80例子宫颈鳞癌患者的肿瘤组织及30例正常子宫颈患者组织,应用免疫组化检测上述标本中AIM2的表达水平,回顾性收集子宫颈鳞癌患者临床病理参数及其术前血清SCC水平,分析两种指标与临床病理特征的关系。结果:①子宫颈鳞癌组织AIM2高表达率明显高于正常子宫颈组织(68.8%vs 26.7%,P<0.001),子宫颈鳞癌组织AIM2表达水平与术前血清SCC水平呈正相关(r=0.275,P=0.013);②AIM2表达与肿瘤的肿瘤直径、病理学分级、FIGO分期、肌层浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05);术前SCC水平与肿瘤的病理学分级、FIGO分期、肌层浸润深度及淋巴结转移有关(P<0.05);③AIM2高表达患者总生存率(OS)(56.1%)明显低于低表达患者(92.0%),差异有统计学意义(P=0.002)。术前SCC阳性患者OS(53.9%)明显低于阴性患者(87.5%),差异有统计学意义(P=0.002);④多因素COX回归分析结果显示,AIM2表达、术前SCC水平是子宫颈鳞癌患者预后的独立危险因素。结论:子宫颈鳞癌组织中AIM2过表达与患者不良预后有关,联合分析子宫颈鳞癌组织AIM2及血清SCC有助于评估子宫颈鳞癌患者预后。

黑色素瘤相关抗原D2在脑胶质瘤患者血清和脑脊液中的表达及临床意义

目的探讨黑色素瘤相关抗原D2(MAGED2)在胶质瘤患者外周血清和脑脊液中异常表达的临床意义。方法收集2020年1月至2022年12月广西医科大学附属肿瘤医院病理确诊的58例胶质瘤患者的脑肿瘤标本作为观察组,20例非肿瘤患者标本来源于癫痫患者的病灶切除及周围脑组织作为对照组。采用蛋白印迹法和免疫组织化学法检测两组标本中MAGED2的表达水平。采集两组患者的血清和胶质瘤患者术后脑脊液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测样品MAGED2表达水平,并比较两组MAGED2表达水平的差异;对两组血清及脑脊液MAGED2的表达程度与肿瘤级别及患者预后作相关性分析,不同预后参数采用Cox比例风险模型进行多因素分析。结果蛋白印迹法检测发现,胶质母细胞瘤(1.07±0.27)、弥漫性星形细胞瘤(1.05±0.19)、间变性星形细胞瘤(0.83±0.06)和少突胶质细胞瘤(0.68±0.07)的MAGED2蛋白表达量均高于非肿瘤脑组织组(0.39±0.07),差异有统计学意义(F=45.88,P<0.01)。免疫组织化学检测MAGED2蛋白主要染色在细胞质和细胞核中。ELISA检测术前血清MAGED2表达水平,观察组[(1051.20±129.33)pg/ml]高于对照组[(207.62±23.39)pg/ml,t=17.22,P<0.01]。观察组术后血清MAGED2表达水平(556.40±59.77)低于术前(1051.20±129.33,t=14.67,P<0.01)。手术后患者血清MAGED2表达水平[(556.40±59.77)pg/ml]仍高于对照组水平[(207.6±23.39)pg/ml],差异有统计学意义(t=6.144,P<0.01)。MAGED2在观察组患者术前血清、术后血清和术后脑脊液的表达上,两两之间均互为正相关(r=0.19、0.33、0.46,P<0.01)。乘积极限(Kaplan-Meier)法结果显示,MAGED2蛋白高表达组的中位总生存期(OS)低于低表达组(50.00周比250.00周,χ^(2)=22.13,P<0.001);术前血清MAGED2高表达组中位OS低于低表达组(94.00周比212.00周,χ^(2)=12.45,P<0.001);术后血清MAGED2高表达组中位OS低于低表达组(150.00周比233.00周,χ^(2)=4.34,P<0.05);术后脑脊液MAGED2高表达组中位OS低于低表达组(132.00周比250.00周,χ^(2)=10.53,P<0.01)。Cox比例风险模型进行多因素分析显示,MAGED2为胶质瘤患者的独立预后因素[风险比(HR)=0.578,95%可信区间(CI):0.182~0.927,P<0.05]。结论MAGED2有望成为评估胶质瘤进展、病理级别和预后的体液生物学标志物。

异种黑色素瘤相关抗原诱发抗肿瘤免疫伴发自身免疫性损伤

目的探讨腺病毒载体(Ad)介导异种黑色素瘤相关抗原酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2)诱发抗肿瘤免疫与自身免疫性损伤的关系。方法用Ad编码的人或小鼠TRP2(AdhTRP2或AdmTRP2)皮内免疫C57BL/6小鼠,将小鼠分为正常对照组(d1703)、AdhTRP2和AdmTRP2免疫组。体内细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤试验和细胞内干扰素γ(IFNγ)染色(ICS)分析CTL杀伤活性和IFN-γ的产生(每组3只小鼠);皮下接种B16.F10黑色素瘤细胞(每组10只小鼠),观察荷瘤小鼠成活情况。结果AdhTRP2诱发小鼠CTL杀伤活性与免疫时间相关,免疫后1周活性达到最大,随后逐渐降低;AdhTRP2诱导的CTL杀伤活性具有剂量效应关系。AdhTRP2免疫小鼠1周其6hCTL杀伤率为94%±5%,脾脏产生IFNγ的CD8+T细胞占总CD8+T细胞的0.87%±0.12%,而相应地AdmTRP2分别为22%±8%和0.15%±0.05%。接种1×106B16.F10细胞,AdhTRP2免疫的小鼠观察3个月100%无瘤生长,但在病毒注射部位有白癜风形成;而接种1×105B16.F10细胞的AdmTRP2免疫小鼠3个月只有20%的成活率,并不伴局部白癜风形成。结论用Ad介导异种TRP2能有效地打破对自身TRP2的免疫耐受,诱发强烈的抗原特异性细胞免疫反应,同时伴发自身免疫性损伤。

黑色素瘤相关抗原-E1在胶质瘤中的表达和意义

一、材料与方法 提取总RNA（胶质瘤47例，相对正常脑组织14例），合成cDNA。RT-PCR扩增目的基因MAGE-E1和管家基因HPRT1的片断，分别插入载体pMAL-C2和pMD19-T并进行鉴定，稀释为不同浓度（10^9-10^3Copies／μl）的标准品；优化反应体系进行定量PCR反应，测定MAGE-E1和HPRT1的起始浓度（Copies／μ1），以MAGE-E1相对于HPRT1的量（MAGE-E1／HPRT1）表示样本中MAGE-E1 mRNA的表达量。SPSS13．0统计学分析软件处理数据。

结直肠癌组织中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中高迁移率族蛋白B2(HMGB2)、黑色素瘤相关抗原-A9(MAGE-A9)、DNA错配修复基因(MMR)蛋白表达情况,以及其在评估患者预后中的临床价值。方法选取52例结直肠癌患者作为研究对象,术中采集所有患者肿瘤标本及癌旁组织标本,检测HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达水平,并分析各指标表达情况与病理特征、预后间的关系。结果肿瘤组织内HMGB2、MAGE-A9、MMR阳性表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤分期Ⅲ期、分化程度低分化、淋巴结转移患者HMGB2、MAGE-A9、MMR阳性表达率高于Ⅰ期、Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。随访3年,52例患者存活率为71.15%(37/52);HMGB2阳性组存活率[61.76%(21/34)]低于HMGB2阴性组[88.89%(16/18)],差异有统计学意义(χ^(2)=4.219,P=0.040);MAGE-A9阳性组存活率[58.62%(17/29)]低于MAGE-A9阴性组[86.96%(20/23)],差异有统计学意义(χ^(2)=5.018,P=0.025);MMR阳性组存活率[52.00%(13/25)]低于MMR阴性组[88.89%(24/27)],差异有统计学意义(χ^(2)=8.606,P=0.003)。结论HMGB2、MAGE-A9、MMR在结直肠癌中呈高表达状态,其表达与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移关系密切,且不同表达患者存活率存在较大差异,可作为评估预后的重要指标。

脑胶质瘤中MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平及其临床意义

目的分析脑胶质瘤中黑色素瘤相关抗原(MAGE)-D4和肌动蛋白结合蛋白CORO1C mRNA的表达水平,探讨二者的相关性及临床意义。方法通过基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库收集脑胶质瘤样本数据681例[低级别脑胶质瘤(LGG)518例,胶质母细胞瘤(GBM)163例],正常脑组织样本数据207例,比较其MAGE-D4和CORO1C mRNA的表达水平。进一步收集62例脑胶质瘤组织和11例正常脑组织临床样本,应用逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平并进行比较,分析MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平与脑胶质瘤患者临床指标的关联性。应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默脑胶质瘤细胞株MAGE-D4的表达,检测CORO1C mRNA的表达变化情况。结果GEPIA数据库数据分析结果显示,GBM和LGG组织的MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。针对临床样本的RT-qPCR检测结果也显示,脑胶质瘤组织中MAGE-D4和CORO1C mRNA的表达水平显著高于正常脑组织(P<0.05)。MAGE-D4及CORO1C mRNA的表达水平与患者年龄、性别、世界卫生组织(WHO)分级、病理类型、卡氏评分(KPS)、肿瘤最长径,以及Ki-67、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、S-100和波形蛋白(Vimentin)的表达水平均无显著关联(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,临床脑胶质瘤样本组织中MAGE-D4与CORO1C mRNA表达水平呈正相关(r=0.848,P=0.000)。细胞实验结果显示,经MAGE-D4 siRNA沉默后,U87 MG和U251细胞CORO1C mRNA的表达水平显著下降(P<0.05)。结论MAGE-D4和CORO1C mRNA在脑胶质瘤组织中高表达,且二者表达水平呈正相关。MAGE-D4和CORO1C可能协同影响脑胶质瘤的发生、发展过程,其具有成为脑胶质瘤分子靶向治疗靶点的潜力。

口服减毒沙门氏菌介导黑色素瘤DNA疫苗的研究

以减毒沙门氏菌作为载体的肿瘤疫苗,可以有效地把特异性肿瘤抗原递呈给免疫细胞,激发机体对肿瘤细胞的特异性免疫反应,从而为抑制和治疗肿瘤提供了新思路.热休克蛋白Hsp70可以有效地将抗原肽递呈至抗原递呈细胞(APC)并将其激活,打破机体对肿瘤相关性抗原的免疫耐受.将携带热休克蛋白Hsp70基因和小鼠黑色素瘤特异性抗原酪氨酸激酶相关蛋白2基因(Trp2)的重组质粒(pcDNA3.1-Hsp70-Trp2)导入减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261菌株,以口服形式免疫小鼠C57BL/6后,有效提高了黑色素瘤细胞特异性毒性T细胞反应,并显著激活了自然杀伤细胞.CTL反应活性达到44.6%(P<0.01),是PBS对照组(8.4%)的5倍多,自然杀伤细胞占脾脏细胞比例达到4.0%(P<0.01),是PBS对照组(0.8%)的5倍.在免疫预防实验中,减毒沙门氏菌介导的口服DNA疫苗能够明显延缓C57BL/6小鼠B16F10黑色素移植肿瘤的生长(P<0.01).

肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨

背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1)蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法:回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果:肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);将其与肿瘤的临床病理学特征进行相关分析发现,肿瘤组织和外周血中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平与肿瘤TNM分期和分化级别有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理学类型无关(P>0.05)。肿瘤组织中6种蛋白的表达水平与外周血清表达具有较好的一致性(P>0.05)。结论:肺癌肿瘤组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白表达阳性与肿瘤TNM分期及分化级别密切相关。

急性白血病患者WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因表达的检测及其与疾病分型、疗效的关系

目的:研究急性白血病患者肾母细胞瘤基因(WT1)、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、ETS相关基因(ERG)、硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达及其与疾病分型、疗效的关系。方法:将本院收治的90例白血病患者纳入研究的白血病组,将同期体检健康者纳入健康组;进一步根据分型将白血病患者分为ALL组和AML组,根据化疗后疗效将白血病患者分为完全缓解组和复发组。采集患者的外周血,检测WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量。结果:白血病组血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AML组血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于ALL组,差异有统计学意义(P<0.05);复发组的血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于完全缓解组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因异常高表达与白细胞的发生有关,也与疾病的分型、化疗的效果密切相关。

MAGE-C3通过诱导上皮–间质转化及免疫抑制作用促进食管鳞状细胞癌转移

背景与目的逃避免疫监视对肿瘤转移是必要的。因此,迫切需要更好地了解肿瘤转移和肿瘤免疫逃逸之间的相互作用机制。本研究旨在阐明食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)发展过程中肿瘤转移和免疫抑制相互影响的新机制。方法通过免疫组化检测黑色素瘤相关抗原C3(melanoma-associated antigen C3,MAGE-C3)的表达。通过细胞迁移和侵袭实验检测ESCC细胞的迁移和侵袭能力。通过小鼠转移模型检测ESCC细胞的体内转移能力。通过淋巴细胞介导的细胞杀伤实验检测肿瘤细胞的免疫抑制能力。采用RNA测序鉴定MAGE-C3过表达的ESCC细胞和对照细胞中差异表达的基因。通过基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析确定受MAGE-C3影响最大的信号通路。使用蛋白质印迹法、GAS荧光素酶报告系统、免疫荧光和流式细胞术分析干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)信号通路的激活。使用蛋白质印迹法和免疫沉淀法分析MAGE-C3在IFN-γ信号通路中的作用。此外,通过免疫组化和流式细胞术监测小鼠肺转移灶中浸润T细胞群的变化。结果MAGE-C3在ESCC组织中过表达。在ESCC患者中,MAGE-C3高表达与患者淋巴结转移和预后不良显著相关。功能实验表明MAGE-C3通过激活上皮-间质转化(epithelialmesenchymaltransition,EMT)促进肿瘤转移。MAGE-C3抑制抗肿瘤免疫反应并调节T细胞的细胞因子分泌,表明其具有免疫抑制作用。在机制上,MAGE-C3通过与IFN-γ受体1(IFN-γreceptor 1,IFNGR1)结合并增强IFNGR1与信号转导及转录激活分子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)之间的相互作用,促进IFN-γ信号传导并上调程序性细胞死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)。有趣的是,MAGE-C3在免疫正常小鼠中比在免疫缺陷裸鼠中表现出更高的促肿瘤发生作用,证实了MAGE-C3具有免疫抑制作用。此外,荷有MAGE-C3过表达肿瘤的小鼠生存期更短,出现更多的肺转移灶,其CD8+浸润T细胞减少和程序性细胞死亡受体1(programmed cell death 1,PD-1)+CD8+浸润T细胞增加。结论MAGE-C3通过促进EMT和保护肿瘤免受免疫监视来促进肿瘤转移,可能作为潜在的肿瘤预后标志物和治疗靶点。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷体外对黑素瘤细胞系肿瘤相关抗原和免疫分子表达的影响

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)对4种体外培养建系的黑素瘤细胞肿瘤相关抗原和免疫分子表达水平的影响。方法将手术切除或细针穿刺活组织检查获得的黑素瘤组织体外培养建系;应用流式细胞术检测5-aza-CdR用药后黑素瘤细胞表面人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-Ⅰ类、-Ⅱ类、-A2以及细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)表达的变化;采用实时定量RT-PCR检测用药后一系列重要的肿瘤相关抗原表达的变化。结果 5-aza-CdR用药后,4种黑素瘤细胞系HLA-Ⅰ类、-Ⅱ类和-A2的表达与对照组相比无明显变化;TC12A和TC13细胞ICAM-1表达明显升高;TC12A、TC13和TC69B细胞肿瘤相关抗原黑素瘤抗原基因(MAGE)-4和NY-ESO-1的表达水平明显升高。结论 5-aza-CdR不影响黑素瘤细胞HLA的表达水平,对ICAM-1和某些黑素瘤相关肿瘤抗原的表达有明显上调作用,提示化疗药物5-aza-CdR不会阻碍抗肿瘤免疫中黑素瘤细胞的抗原呈递能力,为化疗联合免疫治疗肿瘤提供了理论前提。