宫颈癌组织中人类黑色素瘤相关抗原A3表达变化及其意义

目的观察宫颈癌组织中人类黑色素瘤相关抗原A3(MAGE-A3)的表达变化,分析其与肿瘤临床病理参数及预后的关系。方法收集宫颈癌组织76例、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织40例、正常宫颈组织标本25例,采用免疫组化SP法检测MAGE-A3,分析MAGE-A3表达与患者年龄、FIGO分期、组织病理学分级、淋巴结转移及阴道残端癌累及的关系。收集70例宫颈癌患者的术后随访资料,采用Kaplan-Meier生存曲线分析MAGE-A3表达与患者预后的关系。结果宫颈癌组织、CIN组织、正常宫颈组织中MAGE-A3阳性表达率分别为53.94%、7.50%、0,组间两两相比,P均<0.05。FIGO分期Ⅱa1期宫颈癌组织中MAGE-A3阳性表达率高于Ⅰ期者(P<0.05)。病理分级为G1、G2、G3的宫颈癌组织中MAGE-A3阳性表达率逐渐增高(P均<0.05)。有淋巴结转移的宫颈癌组织中MAGE-A3阳性表达率高于无淋巴结转移者(P<0.05)。MAGE-A3低表达组患者5年生存率为78.1%(25/32),高表达组患者5年生存率为44.7%(17/38),两者相比,P<0.05。结论宫颈癌组织中MAGE-A3阳性表达率高于CIN组织和正常宫颈组织;MAGE-A3高表达可能与宫颈癌的发生发展及不良预后密切相关。

黑色素瘤相关抗原3、zeste 2多梳抑制复合物2亚基增强子在宫颈癌组织中的表达及与患者预后的关系

目的 探讨黑色素瘤相关抗原3(MAGEA3)、zeste 2多梳抑制复合物2亚基增强子(EZH2)在宫颈癌组织中的表达及与患者预后的关系。方法 选取45例宫颈癌患者的宫颈癌组织、18例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者的CIN组织和17例健康体检者的正常宫颈组织,采用免疫组化法检测MAGEA3、EZH2的表达情况。MAGEA3、EZH2表达的相关性采用Spearman相关分析;宫颈癌患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果 宫颈癌组织中MAGEA3、EZH2的阳性表达率均高于正常宫颈组织和CIN组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。淋巴结转移、肌层浸润深度﹥1/2、临床分期为ⅡA期、组织学分级为G3级宫颈癌患者宫颈癌组织中MAGEA3、EZH2的阳性表达率分别高于无淋巴结转移、肌层浸润深度≤1/2、临床分期为Ⅰ期、组织学分级为G1~2级的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。宫颈癌组织中MAGEA3的表达与EZH2的表达呈正相关(r=0.337,P﹤0.05)。MAGEA3、EZH2阳性表达宫颈癌患者的3年生存率均高于阴性表达患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,淋巴结转移、肌层浸润深度﹥1/2、临床分期为ⅡA期、组织学分级为G3级均是宫颈癌患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论 MAGEA3、EZH2在宫颈癌组织中表达上调,且阳性表达患者预后较差,淋巴结转移、肌层浸润深度﹥1/2、临床分期为ⅡA期、组织学分级为G3级均是宫颈癌患者预后的独立危险因素。

脑胶质瘤患者血清黑色素瘤相关抗原-A3特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫反应水平及临床意义

目的探讨脑胶质瘤组织中黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)蛋白表达和甲基化状态,血清中特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫应答及临床意义。方法采用蛋白质印迹(Western blot)法和甲基化特异性聚合酶链反应(MSP-PCR)技术检测56例脑胶质瘤组织和15例正常脑组织中MAGE-A3蛋白表达和基因甲基化状态,采用Gultured酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测患者外周血单个核细胞(PBMC)中MAGE-A3特异性CTL免疫反应,并明确二者之间的关系,以及与患者临床特征的关系。结果56例脑胶质瘤组织中MAGE-A3蛋白的表达量为(2.26±1.09),明显高于15例正常脑组织中的(0.44±0.18)(P﹤0.01)。脑胶质瘤组织中MAGE-A3基因启动子甲基化率为55.36%(31/56),明显低于正常脑组织的100%(15/15)(P﹤0.01)。脑胶质瘤患者血清MAGE-A3特异性CTL免疫应答阳性率为33.93%(19/56),平均反应强度为(2301.70±560.33)SFC/106 PBMC。同一患者脑胶质瘤组织中MAGE-A3基因启动子甲基化状态与MAGE-A3蛋白高表达结果一致性一般(Kappa=0.679,P﹤0.01)。同一患者血清MAGE-A3特异性CTL免疫应答阳性与组织中MAGE-A3蛋白高表达结果一致性一般(Kappa=0.464,P﹤0.01)。脑胶质瘤患者血清中MAGE-A3特异性CTL免疫反应强度与组织中MAGE-A3蛋白表达量呈正相关(r=0.788,P﹤0.01)。不同肿瘤大小及临床分期的脑胶质瘤患者血清MAGE-A3特异性CTL免疫反应频率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。结论脑胶质瘤组织中MAGE-A3基因启动子区DNA去甲基化导致MAGE-A3蛋白表达量升高,进而刺激机体产生MAGE-A3特异性CTL免疫应答反应,参与肿瘤生长和恶性进展。

表达黑色素瘤抗原-A3重组质粒的免疫原性研究

目的对新型肺癌基因疫苗的免疫原性进行评价。方法利用Furin 2A将黑色素瘤抗原A3(MAGE-A3)基因与GM-CSF基因进行连接,克隆入真核表达载体p VAX1,构建基因疫苗p VAX1-MAGE-A3-F2A-GM-CSF。将该疫苗体外转染293T细胞,利用免疫印迹和ELISA的方法对其表达情况进行检测。然后,将疫苗及对照组分别免疫接种小鼠,通过ELISA和ELISPOT法初步检测其诱导的体液免疫和细胞免疫反应。结果成功克隆并构建了肺癌基因疫苗p VAX1-MAGE-A3-F2A-GM-CSF,并证实了其在真核细胞中表达。疫苗免疫接种小鼠模型后的检测结果显示,与空载体对照组以及单独抗原组相比,p VAX1-MAGE-A3-F2A-GM-CSF能够诱导产生更强的体液免疫反应和细胞免疫反应。结论 p VAX1-MAGE-A3-F2A-GMCSF能够同时诱导较强的体液免疫和细胞免疫反应,其抗肿瘤效应将通过进一步实验深入研究。

负载乙肝核心抗原-黑色素瘤抗原-A3融合蛋白的外周血单个核细胞对人非小细胞肺癌细胞体外杀伤作用的实验

目的研究经负载乙肝核心抗原(hepatitis B core antigen,HBVc)-黑色素瘤抗原-A3(melanoma antigen gene-A3,MAGE-A3)融合蛋白的外周血单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC)激活的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)对MAGE-A3高表达人非小细胞肺癌细胞的特异性体外杀伤作用。方法从健康人外周血中分离出单个核细胞(peripheral blood monocyte cell,PBMC),使用白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)刺激PBMC,将负载HBVc-MAGEA3融合蛋白的PBMC与正常PBMC共培养,诱导出特异性细胞毒性T淋巴细胞,以该共培养后的PBMC作为效应细胞,以高表达MAGE-A3抗原的人非小细胞肺癌细胞株NCI-H358为靶细胞,低表达MAGE-A3抗原的细胞系HEK-293T作为对照,进行肿瘤细胞杀伤试验。结果负载HBVc-MAGE-A3融合蛋白抗原的外周血单个核细胞能够成功诱导出特异性的细胞毒性T淋巴细胞,并且对非小细胞肺癌细胞有显著的杀伤作用,其杀伤率显著高于对照组(P<0.05)。当使用MAGEA3高表达的NCI-H358细胞作为靶细胞,效靶比(E∶T)=10∶1时,HBVc-MAGE-A3组的杀伤率约为60%,HBVc组和空白对照(no template control,NTC)组的杀伤率约为35%;E∶T=20∶1时,HBVc-MAGE-A3组的杀伤率约为90%,HBVc组和NTC组的杀伤率约为45%。当使用MAGE-A3低表达的HEK-293T作为靶细胞时,三组间杀伤率差异无统计学意义。结论 MAGE-A3融合蛋白抗原负载的外周血单个核细胞可以在体外成功诱导出特异性针对非小细胞肺癌细胞的细胞毒性T淋巴细胞,并具有特异性免疫杀伤作用。

黑色素瘤相关抗原MAGEA1的定位及其相互作用蛋白质的鉴定

黑色素瘤相关抗原家族A1蛋白(melanoma associated antigen family A1,MAGEA1)在生殖细胞和多种组织学来源的肿瘤中有表达,但其作用机制尚不清楚。本研究通过构建带Flag和GFP标签的MAGEA1真核表达重组质粒,将其转染至HeLa、HEK293T细胞内。利用Western印迹、免疫细胞荧光法、免疫共沉淀、细胞核蛋白质与细胞质蛋白质分离和线粒体提取等技术,检测其在细胞内的表达与定位以及与其他蛋白质的相互作用情况。免疫细胞化学和蛋白质印迹结果显示,过表达的MAGEA1主要定位于细胞质,并部分与线粒体共定位。通过免疫共沉淀验证了MAGEA1与TRIM31、SNW1、HDAC1之间存在相互作用,并且发现MAGEA1可能主要与位于细胞质中的HDAC1相互作用。以上研究表明,MAGEA1可能参与不同的细胞内调节途径,部分与线粒体共定位;与TRIM31、SNW1、HDAC1相互作用,且可能主要与位于细胞质中的HDAC1蛋白相互作用,推测其可能参与到蛋白质泛素化和Notch信号通路。本研究的结果为后续深入研究MAGEA1的作用机制奠定了实验基础。

RAC2对黑色素瘤细胞辐射敏感性的影响

黑色素瘤具有恶性程度高、转移早、死亡率高等特点,而且对常规放射治疗不敏感,因此,提高黑色素瘤细胞的辐射敏感性对于此种疾病的治疗具有重要意义。本研究中构建了辐射诱导型过表达Ras相关的C3肉毒素底物2(RAC2)和敲低RAC2的黑色素瘤细胞系,通过测定其辐照后的克隆存活率、γH2AX foci水平、ROS产额以及NADPH氧化酶活性研究了RAC2基因对于黑色素瘤细胞辐射敏感性的影响及可能的作用机制,发现RAC2能通过增强NADPH氧化酶活性和提高ROS产额显著增强黑色素瘤细胞的辐射敏感性。

小鼠黑色素瘤细胞外泌体促进成纤维细胞表达Rac1蛋白

目的:探讨小鼠黑色素瘤细胞外泌体对成纤维细胞表达Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)蛋白的影响。方法:超高速离心法分离小鼠黑色素瘤B16-F10细胞外泌体,电镜负染色观察外泌体的形态,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)测定外泌体的粒径分布,Western blot鉴定外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,Tsg101)和酪氨酸酶相关蛋白2(tyrosinase-related protein 2,Tyrp2)的表达;激光共聚焦显微镜观察在共培养过程中小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)摄取外泌体的过程;免疫细胞化学染色和Western blot实验分析MEF表达Rac1蛋白的情况。结果:B16-F10细胞外泌体在电镜下呈典型茶托状形态,NTA测得其粒径范围在141~255 nm,Western blot测出其标志蛋白Tsg101和Tyrp2。激光共聚焦显微镜观察结果显示,与共培养0 h相比,共培养12 h的MEF内有少量的外泌体,且共培养24和36 h的MEF内聚集了大量的外泌体。Western blot结果表明,与共培养0 h相比,共培养24和36 h的MEF中Rac1蛋白表达水平显著增加(P<0. 01)。免疫细胞化学染色结果表明,与共培养0 h相比,共培养12、24和36 h的MEF中Rac1蛋白阳性表达水平显著增加(P<0. 05或P<0. 01)。结论:小鼠黑色素瘤细胞外泌体可促进成纤维细胞表达Rac1蛋白。

带3蛋白C端和血型糖蛋白A相互作用及其抗原相关性的研究

采用高效液相色谱法分离鉴定了红细胞膜蛋白质跨膜域的亲水性肽链 ,结果显示血型糖蛋白A (GPA)Lys10 1～Asp130与带 3蛋白有相关性 .为进行深入研究 ,采用RT PCR方法从K5 6 2细胞中扩增了 410bp的GPA基因 ,分别克隆到酵母双杂交BD端表达质粒和杆状病毒转移载体上 .同时 ,以含有带 3蛋白全长基因的质粒为模板扩增了 34 8bp的带 3蛋白C端基因 ,将其克隆到酵母双杂交AD端表达质粒 .经酵母双杂交营养缺陷培养选择和 β半乳糖苷酶检测证实GPA与带 3蛋白之间存在相互作用 .GPA表达产物分别经抗带 3蛋白和抗GPA抗体进行蛋白质印迹分析 ,表明二者具有免疫交叉反应 .上述结果表明带 3蛋白与GPA在结构与功能上存在着密切联系 .

肺癌单克隆抗体3C＿9及其相关抗原的研究

用肺腺癌细胞系Ａ５４９免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，常规细胞融合，获得一株ⅠｇＭ型单抗３Ｃ９。ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ研究发现该抗体识别５６．４ＫＤ蛋白带。免疫组化研究发现，３Ｃ９相关抗原（３Ｃ９Ａｇ）在肺癌组织中表达阳性率高达９２．５％。３Ｃ９Ａｇ血清学研究发现，其诊断肺癌的敏感性为６４．７％，特异性为９３．０％，准确性为８２．５％。其血清水平与组织学分布相关，在高、中分化的肺癌病人阳性率高于低分化者（Ｐ＜０．０５）。表明检测血清３Ｃ９Ａｇ具有重要意义。

黑色素瘤相关抗原-A3蛋白激活树突状细胞诱导CD8＋细胞毒性T淋巴细胞免疫治疗肝细胞癌

目的探讨黑色素瘤相关抗原-A3（MAGE-A3）蛋白激活树突状细胞（DC），然后诱导产生CD8＋细胞毒T淋巴细胞（CTL）进行免疫治疗肝细胞癌（简称肝癌）的效果。 方法利用MAGE-A3蛋白诱导DC成熟并检测DC表面标志物及白细胞介素（IL）-10、IL-12表达，然后利用成熟的MAGE-A3-DC诱导MAGE-A3特异性CD8＋CTL，并检测MAGE-A3-DC-CD8＋CTL对正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG2的杀伤作用。建立BALB/c-nu/nu肝癌模型，检测MAGE-A3-DC-CD8＋CTL对小鼠肿瘤的抑制作用，并通过病理学切片观察肿瘤组织变化。 结果MAGE-A3蛋白刺激能够显著上调DC表面标志物DC80、DC83、DC86和人类白细胞抗原DR基因（HLA-DR）水平（97.45±2.58比48.33±1.68，92.81±2.36比52.92±1.90，94.00±3.01比53.97±2.05，92.16±1.87比34.13±1.32；t＝35.680，P＝0.013；t＝29.440，P＝0.021；t＝24.580，P＝0.012；t＝56.690，P＝0.009）；与磷酸盐缓冲液（PBS）刺激的DC比较，MAGE-A3蛋白能够显著促进DC释放IL-12[（338.44±18.15） pg/ml比（243.23±16.56） pg/ml；t＝8.670，P＝0.005]和显著抑制IL-10的释放[（207.21±10.89） pg/ml比（327.58±14.36） pg/ml；t＝14.930，P＝0.009]。MAGE-A3-DC-CD8＋CTL和DC-CD8＋CTL展示了相近的L02细胞杀伤效果[（9.10±1.40）%比（9.71±1.58）%；t＝0.650，P＝0.120]，与DC-CD8＋CTL比较，MAGE-A3-DC-CD8＋CTL展示了显著的HepG2细胞杀伤效果[（58.84±5.27）%比（9.63±1.61）%；t＝19.970，P＝0.008]。BALB/c-nu/nu肝癌小鼠经过MAGE-A3-DC-CD8＋CTL治疗后，肿瘤体积比显著低于PBS组和DC-CD8＋CTL组（5.43±1.22比21.81±2.01比22.85±2.40；t＝22.030，P＝0.010；t＝20.460，P＝0.012）。苏木素-伊红（HE）染色结果显示，经过MAGE-A3-DC-CD8＋CTL处理的肿瘤组织细胞核固缩，细胞间隙增大，出现空泡和水肿现象，而PBS组和DC-CD8＋CTL组肿瘤组织无病理学改变。结论MAGE-A3蛋白能够刺激DC细胞成熟并诱导产生MAGE-A3蛋白特异性CD8＋CTL，MAGE-A3-DC-CD8＋CTL具有特异性的肿瘤杀伤能力。

乳腺癌组织中黑色素瘤相关抗原C2的表达及其机制

目的探讨黑色素瘤相关抗原C2(MAGE-C2)在乳腺正常组织、良性病变组织和癌组织中的表达、表达机制及临床意义。方法分别采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化法检测60例乳腺正常组织、60例乳腺良性病变组织和60例乳腺癌组织中MAGE-C2 mRNA和蛋白的表达,分析其与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。以DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)干预人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231后,采用RT-PCR法检测MAGE-C2 mRNA表达的变化。结果乳腺癌组织中MAGE-C2 mRNA阳性表达率为61.7%(37/60),MAGE-C2蛋白阳性表达率为58.3%(35/60),乳腺正常组织和良性病变组织中未见MAGE-C2 mRNA及蛋白的表达。MAGE-C2蛋白表达与乳腺癌的病理类型、组织学分级、脉管瘤栓有关(均P<0.05)。MAGE-C2蛋白表达阳性乳腺癌患者的无复发生存率低于MAGE-C2蛋白表达阴性的患者(χ^(2)=4.467,P=0.035)。多因素Cox回归分析显示,临床分期(HR=4.715,P=0.004)、淋巴结转移(HR=3.827,P=0.023)和MAGE-C2蛋白表达(HR=4.229,P=0.026)是乳腺癌患者无复发生存的独立影响因素。对照组和TSA组乳腺癌细胞中未见MAGE-C2 mRNA表达,5-aza-CdR组乳腺癌细胞中可见MAGE-C2 mRNA表达(MCF-7细胞为0.2914±0.0274,MDA-MB-231细胞为0.4808±0.0288),联合应用5-aza-CdR和TSA可使乳腺癌细胞中MAGE-C2 mRNA表达进一步增加(MCF-7细胞为1.0357±0.0644,MDA-MB-231细胞为1.6013±0.0675)。结论MAGE-C2是肿瘤特异性抗原,其表达与乳腺癌患者的不良预后有关,DNA甲基化和组蛋白乙酰化可能是调控MAGE-C2基因表达的重要机制。

黑色素瘤相关抗原-A3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定及其在肺癌细胞株中的表达

目的构建重组慢病毒载体PLV—MAGE-A3-GFP，并检测其在人肺癌细胞系A549的表达情况。方法利用DNA重组技术将MAGE-A3基因克隆到带GFP的慢病毒表达载体质粒PLV中，经限制性酶切和测序鉴定重组载体。将重组慢病毒载体PLV-MAGE-A3-GFP与包装质粒pCMV-dR8．91及pCMV—VSVG共转染人胚肾上皮细胞株293TAB，包装重组慢病毒PLV-MAGE—A3-GFP，并感染人肺癌细胞株A549，用Westernblot法检测MAGE—A3蛋白的表达情况。结果限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实，构建了重组慢病毒载体PLV—MAGE-A3-GFP，免疫荧光显微镜下观察显示慢病毒感染A549细胞后，MAGE-A3基因能够在细胞内正确地转录、翻译并稳定表达MAGE—A3基因。结论成功构建了慢病毒载体PLV—MAGEA3-GFP，包装的病毒能够成功感染人肺癌细胞系A549，并使MAGE—A3基因得以稳定表达，为进一步对非小细胞肺癌进行免疫治疗提供了适合的稳定转染的载体。

黑色素瘤相关抗原A3 E-钙黏蛋白及P53在宫颈癌组织中的表达与意义

目的研究黑色素瘤相关抗原A3(MAGE-A3)、E-钙黏蛋白(E-cad)及P53在宫颈癌组织中的表达与意义,为宫颈癌基因方面的病情检测提供新的思路。方法选取2019年3月—2021年3月义乌市中心医院收治的86例宫颈癌患者为研究对象,应用免疫组织化学法检测患者癌组织及相应的癌旁组织中MAGE-A3、E-cad、P53的表达水平,采用Pearson相关性分析法分析MAGE-A3、E-cad、P53之间的相关性。结果宫颈癌组织中MAGE-A3、E-cad、P53阳性表达率分别为45.35%(39例)、40.70%(35例)、26.74%(23例);癌旁组织中MAGE-A3、E-cad、P53阳性表达率分别为8.14%(7例)、88.37%(76例)、2.33%(2例)。与癌旁组织比较,癌组织中MAGE-A3、P53阳性表达率均升高,E-cad阳性表达率降低,两组比较差异均具有统计学意义(MAGE-A3:χ^(2)=30.388,P<0.05;E-cad:χ^(2)=42.702,P<0.05;P53:χ^(2)=18.721,P<0.05)。不同TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况的患者宫颈癌组织中MAGE-A3、E-cad、P53阳性表达率比较,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。宫颈癌组织中,MAGE-A3与E-cad表达呈负相关(r=-0.261,P<0.05),MAGE-A3与P53表达呈正相关(r=0.871,P<0.05),E-cad与P53表达呈负相关(r=-0.486,P<0.05)。结论宫颈癌组织中MAGE-A3、P53阳性表达呈上调状态,E-cad阳性表达呈下调状态,三者之间紧密相关,并且其表达水平的高低变化与TNM分期、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征有关,可能共同参与了宫颈癌的发生、发展。

MAGE-A3抗原肽负载树突状细胞治疗小鼠乳腺癌移植瘤

目的研究黑色素瘤相关抗原基因A3(MAGE-A3)抗原肽负载树突状细胞(DCs),在乳腺癌动物模型免疫治疗中的作用。方法采用MAGE-A3抗原肽负载树突状细胞,过继免疫治疗乳腺癌的小鼠模型,观察其治疗效果。结果抗原负载的DCs治疗组的生存率(100%)、抑瘤率(76·3%)明显高于对照组(P<0·05);肿瘤转移率(22·2%)低于对照组(P<0·05)。同时,治疗组的小鼠生存质量高于对照组。结论MAGE-A3抗原肽负载DCs疫苗是一种比较安全有效的治疗方法。

胃癌中CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3的去甲基化

目的:探讨肿瘤相关抗原基因(cancer associated antigen gene,CAGE)、黑色素瘤抗原基因-A1(melanoma antigen gene A1,MAGE-A1)、黑色素瘤抗原基因-A3(melanoma antigen gene A3,MAGE-A3)启动子区去甲基化与胃癌临床特点的关系和意义.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)的方法检测30例胃癌和25例正常胃黏膜标本中CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区的去甲基化状态,并分析其与胃癌临床病例参数间的关系.结果:胃癌组CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子去甲基化阳性率(80.0%、60.0%、46.7%)均明显高于正常胃黏膜组(4.0%、0.0%、8.0%,P<0.05).胃癌组中,CAGE基因启动子区去甲基化与淋巴转移和临床分期有关(P=0.016;P=0.026);MAGE-A1基因启动子区去甲基化与组织分化程度和临床分期有关(P=0.042;P=0.002);MAGE-A3基因启动子区去甲基化与淋巴转移和组织分化程度有关(P=0.034;P=0.026).结论:CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区去甲基化的检测可能有助于判断胃癌的组织分化程度、淋巴结转移和临床分期,有可能成为胃癌治疗及判断预后的分子标志物.

负载MAGE-A3抗原的树突状细胞与细胞因子诱导杀伤细胞共培养对子宫内膜癌肿瘤干细胞及恶性进展的影响

目的:探究负载黑色素瘤相关抗原基因A3(MAGE-A3)的树突状细胞(DC)与细胞因子诱导杀伤细胞(CIK)对子宫内膜癌肿瘤干细胞及恶性进展的影响。方法:采集人外周血分离单个核细胞,利用细胞因子分别诱导生成DC和CIK;MAGE-A3孵育DC后与CIK共培养,流式细胞仪检测DC-CIK、MAGE-A3-DC-CIK的表型;流式细胞仪分选子宫内膜癌细胞系Ishikawa的CD133^(+)干细胞,以子宫内膜癌干细胞作为靶细胞,分别以CIK、DC-CIK及MAGE-A3-DC-CIK作为效应细胞,MTT法检测效靶比为10∶1、20∶1、40∶1的细胞杀伤活性,ELISA法检测联合培养细胞上清液中IFN-γ、IL-2、IL-12、IL-17水平,Annexin V-FITC/PI双染法检测子宫内膜癌干细胞凋亡;建立子宫内膜癌干细胞移植瘤裸鼠模型,尾静脉注射DC-CIK或MAGE-A3-DC-CIK,观察裸鼠肿瘤生长情况,每隔2 d测量瘤体大小,21 d后取肿瘤组织,电子天平称重,HE染色观察肿瘤组织病理形态学变化,免疫组织化学染色检测肿瘤组织内Ki-67表达。结果:分离获得细胞表面CD80、CD86、HLA-DR表达分别达到88%、86%和90%的DC;MAGE-A3-DC-CIK组细胞表面CD8^(+)CD3^(+)、CD56^(+)CD3^(+)比例均高于DC-CIK组(P<0.01);经磁珠分选后获得CD133^(+)细胞比例高达90.23%的子宫内膜癌干细胞;与CIK组和DC-CIK组比较,MAGE-A3-DC-CIK组在不同效靶比下对子宫内膜癌干细胞的杀伤能力升高,细胞上清中IFN-γ、IL-2、IL-12及IL-17的分泌水平升高,培养液上清处理的子宫内膜癌干细胞凋亡率增加,差异均具有统计学意义(P<0.01);同时,与对照组和DC-CIK组比较,MAGE-A3-DC-CIK组移植瘤裸鼠的肿瘤体积小,肿瘤重量轻,肿瘤组织内细胞稀疏,Ki-67阳性细胞率减小,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:负载MAGE-A3的DC与CIK联合培养能促进CIK成熟,提高对子宫内膜癌干细胞的杀伤性,并抑制移植瘤裸鼠的恶性进展。

MAGE-C3通过诱导上皮–间质转化及免疫抑制作用促进食管鳞状细胞癌转移

背景与目的逃避免疫监视对肿瘤转移是必要的。因此,迫切需要更好地了解肿瘤转移和肿瘤免疫逃逸之间的相互作用机制。本研究旨在阐明食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)发展过程中肿瘤转移和免疫抑制相互影响的新机制。方法通过免疫组化检测黑色素瘤相关抗原C3(melanoma-associated antigen C3,MAGE-C3)的表达。通过细胞迁移和侵袭实验检测ESCC细胞的迁移和侵袭能力。通过小鼠转移模型检测ESCC细胞的体内转移能力。通过淋巴细胞介导的细胞杀伤实验检测肿瘤细胞的免疫抑制能力。采用RNA测序鉴定MAGE-C3过表达的ESCC细胞和对照细胞中差异表达的基因。通过基因本体(Gene Ontology,GO)富集分析确定受MAGE-C3影响最大的信号通路。使用蛋白质印迹法、GAS荧光素酶报告系统、免疫荧光和流式细胞术分析干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)信号通路的激活。使用蛋白质印迹法和免疫沉淀法分析MAGE-C3在IFN-γ信号通路中的作用。此外,通过免疫组化和流式细胞术监测小鼠肺转移灶中浸润T细胞群的变化。结果MAGE-C3在ESCC组织中过表达。在ESCC患者中,MAGE-C3高表达与患者淋巴结转移和预后不良显著相关。功能实验表明MAGE-C3通过激活上皮-间质转化(epithelialmesenchymaltransition,EMT)促进肿瘤转移。MAGE-C3抑制抗肿瘤免疫反应并调节T细胞的细胞因子分泌,表明其具有免疫抑制作用。在机制上,MAGE-C3通过与IFN-γ受体1(IFN-γreceptor 1,IFNGR1)结合并增强IFNGR1与信号转导及转录激活分子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)之间的相互作用,促进IFN-γ信号传导并上调程序性细胞死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)。有趣的是,MAGE-C3在免疫正常小鼠中比在免疫缺陷裸鼠中表现出更高的促肿瘤发生作用,证实了MAGE-C3具有免疫抑制作用。此外,荷有MAGE-C3过表达肿瘤的小鼠生存期更短,出现更多的肺转移灶,其CD8+浸润T细胞减少和程序性细胞死亡受体1(programmed cell death 1,PD-1)+CD8+浸润T细胞增加。结论MAGE-C3通过促进EMT和保护肿瘤免受免疫监视来促进肿瘤转移,可能作为潜在的肿瘤预后标志物和治疗靶点。

HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者红细胞天然免疫黏附功能与血清sCR1变化的相关性

进入血液中的病原体或机体产生的抗原-抗体复合物,将直接或间接激活补体C3,产生C3b、C4b等补体片段,这些片段将病原颗粒或循环免疫复合物与红细胞表达的补体受体1型分子（CR1）连接成免疫复合体,然后通过FC段或补体C端与吞噬细胞的FCR或CR结合,从而活化吞噬细胞[1],释放蛋白水解酶,

宫颈癌癌组织及外周血单个核细胞中MAGE-A3的表达及其临床意义

目的探究宫颈癌癌组织及外周血单个核细胞(PBMC)中黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)表达及临床意义。方法通过方便抽样选取2020-05至2022-05保定市妇幼保健院及河北大学附属医院收治的因宫颈病变拟行宫颈锥切术或广泛性子宫切除术患者96例,根据术后病理结果分为宫颈癌组和子宫颈鳞状上皮内病变(SIL)组,采用免疫组化法检测病变组织MAGE-A3蛋白表达情况。采用实时荧光定量PCR法检测宫颈病变组织及PBMC中MAGE-A3 mRNA表达水平,分析宫颈癌患者癌组织及PBMC中MAGE-A3mRNA表达与血清肿瘤标志物相关性以及癌组织MAGE-A3蛋白表达与临床病理特征关系。结果宫颈癌癌组织MAGE-A3蛋白表达阳性率与FIGO分期、肿瘤的直径大小、分化程度、淋巴结转移、感染高危型HPV有关(P<0.05),与年龄、病理类型无关(P>0.05)。宫颈癌组癌组织和PBMC中MAGE-A3 mRNA表达水平分别为(1.33±0.46)、(1.70±0.49),均显著高于SIL组(0.59±0.20、0.92±0.33)(P<0.05),血清SCC-Ag[(3.87±1.69)ng/ml]、CA-125[(48.62±15.10)U/ml]均显著高于SIL组[(0.70±0.32)ng/ml、(25.36±8.33)U/ml](P<0.05);宫颈癌组癌组织MAGE-A3蛋白表达阳性率(66.07%)显著高于SIL组(30.00%)(P<0.05);宫颈癌患者癌组织、PBMC中MAGE-A3 mRNA表达水平与血清SCC-Ag、CA-125均呈正相关(P<0.05)。结论宫颈癌患者癌组织及PBMC中MAGE-A3表达均上调,且与患者血清肿瘤标志物水平及病情进展有关,MAGE-A3有望成为早期宫颈癌诊断的重要标志物。