食管鳞癌组织中黑色素瘤相关抗原D4b的表达及临床意义

目的:探讨黑色素瘤相关抗原D4b(melanoma associated antigens-D4b,MAGE-D4b)在食管鳞癌(ESCC)组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法:采用免疫组织化学法检测75例食管鳞癌石蜡标本和36例正常食管黏膜组织中MAGE-D4b蛋白表达情况。结果:ESCC中MAGE-D4b的表达水平明显高于正常食管黏膜中的表达水平(分别为42.7%和16.7%,P<0.01)。MAGE-D4b蛋白的阳性表达水平与食管鳞癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、浸润深度、肿瘤分化及AJCC分期等临床病理因素均无相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,食管鳞癌组织中MAGE-D4b阳性表达者的3年生存率低于阴性表达者(3年生存率:38.7%和69.2%,P=0.013)。单因素分析及Cox多因素分析均提示年龄、MAGED4b的表达及淋巴结转移是有意义的预后因素(P<0.05)。结论:MAGE-D4b蛋白在食管鳞癌组织中高表达,且其阳性表达与患者的3年生存率相关,MAGE-D4b蛋白可能为食管鳞癌的预后判断提供有意义的生物学指标。

黑色素瘤相关性抗原E1基因的克隆与测序

目的 克隆表达人黑色素瘤相关性抗原MAGE E1片段 ,以便研究其对神经系统恶性肿瘤的生物学作用。方法 从人胶质瘤细胞系BT 32 5中提取mRNA ,用RT PCR法从中扩增出MAGE E1片段 ,采用DNA重组技术将其克隆于 pGEM TEasy载体中并测序。 结果 RNA体外扩增得到的片段为 4 0 0bp ,PGEM MAGE E1经酶切鉴定正确 ,测序结果与Genebank比较完全相同。

黑色素瘤相关抗原MAGEA1的定位及其相互作用蛋白质的鉴定

黑色素瘤相关抗原家族A1蛋白(melanoma associated antigen family A1,MAGEA1)在生殖细胞和多种组织学来源的肿瘤中有表达,但其作用机制尚不清楚。本研究通过构建带Flag和GFP标签的MAGEA1真核表达重组质粒,将其转染至HeLa、HEK293T细胞内。利用Western印迹、免疫细胞荧光法、免疫共沉淀、细胞核蛋白质与细胞质蛋白质分离和线粒体提取等技术,检测其在细胞内的表达与定位以及与其他蛋白质的相互作用情况。免疫细胞化学和蛋白质印迹结果显示,过表达的MAGEA1主要定位于细胞质,并部分与线粒体共定位。通过免疫共沉淀验证了MAGEA1与TRIM31、SNW1、HDAC1之间存在相互作用,并且发现MAGEA1可能主要与位于细胞质中的HDAC1相互作用。以上研究表明,MAGEA1可能参与不同的细胞内调节途径,部分与线粒体共定位;与TRIM31、SNW1、HDAC1相互作用,且可能主要与位于细胞质中的HDAC1蛋白相互作用,推测其可能参与到蛋白质泛素化和Notch信号通路。本研究的结果为后续深入研究MAGEA1的作用机制奠定了实验基础。

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应(qPCR)检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒(anti-miR-132-3p)、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)过表达质粒(pcDNA3.1-PTEN)或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒(si-PTEN),MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量(0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08)明显升高(P<0.05)。与anti-miR-132-3p阴性对照(anti-miR-NC)组相比,anti-miR-132-3p组24 h、48 h、72 h的细胞活性(0.51±0.05比0.30±0.03、0.97±0.09比0.45±0.05、1.40±0.14比0.76±0.07)、cyclin D1、Bcl-2蛋白表达量显著降低(P<0.05),细胞凋亡率[(8.03±0.68)%比(21.51±2.06)%]、P21、Bax水平明显提高(P<0.05),与过表达PTEN相同。miR-132-3p与PTEN之间有靶向调控关系。抑制PTEN能逆转抑制miR-132-3p对SP6.5细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用。结论 miR-132-3p通过直接靶向PTEN调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡。

长链非编码RNA LINC00662靶向微小RNA-103a-3p对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响

目的探究长链非编码RNA LINC00662对黑色素瘤细胞增殖和周期的影响,以及分子机制。方法本研究于2018年10月至2020年2月进行。以体外培养的人皮肤黑色素瘤细胞A375为研究对象,然后将其分为四组,分别为si-NC、siLINC00662、si-LINC00662+anti-miR-NC和si-LINC00662+anti-miR-103a-3p转染A375细胞。采用RT-PCR检测皮肤黑色素瘤组织中LINC00662和miR-103a-3p的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法(western blot‐ting)检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达。结果与正常组织和正常皮肤细胞相比,在皮肤黑色素瘤组织和细胞株中LINC00662表达[1.24±0.50比4.17±1.27]上调,miR-103a-3p表达[1.17±0.32比0.64±0.21]显著下调。LINC00662与miR-103a-3p靶向结合。与si-NC组相比,si-LINC00662组LINC00662表达[1.00±0.06比0.48±0.06]、OD值和S期细胞比例[(34.7±3.5)%比(20.5±3.0)%]降低,G0/G1期细胞比例[(57.4±5.2)%比(74.7±4.8)%]增高,Cyclin D1[1.00±0.01比0.56±0.06]、PCNA蛋白表达[0.99±0.05比0.53±0.06]下降。抑制miR-103a-3p表达可以部分恢复沉默LINC00662对黑色素瘤的细胞增殖、周期的影响。结论长链非编码RNA LINC00662通过靶向负调控miR-103a-3p的表达,抑制皮肤黑色素瘤细胞的增殖,并诱导细胞周期阻滞。

miR-760靶向调节黑色素瘤抗原家族D1抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的研究

目的 探讨microRNA-760(miR-760)靶向负调节黑色素瘤抗原家族D1(NRAGE)表达对胃癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用。方法 将胃癌NCI-N87细胞分为空白组、miR-760 NC组、miR-760 mimics组、miR-760 mimics+NRAGE NC组和miR-760 mimics+NRAGE OE组。空白组用RPMI 1640培养基培养;miR-760 NC组、miR-760 mimics组分别转染miR-760 NC、miR-760 mimics;miR-760 mimics+NRAGE NC组同时转染miR-760 mimics和空载pcDNA3.1质粒;miR-760 mimics+NRAGE OE组同时转染miR-760 mimics和NRAGE过表达pcDNA3.1质粒。用蛋白质印迹法检测NRAGE的表达水平,用Transwell实验法检测NCI-N87细胞的迁移、侵袭能力。结果 空白组、miR-760 NC组和miR-760 mimics组的NRAGE蛋白相对表达水平分别为0.95±0.06,0.93±0.09和0.27±0.04;迁移细胞数分别为(268.65±14.08),(261.43±13.25)和(163.25±11.37)个;侵袭细胞数量分别为(183.58±10.65),(176.29±9.93)和(95.73±8.29)个;miR-760 mimics组的上述指标均较空白组、miR-760 NC组显著降低(均P<0.05)。NRAGE OE可显著减弱miR-760 mimics对上述指标的影响(均P<0.05)。结论 miR-760可能通过靶向下调NRAGE表达,抑制胃癌NCI-N87细胞的增殖、迁移及侵袭。

弓形虫srs19d基因敲除株的构建及其在宿主细胞中的生物学功能分析

为探究弓形虫表面抗原1相关序列(SRS)蛋白家族新成员SRS19D的功能,本试验以弓形虫Ⅱ型Pru虫株为亲本,运用成簇规律间隔短回文重复-CRISPR相关蛋白9(CRISPR/Cas9)技术构建了PruΔsrs 19 d敲除虫株,并进行了噬斑试验、细胞内增殖试验、体外缓殖子转化试验、小鼠毒力试验和小鼠脑包囊检测试验。噬斑试验和细胞内增殖试验结果显示,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株在人包皮成纤维(HFF)细胞上形成的噬斑显著变小(P<0.05),纳虫泡内形成的速殖子个数显著减少(P<0.05)。体外缓殖子转化试验发现,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株的体外缓殖子转化率极显著降低(P<0.01)。小鼠毒力试验结果显示,与Pru虫株相比,弓形虫PruΔsrs 19 d敲除虫株不会引起ICR小鼠的死亡(P<0.05)。小鼠脑包囊检测试验结果显示,与Pru虫株相比,PruΔsrs 19 d敲除虫株感染小鼠后形成的脑包囊数量极显著减少(P<0.01)。本试验成功构建了弓形虫PruΔsrs 19 d敲除虫株,发现srs 19 d基因在弓形虫的体外生长、复制、毒力和慢性感染中发挥重要作用,为进一步探究SRS19D的功能和作用机制提供参考。

血清维生素D、糖类抗原125及高迁移率簇蛋白B1水平与子宫内膜异位症患者临床分期的相关性分析

目的探讨血清维生素D(VitD)、糖类抗原125(CA125)及高迁移率簇蛋白B1(HMGB1)水平变化与子宫内膜异位症(EMS)的关系。方法选取2018年12月至2019年12月我院收治的70例EMS患者作为研究对象(观察组),并纳入同期40例健康体检者为对照组。比较两组基线资料及VitD、CA125、HMGB1水平差异,评估不同病理类型、不同R-AFS分期EMS患者血清VitD、CA125、HMGB1表达差异,ROC曲线分析三个检测指标评估EMS患者临床分期的价值。结果观察组VitD低于对照组,CA125、HMGB1高于对照组(P<0.05);腹膜型、混合型VitD、CA125、HMGB1水平比较差异无统计学意义(P>0.05);卵巢型CA125、HMGB1水平高于腹膜型、混合型(P<0.05),VitD水平低于腹膜型、混合型(P<0.05);观察组不同分期VitD水平比较Ⅳ期<Ⅲ期<Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05),CA125、HMGB1水平比较Ⅳ期>Ⅲ期>Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05);相关分析VitD与R-AFS分期呈负相关(P<0.05),CA125、HMGB1均与R-AFS分期呈正相关(P<0.05);ROC曲线VitD、CA125、HMGB1均是评估EMD临床分期的有效指标(P<0.05),三项指标并联评估具有更高评估效能。结论血清VitD、CA125、HMGB1与EMS发生发展关系密切,监测其水平变化对临床诊治有积极意义。

黑色素瘤相关抗原D2在脑胶质瘤患者血清和脑脊液中的表达及临床意义

目的探讨黑色素瘤相关抗原D2(MAGED2)在胶质瘤患者外周血清和脑脊液中异常表达的临床意义。方法收集2020年1月至2022年12月广西医科大学附属肿瘤医院病理确诊的58例胶质瘤患者的脑肿瘤标本作为观察组,20例非肿瘤患者标本来源于癫痫患者的病灶切除及周围脑组织作为对照组。采用蛋白印迹法和免疫组织化学法检测两组标本中MAGED2的表达水平。采集两组患者的血清和胶质瘤患者术后脑脊液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测样品MAGED2表达水平,并比较两组MAGED2表达水平的差异;对两组血清及脑脊液MAGED2的表达程度与肿瘤级别及患者预后作相关性分析,不同预后参数采用Cox比例风险模型进行多因素分析。结果蛋白印迹法检测发现,胶质母细胞瘤(1.07±0.27)、弥漫性星形细胞瘤(1.05±0.19)、间变性星形细胞瘤(0.83±0.06)和少突胶质细胞瘤(0.68±0.07)的MAGED2蛋白表达量均高于非肿瘤脑组织组(0.39±0.07),差异有统计学意义(F=45.88,P<0.01)。免疫组织化学检测MAGED2蛋白主要染色在细胞质和细胞核中。ELISA检测术前血清MAGED2表达水平,观察组[(1051.20±129.33)pg/ml]高于对照组[(207.62±23.39)pg/ml,t=17.22,P<0.01]。观察组术后血清MAGED2表达水平(556.40±59.77)低于术前(1051.20±129.33,t=14.67,P<0.01)。手术后患者血清MAGED2表达水平[(556.40±59.77)pg/ml]仍高于对照组水平[(207.6±23.39)pg/ml],差异有统计学意义(t=6.144,P<0.01)。MAGED2在观察组患者术前血清、术后血清和术后脑脊液的表达上,两两之间均互为正相关(r=0.19、0.33、0.46,P<0.01)。乘积极限(Kaplan-Meier)法结果显示,MAGED2蛋白高表达组的中位总生存期(OS)低于低表达组(50.00周比250.00周,χ^(2)=22.13,P<0.001);术前血清MAGED2高表达组中位OS低于低表达组(94.00周比212.00周,χ^(2)=12.45,P<0.001);术后血清MAGED2高表达组中位OS低于低表达组(150.00周比233.00周,χ^(2)=4.34,P<0.05);术后脑脊液MAGED2高表达组中位OS低于低表达组(132.00周比250.00周,χ^(2)=10.53,P<0.01)。Cox比例风险模型进行多因素分析显示,MAGED2为胶质瘤患者的独立预后因素[风险比(HR)=0.578,95%可信区间(CI):0.182~0.927,P<0.05]。结论MAGED2有望成为评估胶质瘤进展、病理级别和预后的体液生物学标志物。

艾灸对结肠炎相关性结肠癌大鼠细胞增殖相关蛋白PCNA、CyclinD1的影响

目的:观察艾灸“天枢、气海”穴对结肠炎相关性结肠癌(CAC)模型大鼠肿瘤的影响,从细胞增殖角度探讨艾灸对CAC的作用机制。方法:将SD大鼠随机分为正常组、模型组、隔药灸组、隔姜灸组。采用AOM/DSS方法构建CAC模型,隔药灸组和隔姜灸组选用“天枢、气海”穴,每穴灸2壮/次,共30次。观察大鼠结肠组织成瘤率、组织病理学改变和肿瘤评分;ELISA法检测血清CysC含量;免疫组化法、Western blot法检测结肠组织PCNA和CyclinD1蛋白表达水平。结果:与正常组比,模型组成瘤率和肿瘤评分均升高(P 【0.05),光镜下结肠组织可见不同级别异型增生,达到腺癌程度;血清CysC含量、结肠组织PCNA和CyclinD1蛋白的表达均显著升高(P 【0.05)。与模型组比,隔药灸组、隔姜灸组成瘤率和肿瘤评分均降低(P 【0.05),血清CysC含量、结肠组织PCNA和CyclinD1蛋白的表达均显著降低(P 【0.05)。结论:隔药灸和隔姜灸可延缓CAC肿瘤生长,其机制可能与降低结肠组织PCNA和CyclinD1蛋白的表达,从而抑制结肠细胞增殖相关。

黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)的生物信息学分析及真核表达载体的构建

目的分析黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)蛋白的理化性质、结构和功能,构建MAGE-D4真核表达载体。方法通过生物信息学软件分析MAGE-D4蛋白的理化性质、结构和功能。以MAGE-D4/pMAL-C2原核重组质粒为模板,经PCR扩增、酶切后与pEGFP-C1真核表达质粒连接,转化大肠杆菌。连接产物经抗生素筛选、酶切、测序鉴定后,通过脂质体转染A549肺癌细胞。结果MAGE-D4蛋白为不稳定亲水性蛋白,无跨膜结构和信号肽,二级结构以α螺旋为主,具有多个功能性修饰位点,主要定位在细胞核。SLLLVILGV可能为MAGE-D4来源的HLA-A*0201限制性T细胞表位。与MAGE-D4存在潜在相互作用的前3位蛋白依次是染色体成分4非结构维持蛋白同源物A(NSMCE4A)、T细胞识别的黑素瘤抗原1(MLANA/MART-1)、黑素瘤B抗原5(BAGE5)。测序结果证实重组质粒含有MAGE-D4的全长编码序列(CDS),能成功转染A549肺癌细胞。结论MAGE-D4蛋白为不稳定核蛋白,可通过与多种黑素瘤相关蛋白相互作用而发挥功能,其来源的短肽可能具有较强的免疫原性,并构建了MAGE-D4真核表达载体。

MAGE-A1在肿瘤诊断及免疫治疗中的研究进展

癌-睾丸抗原(cancer-testis antigens,CTAs)是一组在睾丸和胎盘及恶性肿瘤中表达的肿瘤相关抗原,其高表达可促进肿瘤的发生和发展,与肿瘤不良预后相关,已成为多种肿瘤的生物标志物和免疫治疗的理想靶点。在CTAs中,发现最早和研究最广泛的家族是黑色素瘤相关抗原A(melanoma-associated antigen A,MAGE-A)家族,MAGE-A家族有12个成员(MAGE-A1到MAGE-A12)。本文着重于MAGE-A1的研究,主要对MAGE-A1在肿瘤诊断及免疫治疗方面的进展进行综述。

肝癌患者及正常人群中黑色素瘤相关抗原1的基因多态性

目的 研究黑色素瘤相关抗原1(MAGE-1)在中国肝癌患者中的表达,并阐明MAGE-1基因变异是肿瘤细胞内的突变还是单核苷酸多态性(SNP),以及基因变异在人群中的分布状况。 方法 提取19例原发性肝癌(HCC)患者的癌组织、癌旁组织总RNA,用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测组织MAGE-1基因mRNA的表达,并通过PCR产物测序分析编码基因是否存在变异,提取HCC患者癌组织、癌旁组织和外周血细胞基因组DNA,以及23例正常献血员外周血细胞基因组DNA,分析MAGE-1编码基因的变异状况并利用软件对变异抗原蛋白的生物学意义进行了初步探讨。 结果 癌组织中MAGE-1表达阳性率为47.4％(9/19),癌旁组织无表达。序列测定显示,MAGE-1 cDNA编码基因存在3种类型:一类是Ⅰ型(GenBank M77481),发生率为11.1％(1/9);另一类型(C159T,A272G,G393A)发生率为55.6％(5/9),称之为TGA型,导致编码的2个氨基酸的改变分别是T32A和R72Q;第三种类型(A272G,C991T,A1125G)发生率为33.3％(3/9),仅A272G引起一个氨基酸的替换(T32A),称之为GTG型。经对基因组DNA分析,证实以上3种基因类型不是肝癌组织的基因突变,而是SNP,其在肝癌患者和正常献血员中分布的比例分别为:Ⅰ型占26.3％(5/1 9)和60.9％(14/23);TGA型占57.9％(11/19)和47.8％(11/23),GTG型占21.

MAGE-D1对大鼠牙胚来源外胚间充质干细胞增殖迁移能力的影响

目的研究黑色素瘤相关抗原D1(Melanoma associated antigens,MAGE-D1)对大鼠牙胚来源的外胚间充质干细胞(Ectomensenchymal stem cells,EMSCs)增殖及迁移能力的影响。方法取SD大鼠孕19. 5 d胎鼠牙胚组织,组织块法培养牙胚来源外胚间充质干细胞,流式细胞仪进行外胚间充质干细胞表面分子鉴定CD14、CD29、CD44、CD45、CD90、CD105、CD146、CD166和p75NTR,MAGE-D1 siRNA转染入外胚间充质干细胞,实验组分为:对照组(Control)和MAGE-D1 siRNA组(MAGEsiRNA-EMSCs),CCK8法和划痕法分别检测两组细胞增殖能力与迁移能力,Real Time-PCR及Western blot检测迁移及WNT通路相关基因MAGE-D1、β-catenin、E-cadherin的mRNA及蛋白表达量。结果组织块法成功培养出牙胚来源的外胚间充质干细胞,经流式细胞仪检测细胞阳性表达CD14(92. 16%)、CD29(94. 53%)、CD44(99. 51%)、CD90(95. 18%)、CD105(34. 22%)、CD146(92. 39%)、CD166(98. 15%)和p75NTR(88. 56%),阴性表达CD45(0. 5%);CCK8法检测MAGE-D1 siRNA组EMSCs增殖能力受到抑制;划痕试验法检测MAGE-D1 siRNA组细胞48 h迁移量高于对照组细胞;Real Time-PCR检测Mage-D1、β-catenin和E-cadherin表达量,MAGE-D1 siRNA组EMSCs MAGE-D1和E-cadherin表达较对照组低,而β-catenin表达较高,Western blot检测MAGE-D1、β-catenin和E-cadherin表达水平趋势与Real Time-PCR结果相一致。结论抑制EMSCs中MAGE-D1的表达上调β-catenin,下调E-cadherin,能够提高细胞的迁移能力,但是其导致增殖能力降低,MAGE-D1可能作为EMSCs迁移增殖能力的关键因子。

MageD1在口腔鳞癌中的表达及其促进凋亡作用的研究

目的:检测口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞系中黑色素瘤相关抗原D1(Mage D1)的表达,并在口腔鳞癌细胞系HN6中通过转染慢病毒的方法过表达Mage D1,探讨其对细胞凋亡的影响。方法:收集临床标本,通过Western blot和RT-PCR的方法检测口腔鳞癌以及HN6细胞系中Mage D1的表达量,用载有Mage D1的慢病毒转染HN6细胞,检测转染效果和Bax、CleavedCasepase3等凋亡相关蛋白的表达,并采用裸鼠荷瘤实验研究肿瘤体内生长的情况。结果:Mage D1在口腔鳞癌组织及HN6细胞株中较正常组织呈低表达,Western blot及RT-PCR结果表明,Mage D1成功转染并得到稳定过表达Mage D1的Lv-Maged1细胞,并且过表达Mage D1的HN6细胞中Cleaved-Casepase3和Bax的表达量高于HN6细胞,荷瘤实验证明Mage D1具有抑制肿瘤生长作用(P<0.05)。结论:Mage D1在口腔鳞癌组织及细胞系中表达降低,过表达Mage D1能促进肿瘤细胞凋亡。

采用RACE技术获得全长人新基因MAGE-D1

c DNA末端快速扩增 (RACE)技术是快速获得新基因 5′和 3′端未知序列的有效手段 .鉴于新报导的人肿瘤基因 MAGE家族成员之一 MAGE- D1的 c DNA序列不完全 ,从而拟用 RACE技术获得 MAGE- D1的全长 c DNA序列 .结果显示 ,MAGE- D1的 c DNA全长为 2 80 0个碱基 ,编码778个氨基酸 .同时对 RACE技术应用时的一些关键问题进行了讨论 .

人胶质瘤中HIF1A和MAGED4的表达及调控关系初探

目的探讨缺氧诱导因子1A(HIF1A)和黑色素瘤相关抗原D4(MAGED4)在人胶质瘤中的表达情况,并分析HIF1A对MAGED4表达的影响。方法通过基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库收集人胶质瘤组织样本数据681例,正常脑组织样本数据207例,比较其MAGED4 mRNA和HIF1A mRNA表达水平。通过中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中下载693例胶质瘤患者的mRNA-seq_693数据集及相应的临床信息,分析MAGED4 mRNA和HIF1A mRNA表达的相关性,以及二者与患者临床特征指标的关联性。应用氯化钴模拟体外缺氧环境,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印记(WB)实验探讨沉默胶质瘤细胞HIF1A表达对MAGED4表达变化的影响。结果基于GEPIA数据库的分析结果显示,低级别胶质瘤(LGG)和胶质母细胞瘤(GBM)组织的HIF1A mRNA和MAGED4 mRNA水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。基于CGGA数据库的分析结果显示,MAGED4 mRNA表达水平与HIF1A mRNA表达水平呈正相关(r=0.322,P=0.000)。MAGED4 mRNA高表达组年龄<40岁、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变型的人数比例大于MAGED4 mRNA低表达组,差异有统计学意义(P<0.05),两组性别、肿瘤类型、世界卫生组织(WHO)肿瘤分级,O6-甲基鸟瞟-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化状态、1p/19q共缺失情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。将HIF1A siRNA转染至U87-MG和U251细胞,并在缺氧条件下培养48 h,RT-qPCR和WB实验结果显示,HIF1A下调后,MAGED4的表达水平也显著下降。结论HIF1A和MAGED4均高表达于胶质瘤,且两者呈正相关。胶质瘤细胞中HIF1A可调控MAGED4的表达。

脑胶质瘤中MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平及其临床意义

目的分析脑胶质瘤中黑色素瘤相关抗原(MAGE)-D4和肌动蛋白结合蛋白CORO1C mRNA的表达水平,探讨二者的相关性及临床意义。方法通过基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库收集脑胶质瘤样本数据681例[低级别脑胶质瘤(LGG)518例,胶质母细胞瘤(GBM)163例],正常脑组织样本数据207例,比较其MAGE-D4和CORO1C mRNA的表达水平。进一步收集62例脑胶质瘤组织和11例正常脑组织临床样本,应用逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平并进行比较,分析MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平与脑胶质瘤患者临床指标的关联性。应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默脑胶质瘤细胞株MAGE-D4的表达,检测CORO1C mRNA的表达变化情况。结果GEPIA数据库数据分析结果显示,GBM和LGG组织的MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。针对临床样本的RT-qPCR检测结果也显示,脑胶质瘤组织中MAGE-D4和CORO1C mRNA的表达水平显著高于正常脑组织(P<0.05)。MAGE-D4及CORO1C mRNA的表达水平与患者年龄、性别、世界卫生组织(WHO)分级、病理类型、卡氏评分(KPS)、肿瘤最长径,以及Ki-67、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、S-100和波形蛋白(Vimentin)的表达水平均无显著关联(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,临床脑胶质瘤样本组织中MAGE-D4与CORO1C mRNA表达水平呈正相关(r=0.848,P=0.000)。细胞实验结果显示,经MAGE-D4 siRNA沉默后,U87 MG和U251细胞CORO1C mRNA的表达水平显著下降(P<0.05)。结论MAGE-D4和CORO1C mRNA在脑胶质瘤组织中高表达,且二者表达水平呈正相关。MAGE-D4和CORO1C可能协同影响脑胶质瘤的发生、发展过程,其具有成为脑胶质瘤分子靶向治疗靶点的潜力。

CyclinD1和CD15蛋白在结直肠癌中的表达及其临床意义

[目的]探讨CyclinD1和CD15蛋白在结直肠癌中的表达及在侵袭和转移中发挥的作用和意义.[方法]用免疫组织化学(SP)方法检测60例结直肠癌、30例腺瘤、30例正常结直肠组织中CyclinD1和CD15蛋白的表达水平.[结果]CyclinD1和CD15蛋白在结直肠癌中的表达水平较正常结直肠组织明显增高(P<0.01).CyclinD1蛋白表达阳性率在分化程度不同的结直肠癌中不同(P<0.01),随着浸润深度的增加,有淋巴结转移组CyclinD1蛋白表达阳性率较无淋巴结转移组显著增高(P<0.01);随着临床分期的升高,CyclinD1蛋白表达呈上升趋势(P<0.01).CD15蛋白表达阳性率在分化程度较低的结直肠癌中明显增高(P<0.01),随着浸润深度的增加,有淋巴结转移组CD15蛋白表达阳性率较无淋巴结转移组显著增高(P<0.01);随着临床分期的增加,CD15蛋白表达呈上升趋势(P<0.01).CyclinD1和CD15蛋白的共同表达与结直肠癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移及离原发灶较远处转移、临床Dukes分期有相关性.[结论]CyclinD1和CD15蛋白可作为结直肠癌早期诊断的参考指标;检测CyclinD1和CD15蛋白在癌组织中的表达水平有助于判断结直肠癌的恶性程度、转移潜能及预后分析.

蛋白激酶D1在宫颈癌中的表达及临床意义

目的:探究蛋白激酶D1(PKD1)在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法:收集2018年1月-2019年12月本院48例宫颈癌(宫颈癌组)、42例高级别宫颈上皮内瘤变(CINⅢ组)及38例正常宫颈者(对照组)宫颈组织标本,检测标本PKD1表达,分析其与宫颈癌临床病理特征及增殖细胞核抗原(Ki67)表达相关性。结果:3组宫颈标本PKD1阳性表达率及免疫组化评分均为宫颈癌组(81.3%、4.7±0.8分)>CINⅢ组(61.9%、3.1±0.6分)>对照组(7.9%、0.9±0.3分)(P<0.05)。宫颈癌组中,PKD1阳性39例、PKD1阴性9例,PKD1阳性组FIGO分期、低分化、淋巴结转移及Ki67表达阳性率均高于PKD1阴性组(P<0.05)。经Spearman秩相关检验,宫颈癌组织PKD1免疫组化评分与FIGO分期、淋巴结转移及Ki67免疫组化评分呈显著正相关(r=0.439、0.411、0.517,P<0.05),而与肿瘤分化程度呈显著负相关(r=-0.304,P<0.05)。结论:PKD1在宫颈癌组织中高表达,与宫颈癌的发生发展有关,可作为宫颈癌诊疗及预后评估的重要指标。