食管鳞癌组织中黑色素瘤相关抗原D4b的表达及临床意义

目的:探讨黑色素瘤相关抗原D4b(melanoma associated antigens-D4b,MAGE-D4b)在食管鳞癌(ESCC)组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法:采用免疫组织化学法检测75例食管鳞癌石蜡标本和36例正常食管黏膜组织中MAGE-D4b蛋白表达情况。结果:ESCC中MAGE-D4b的表达水平明显高于正常食管黏膜中的表达水平(分别为42.7%和16.7%,P<0.01)。MAGE-D4b蛋白的阳性表达水平与食管鳞癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、浸润深度、肿瘤分化及AJCC分期等临床病理因素均无相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,食管鳞癌组织中MAGE-D4b阳性表达者的3年生存率低于阴性表达者(3年生存率:38.7%和69.2%,P=0.013)。单因素分析及Cox多因素分析均提示年龄、MAGED4b的表达及淋巴结转移是有意义的预后因素(P<0.05)。结论:MAGE-D4b蛋白在食管鳞癌组织中高表达,且其阳性表达与患者的3年生存率相关,MAGE-D4b蛋白可能为食管鳞癌的预后判断提供有意义的生物学指标。

黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体的制备和应用

目的制备兔抗人黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)多克隆抗体,鉴定其免疫学特性,并进行初步应用。方法对构建的p MAL-C2/MAGE-D4重组质粒进行原核表达及纯化,获得MBP/MAGE-D4融合蛋白,并以此蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。抗体经蛋白A凝胶柱亲和层析法纯化后,通过SDS-PAGE检测其纯度;间接ELISA、Western blot法检测抗体的效价及特异性;免疫组织化学染色法检测肺癌组织中MAGE-D4的表达及定位。结果获得纯度较高的抗MAGE-D4多克隆抗体,ELISA检测抗体的效价为1∶256 000,Western blot法分析显示MAGE-D4多克隆抗体可特异性识别MAGE-D4重组蛋白,免疫组织化学结果表明,该抗体能识别肺癌组织中的内源性MAGE-D4蛋白,表达的阳性率为69.6%(17/23)。结论制备的MAGE-D4多克隆抗体具有较高的特异性和灵敏度。

非小细胞肺癌中黑素瘤相关抗原D4基因启动子甲基化的检测及其临床意义

目的:分析非小细胞肺癌(NSCLC)中黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)基因启动子甲基化程度与MAGE-D4 mRNA表达水平及患者临床病理特征的关系。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测38例NSCLC患者癌组织及其癌旁组织中MAGE-D4启动子甲基化程度,实时荧光定量PCR(qPCR)法检测组织中MAGE-D4 m RNA相对表达量,分析MAGE-D4启动子甲基化频率与患者临床病理特征的关系。结果:肺癌组织中MAGE-D4基因甲基化频率为23.68%,明显低于癌旁组织的86.84%(P<0.05);而癌组织中MAGE-D4 m RNA表达水平则显著高于癌旁组织(5.49±5.65 vs.1.44±1.08,P<0.05),MAGE-D4表达量与启动子甲期化程度呈负相关关系(r=-0.663,P<0.05)。肿瘤直径>3 cm的肺癌患者MAGE-D4甲基化发生率明显低于肿瘤直径≤3 cm患者(P<0.05)。结论:NSCLC中MAGE-D4基因转录活性的增强与其启动子低甲基化相关;肿瘤直径较大的NSCLC患者MAGE-D4甲基化发生率较低。

人黑素瘤相关抗原D4原核表达条件的优化

目的:探索黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)基因工程菌原核诱导表达的最佳条件,以提高目的蛋白产量。方法:设置不同宿主菌(DH5α、TB1、Rosetta)、诱导时机(重组菌分别培养0.5~3h后进行诱导)、诱导剂IPTG浓度(0.1~0.9mmol/L)和诱导时间(1~8h)等条件,诱导MAGE-D4重组质粒表达,通过SDS-PAGE电泳和ImageJ软件扫描电泳图谱的方法,对目的蛋白的表达量和可溶性进行分析。通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法对35例肝癌患者血清MAGE-D4抗体进行检测,分析MAGE-D4融合蛋白的免疫活性。结果:将重组质粒转化至Rosetta(DE3)大肠杆菌,菌液OD600达到0.8时加入IPTG至终浓度0.9mmol/L,37℃诱导培养7h,可有效提高目的蛋白的表达量。可溶性MAGE-D4融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的25.5%。肝癌患者血清中MAGE-D4抗体的阳性率为28.57%(10/35),其MAGE-D4抗体平均效价明显高于正常人(P<0.05)。结论:本研究优化了MAGE-D4融合蛋白的原核表达条件,获得了可溶性、具有免疫活性的重组蛋白。

黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)的生物信息学分析及真核表达载体的构建

目的分析黑素瘤相关抗原D4(MAGE-D4)蛋白的理化性质、结构和功能,构建MAGE-D4真核表达载体。方法通过生物信息学软件分析MAGE-D4蛋白的理化性质、结构和功能。以MAGE-D4/pMAL-C2原核重组质粒为模板,经PCR扩增、酶切后与pEGFP-C1真核表达质粒连接,转化大肠杆菌。连接产物经抗生素筛选、酶切、测序鉴定后,通过脂质体转染A549肺癌细胞。结果MAGE-D4蛋白为不稳定亲水性蛋白,无跨膜结构和信号肽,二级结构以α螺旋为主,具有多个功能性修饰位点,主要定位在细胞核。SLLLVILGV可能为MAGE-D4来源的HLA-A*0201限制性T细胞表位。与MAGE-D4存在潜在相互作用的前3位蛋白依次是染色体成分4非结构维持蛋白同源物A(NSMCE4A)、T细胞识别的黑素瘤抗原1(MLANA/MART-1)、黑素瘤B抗原5(BAGE5)。测序结果证实重组质粒含有MAGE-D4的全长编码序列(CDS),能成功转染A549肺癌细胞。结论MAGE-D4蛋白为不稳定核蛋白,可通过与多种黑素瘤相关蛋白相互作用而发挥功能,其来源的短肽可能具有较强的免疫原性,并构建了MAGE-D4真核表达载体。

人脑胶质瘤中MAGE-D4和CANX mRNA的表达及其相关性分析

目的探讨人脑胶质瘤中黑色素瘤相关抗原(MAGE)-D4和钙联蛋白(CANX)mRNA的表达水平,分析其相关性及临床意义。方法应用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库数据[胶质母细胞瘤(GBM)组织163例,低级别胶质瘤(LGG)组织518例,正常脑组织207例]分析MAGE-D4和CANX mRNA在人脑胶质瘤组织中的表达情况,并通过逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法在临床样本(胶质瘤62例,正常脑组织11例)中进一步验证。分析MAGE-D4和CANX mRNA表达水平与胶质瘤患者临床指标的关联性。应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默胶质瘤细胞株SF126和U251中MAGE-D4的表达,探讨MAGE-D4与CANX表达的相关性。结果GEPIA数据库数据分析结果显示,GBM和LGG组织的MAGE-D4和CANX mRNA表达水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。针对临床样本的RT-qPCR检测结果也显示,胶质瘤组织中MAGE-D4和CANX mRNA的表达水平显著高于正常脑组织(P<0.05)。MAGE-D4及CANX mRNA的表达水平与患者年龄、性别、世界卫生组织(WHO)分级、病理类型、卡氏评分(KPS)、肿瘤最长径,以及Ki-67、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、S-100和波形蛋白(vimentin)的表达水平均无关联性(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,临床胶质瘤样本组织中MAGE-D4与CANX mRNA表达水平呈正相关(r=0.916,P=0.000)。细胞实验结果显示,经MAGE-D4 siRNA沉默后,SF126和U251细胞CANX mRNA的表达水平显著下降(P<0.05)。结论人脑胶质瘤中MAGE-D4、CANX高表达,且二者表达水平呈正相关,提示其可能共同参与了胶质瘤的发生、发展,具有成为胶质瘤免疫治疗靶点的应用前景。

人胶质瘤中HIF1A和MAGED4的表达及调控关系初探

目的探讨缺氧诱导因子1A(HIF1A)和黑色素瘤相关抗原D4(MAGED4)在人胶质瘤中的表达情况,并分析HIF1A对MAGED4表达的影响。方法通过基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库收集人胶质瘤组织样本数据681例,正常脑组织样本数据207例,比较其MAGED4 mRNA和HIF1A mRNA表达水平。通过中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中下载693例胶质瘤患者的mRNA-seq_693数据集及相应的临床信息,分析MAGED4 mRNA和HIF1A mRNA表达的相关性,以及二者与患者临床特征指标的关联性。应用氯化钴模拟体外缺氧环境,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印记(WB)实验探讨沉默胶质瘤细胞HIF1A表达对MAGED4表达变化的影响。结果基于GEPIA数据库的分析结果显示,低级别胶质瘤(LGG)和胶质母细胞瘤(GBM)组织的HIF1A mRNA和MAGED4 mRNA水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。基于CGGA数据库的分析结果显示,MAGED4 mRNA表达水平与HIF1A mRNA表达水平呈正相关(r=0.322,P=0.000)。MAGED4 mRNA高表达组年龄<40岁、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变型的人数比例大于MAGED4 mRNA低表达组,差异有统计学意义(P<0.05),两组性别、肿瘤类型、世界卫生组织(WHO)肿瘤分级,O6-甲基鸟瞟-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化状态、1p/19q共缺失情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。将HIF1A siRNA转染至U87-MG和U251细胞,并在缺氧条件下培养48 h,RT-qPCR和WB实验结果显示,HIF1A下调后,MAGED4的表达水平也显著下降。结论HIF1A和MAGED4均高表达于胶质瘤,且两者呈正相关。胶质瘤细胞中HIF1A可调控MAGED4的表达。

黑色素瘤相关抗原D2在脑胶质瘤患者血清和脑脊液中的表达及临床意义

目的探讨黑色素瘤相关抗原D2(MAGED2)在胶质瘤患者外周血清和脑脊液中异常表达的临床意义。方法收集2020年1月至2022年12月广西医科大学附属肿瘤医院病理确诊的58例胶质瘤患者的脑肿瘤标本作为观察组,20例非肿瘤患者标本来源于癫痫患者的病灶切除及周围脑组织作为对照组。采用蛋白印迹法和免疫组织化学法检测两组标本中MAGED2的表达水平。采集两组患者的血清和胶质瘤患者术后脑脊液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测样品MAGED2表达水平,并比较两组MAGED2表达水平的差异;对两组血清及脑脊液MAGED2的表达程度与肿瘤级别及患者预后作相关性分析,不同预后参数采用Cox比例风险模型进行多因素分析。结果蛋白印迹法检测发现,胶质母细胞瘤(1.07±0.27)、弥漫性星形细胞瘤(1.05±0.19)、间变性星形细胞瘤(0.83±0.06)和少突胶质细胞瘤(0.68±0.07)的MAGED2蛋白表达量均高于非肿瘤脑组织组(0.39±0.07),差异有统计学意义(F=45.88,P<0.01)。免疫组织化学检测MAGED2蛋白主要染色在细胞质和细胞核中。ELISA检测术前血清MAGED2表达水平,观察组[(1051.20±129.33)pg/ml]高于对照组[(207.62±23.39)pg/ml,t=17.22,P<0.01]。观察组术后血清MAGED2表达水平(556.40±59.77)低于术前(1051.20±129.33,t=14.67,P<0.01)。手术后患者血清MAGED2表达水平[(556.40±59.77)pg/ml]仍高于对照组水平[(207.6±23.39)pg/ml],差异有统计学意义(t=6.144,P<0.01)。MAGED2在观察组患者术前血清、术后血清和术后脑脊液的表达上,两两之间均互为正相关(r=0.19、0.33、0.46,P<0.01)。乘积极限(Kaplan-Meier)法结果显示,MAGED2蛋白高表达组的中位总生存期(OS)低于低表达组(50.00周比250.00周,χ^(2)=22.13,P<0.001);术前血清MAGED2高表达组中位OS低于低表达组(94.00周比212.00周,χ^(2)=12.45,P<0.001);术后血清MAGED2高表达组中位OS低于低表达组(150.00周比233.00周,χ^(2)=4.34,P<0.05);术后脑脊液MAGED2高表达组中位OS低于低表达组(132.00周比250.00周,χ^(2)=10.53,P<0.01)。Cox比例风险模型进行多因素分析显示,MAGED2为胶质瘤患者的独立预后因素[风险比(HR)=0.578,95%可信区间(CI):0.182~0.927,P<0.05]。结论MAGED2有望成为评估胶质瘤进展、病理级别和预后的体液生物学标志物。

MAGE-D4a融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的:构建肿瘤相关抗原MAGE-D4a的原核重组体系,表达、纯化融合蛋白。方法:PCR法从胶质瘤组织cDNA中扩增MAGE-D4a基因全长编码区,连接入原核表达载体pMAL-c2,筛选、鉴定阳性克隆并测序。将重组质粒转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导表达,表达产物经AmyloseResin亲和层析分离纯化,并且对纯化的融合蛋白进行质谱鉴定。结果:成功扩增了MAGE-D4a基因;重组质粒在Rosetta大肠杆菌中诱导表达出MBP/MAGE-D4a融合蛋白;优化了MAGE-D4a原核表达体系的最适条件;蛋白质谱分析结果显示表达的基因重组蛋白与目的蛋白相符。结论:获得了高效表达、可溶性的MAGE-D4a重组蛋白,为抗体的制备及血清学分析奠定了基础。

MAGE-D4在人脑膜瘤组织中的表达及其意义

目的检测人脑膜瘤组织中黑色素瘤相关抗原MAGE-D4 m RNA的表达并分析其临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)方法,检测36例脑膜瘤组织和8例正常人脑组织中MAGE-D4 m RNA的表达,分析MAGE-D4 m RNA的表达与脑膜瘤患者临床病理特征的关系。结果 MAGE-D4 m RNA在脑膜瘤组织中的阳性表达率为58.33%(21/36),明显高于正常人脑组织中的阳性表达率12.50%(1/8)(P<0.05);脑膜瘤组织中MAGE-D4 m RNA的表达与性别、年龄、肿瘤大小和病理类型等临床病理特征无关(P>0.05)。结论在脑膜瘤组织中MAGE-D4的表达率较高,提示MAGE-D4可能成为脑膜瘤免疫治疗的靶抗原。

MAGE-4抗原MHC-Ⅰ/MHC-Ⅱ限制性表位肽的预测

1目的预测黑色素瘤相关抗原-4(MAGE-4)抗原的MHC-Ⅰ/MHC-Ⅱ限制性表位肽。2方法利用NCBI蛋白数据库检索到MAGE-4抗原的氨基酸序列,BIMAS、SYFPEITH1、IEDB等3种方案分别对MAGE-4抗原的HLA-A*0201限制性MHC-Ⅰ类抗原表位进行预测,选出候选肽;然后利用SYFPEITHI服务器和NetMHCIIpan 3.1服务器对候选肽周围的MHC-Ⅱ限制性表位进行预测。综合分析选出MHC-Ⅰ/MHC-Ⅱ限制性表位肽。3结果筛选得到3条肽段,既存在MHC-Ⅰ限制性表位又存在MHC-Ⅱ限制性表位肽。4结论为MAGE-4抗原用于结肠癌免疫治疗肽段的选择提供了依据。

脑胶质瘤中MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平及其临床意义

目的分析脑胶质瘤中黑色素瘤相关抗原(MAGE)-D4和肌动蛋白结合蛋白CORO1C mRNA的表达水平,探讨二者的相关性及临床意义。方法通过基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库收集脑胶质瘤样本数据681例[低级别脑胶质瘤(LGG)518例,胶质母细胞瘤(GBM)163例],正常脑组织样本数据207例,比较其MAGE-D4和CORO1C mRNA的表达水平。进一步收集62例脑胶质瘤组织和11例正常脑组织临床样本,应用逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平并进行比较,分析MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平与脑胶质瘤患者临床指标的关联性。应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默脑胶质瘤细胞株MAGE-D4的表达,检测CORO1C mRNA的表达变化情况。结果GEPIA数据库数据分析结果显示,GBM和LGG组织的MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。针对临床样本的RT-qPCR检测结果也显示,脑胶质瘤组织中MAGE-D4和CORO1C mRNA的表达水平显著高于正常脑组织(P<0.05)。MAGE-D4及CORO1C mRNA的表达水平与患者年龄、性别、世界卫生组织(WHO)分级、病理类型、卡氏评分(KPS)、肿瘤最长径,以及Ki-67、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、S-100和波形蛋白(Vimentin)的表达水平均无显著关联(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,临床脑胶质瘤样本组织中MAGE-D4与CORO1C mRNA表达水平呈正相关(r=0.848,P=0.000)。细胞实验结果显示,经MAGE-D4 siRNA沉默后,U87 MG和U251细胞CORO1C mRNA的表达水平显著下降(P<0.05)。结论MAGE-D4和CORO1C mRNA在脑胶质瘤组织中高表达,且二者表达水平呈正相关。MAGE-D4和CORO1C可能协同影响脑胶质瘤的发生、发展过程,其具有成为脑胶质瘤分子靶向治疗靶点的潜力。

脑胶质瘤中MAGE-D4和MCM3 mRNA的表达水平及其临床意义

目的探讨肿瘤相关抗原(MAGE)-D4和微小染色体维持蛋白3(MCM3)mRNA的表达水平,分析MAGE-D4与MCM3二者之间的相关性及临床意义。方法应用基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库比较MAGE-D4和MCM3 mRNA在脑胶质瘤及正常脑组织中的表达情况;并通过癌症基因组图谱(TCGA)、中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)数据库分析MAGE-D4和MCM3 mRNA表达对胶质瘤患者生存期的影响;通过逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法在临床样本(胶质瘤62例,正常脑组织11例)中进一步验证。分析MAGE-D4和MCM3 mRNA表达水平与胶质瘤患者临床指标的关联性。应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默胶质瘤细胞株SF126和U251中MAGE-D4的表达,接着用RT-qPCR检测干扰后MAGE-D4及MCM3的表达水平。结果GEPIA数据库数据分析结果显示,MAGED4和MCM3 mRNA的表达水平均高于正常脑组织(P<0.05);TCGA及CGGA数据库显示,MAGE-D4和MCM3 mRNA与多数胶质瘤患者的总体生存率明显相关(P<0.05)。对本实验室收集的脑胶质瘤组织及正常脑组织的RT-qPCR检测结果也显示,胶质瘤组织中MAGE-D4和MCM3 mRNA的表达水平显著高于正常脑组织(P<0.05)。MAGE-D4和MCM3 mRNA的表达水平与患者年龄、性别、世界卫生组织(WHO)分级、病理类型、卡氏评分(KPS)、肿瘤最长径,以及Ki-67、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、S-100和波形蛋白(vimentin)的表达水平均无关联性(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,临床胶质瘤样本组织中MAGE-D4和MCM3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.1405,P=0.0057)。细胞实验结果显示,经MAGE-D4 siRNA沉默后,SF126和U251细胞中MCM3 mRNA的表达水平显著下降(P<0.05)。结论人脑胶质瘤中MAGE-D4和MCM3高表达,且与总体生存率明显相关,二者表达水平呈正相关,提示其可能共同参与了胶质瘤的发生、发展,具有成为胶质瘤免疫治疗靶点的应用前景。

采用RACE技术获得全长人新基因MAGE-D1

c DNA末端快速扩增 (RACE)技术是快速获得新基因 5′和 3′端未知序列的有效手段 .鉴于新报导的人肿瘤基因 MAGE家族成员之一 MAGE- D1的 c DNA序列不完全 ,从而拟用 RACE技术获得 MAGE- D1的全长 c DNA序列 .结果显示 ,MAGE- D1的 c DNA全长为 2 80 0个碱基 ,编码778个氨基酸 .同时对 RACE技术应用时的一些关键问题进行了讨论 .

MAGE-D1对大鼠牙胚来源外胚间充质干细胞增殖迁移能力的影响

目的研究黑色素瘤相关抗原D1(Melanoma associated antigens,MAGE-D1)对大鼠牙胚来源的外胚间充质干细胞(Ectomensenchymal stem cells,EMSCs)增殖及迁移能力的影响。方法取SD大鼠孕19. 5 d胎鼠牙胚组织,组织块法培养牙胚来源外胚间充质干细胞,流式细胞仪进行外胚间充质干细胞表面分子鉴定CD14、CD29、CD44、CD45、CD90、CD105、CD146、CD166和p75NTR,MAGE-D1 siRNA转染入外胚间充质干细胞,实验组分为:对照组(Control)和MAGE-D1 siRNA组(MAGEsiRNA-EMSCs),CCK8法和划痕法分别检测两组细胞增殖能力与迁移能力,Real Time-PCR及Western blot检测迁移及WNT通路相关基因MAGE-D1、β-catenin、E-cadherin的mRNA及蛋白表达量。结果组织块法成功培养出牙胚来源的外胚间充质干细胞,经流式细胞仪检测细胞阳性表达CD14(92. 16%)、CD29(94. 53%)、CD44(99. 51%)、CD90(95. 18%)、CD105(34. 22%)、CD146(92. 39%)、CD166(98. 15%)和p75NTR(88. 56%),阴性表达CD45(0. 5%);CCK8法检测MAGE-D1 siRNA组EMSCs增殖能力受到抑制;划痕试验法检测MAGE-D1 siRNA组细胞48 h迁移量高于对照组细胞;Real Time-PCR检测Mage-D1、β-catenin和E-cadherin表达量,MAGE-D1 siRNA组EMSCs MAGE-D1和E-cadherin表达较对照组低,而β-catenin表达较高,Western blot检测MAGE-D1、β-catenin和E-cadherin表达水平趋势与Real Time-PCR结果相一致。结论抑制EMSCs中MAGE-D1的表达上调β-catenin,下调E-cadherin,能够提高细胞的迁移能力,但是其导致增殖能力降低,MAGE-D1可能作为EMSCs迁移增殖能力的关键因子。

MAGE-A4在肿瘤诊断与免疫治疗中的作用研究进展

肿瘤免疫治疗已成为继放化疗、靶向治疗后最终攻克癌症的希望之一,而肿瘤相关性抗原是免疫治疗的重要靶点。黑色素瘤相关抗原-A4(MAGE-A4)作为癌睾丸抗原,是MAGE-A亚家族的重要成员,具有很好的组织学特异性,在多种肿瘤组织中呈高表达,在正常组织(除睾丸、胎盘外)中均呈低表达。MAGE-A4参与细胞功能的调节,具有调控细胞周期、诱导细胞分化和生长、参与上皮-间质转化等重要作用,与肿瘤的发生、发展、转移及预后密切相关。目前,以MAGE-A4为靶点的T细胞受体转基因T细胞(TCR-T)免疫治疗,其Ⅰ期临床试验结果显示总体反应率(ORR)为23.7%、病情稳定率为47.4%,Ⅱ期临床试验正在开展,提示以MAGE-A4为靶点的TCR-T免疫治疗具有较高的临床应用价值。本文总结了MAGE-A4的结构和生物学功能及其在多种实体肿瘤中的最新研究进展和临床应用,旨在为MAGE-A4的临床转化及免疫靶向治疗提供理论基础。

新疆维吾尔族人自然长寿与HLADRB、ACE基因的关联分析

目的探讨人类白细胞抗原(HLA)DRB基因及血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与新疆维吾尔族人自然长寿的关系。方法研究样本分为4组:第1组年龄≥100岁;第2组年龄为90～99岁;第3组年龄为70～90岁;第4组为65～70岁自然死亡者。分别应用聚合酶链反应序列特异引物法(PCRSSP)、单链构象多态性(SSCP)分析和直接测序技术对各组进行基因分型。结果百岁组HLADR1的频率明显高于对照组(分别为9.5%和1.9%,P<0.05);HLADR6(14)的频率也明显高于对照组(分别为9.5%和0.9%,P<0.05);HLADR6的频率明显高于其余3组;HLADR4的频率明显低于对照组(分别为9.5%和23.6%,P<0.05);HLADR9的频率明显低于对照组(分别为1.2%和9.4%,P<0.05)。相关分析显示:HLADR1及ACE基因的D等位基因与长寿呈正相关,而HLADR9呈负相关。结论HLADRB基因的DR1等位基因和ACE基因的等位基因D对长寿可能有保护作用;HLADRB基因的DR9等位基因可能是不利于长寿的危险因素,HLADRB基因多态性和ACE基因多态性相互作用对长寿有协同作用。

MageD1在口腔鳞癌中的表达及其促进凋亡作用的研究

目的:检测口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞系中黑色素瘤相关抗原D1(Mage D1)的表达,并在口腔鳞癌细胞系HN6中通过转染慢病毒的方法过表达Mage D1,探讨其对细胞凋亡的影响。方法:收集临床标本,通过Western blot和RT-PCR的方法检测口腔鳞癌以及HN6细胞系中Mage D1的表达量,用载有Mage D1的慢病毒转染HN6细胞,检测转染效果和Bax、CleavedCasepase3等凋亡相关蛋白的表达,并采用裸鼠荷瘤实验研究肿瘤体内生长的情况。结果:Mage D1在口腔鳞癌组织及HN6细胞株中较正常组织呈低表达,Western blot及RT-PCR结果表明,Mage D1成功转染并得到稳定过表达Mage D1的Lv-Maged1细胞,并且过表达Mage D1的HN6细胞中Cleaved-Casepase3和Bax的表达量高于HN6细胞,荷瘤实验证明Mage D1具有抑制肿瘤生长作用(P<0.05)。结论:Mage D1在口腔鳞癌组织及细胞系中表达降低,过表达Mage D1能促进肿瘤细胞凋亡。

肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨

背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1)蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法:回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果:肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);将其与肿瘤的临床病理学特征进行相关分析发现,肿瘤组织和外周血中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平与肿瘤TNM分期和分化级别有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理学类型无关(P>0.05)。肿瘤组织中6种蛋白的表达水平与外周血清表达具有较好的一致性(P>0.05)。结论:肺癌肿瘤组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白表达阳性与肿瘤TNM分期及分化级别密切相关。

恶性黑色素瘤生物免疫治疗的研究进展

恶性黑色素瘤是一种恶性程度极高的皮肤肿瘤，病人发生转移后应用传统治疗方法很难达到有效治疗。自从恶性黑色素瘤的肿瘤抗原表位被发现后，恶性黑色素瘤的免疫治疗就开始成为研究热点。过继性细胞治疗临床应用研究在近几年内得到快速发展，其中疗效最好的当属肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）回输治疗，其治疗有效率可以达到70％以上。同时，各种用于调节免疫系统的单克隆抗体药物以及信号传导阻滞剂的研究也在快速发展，这些研究为恶性黑色素瘤的免疫治疗提供了新思路。多种不同作用机制的药物疗效将在不久的将来得到证实，尤其是抗细胞毒性T细胞相关抗原4（CTLA4）抗体的ipilimumab以及高选择性B型有丝分裂原激活的蛋白激酶依粘性激酶的激酶（BRAF）阻断剂PLX4032。