黑色素瘤相关性抗原E1基因的克隆与测序

目的 克隆表达人黑色素瘤相关性抗原MAGE E1片段 ,以便研究其对神经系统恶性肿瘤的生物学作用。方法 从人胶质瘤细胞系BT 32 5中提取mRNA ,用RT PCR法从中扩增出MAGE E1片段 ,采用DNA重组技术将其克隆于 pGEM TEasy载体中并测序。 结果 RNA体外扩增得到的片段为 4 0 0bp ,PGEM MAGE E1经酶切鉴定正确 ,测序结果与Genebank比较完全相同。

黑色素瘤相关抗原MAGEA1的定位及其相互作用蛋白质的鉴定

黑色素瘤相关抗原家族A1蛋白(melanoma associated antigen family A1,MAGEA1)在生殖细胞和多种组织学来源的肿瘤中有表达,但其作用机制尚不清楚。本研究通过构建带Flag和GFP标签的MAGEA1真核表达重组质粒,将其转染至HeLa、HEK293T细胞内。利用Western印迹、免疫细胞荧光法、免疫共沉淀、细胞核蛋白质与细胞质蛋白质分离和线粒体提取等技术,检测其在细胞内的表达与定位以及与其他蛋白质的相互作用情况。免疫细胞化学和蛋白质印迹结果显示,过表达的MAGEA1主要定位于细胞质,并部分与线粒体共定位。通过免疫共沉淀验证了MAGEA1与TRIM31、SNW1、HDAC1之间存在相互作用,并且发现MAGEA1可能主要与位于细胞质中的HDAC1相互作用。以上研究表明,MAGEA1可能参与不同的细胞内调节途径,部分与线粒体共定位;与TRIM31、SNW1、HDAC1相互作用,且可能主要与位于细胞质中的HDAC1蛋白相互作用,推测其可能参与到蛋白质泛素化和Notch信号通路。本研究的结果为后续深入研究MAGEA1的作用机制奠定了实验基础。

MAGE-A1在肿瘤诊断及免疫治疗中的研究进展

癌-睾丸抗原(cancer-testis antigens,CTAs)是一组在睾丸和胎盘及恶性肿瘤中表达的肿瘤相关抗原,其高表达可促进肿瘤的发生和发展,与肿瘤不良预后相关,已成为多种肿瘤的生物标志物和免疫治疗的理想靶点。在CTAs中,发现最早和研究最广泛的家族是黑色素瘤相关抗原A(melanoma-associated antigen A,MAGE-A)家族,MAGE-A家族有12个成员(MAGE-A1到MAGE-A12)。本文着重于MAGE-A1的研究,主要对MAGE-A1在肿瘤诊断及免疫治疗方面的进展进行综述。

肝癌患者及正常人群中黑色素瘤相关抗原1的基因多态性

目的 研究黑色素瘤相关抗原1(MAGE-1)在中国肝癌患者中的表达,并阐明MAGE-1基因变异是肿瘤细胞内的突变还是单核苷酸多态性(SNP),以及基因变异在人群中的分布状况。 方法 提取19例原发性肝癌(HCC)患者的癌组织、癌旁组织总RNA,用逆转录-多聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测组织MAGE-1基因mRNA的表达,并通过PCR产物测序分析编码基因是否存在变异,提取HCC患者癌组织、癌旁组织和外周血细胞基因组DNA,以及23例正常献血员外周血细胞基因组DNA,分析MAGE-1编码基因的变异状况并利用软件对变异抗原蛋白的生物学意义进行了初步探讨。 结果 癌组织中MAGE-1表达阳性率为47.4％(9/19),癌旁组织无表达。序列测定显示,MAGE-1 cDNA编码基因存在3种类型:一类是Ⅰ型(GenBank M77481),发生率为11.1％(1/9);另一类型(C159T,A272G,G393A)发生率为55.6％(5/9),称之为TGA型,导致编码的2个氨基酸的改变分别是T32A和R72Q;第三种类型(A272G,C991T,A1125G)发生率为33.3％(3/9),仅A272G引起一个氨基酸的替换(T32A),称之为GTG型。经对基因组DNA分析,证实以上3种基因类型不是肝癌组织的基因突变,而是SNP,其在肝癌患者和正常献血员中分布的比例分别为:Ⅰ型占26.3％(5/1 9)和60.9％(14/23);TGA型占57.9％(11/19)和47.8％(11/23),GTG型占21.

Mage-H1在PC12细胞分化前后的表达变化及其对细胞周期的影响

目的:探讨黑色素瘤相关抗原H1(Mage-H1)在细胞增殖和分化调控中的作用。方法:神经生长因子(nerve growth factor,NGF)诱导PC12细胞分化后用相差显微镜对其形态学进行观察。通过RT-PCR、Western blotting检测分化前后Mage-H1表达变化情况。流式细胞技术分析PC12细胞瞬时表达Mage-H1对细胞周期的影响。结果:经NGF诱导8d后,92%以上PC12细胞属于已分化细胞。分化后的PC12细胞与对照组相比,Mage-H1表达上调。PC12细胞瞬时表达Mage-H1后被明显阻滞在G0-G1期。结论:Mage-H1可抑制PC12细胞增殖并促进细胞的分化。

人胶质瘤中HIF1A和MAGED4的表达及调控关系初探

目的探讨缺氧诱导因子1A(HIF1A)和黑色素瘤相关抗原D4(MAGED4)在人胶质瘤中的表达情况,并分析HIF1A对MAGED4表达的影响。方法通过基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库收集人胶质瘤组织样本数据681例,正常脑组织样本数据207例,比较其MAGED4 mRNA和HIF1A mRNA表达水平。通过中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库中下载693例胶质瘤患者的mRNA-seq_693数据集及相应的临床信息,分析MAGED4 mRNA和HIF1A mRNA表达的相关性,以及二者与患者临床特征指标的关联性。应用氯化钴模拟体外缺氧环境,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印记(WB)实验探讨沉默胶质瘤细胞HIF1A表达对MAGED4表达变化的影响。结果基于GEPIA数据库的分析结果显示,低级别胶质瘤(LGG)和胶质母细胞瘤(GBM)组织的HIF1A mRNA和MAGED4 mRNA水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。基于CGGA数据库的分析结果显示,MAGED4 mRNA表达水平与HIF1A mRNA表达水平呈正相关(r=0.322,P=0.000)。MAGED4 mRNA高表达组年龄<40岁、异柠檬酸脱氢酶(IDH)突变型的人数比例大于MAGED4 mRNA低表达组,差异有统计学意义(P<0.05),两组性别、肿瘤类型、世界卫生组织(WHO)肿瘤分级,O6-甲基鸟瞟-DNA甲基转移酶(MGMT)启动子甲基化状态、1p/19q共缺失情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。将HIF1A siRNA转染至U87-MG和U251细胞,并在缺氧条件下培养48 h,RT-qPCR和WB实验结果显示,HIF1A下调后,MAGED4的表达水平也显著下降。结论HIF1A和MAGED4均高表达于胶质瘤,且两者呈正相关。胶质瘤细胞中HIF1A可调控MAGED4的表达。

肺癌组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白水平检测及其临床价值探讨

背景与目的:肺癌发病机制具有多样性,但一经确认,往往已错过最佳治疗时机,本文通过探讨肺癌组织和外周血中抑癌基因(p53)、蛋白基因产物(PGP9.5)、转录因子(SOX2)、肿瘤相关基因编码蛋白(GAGE7)、解旋酶(GBU4-5)和黑色素瘤抗原(MAGE A1)蛋白水平的相关性,同时分析其在肺癌诊疗中的应用价值。方法:回顾并分析2018年5月—2020年5月在复旦大学附属肿瘤医院确诊的100例肺癌患者的病历资料,临床TNM分期Ⅰ期25例,Ⅱ期45例,Ⅲa期30例;非小细胞肺癌80例,小细胞肺癌20例;取手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,采用免疫组织化学染色法检测上述6种蛋白的水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)法检测其基因表达,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)检测外周血中6种蛋白的抗体阳性情况。结果:肿瘤组织中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平均明显高于癌旁组织(P<0.05);将其与肿瘤的临床病理学特征进行相关分析发现,肿瘤组织和外周血中的p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白的阳性率和基因表达水平与肿瘤TNM分期和分化级别有关(P<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、病理学类型无关(P>0.05)。肿瘤组织中6种蛋白的表达水平与外周血清表达具有较好的一致性(P>0.05)。结论:肺癌肿瘤组织和外周血中p53、PGP9.5、SOX2、GAGE7、GBU4-5和MAGE A1蛋白表达阳性与肿瘤TNM分期及分化级别密切相关。

采用RACE技术获得全长人新基因MAGE-D1

c DNA末端快速扩增 (RACE)技术是快速获得新基因 5′和 3′端未知序列的有效手段 .鉴于新报导的人肿瘤基因 MAGE家族成员之一 MAGE- D1的 c DNA序列不完全 ,从而拟用 RACE技术获得 MAGE- D1的全长 c DNA序列 .结果显示 ,MAGE- D1的 c DNA全长为 2 80 0个碱基 ,编码778个氨基酸 .同时对 RACE技术应用时的一些关键问题进行了讨论 .

MAGE-C1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨黑色素瘤相关抗原-C1(melanoma-associated antigen-C1,MAGE-C1)在乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法:选取2008年1月至2008年12月河北医科大学第四医院乳腺中心行手术切除的乳腺癌、正常乳腺组织及良性乳腺病变组织各60例,用RT-PCR和免疫组织化学染色法分别检测3种组织中MAGE-C1 mRNA和蛋白的表达水平,分析MAGE-C1表达与乳腺癌患者临床病理特征及预后的关系。用DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)干预乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,RT-PCR法检测药物干预前后细胞中MAGE-C1 mRNA表达的变化。结果:乳腺癌组织中MAGE-C1 mRNA及蛋白表达阳性率分别为43.3%(26/60)和38.3%(23/60),乳腺正常组织及良性病变组织中均未发现MAGE-C1 mRNA和蛋白的表达。MAGE-C1表达与乳腺癌患者的组织学分级相关(χ2=6.233,P<0.05)。MAGE-C1表达阳性的患者,其无复发生存率低于MAGE-C1表达阴性的患者(χ2=4.213,P<0.05)。MAGE-C1表达(HR=3.980,P<0.05)和临床分期(HR=3.637,P<0.05)是影响乳腺癌患者预后的独立危险因素。单独或联合应用5-Aza-CdR和TSA对乳腺癌细胞中MAGE-C1的表达均无影响(P>0.05)。结论:MAGE-C1是肿瘤特异性抗原,其表达与乳腺癌患者的不良预后密切相关。

胃癌中CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3的去甲基化

目的:探讨肿瘤相关抗原基因(cancer associated antigen gene,CAGE)、黑色素瘤抗原基因-A1(melanoma antigen gene A1,MAGE-A1)、黑色素瘤抗原基因-A3(melanoma antigen gene A3,MAGE-A3)启动子区去甲基化与胃癌临床特点的关系和意义.方法:应用甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)的方法检测30例胃癌和25例正常胃黏膜标本中CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区的去甲基化状态,并分析其与胃癌临床病例参数间的关系.结果:胃癌组CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子去甲基化阳性率(80.0%、60.0%、46.7%)均明显高于正常胃黏膜组(4.0%、0.0%、8.0%,P<0.05).胃癌组中,CAGE基因启动子区去甲基化与淋巴转移和临床分期有关(P=0.016;P=0.026);MAGE-A1基因启动子区去甲基化与组织分化程度和临床分期有关(P=0.042;P=0.002);MAGE-A3基因启动子区去甲基化与淋巴转移和组织分化程度有关(P=0.034;P=0.026).结论:CAGE、MAGE-A1和MAGE-A3基因启动子区去甲基化的检测可能有助于判断胃癌的组织分化程度、淋巴结转移和临床分期,有可能成为胃癌治疗及判断预后的分子标志物.

MAGE-D1对大鼠牙胚来源外胚间充质干细胞增殖迁移能力的影响

目的研究黑色素瘤相关抗原D1(Melanoma associated antigens,MAGE-D1)对大鼠牙胚来源的外胚间充质干细胞(Ectomensenchymal stem cells,EMSCs)增殖及迁移能力的影响。方法取SD大鼠孕19. 5 d胎鼠牙胚组织,组织块法培养牙胚来源外胚间充质干细胞,流式细胞仪进行外胚间充质干细胞表面分子鉴定CD14、CD29、CD44、CD45、CD90、CD105、CD146、CD166和p75NTR,MAGE-D1 siRNA转染入外胚间充质干细胞,实验组分为:对照组(Control)和MAGE-D1 siRNA组(MAGEsiRNA-EMSCs),CCK8法和划痕法分别检测两组细胞增殖能力与迁移能力,Real Time-PCR及Western blot检测迁移及WNT通路相关基因MAGE-D1、β-catenin、E-cadherin的mRNA及蛋白表达量。结果组织块法成功培养出牙胚来源的外胚间充质干细胞,经流式细胞仪检测细胞阳性表达CD14(92. 16%)、CD29(94. 53%)、CD44(99. 51%)、CD90(95. 18%)、CD105(34. 22%)、CD146(92. 39%)、CD166(98. 15%)和p75NTR(88. 56%),阴性表达CD45(0. 5%);CCK8法检测MAGE-D1 siRNA组EMSCs增殖能力受到抑制;划痕试验法检测MAGE-D1 siRNA组细胞48 h迁移量高于对照组细胞;Real Time-PCR检测Mage-D1、β-catenin和E-cadherin表达量,MAGE-D1 siRNA组EMSCs MAGE-D1和E-cadherin表达较对照组低,而β-catenin表达较高,Western blot检测MAGE-D1、β-catenin和E-cadherin表达水平趋势与Real Time-PCR结果相一致。结论抑制EMSCs中MAGE-D1的表达上调β-catenin,下调E-cadherin,能够提高细胞的迁移能力,但是其导致增殖能力降低,MAGE-D1可能作为EMSCs迁移增殖能力的关键因子。

肝癌组织中MAGE-A1表达及其临床意义

目的检测黑色素瘤抗原A1(MAGEA1)在肝癌组织中表达,探讨MAGEA1基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床病理指标的关系。方法应用RTPCR法检测31例HCC组织及相应癌旁组织中MAGEA1基因的表达。应用组织芯片和免疫组化技术分析178例HCC组织及相应癌旁组织中MAGEA1抗原表达。结果31例HCC组织标本中有21例(67.74%)表达MAGEA1基因,而相应的癌旁组织MAGEA1基因均不表达。178例HCC组织中95例表达MAGEA1抗原(53.37%),相应的癌旁组织MAGEA1抗原均不表达。结论MAGEA1基因在HCC组织中有较高表达,其阳性率与HCC患者的临床病理指标无相关关系。

脑胶质瘤中MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平及其临床意义

目的分析脑胶质瘤中黑色素瘤相关抗原(MAGE)-D4和肌动蛋白结合蛋白CORO1C mRNA的表达水平,探讨二者的相关性及临床意义。方法通过基因表达谱交互式分析(GEPIA)数据库收集脑胶质瘤样本数据681例[低级别脑胶质瘤(LGG)518例,胶质母细胞瘤(GBM)163例],正常脑组织样本数据207例,比较其MAGE-D4和CORO1C mRNA的表达水平。进一步收集62例脑胶质瘤组织和11例正常脑组织临床样本,应用逆转录-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平并进行比较,分析MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平与脑胶质瘤患者临床指标的关联性。应用小干扰RNA(siRNA)技术沉默脑胶质瘤细胞株MAGE-D4的表达,检测CORO1C mRNA的表达变化情况。结果GEPIA数据库数据分析结果显示,GBM和LGG组织的MAGE-D4和CORO1C mRNA表达水平均高于正常脑组织,差异有统计学意义(P<0.05)。针对临床样本的RT-qPCR检测结果也显示,脑胶质瘤组织中MAGE-D4和CORO1C mRNA的表达水平显著高于正常脑组织(P<0.05)。MAGE-D4及CORO1C mRNA的表达水平与患者年龄、性别、世界卫生组织(WHO)分级、病理类型、卡氏评分(KPS)、肿瘤最长径,以及Ki-67、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、S-100和波形蛋白(Vimentin)的表达水平均无显著关联(P>0.05)。Pearson相关分析结果显示,临床脑胶质瘤样本组织中MAGE-D4与CORO1C mRNA表达水平呈正相关(r=0.848,P=0.000)。细胞实验结果显示,经MAGE-D4 siRNA沉默后,U87 MG和U251细胞CORO1C mRNA的表达水平显著下降(P<0.05)。结论MAGE-D4和CORO1C mRNA在脑胶质瘤组织中高表达,且二者表达水平呈正相关。MAGE-D4和CORO1C可能协同影响脑胶质瘤的发生、发展过程,其具有成为脑胶质瘤分子靶向治疗靶点的潜力。

MageD1在口腔鳞癌中的表达及其促进凋亡作用的研究

目的:检测口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞系中黑色素瘤相关抗原D1(Mage D1)的表达,并在口腔鳞癌细胞系HN6中通过转染慢病毒的方法过表达Mage D1,探讨其对细胞凋亡的影响。方法:收集临床标本,通过Western blot和RT-PCR的方法检测口腔鳞癌以及HN6细胞系中Mage D1的表达量,用载有Mage D1的慢病毒转染HN6细胞,检测转染效果和Bax、CleavedCasepase3等凋亡相关蛋白的表达,并采用裸鼠荷瘤实验研究肿瘤体内生长的情况。结果:Mage D1在口腔鳞癌组织及HN6细胞株中较正常组织呈低表达,Western blot及RT-PCR结果表明,Mage D1成功转染并得到稳定过表达Mage D1的Lv-Maged1细胞,并且过表达Mage D1的HN6细胞中Cleaved-Casepase3和Bax的表达量高于HN6细胞,荷瘤实验证明Mage D1具有抑制肿瘤生长作用(P<0.05)。结论:Mage D1在口腔鳞癌组织及细胞系中表达降低,过表达Mage D1能促进肿瘤细胞凋亡。

急性白血病患者WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因表达的检测及其与疾病分型、疗效的关系

目的:研究急性白血病患者肾母细胞瘤基因(WT1)、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、ETS相关基因(ERG)、硫氧还蛋白-2(TRX-2)基因表达及其与疾病分型、疗效的关系。方法:将本院收治的90例白血病患者纳入研究的白血病组,将同期体检健康者纳入健康组;进一步根据分型将白血病患者分为ALL组和AML组,根据化疗后疗效将白血病患者分为完全缓解组和复发组。采集患者的外周血,检测WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量。结果:白血病组血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);AML组血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于ALL组,差异有统计学意义(P<0.05);复发组的血液中WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因的mRNA含量高于完全缓解组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:WT1、PRAME、ERG、TRX-2基因异常高表达与白细胞的发生有关,也与疾病的分型、化疗的效果密切相关。

肾上皮样血管平滑肌脂肪瘤的临床病理和免疫组化特征

目的 :探讨肾上皮样血管平滑肌脂肪瘤 (AML)的临床病理特点及鉴别诊断。 方法 :对 2例肾上皮样AML的临床资料、随访结果及组织病理进行分析 ,应用免疫组化染色观察了黑色素瘤相关抗原 (HMB4 5 )、(Pan)melanomamarkerAb 1、角蛋白 (CK)、平滑肌肌动蛋白 (SMA)、上皮膜抗原 (EMA)、波形蛋白 (VIM)、肿瘤抑癌基因 (p5 3)、增殖细胞核抗原 (PC NA)、细胞增殖标记 (Ki6 7)等在肾上皮样AML的表达 ,并与国外报道的 2 8例进行比较。 结果 :组织学特点 :瘤细胞呈上皮样或短梭形 ,细胞质为嗜酸性 ,核大 ,较深染、异形 ,可见病理性核分裂相。瘤细胞排列密集成片 ,伴大片坏死 ,瘤组织中散在多核巨细胞。免疫组化 :HMB4 5和 (Pan)MelanomaMarkerAb 1阳性 ,上皮标记EMA、CK阴性。 结论 :在未出现远处转移前 ,肾上皮样AML一般属潜在恶性病变。

肿瘤疫苗在肺癌治疗中的进展

肺癌是世界上最常见恶性肿瘤,也是引起肿瘤性死亡的主要原因。手术、化疗和放疗等传统抗肿瘤手段在一定程度上达到瓶颈。近年来,免疫治疗在恶性肿瘤治疗领域中显示出广阔前景。肿瘤免疫原性低,不能引起机体足够的抗肿瘤免疫,是肿瘤免疫逃逸机制之一。肿瘤疫苗是利用肿瘤细胞或肿瘤抗原物质诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应,增强机体的抗癌能力,阻止肿瘤的生长、扩散和复发,以达到清除或控制肿瘤的目的。本文将系统总结近年来肿瘤疫苗在肺癌治疗中的研究进展。

非小细胞肺癌组织MAGE-A3、HIF-1α、MTA1表达与临床病理参数及复发转移的关系研究

目的:探讨非小细胞肺癌组织黑色素瘤相关抗原-A3(MAGE-A3)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、转移相关蛋白1(MTA1)表达与临床病理参数及复发转移的关系。方法:选择2015年2月至2018年1月我院诊治的130例非小细胞肺癌患者进行临床研究,采用免疫组织化学染色法检测其非小细胞癌组织及癌旁组织中MAGE-A3、HIF-1α、MTA1的表达,分析MAGE-A3、HIF-1α、MTA1的表达与各项临床病理参数的关系。对比不同MAGE-A3、HIF-1α、MTA1表达情况患者的转移率及复发率。结果:130例非小细胞肺癌组织中MAGE-A3、HIF-1α、MTA1阳性率分别为70.77%、74.62%、79.23%,明显高于癌旁组织的25.38%、22.31%、17.69%(P<0.05)。非小细胞肺癌组织中MAGE-A3、HIF-1α、MTA1表达与淋巴结转移和TNM分期相关(P<0.05)。MAGE-A3、HIF-1α、MTA1阳性患者转移/复发率明显高于MAGE-A3、HIF-1α、MTA1阴性患者(P<0.05)。结论:MAGE-A3、HIF-1α、MTA1在非小细胞肺癌中阳性表达率升高,并且均与非小细胞肺癌淋巴结转移、TNM分期和转移复发相关,在非小细胞肺癌的诊断和预后评估中具有一定临床意义。

志贺菌6种毒力基因的多重PCR检测

目的:建立志贺菌6种毒力基因[志贺菌肠毒素1基因(set1)、志贺菌肠毒素2基因(sen)、侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、侵袭相关蛋白基因(ial)、志贺毒素1基因(stx1)及调控基因(virA)]的多重PCR鉴定方法,实现多基因的同时检测。方法:选择志贺菌的6种毒力基因作为靶基因,以A群和C群4株标准及B群和D群4株临床分离株为模型,应用降落PCR方法在1个反应管中同时进行扩增,根据扩增片段大小定性判断结果。通过样本倍比稀释检验多重PCR的灵敏性,并在NCBI网站上用BLAST检索各引物的特异性。另选取河南省2001年至2007年115株志贺菌进行多重PCR检测,以验证多重PCR的可行性。结果:多重PCR能同时检测上述6种毒力基因,与单基因PCR分别检测6种毒力基因相比具有相近的灵敏度与特异性。应用多重PCR方法检测115株志贺菌,除stx1外,其余5种毒力基因的阳性率均在85%以上。结论:多重PCR鉴定志贺菌毒力基因具有简便、快速的特点,适用于毒力基因鉴定和流行病学调查研究。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷体外对黑素瘤细胞系肿瘤相关抗原和免疫分子表达的影响

目的探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)对4种体外培养建系的黑素瘤细胞肿瘤相关抗原和免疫分子表达水平的影响。方法将手术切除或细针穿刺活组织检查获得的黑素瘤组织体外培养建系;应用流式细胞术检测5-aza-CdR用药后黑素瘤细胞表面人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)-Ⅰ类、-Ⅱ类、-A2以及细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)表达的变化;采用实时定量RT-PCR检测用药后一系列重要的肿瘤相关抗原表达的变化。结果 5-aza-CdR用药后,4种黑素瘤细胞系HLA-Ⅰ类、-Ⅱ类和-A2的表达与对照组相比无明显变化;TC12A和TC13细胞ICAM-1表达明显升高;TC12A、TC13和TC69B细胞肿瘤相关抗原黑素瘤抗原基因(MAGE)-4和NY-ESO-1的表达水平明显升高。结论 5-aza-CdR不影响黑素瘤细胞HLA的表达水平,对ICAM-1和某些黑素瘤相关肿瘤抗原的表达有明显上调作用,提示化疗药物5-aza-CdR不会阻碍抗肿瘤免疫中黑素瘤细胞的抗原呈递能力,为化疗联合免疫治疗肿瘤提供了理论前提。