榄香烯诱导小鼠黑色素瘤B16细胞凋亡的实验研究

目的:观察榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度榄香烯体外处理小鼠黑色素瘤B16细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及荧光染色等方法,检测榄香烯对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。结果:榄香烯能抑制B16细胞增殖,使细胞停滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其作用呈明显浓度依赖性。形态学及流式细胞术分析结果均提示:在本实验条件下,榄香烯可诱导B16细胞凋亡,其诱导作用亦显示明显的浓度依赖关系。在此基础上,进一步分析发现:榄香烯可诱导B16细胞原癌基因bcl-2表达降低,抑癌基因p53表达增强。结论:榄香烯在体外通过干扰细胞周期、诱导细胞凋亡明显抑制B16细胞增殖,其作用机制可能与其诱导癌基因bcl-2表达减少、p53表达增加有关。

重楼皂苷Ⅱ诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的机制研究

目的:研究重楼皂苷Ⅱ诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的作用及机制。方法:采用MTT法观察重楼皂苷Ⅱ对B16细胞增殖的抑制作用;采用DAPI染色于倒置荧光显微镜下观察重楼皂苷Ⅱ对B16细胞诱导凋亡的形态学改变;Annexin V-FITC/PI双染及流式细胞术检测重楼皂苷Ⅱ对B16细胞凋亡率的影响;JC-1染色流式细胞仪检测重楼皂苷Ⅱ作用B16细胞后细胞线粒体膜电位的变化;Western blot检测重楼皂苷Ⅱ对B16细胞中凋亡相关蛋白Bcl-2的表达变化。结果:重楼皂苷Ⅱ对B16细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈时间及浓度依赖性;重楼皂苷Ⅱ作用B16细胞后凋亡率随药物浓度的升高而升高;线粒体膜电位水平也随之显著降低,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);Western blot检测结果表明Bcl-2蛋白表达水平显著降低。结论:重楼皂苷Ⅱ可能通过线粒体氧化应激通路从而诱导B16细胞凋亡。

原儿茶酸对小鼠黑色素瘤B16细胞酪氨酸酶活力及黑色素生成的抑制效应

酪氨酸酶是生物体内黑色素合成的关键酶,其抑制剂有着广泛的应用前景.从天然药物的有效成分中筛选安全的酶抑制剂具有重要意义.以小鼠黑色素瘤B16细胞为模型,研究了天然药物有效成分原儿茶酸对黑色素生成和酪氨酸酶活力的影响.实验结果显示:原儿茶酸可显著降低细胞的黑色素含量,浓度为10μmol/L时使黑色素含量降低60%.进一步研究发现,原儿茶酸对小鼠黑色素瘤B16细胞粗提取和共培养体系中的酪氨酸酶均有较强的抑制作用.对粗提酪氨酸酶的活力半抑制浓度(IC50)约为160μmol/L,与共培养体系中酪氨酸酶活力的抑制、抑制剂浓度和作用时间有关,10μmol/L作用54h可使酪氨酸酶活力下降88%.本研究为原儿茶酸作为酪氨酸酶抑制剂的开发应用奠定了基础.

双脱甲氧基姜黄素对黑色素瘤B16-F10细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨双脱甲氧基姜黄素(bisdemethoxycurcumin)对黑色素瘤B16-F10细胞增殖与凋亡的影响。方法:双脱甲氧基姜黄素作用于B16-F10细胞24 h,MTT法检测双脱甲氧基姜黄素对B16-F10细胞的增殖抑制作用。流式细胞术检测双脱甲氧基姜黄素对细胞周期、细胞凋亡的影响。在C57BL/6小鼠上面建立黑色素瘤模型,采用静脉给药,观察其对黑色素瘤模型的增殖影响。用蛋白免疫印迹法检测双脱甲氧基姜黄素在细胞和组织层面对抗细胞凋亡蛋白BCL-1的表达影响。结果:双脱甲氧基姜黄素可以明显抑制B16-F10细胞的增殖。双脱甲氧基姜黄素诱导B16-F10细胞凋亡,抑制细胞周期于S期。采用静脉注射给药,双脱甲氧基姜黄素可以抑制黑色素瘤的生长。在细胞和组织层面,可以抑制抗凋亡蛋白BCL-1的表达。结论:双脱甲氧基姜黄素可以抑制黑色素瘤B16-F10细胞的增殖,可能与其促进细胞凋亡有关;双脱甲氧基姜黄素诱导黑色素瘤B16-F10细胞凋亡可能与抑制抗凋亡单位BCL-1有关。

和厚朴酚对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖以及黑色素合成的影响

目的探讨和厚朴酚对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖以及细胞内黑色素合成的影响。方法体外培养小鼠B16细胞,MTT法检测和厚朴酚对B16细胞增殖的影响;DAPI染色法观察和厚朴酚对B16细胞细胞形态的影响;NaOH裂解法检测和厚朴酚对黑色素含量的影响。结果和厚朴酚浓度为51、0、204、0、80μmol/L作用B16细胞,在不同的用药时间122、4和48 h,和厚朴酚对B16细胞增殖的IC50分别为23.41、3.1和11.4μmol/L;同时和厚朴酚作用B16细胞12 h后,经DAPI染色,B16细胞呈现典型的凋亡形态;另外采用204、0、80μmol/L的和厚朴酚分别作用B16细胞,B16细胞内黑色素合成量也呈现降低的趋势。结论和厚朴酚能有效地抑制B16细胞增殖,且其抑制作用具有时间和浓度依赖性;药物作用后的B16细胞呈现凋亡形态并出现凋亡小体;和厚朴酚对B16细胞内黑色素合成也呈现抑制作用但不明显。

三氧化二砷诱导黑色素瘤B16细胞凋亡机制

目的观察三氧化二砷(As2O3)对黑色素瘤B16细胞(B16细胞)的作用,探讨As2O3抗肿瘤的机制。方法Hoechst33258染色观察细胞凋亡特征;应用激光扫描共聚焦显微术(LSCM),结合特异性荧光探针Fluo-3/AM、H2DCF-DA和DAF-FM-DA,观察As2O3引起瘤细胞内钙离子(Ca2+)、活性氧(ROS)和一氧化氮(NO)的变化。结果50μmol/LAs2O3作用细胞12h后,Hoechst33258核染色可见典型凋亡细胞;细胞内Ca2+、ROS和NO含量明显高于对照组(P<0·01)。结论As2O3可诱导B16细胞发生凋亡,As2O3诱导凋亡可能与细胞内Ca2+、ROS和NO的增加有关。

新藤黄酸诱导黑色素瘤B16细胞凋亡的研究

目的:研究新藤黄酸(Gambogenic Acid,GNA)对黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用,并探讨细胞凋亡机制在其中的角色。方法:MTT法检测新藤黄酸对B16细胞生长和增殖的作用;采用acridine orange/ethidium bromide(AO/EB)荧光染色观察新藤黄酸对B16细胞的影响;采用流式细胞仪检测新藤黄酸处理B16细胞后细胞内活性氧(ROS)的产生;Western blotting法检测凋亡相关蛋白Caspase-3的变化。结果:MTT结果表明新藤黄酸在一定浓度下对黑色素瘤B16细胞的增殖有明显抑制作用,并呈一定的时效和量效关系;AO/EB染色观察表明新藤黄酸处理的细胞呈现明显的凋亡状态;新藤黄酸处理细胞后,细胞内活性氧的急剧增加,与未给药组比较有统计学意义(P<0.01),同时线粒体膜电位也随之下降;Western blotting检测发现新藤黄酸作用后cleaved-Caspase-3蛋白表达量增加。结论:新藤黄酸在一定的时间和浓度范围内能够抑制黑色素瘤B16细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡。

云芝多糖对小鼠黑色素瘤B16细胞体外增殖和凋亡的影响及其机制

目的：研究云芝多糖（CVP）对小鼠黑色素瘤B16细胞体外增殖、凋亡的影响及其机制。方法：采用MTT法测定以二甲基亚砜（DMSO,阴性对照）和0（空白对照）、0.156、0.312 5、0.625、1.25、2.5、5.0、10.0μg/ml CVP分别培养细胞48、72 h后的细胞存活率,计算半数抑制浓度（IC_（50））;流式细胞术测定以DMSO（阴性对照）和0（空白对照）、0.5μg/ml CVP分别培养细胞24、48、72 h后的细胞凋亡率;实时荧光定量聚合酶链式反应法测定以DMSO（阴性对照）、0.5μg/ml CVP培养细胞48、72 h后细胞中凋亡相关基因P53、Bcl-2、Fas m RNA的表达。结果：0.156-10.0μg/ml CVP对B16细胞的生长均有抑制作用,并在0.156~0.625μg/ml范围内呈浓度和时间依赖性,培养48、72 h的IC50分别为（0.32±0.01）、（0.18±0.04）μg/ml。0.5μg/ml CVP培养细胞24、48、72 h后,细胞凋亡率较阴性对照和空白对照均明显升高（P〈0.01）;0.5μg/ml CVP培养细胞48、72 h后,细胞中P53、Bcl-2、Fas m RNA表达水平较阴性对照明显降低（P〈0.01）。结论：CVP可抑制小鼠B16细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调细胞中P53、Bcl-2和Fas基因的表达有关。

莲房原花青素对黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用

背景与目的:探讨莲房原花青素(LSPC)对荷瘤小鼠体内黑色素瘤B16细胞的诱导分化作用。材料与方法:以荷黑色素瘤B16小鼠为模型,随机分LSPC3个剂量(60、120、240mg/kg)组和阴性对照组,每组10只,实验组用LSPC、阴性对照组用等体积溶剂分别灌胃13d后取材,检测黑色素瘤B16细胞中酪氨酸酶活力、黑色素含量、S-100蛋白表达,并用光学显微镜和透射电镜观察其细胞形态的变化。结果:60～120mg/kg的LSPC能抑制黑色素瘤B16细胞在小鼠体内生长,且呈浓度依赖关系。其中,120mg/kgLSPC组作用最显著(P<0.01),抑瘤率达55.3%,并使B16细胞内酪氨酸酶活力和黑色素含量分别提高28.5%和23.8%,与阴性对照比较,差异有统计学意义(P<0.05),并使S-100蛋白表达下降。结论:LSPC显著抑制B16细胞在小鼠体内的生长,并从形态上和功能上诱导B16细胞分化。

rhIL-24对黑色素瘤B16细胞的体内外抑瘤作用

目的研究重组人白细胞介素24(rhIL-24)及真核表达基因重组质粒pcDNA3·0-hIL-24对黑色素瘤B16细胞(B16细胞)及其荷瘤小鼠体内外抑肿瘤作用。方法用rhIL-24蛋白作用于小鼠B16细胞,检测其对B16细胞的生长抑制作用及诱导凋亡作用,并用rhIL-24蛋白及pcD-NA3·0-hIL-24治疗荷瘤小鼠。结果rhIL-24蛋白对体外培养的B16细胞具有显著的抑制生长和诱导凋亡作用,rhIL-24蛋白及pcDNA3·0-hIL-24对C57/BL6小鼠体内形成的恶性黑色素瘤具有明显的抑瘤作用。结论rhIL-24蛋白具有生物活性,他及真核表达重组质粒对B16细胞及其小鼠种植瘤生长有抑制作用,并能诱导肿瘤细胞凋亡及促进其分化。

小檗碱上调程序性细胞死亡蛋白4抑制黑色素瘤B16细胞增殖及促细胞凋亡的研究

目的探讨小檗碱对黑色素瘤B16细胞增殖、凋亡的影响。方法使用CCK-8法检测细胞增殖活力;使用流式细胞仪检测细胞周期;使用脂质体转染siRNA敲减程序性细胞死亡蛋白4(PDCD4)基因;使用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)明确敲减情况;使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;使用Western-blotting检测PDCD4增殖、凋亡情况及其相关蛋白表达。结果小檗碱可抑制黑色素瘤B16细胞的增殖活力,并将其细胞周期阻滞于G0/G1期;PDCD4是小檗碱抑制B16细胞增殖、促细胞凋亡的关键基因;小檗碱处理可增高PDCD4、Cleaved Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平,降低Ki-67、Bcl-2的表达水平,敲除PDCD4能减弱小檗碱对黑色素瘤B16细胞Ki-67、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3的影响。结论小檗碱通过上调PDCD4来抑制黑色素瘤B16细胞增殖并促使其凋亡。

南蛇藤对鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖抑制及凋亡诱导作用研究

目的:探讨南蛇藤乙酸乙酯提取物对鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖的抑制作用以及对细胞凋亡的影响。方法:采用MTT法测定细胞增殖,通过AO/EB染色法观察细胞的凋亡形态,应用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:南蛇藤乙酸乙酯提取物可以抑制鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖,诱导其凋亡,呈剂量依赖性,并且与药物作用时间呈正相关。结论:南蛇藤乙酸乙酯提取物能够抑制鼠黑色素瘤B16BL6细胞增殖,诱导其凋亡。

异硫氰酸荧光素标记动态观察天花粉蛋白对黑色素瘤B16细胞的损伤

目的:应用异硫氰酸荧光素标记天花粉蛋白,在激光共聚焦显微镜下直接观察天花粉蛋白进入黑色素瘤B16细胞的动态过程并分析其对黑色瘤B16细胞的损伤作用。方法:实验于2003-08/2004-08在南通大学神经再生重点实验室完成。将常规传代培养的黑色素瘤B16细胞用胰酶消化,以5×109个/L的浓度种植于24孔培养板。将天花粉蛋白、异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白、异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白分别加入培养细胞中,终浓度为50mg/L,同时加入等量生理盐水作为正常对照组,每组再分别设3,6,12h不同孵育时间组。异硫氰酸荧光素标记天花粉蛋白后,利用激光共聚焦显微镜观察异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白进入细胞的过程及其荧光强度,CCK-8细胞毒性实验评估各组细胞存活率、并用单细胞凝胶电泳及hoechst33258染核观察天花粉蛋白对黑色素瘤B16细胞致DNA损伤作用。结果:①终浓度50mg/L的异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白孵育3h时已经进入黑色素瘤细胞,6h时进入细胞量达到最高,12h时已轻度下降,各时间点比较差异有统计学意义(P<0.01)。异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白组与异硫氰酸荧光素-牛血清白蛋白组荧光强度差异有显著性(P<0.01)。②终浓度50mg/L异硫氰酸荧光素-天花粉蛋白、天花粉蛋白孵育黑色素瘤细胞3,6h后利用单细胞电泳和Hoechst33258染色未观察到核形态的变化;但孵育6h后CCK-8细胞毒性实验显示活细胞数量明显下降;孵育12h后出现DNA损伤的特征性彗星尾现象,并观察到明显的核浓缩和边集现象,出现特征性凋亡小体。结论:孵育6h时天花粉蛋白进入细胞量最多,但并没有明显的细胞DNA损伤的作用,而孵育12h时产生明显的细胞毒作用和凋亡的发生。

鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因转染小鼠黑色素瘤B16F1细胞

目的 :探讨基因转移载体脂质体介导转染的鼠粒细胞 巨噬细胞集落刺激因子 (mGM CSF)基因在B16F1细胞的表达动态及表达产物的生物活性。方法 :脂质体和质粒DNA复合后 ,转染 10 6B16F1细胞 ,连续 5d换细胞培养液 ,并检测其中的mGM CSF含量。采用 [3 HTdR]渗入法 ,测定DA1G细胞和转染后第一天收获的以 1:10对倍稀释到 1:6 40的上清液及 [3 HTdR]混合培养后 ,渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm) ,以分析表达产物的生物活性。结果 :转染B16F1细胞的mGM CSF基因得到有效表达。但随着时间的推移 ,表达由第 1天的 135ng/ml下降到第 5天的 42 .2ng/ml。渗入到DA1G细胞的 [3 HTdR]量 (cpm)随上清液的稀释而逐步下降 ,由 1:10稀释度的9371下降到 1:6 40时的 32 5 1。和DMEM混合培养的DA1G细胞的 [3 HTdR]渗入量 (cpm)仅为 472。结论 :脂质体作为基因转移载体可有效地介导mGM CSF基因转染B16F1细胞 。

人参皂苷Rh2对黑色素瘤B16细胞作用及机制研究

目的探讨人参皂苷Rh2(ginsenoside Rh2,G-Rh2)对小鼠黑色素瘤B16细胞的促凋亡作用及其作用机制。方法培养黑色素瘤B16细胞,将黑色素瘤B16细胞随机分为6组:control、10 mg/mL、20 mg/mL、30 mg/mL、40 mg/mL、50 mg/mL,培养24 h、48 h、72 h后,采用CCK-8法检测不同浓度G-Rh2对B16细胞增殖的影响;采用Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况;采用分光光度法检测Caspase-9、Caspase-3蛋白的活性。结果不同浓度G-Rh2(10 mg/mL、20 mg/mL、30 mg/mL、40 mg/mL、50 mg/mL)作用于B16细胞24 h、48 h和72 h后,与空白对照组比,随给药浓度升高和药物干预时间延长对B16细胞的抑制率均有显著升高,并且呈浓度依赖性和时间依赖性(P<0.05);10 mg/mL、20 mg/mL、30 mg/mL、40 mg/mL、50 mg/mL的G-Rh2作用B16细胞48 h后,凋亡率分别为(9.43±0.23)%、(17.50±0.11)%、(24.14±0.38)%、(38.93±0.59)%,与空白对照组(6.67±0.10)%相比,随着G-Rh2的浓度增加,B16细胞凋亡率可显著增加(P<0.05);细胞周期研究结果表明,与空白对照组相比,G0/G1期细胞增多,由空白对照组(60.64±0.68)增加至40 mg/mL时的(82.88±0.17)%,G2/M期细胞减少,由空白对照组(16.31±0.11)%下降至40 mg/mL时的(7.49±0.69)%,说明G-Rh2可诱导B16细胞周期阻滞于G0/G1期;分光光度法研究表明,G-Rh2可以明显增加B16细胞内Caspase-9、Caspase-3蛋白的活性(P<0.05)。结论人参皂苷Rh2可抑制黑色素瘤B16细胞增殖,诱导其凋亡,其凋亡机制可能与上调Caspase-9、Caspase-3,激活Caspase家族有关。

GHGKHKNK八肽抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-F10转移及其机制的实验研究

目的：探讨GHGKHKNK八肽抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-FIO细胞转移及其机制。结果：1．不同剂量的GHGKHKNK八肽对小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-FIO的克隆形成均有抑制作用，与对照组相比较均有显著性差异（P〈0．05）2．不同剂量的GHGKHKNK八肽在体外作用24h后可以显著抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-FIO细胞的侵袭，穿膜细胞数与对照组比较具有显著性差异（P〈0．05）。3．GHGKHKNK八肽在24h时5．5×10^-4mol／L、5．5×10^-5mol／L、5．5×10^-6mol／L对小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-F10黏附抑制率与对照组相比较均有显著性差异（P〈0．05）。4．经GHGKHKNK八肽作用后，小鼠恶性黑色素瘤细胞ICAM-1、LN—R表达降低表达降低，E-cadhesion表达增强。与对照组比较明显差异P〈0．05．5．GHGKHKNK八肽对B16一F10人工肺转移的抑制作用的实验结果显示：GHGKHKNK八肽各剂量组和环磷酰胺组肺转移灶的平均数目与生理盐水组照组相比较有明显差异（P〈0．05）：GHGKHKNK八肽500ug／kg／d、50ug／kg／d剂量组与环磷酰胺组对比有显著性差异（P〈0．05）。结论：i．GHGKHKNK八肽在体外能抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞的体外克隆形成能力，能显著抑制小鼠恶性黑色素瘤B16-F10细胞的侵袭。提示HGKHKNK八肽可能通过抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞的侵袭和增殖而抗肿瘤细胞的转移。2．GHGKHKNK八肽抑制小鼠小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-FIO与人工基底膜的黏附，提示GFIGKHKNK八肽可能通过抑制细胞与基底膜的黏附来抑制肿瘤细胞的转移。3．GHGKHKNK八肽能够下调细胞间黏附因子1（ICAM-1）和层黏连蛋白受体（LN—R）在细胞内的表达，提示GHGKHKNK八肽可能通过抑制细胞间黏附因子的表达而抑制肿瘤细胞的转移。4．GHGKHKNK八肽能显著抑制小鼠恶性黑色素瘤细胞B16-F10在小鼠体内的肺转移。

青蒿素类药联合紫杉醇对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用

目的观察青蒿琥酯(ATS)、双氢青蒿素(DHA)和紫杉醇(Taxol)及ATS联合Taxol对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用,评价各组药物对小鼠黑色素瘤B16细胞的杀伤作用,初步探讨ATS与Taxol联合给药对小鼠黑色素瘤B16细胞是否有协同增效作用。方法采用CCK-8法检测ATS、DHA和Taxol单药对小鼠黑色素瘤B16细胞作用24 h和48 h的抑制作用,并计算半数抑制浓度(IC_(50))值;检测ATS联合Taxol不同配比AT(1∶1)、AT(3∶2)和AT(7∶3)对小鼠黑色素瘤B16细胞作用48 h的抑制作用。运用质量作用中效定理和药物合并指数定理分析两药联合是否具有协同增效作用。结果 ATS、DHA和Taxol单药作用于小鼠黑色素瘤B16细胞的IC_(50)值,在24 h时,分别为126.56,86.09,3.27μmol·L^(-1);在48 h时,分别为1.36,15.11,0.97μmol·L^(-1)。ATS联合Taxol 3个浓度组AT(1∶1)、AT(3∶2)和AT(7∶3)对小鼠黑色素瘤B16细胞作用48 h,联合用药合并指数(CI)均小于1。结论 ATS、DHA和Taxol单药对小鼠黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用随着药物浓度和时间的增加而明显增加,呈剂量和时间依赖性。青蒿琥酯联合紫杉醇抑制小鼠黑色素瘤B16细胞增殖,有良好的协同增效作用。

重组骆驼蓬脂转移蛋白与顺铂联合抑制黑色素瘤B16细胞增殖效应的研究

旨在探讨重组骆驼蓬脂转移蛋白(Recombinant Peganum harmala lipid transfer protein,r Ph LTP)与顺铂(DDP)联用对鼠黑色素瘤B16细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。MTT法检测r Ph LTP、顺铂单独及联用后对鼠黑色素瘤B16细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡,活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(Δψm)的变化情况。结果显示,r Ph LTP和DDP联用后细胞生长抑制率和凋亡率显著高于DDP单独处理组(P<0.01);而且胞内ROS升高的水平均高于单独处理组(P<0.01),胞内Δψm水平均低于单独处理组,但无显著性差异。r Ph LTP可增强顺铂对B16细胞的生长抑制并促进细胞凋亡,与顺铂具有协同作用。

知母皂苷AⅢ对黑色素瘤B16细胞生长和Bax,Bcl-2 mRNA的影响

目的观察知母皂苷AⅢ对体外培养黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养B16细胞,分别以浓度为1,2,4,8,16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ作用24 h,通过MTT比色法检测对细胞生长的影响;倒置显微镜观察对细胞形态的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式检测对细胞凋亡的影响;逆转录PCR检测对细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2的影响。结果 8,16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ明显抑制细胞增殖,24 h的半数抑制浓度(IC50)为10.16μmol·L-1;细胞形态显示16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ使细胞体积缩小变圆,细胞减少。与对照组比较,10μmol·L-1知母皂苷AⅢ细胞凋亡率为(4.83±0.25)%(P<0.01),而Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05)。结论体外实验显示知母皂苷AⅢ能明显抑制B16细胞生长,并能诱导部分细胞发生凋亡。由于诱导细胞凋亡率与24 h的IC50有一定差距,因此知母皂苷AⅢ对B16细胞生长的影响可能不仅仅与激活凋亡信号通路有关,还与其他细胞生长信号通路有关。