汽巴蓝F3GA染料亲和色谱介质的制备及其对黑芸豆凝集素的特异性吸附

采用反相悬浮再生法制备6 g/100 mL的琼脂糖微球,采用环氧氯丙烷对琼脂糖微球进行二次交联,并进行染料配体汽巴蓝F3GA的偶联,得到一种新型活性Blue Beads 6FF微球。通过傅里叶变换红外光谱、扫描电子显微镜、压力流速曲线、溶胀率、泄漏率和孔隙率等对微球物理性能进行表征。结果发现,微球球形度较好,粒径大小均一,平均粒径为56.37μm左右,具有较高的孔隙率、溶胀率及广范围的pH值稳定性,且耐压能力强。以黑芸豆凝集素为目标蛋白,通过Langmuir吸附等温式拟合,结果表明该填料对黑芸豆蛋白有较高的吸附量(19.7 mg/mL),微球吸附性能良好,可实现对凝集素蛋白的快速分离和纯化。

大黑花芸豆凝集素的分离纯化及温度、pH、色氨酸修饰对其活性的影响(英文)

大黑花芸豆（Phaseolus multiflorus．Willd）种子经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析（DEAE-Sepharose）、阳离子交换层析（CM-Sepharose）和Sephacryl S-200分子筛层析得到凝集素样品（PML）。经SDS-PAGE检测为一分子量约为28k的单一条带，Sephacryl S-100凝胶过滤测得其表观分子量约为56kD表明PML是由两个相同亚基组成的蛋白。温度低于60℃时，PML较为稳定，当温度达80℃时，其凝血活性完全丧失；pH为5．6—9对活性影响不大，pH为12时，活性大部分丧失；高温和强碱对荧光光谱有较大影响。NBS修饰Trp结果表明，在天然状态下有3个色氨酸分子被修饰，其中第二和第三个色氨酸分子对其活性至关重要。