帕金森病黑质多巴胺神经元的凋亡与其发病机制(英文)

目的:研究帕金森病黑质多巴胺神经元的死亡机制。方法:用四唑盐法及流式细胞仪观察囊泡单胺类转运体(VesicularMonoamineTransporter,VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬细胞瘤(pheochromocytomacell,PC12)细胞凋亡的影响。结果:多巴胺浓度为0.15,0.30,0.45,0.60mmol/L时,PC12细胞生存率为(89.3±7.7)%,(62.9±4.3)%,(42.5±2.7)%,(37.6±3.7)%,与对照组100%比较0.30组差异有显著性意义(t=2.373～5.323,P<0.05),0.45组与0.60组比较差异有显著性意义(t=4.673～5.323,P<0.01),利血平协同多巴胺作用时,其生存率为(73.7±3.9)%,(49.8±2.1)%,(31.6±1.9)%,(20.1±1.7)%,与对照组100%比较,差异有显著性意义(t=3.043～5.673,P<0.05)。结论:VMAT功能抑制引发了多巴胺的内源性毒性,进而诱发多巴胺神经元的凋亡,可较好解释帕金森病的发病机制。

雌激素对6-羟基多巴胺诱导的黑质多巴胺神经元损伤作用的影响

目的 研究雌激素对 6 羟基多巴胺所致的黑质多巴胺神经元损伤作用的影响。方法 将 2 0只成年雌性大鼠切除双侧卵巢后分为卵巢切除组 (非替代组 )和卵巢切除 +雌二醇替代组 (替代组 ) ,分别采用酪氨酸羟化酶 (TH)和胶质酸性纤维蛋白 (GFAP)免疫组化法检测两组大鼠黑质神经元及反应性星形胶质细胞的数目 ,采用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测纹状体区肿瘤坏死因子 α(TNF α)的水平。结果 替代组损伤侧黑质TH阳性细胞数较未损伤侧明显减少 (P <0 0 1) ,但较非替代组损伤侧显著增多 (P <0 0 1) ;替代组损伤侧黑质GFAP阳性细胞数较非替代组损伤侧明显减少 (P <0 0 5 ) ;替代组损伤侧纹状体TNF α水平较非替代组损伤侧纹状体TNF α明显降低 (P <0 0 5 )。结论 雌激素可能通过降低TNF α水平 ,减轻炎性反应 ,对黑质多巴胺神经元起保护作用。

艾司西酞普兰对帕金森病大鼠运动行为学及黑质多巴胺神经元的影响

目的观察艾司西酞普兰(ESC)对帕金森病(PD)大鼠运动行为学及黑质多巴胺神经元的影响,并探讨可能机制。方法将30只PD大鼠随机分为PD组、ESC组、ESC+LY294002组,各10只。另10只仅做假手术,设为Sham组。造模成功后,ESC组给予ESC 10 mg·kg^(-1)(溶于生理盐水),灌胃;ESC+LY294002组给予ESC 10 mg·kg^(-1),灌胃,同时给予0.5 mg·kg^(-1) LY294002,静脉注射;Sham组、PD组给予等体积生理盐水灌胃及静脉注射。4组大鼠每天给药1次,连续干预4周。观察大鼠运动行为学;检测黑质丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;以免疫组化法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)表达;以蛋白质印迹法检测黑质磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mTOR)、p-mTOR蛋白表达。结果Sham组、PD组、ESC组、ESC+LY294002组的旷场实验跨格次数分别为(31.92±4.10),(4.44±0.62),(23.21±3.12),(15.73±7.33)次,旋转圈数分别为(1.53±0.16),(9.12±1.23),(4.27±0.57),(6.65±0.75)r·min^(-1),黑质MDA含量为(1.31±0.28),(5.02±0.69),(2.50±0.45),(3.42±0.51)nmol·mg^(-1) prot;黑质TH平均光密度值分别为2.01±0.39,0.19±0.02,1.03±0.25,0.58±0.09。上述指标及各蛋白表达量,PD组与Sham组比较,ESC组与PD组比较,ESC+LY294002组与ESC组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论ESC可改善PD大鼠运动行为学、黑质氧化应激及病理学变化,保护黑质多巴胺神经元,可能通过激活PI3K/Akt信号通路来实现。

脂多糖诱导黑质多巴胺能神经元变性中小胶质细胞的反应

目的 探讨小胶质细胞活化规律与脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)诱导黑质多巴胺 (DA)能神经元变性的关系。方法 脑立体定位注射LPS入大鼠脑黑质后 ,采用特异性抗体OX 4 2标记不同时间点小胶质细胞的激活情况 ;酪氨酸羟化酶 (tyrosine hydroxylase ,TH)免疫组织化学观察DA能神经元损害变化。结果 小胶质细胞在LPS注入黑质 6h后开始出现部分激活。 12h大部分激活 ,为“灌木丛样”小胶质细胞 ;2 4h已完全激活 ,呈现“阿米巴样” ,在随后的 30d内 ,基本维持在此形态。而TH阳性细胞数在第 3d开始出现下降 ,与对照组相比下降达 4 5 % ,14d时下降至 5～ 10 % ,至30d时几乎完全消失。结论 小胶质细胞的激活先于DA能神经元变性 ,其激活介导的炎症反应在PD发病中具有重要的神经破坏作用。

大鼠行为学改变与黑质多巴胺能神经元的相关性研究

目的 观察毁损黑质多巴胺能神经元大鼠行为学及其形态学变化特点 ,探讨两者之间的相关性。方法 利用 6 -羟基多巴胺 (6 - OHDA)单侧一点注射大鼠黑质致密区 (SNc) ,特异毁损多巴胺 (DA )能神经元 ,采用开野实验观察术后 1d、3d、5 d、7d、14 d、2 1d行为学变化 ;利用 Nissl染色、HE染色、免疫组织化学方法和电镜的方法 ,观察各时间点黑质形态学变化。结果 毁损侧 DA能神经元逐渐减少 ,超微结构损伤逐渐加重 ;开野实验中旋转、探究、后肢站立和穿梭行为在术后 1d即有显著改变 (与对照组比较 P<0 .0 5 ) ,其中 ,旋转行为与毁损程度呈正相关 (r=0 .4 71,P <0 .0 1) ,探究、后肢站立和穿梭行为与毁损程度呈负相关 (r分别为 - 0 .719、- 0 .5 89、- 0 .5 94 ,P <0 .0 1) ,修饰行为与毁损程度无相关性 (r=- 0 .2 2 7,P>0 .0 5 )。结论 黑质 DA能神经元丢失是毁损大鼠行为改变的病理学基础 ,开野实验可作为丢失程度的敏感行为学观察指标。

帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元的氧化应激研究

目的 探索帕金森病模型大鼠黑质多巴胺能神经元的氧化应激发病机制。方法 通过立体定位仪 ,将 6-OHDA注入大鼠一侧纹状体内制备 PD模型 ,2周后观察动物的行为学改变 ,2个月后观察黑质纹状体等的病理形态学变化 ,检测模型组、假手术组和正常对照组的超氧化物歧化酶 (SOD)的活性 ,丙二醛 (MDA)、一氧化氮(NO)代谢产物 (NO x)的含量的变化。结果 成功 PD模型鼠有 2 2只。光镜下 HE染色示模型组右侧黑质的多巴胺神经元受损 ,数目减少。模型组右侧黑质的 SOD的含量下降 ,MDA及 NO x含量明显升高 ,与左侧、假手术组及正常对照组相比有显著差异 (P>0 .0 5)。结论 6-OHDA纹状体内双靶点注射法是一种有效的制备 PD模型的方法。帕金森病大鼠模型黑质内 SOD活性下降 ,MDA、NO x含量升高 ,氧化应激在

重组α-突触核蛋白对SD大鼠黑质多巴胺能神经元的作用

目的:研究重组人全长α-突触核蛋白对大鼠黑质多巴胺能神经元的毒性作用。方法:原核表达、鉴定α-突触核蛋白;雄性SD大鼠30只,随机分为α-突触核蛋白注射组、六羟多巴注射组及α-突触核蛋白和六羟多巴联合注射组。用立体定位的方法分别右侧黑质注射α-突触核蛋白,六羟多巴及α-突触核蛋白+六羟多巴,左侧黑质注射等量的生理盐水,测定大鼠纹状体多巴胺含量和黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元数目。结果:六羟多巴和α-突触核蛋白+六羟多巴注射使注射侧多巴胺分别减少到对照侧的36.98%和21.79%,多巴胺能神经元数减少到30.81%和28.05%。而α-突触核蛋白注射对纹状体多巴胺和黑质多巴胺能神经元数目无显著影响。结论:没有发现重组α-突触核蛋白对大鼠黑质多巴胺能神经元有明显的毒性作用。

脂多糖诱发大鼠黑质多巴胺能神经元变性

目的 :观察脂多糖 (Lipopolysaccharide,LPS)对黑质多巴胺 (DA)能神经元的毒性作用 ,探讨帕金森病 (PD)发病机制。方法 :脑立体定位注射LPS入大鼠脑黑质后 ,采用酪氨酸羟化酶 (Tyrosinehydroxylase,TH)免疫组织化学染色 ,观察不同剂量LPS和 5 μgLPS注射后不同时间点黑质DA能神经元的损伤状况。结果 :0 1～ 10 μgLPS注射后14d ,导致TH+ 细胞数下降分别为 5 %、15 %、2 0 %、4 5 %、96 %和 99% ;5 μgLPS注射后与对照组相比 ,TH+ 细胞数3d后开始下降 ,14d明显减少 ,仅为 5 % ,30d后基本消失。结论 :LPS能诱导黑质DA能神经元变性 ,呈剂量和时间依赖性。

环加氧酶-2对帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元的影响

目的 观察COX 2对帕金森病小鼠黑质多巴胺能神经元的影响。方法 选用C5 7BL种系环加氧酶 2 (Cyclooxygenase 2 ,COX 2 )缺陷小鼠 ,腹腔注射 1 甲基 4 苯基 1,2 ,3,6 四氢吡啶 (MPTP)制备帕金森病小鼠模型 ,用免疫组织化学方法。结果 行为学及免疫组织化学观察显示 ,野生型帕金森病小鼠的死亡率明显高于COX 2缺陷杂合子帕金森病小鼠 (P <0 0 1) ;野生型帕金森病小鼠黑质致密部酪氨酸羟化酶 (Ty rosineHydroxylase ,TH)免疫反应阳性神经元数目较杂合子帕金森病小鼠明显减少 (P <0 0 1)。结论 COX

大鼠黑质多巴胺能神经元的形态学发育

目的 探讨大鼠黑质多巴胺(DA)能神经元的形态学发育和分布特征。方法 行大鼠出生前后不同时期的脑黑质区段连续冠状石蜡切片,以酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色方法显示DA能神经元,焦油紫染色确定黑质区域,进行光镜观察以及细胞形态学指标的测量。结果 胚胎(embryonicday ,E)第13天龄(E13)时,开始于中脑腹侧出现TH阳性(TH+ )细胞。至E16时,中脑腹侧这些细胞的数量和密度达到最大值,此后又逐渐下降,且于出生后早期这些TH+ 细胞的减少最为显著。至生后第14天龄(P14 )时,中脑腹侧黑质区域TH+ 细胞的分布和密度不再明显改变,与成年期状态接近。胚胎期,TH+ 细胞多为圆形或椭圆形,随着胚胎发育,其突起逐渐伸长,分支也逐渐增多。出生后,TH+ 细胞逐渐表现为成熟神经元的形态特征。结论 大鼠脑黑质DA能神经元的发育发生在个体出生前后,呈现先大量形成后又逐渐减少的过程,与此同时,其形态趋向成熟。至P14时,DA能神经元的分布和形态学发育基本成熟。

神经营养因子对中脑黑质多巴胺能神经元的作用

神经营养因子对帕金森氏病等神经退行性疾病的治疗显示出诱人的前景。在对中脑黑质多巴胺能神经元有作用的神经营养因子当中 ,以胶质细胞系源性神经营养因子和脑源性神经营养因子的效应更强大。此外 ,中脑黑质多巴胺能神经元的主要靶区纹状体细胞以及该神经元局部的胶质细胞可产生对此神经元有作用的神经营养因子。本文概述了有关的研究成果 。

Neurotropin拮抗6-OHDA诱导大鼠早期黑质多巴胺能神经元的凋亡

【目的】探讨神经托平(neurotropin)对6-OHDA诱导的SD(Sprague-Dawley)大鼠黑质多巴胺能神经元极早期凋亡的拮抗作用。【方法】实验组SD大鼠,按完全随机设计分3组,每组16只,分别用神经托平15、30、45U·kg-1·d-1腹腔内注射,对照组(32只)用等体积的生理盐水腹腔内注射。2周后用6-OHDA立体定向注射于大鼠纹状体区。在6h、12h、24h、48h、72h、96h、1周及2周时采用原位末端标记法(TUNEL)检测黑质细胞的凋亡,用流式细胞仪检测凋亡率,用免疫组化法检测纹状体区多巴胺能神经纤维的含量的变化。【结果】对照组在6-OHDA作用后的6h即可检测到黑质细胞凋亡,在48h达到高峰,凋亡率6.4%±0.2%;神经托平30、45U·kg-1·d-1预处理后则可降低细胞凋亡(P<0.05),其中45U·kg-1·d-1预处理组在48h仅为2.3%±0.1%,与实验组比有统计学意义,同时纹状体区多巴胺能神经纤维含量的减少较对照组亦有统计学意义(P<0.05);而15U·kg-1·d-1组则无明显效果。【结论】大剂量神经托平可拮抗神经毒性物质对黑质神经元的凋亡作用,避免了投射至纹状体区多巴胺能神经递质的减少,为今后探讨帕金森病的防治提供了重要的理论依据。

人参皂甙Rg1保护多巴胺能神经元的实验研究

帕金森病(PD)是中老年人常见的一种中枢神经系统变性疾病,其特征性病理变化是中脑黑质多巴胺能神经元变性坏死.近年来许多证据显示氧化应激反应增强是导致帕金森病黑质多巴胺能神经元凋亡的主要因素.传统的帕金森病治疗包括多巴胺替代疗法、抗胆碱能药物等,近年神经元保护治疗也逐步成为新的治疗热点.人参皂甙是从祖国传统中药人参中提取的有效成分之一,已有的研究提示,人参皂甙Rg1可保护大鼠大脑皮质神经细胞,防止细胞凋亡的发生.但是,人参皂甙Rg1对多巴胺能神经元是否也有保护作用,国内外尚未见文献报道.

帕金森病相关转录因子Nurr1在多巴胺能神经元中的作用

黑质多巴胺能神经元对于运动控制、药物成瘾、学习记忆等功能的调控至关重要[1]。中脑多巴胺能神经元的变性死亡是帕金森病（Parkinson＇s disease,PD）发生的主要病理特征之一。近年来研究发现核相关受体因子（nuclear receptor related factor1,Nurr1）蛋白对于多巴胺能神经元的发育分化、存活和变性具有重要意义。

还原型谷胱甘肽对黑质多巴胺能细胞保护作用的实验研究

目的 观察还原型谷胱甘肽 (GSH)对帕金森病 (PD)大鼠模型的保护性治疗作用 ,并探讨其作用机制。方法 应用 6 羟基多巴制作PD大鼠模型 ,随机分为 4组 :模型组 ,GSH组 ,左旋多巴 (L dopa)组 ,GSH并L dopa组 ,并设正常组 ,给药结束后行电镜观察 ,并测定各组其余大鼠黑质区谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)、丙二醛 (MDA)、活性氧 (ROS)及线粒体呼吸链酶复合体Ⅰ水平 ,测定尾状核头部多巴胺 (DA)、高香草酸 (HVA)及单胺氧化酶 B(MAO B)水平。结果 ①GSH组旋转行为无明显变化 ,但GSH并L dopa组可使大鼠旋转行为明显改善 ;②GSH能减轻黑质区氧化应激损伤 ;③GSH能增强黑质呼吸链酶复合体Ⅰ活性 ;④GSH组对MAO B活性及DA、HVA含量和DA/HVA比值均无明显影响 ;⑤电镜下发现模型组存在大量中、晚期凋亡细胞 ,而GSH组以早、中期凋亡为主。结论 ①GSH能减轻PD模型大鼠黑质区氧化应激损伤 ,并对线粒体呼吸链具有一定保护作用 ;②GSH与L dopa合用 ,既可有效改善症状 ,又对残存DA能神经元具有保护性治疗作用。

小鼠帕金森病模型多巴胺转运体、脑血流灌注与葡萄糖代谢变化

目的联合观察不同剂量1甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)对小鼠多巴胺神经系统、局部脑血流灌注和葡萄糖代谢的损伤效应。方法8周龄雄性C57BL6小鼠,按体重腹腔注射0～80mgkg的MPTP,10d后用免疫组织化学法测定黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数,放射自显影法测定尾壳核多巴胺转运体(DAT)相对含量、尾壳核和丘脑局部血流量与葡萄糖代谢水平。结果随MPTP用量增加,DAT损耗和TH阳性细胞数减少程度均加重,两者呈正相关(r=0.998,P<0.05)。其中80mgkg组平均DAT损耗达79.8%(P<0.001),TH阳性细胞数减少达54.1%(P<0.001)。尾壳核和丘脑局部血流量在各组之间差异无显著性(P>0.2)。尾壳核、丘脑葡萄糖代谢在80mgkg组分别下降了3.0%和5.4%(P<0.05)。结论MPTP引起黑质多巴胺神经元和尾壳核DAT丧失存在明显剂量效应关系,尾壳核和丘脑的局部血流灌注变化不明显,葡萄糖代谢在高剂量组有轻微下降。

陈蒜提取物抑制大鼠黑质神经元损伤及NF-κB核转位

以6-羟基多巴(6-OHDA)建立帕金森病(PD)模型大鼠,研究陈蒜提取物对模型大鼠黑质多巴胺能神经元凋亡以及核转录因子κB(NF-κB)核转位的影响。实验大鼠分别给予低、中、高剂量陈蒜提取物,观察大鼠行为变化与阿朴吗啡诱导的旋转运动,并采用免疫组化技术检测实验大鼠黑质多巴胺神经元的酪氨酸羟化酶(TH)和NF-κB表达情况。结果显示,陈蒜提取物能显著抑制阿朴吗啡诱导的模型大鼠旋转,可抑制黑质多巴胺能神经元的损伤与NF-κB的核转位。推测陈蒜提取物抑制黑质神经元凋亡的机理与抑制NF-κB的激活有关。

应用6-羟基多巴胺建立帕金森病大鼠模型的稳定性评价(英文)

背景:应用6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine,6-OHDA)损毁黑质多巴胺神经元(nigraldopaminergicneuron,NDN)制作的大鼠模型,在目前帕金森病的研究中应用最广,但由于黑质致密部体积狭小,技术难度大,故模型制备成功率一般仅为30%～40%左右。目的:探讨提高6-羟基多巴胺帕金森病大鼠模型成功率的方法,并对模型进行评价。设计:完全随机的实验研究。地点和材料:实验在安徽中医学院第一附属医院中心实验室完成,实验材料包括SD大鼠,6-OHDA,阿朴吗啡,兔抗TH血清,ABC试剂盒,SR-6N大鼠脑立体定向仪,JEM-100CX电镜。干预:取SD大鼠90只,将6-OHDA立体定向微量注射于左侧黑质区及黑质纹状体通路,观察大鼠行为及黑质细胞形态学变化。主要观察指标:旋转行为,免疫组织化学观察多巴胺能神经元数量,电镜观察多巴胺能神经元形态改变。结果:90只大鼠中经阿朴吗啡诱导后有64只(占71%)恒定转向右侧且结果稳定,旋转圈数30min>210r,被视为成功大鼠模型;免疫组化观察发现注射侧黑质区多巴胺能神经元较对侧明显减少,电镜观察发现其普遍存在凋亡及坏死样改变。结论:应用本方法可较快建立稳定的成功率较高的大鼠模型,但在病理和行为学等方面同自然患者仍有较多差异。