银杏叶提取物防止帕金森病大鼠黑质细胞损伤的实验研究

目的 探讨银杏叶提取物防止帕金森病大鼠黑质细胞损伤的可能性。方法 通过帕金森病大鼠模型 ,采用 TUNEL法、 Nissl's染色、HE染色、旋转行为观察的方法 ,与对照组比较 ,观察模型成功后 EGb治疗 1 d、 5d、 1 0 d大鼠旋转行为及黑质病理变化。结果 EGb组黑质凋亡细胞数、旋转圈数均较 PD组减少 ,HE染色结构均得到改善。

电针对帕金森病模型大鼠黑质细胞线粒体复合物活性的影响

目的通过检测帕金森病(PD)模型大鼠黑质细胞线粒体复合物活性的改变,探讨电针治疗对黑质细胞线粒体功能的影响,以期揭示电针治疗PD的机制。方法将48只SD雄性大鼠随机分成4组:正常组、溶剂对照组、模型组、电针治疗组;采用鱼藤酮颈背部皮下注射法制备模型,按行为学评分标准记分;治疗结束后采用免疫组织化学技术检测中脑黑质酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元数目;同时采用紫外分光光度法检测线粒体复合物Ⅰ～Ⅳ的活性。结果与模型组相比较,电针治疗组行为学异常明显改善(P<0.05)。电针治疗组黑质TH阳性神经元数目较模型组显著增加(P<0.01)。模型组的线粒体复合物Ⅰ的活性明显低于正常组(P<0.01),电针治疗组的线粒体复合物Ⅰ的活性明显高于模型组(P<0.01)。各组线粒体复合物Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ无显著差异。结论粒体复合物Ⅰ功能障碍在PD发病中占有重要的地位,并可能是针刺治疗作用的靶点之一。

帕金森病大鼠黑质细胞凋亡与左旋多巴剂量的关系(英文)

目的研究左旋多巴对黑质细胞的神经毒性作用,探讨左旋多巴治疗帕金森病(PD)的最佳方案。方法选用Wistar大鼠,采用改良的Thomas方法,用6-OHDA行脑立体定向注射术制作大鼠帕金森病(PD)模型100只,随机分为两大组:PD模型组(n=25)、L-dopa治疗组(n=75),采用TUNEL方法观察左旋多巴小、中、大3种不同剂量犤10,50,100mg/(kg·d)犦、不同的作用时间(1,3,5,7d)对帕金森病大鼠黑质细胞的毒性作用,并观察治疗后7d各项指标的变化。结果同一时点PD大鼠黑质细胞凋亡数随着左旋多巴治疗的时间、剂量增加而增加;1～7d小剂量组:从(412±35)个/mm2减少到(403±22)个/mm2,中剂量组从(468±33)个/mm2增加到(605±37)个/mm2,大剂量组从(759±61)个/mm2减少到(486±37)个/mm2;7～14d各时点减少。结论左旋多巴能加速PD大鼠黑质细胞凋亡,小剂量、间隔使用左旋多巴能有效减少其神经毒性作用。

抑颤汤对帕金森病模型大鼠行为学及脑黑质细胞形态学的作用

目的 :探讨抑颤汤治疗帕金森病 (Parkinson′sdisease ,PD)的作用机理。方法 :建立PD大鼠模型 ,设立正常组 (给等量生理盐水 )、模型组 (给等量生理盐水 )、抑颤汤组 (给抑颤汤 1 7～ 1 8g/只 ) ,分别每天灌胃 1次 ,连续 8周 ;并观察PD大鼠行为特征及脑黑质细胞形态学变化。结果 :与模型组比较 ,抑颤汤组大鼠治疗后旋转次数明显减少 (P <0 0 1) ;脑黑质细胞数明显增多 ,神经元体积较饱满 ,结构较清晰 ,细胞内高尔基体、线粒体等趋于正常。结论 :抑颤汤能明显改善PD模型大鼠的旋转行为 ,促进受损脑黑质细胞修复 。

抑颤汤对帕金森病大鼠旋转行为、黑质细胞及神经递质的影响

目的:探讨抑颤汤治疗帕金森病在脑黑质细胞及神经递质方面的作用机制。方法:运用6-羟基多巴诱发法建立帕金森病大鼠模型,通过随机分组,观察抑颤汤对帕金森病大鼠行为特征的影响;采用脑组织液微透析技术,用高效液相色谱法测定各组大鼠脑组织细胞外液中儿茶酚胺类物质含量的变化,并分别用光镜和电镜观察各组大鼠脑黑质细胞的形态学变化。结果:治疗后40min旋转次数抑颤汤组为(61.63±17.93)次,生理盐水组为(340.90±52.97)次,表明抑颤汤能明显改善帕金森病模型大鼠的旋转行为(t=2.762,P<0.01);帕金森病大鼠损毁侧脑组织透析液中3,4-二羟基苯酸(DOPAC)、高香草酸、多巴胺、5-羟色胺水平明显低于未损毁侧(P<0.05或P<0.01),治疗后抑颤汤组含量则明显高于生理盐水对照组(P<0.05或P<0.01),而未损毁侧各递质的含量3组比较差异均没有统计学意义(P>0.05);病理学观察,大鼠受损侧脑黑质神经细胞数量抑颤汤组明显比生理盐水组多,且神经元体积较饱满,结构较清晰,细胞内高尔基氏体、线粒体等接近正常。结论:抑颤汤能减轻帕金森病模型大鼠脑黑质细胞的受损程度,促进其修复,改善黑质纹状体系统的分泌功能,提高脑组织中内源性儿茶酚胺类物质的含量,从而改善帕金森病大鼠的旋转行为。

银杏叶提取物对帕金森病大鼠黑质细胞的保护作用

目的 观察细胞凋亡在帕金森病发病过程中的作用 ,探讨银杏叶提取物用于帕金森病防治的可能性。方法 通过 6 OHDA脑立体定向注射术建立大鼠帕金森病模型 ,采用生化、TUNEL、电镜的方法观察帕金森病大鼠模型制作后 1、7、14、2 1d黑质细胞自由基 (丙二醛、过氧化物歧化酶 )、细胞凋亡数变化及超微结构的改变 ,同时观察使用银杏叶提取物 (EGb组 )治疗对上述指标的影响。结果 在大鼠帕金森病发病过程中PD组、EGb组大鼠黑质丙二醛 (MDA)、过氧化物歧化酶 (SOD)、细胞凋亡数随时间增加而升高 ,PD组大鼠各指标均高于EGb组 (P <0 .0 5 ) ,PD组黑质细胞超微结构改变符合典型的凋亡改变。结论 细胞凋亡参与了帕金森病发病 。

百草枯增加小鼠黑质细胞caspase-3 mRNA的表达及其酶活性

目的 探讨百草枯对C5 7bl/ 6小鼠黑质细胞caspase 3mRNA的表达及其活性的影响。 方法 应用RT-PCR技术检测C5 7bl/ 6小鼠暴露于百草枯不同时间后黑质细胞中caspase 3mRNA表达的变化 ,并采用比色法测定相应时间点黑质细胞的caspase 3酶的活性。 结果 C5 7bl/ 6小鼠暴露于百草枯后黑质细胞中caspase 3mRNA的表达明显增加 ,caspase 3酶的活性也相应地增加 ,这种增加与黑质细胞的凋亡相一致。结论 百草枯可诱导C5 7bl/ 6小鼠黑质细胞表达caspase 3mRNA ,增加caspase 3酶的活性 。

辅酶Q_(10)对帕金森病大鼠黑质细胞损伤的保护作用

目的探讨辅酶Q10(coenzyme Q10,CoQ10)对帕金森病大鼠黑质细胞损伤的保护作用。方法以立体定向技术,向大鼠一侧纹状体内定向注射6-OHDA,建立早期帕金森病的大鼠模型。对照组只建立模型,不给CoQ10,研究组术前一周开始预服CoQ10,连用5周,手术4周后采用Nissl染色和TUNEL法观察黑质病理变化。结果研究组黑质凋亡细胞数(31.75±2.99)与对照组(43.50±6.56)比较明显减少(P<0.05),Nissl染色结构得到改善。结论CoQ10能有效防止帕金森病大鼠黑质细胞损伤。

帕金森病大鼠黑质细胞凋亡与Bax蛋白表达相关性的实验研究

目的 观察 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)能否诱发黑质细胞凋亡以及Bax蛋白表达与黑质细胞凋亡的关系。方法 通过脑立体定位注射6 OHDA的方法建立大鼠帕金森病 (Parkinsondisease ,PD)模型 ,采用TUNEL方法、免疫组织化学、电镜观察等方法 ,选择 6 羟基多巴胺注射术后 1d、7d、1 4d、2 1d为研究时点 ,观察大鼠PD模型形成过程中黑质细胞凋亡的数量及超微结构变化情况 ,并检测黑质细胞Bax蛋白表达情况变化。结果 用TUNEL法发现黑质细胞存在细胞凋亡 ,与对照组存在显著性差异 ,1d～ 2 1d细胞凋亡数逐渐增高 ;电镜观察在此过程中黑质细胞存在典型的细胞凋亡 ,Bax蛋白表达在 1d为最高 ,其后很快下降 ,但显著高于对照组。结论 6 OHDA能诱发大鼠黑质细胞凋亡 ,Bax蛋白是黑质细胞凋亡的关键启动因素。

6-羟基多巴胺诱发大鼠黑质细胞凋亡的实验研究

目的 :为了解证实细胞凋亡参与了帕金森病 (Parkinsondisease,PD)的发病和黑质细胞凋亡的调控因素。方法 :通过脑立体定位注射 6 羟基多巴胺 (6 OHDA)建立大鼠PD模型。采用TUNEL法、原位杂交技术、电镜观察等 ,选择 6 DHDA注射术后 1、3、5、7、14及 2 1d为研究时点 ,观察大鼠PD模型形成过程中黑质细胞凋亡的数量及超微结构变化情况 ,并检测黑质细胞Bcl 2mRNA、P5 3mRNA表达情况及铁的浓度。结果 :用TUNEL法发现黑质细胞存在细胞凋亡 ,与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,7d细胞凋亡数为最高 ,2 1d最低 ;电镜观察在此过程中黑质细胞存在典型的细胞凋亡 ,并逐渐加重 ;Bcl 2和铁随时间增加而升高 ,P5 3则在 1d为最高 ,其后很快下降 ,但都高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :6 OHDA能诱发大鼠黑质细胞凋亡 ,细胞凋亡参与了PD发病 ,并受到Bcl 2、P5 3和铁的影响。

混合胎垂体下丘脑黑质细胞的微囊研究

为了将微囊包膜技术应用于垂体移植，本文采用海藻酸钠包裹混合的胎垂体下丘脑黑质细胞，通过测定微囊细胞培养液中生长激素（ＧＨ）与泌乳素（ＰＲＬ）分泌水平、促甲状腺素释放激素（ＴＲＨ）刺激ＰＲＬ分泌试验及用微囊细胞免疫兔等方法，发现微囊细胞分泌活性良好，微囊内垂体细胞功能受到下丘脑细胞分泌因子的调节，且ＰＲＬ分泌受到控制；微囊膜能通透垂体激素与下丘脑因子，并具有免疫隔离作用。结果提示：本微囊可作为具有免疫隔离性能的移植物．可在颅外移植而垂体细胞功能仍能正常发挥，同时能避免移植后高泌乳素血症发生。

微囊胎垂体下丘脑黑质细胞移植实验研究

微囊包膜的股垂体下丘脑黑质细胞移植于去垂体兔腹腔中，术后观察移植兔12周。结果：移植后兔血清中GH与PRL浓度可平稳在一定水平，T4浓度自第2周起开始上升并逐渐接近正常水平，兔体重于第3周起开始增加，各靶器官在12周后无明显萎缩。提示本微囊可在促垂体区（HTA）以外移植而重建正常垂体功能达12周以上。

褪黑素对离体帕金森病模型黑质NF-κB表达及黑质细胞凋亡的影响

目的研究褪黑素(melatonin,MT)对6-羟多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)所制造的离体帕金森病(Pakinson disease,PD)模型的影响。方法将14只大鼠分成假手术组、MT组和对照组3组,MT组大鼠经腹腔连续3 d注射MT,另两组以相同方法注射等量生理盐水,然后MT组和对照组分别取脑片置于含6-OHDA的人工脑脊液中孵育2 h。应用TUNEL法、免疫组化技术观察黑质细胞凋亡的数量并检测黑质细胞NF-κBp65表达情况。结果假手术组未见明显黑质细胞凋亡,MT组较对照组黑质细胞凋亡明显减少,且黑质细胞NF-κB p65的表达也有所减少,与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论MT对离体PD模型具有保护作用,其机制可能为抗凋亡。

同型半胱氨酸对黑质细胞凋亡及NF-κB表达的影响

目的研究同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对帕金森(parkinson’s disease,PD)大鼠的黑质细胞的细胞凋亡及NF-κB表达的影响作用。方法100只SD鼠随机分为四组,即正常对照组、6-OHDA组、Hcy组、6-OHDA+Hey组,通过脑立体定向注射6-羟多巴胺建立大鼠PD模型,2小时后同侧脑立体定向注射同型半胱氨酸或生理盐水,采用TUNEL法、免疫组化技术,选择实验后后4h、1d、2d、7d及14d为研究时点,观察黑质细胞凋亡的数量;并检测黑质细胞NF-κB p65的表达情况。结果局部注射同型半胱氨酸能明显增加6-羟基多巴胺引起的黑质细胞凋亡,并增加黑质细胞NF-κB p65的表达,与对照组存在显著性差异(P<0.01)。结论Hcy可以促进6-OHDA引起的黑质细胞凋亡,NF-κBp65的激活可能是机制之一。

大鼠胎脑黑质细胞培养及PD鼠纹状体内悬液微移植研究

目的 探讨如何提高移植存活率和保存供体组织。方法 :胎脑黑质细胞原代培养 6天后 ,做免疫组化染色鉴定其生物活性 ,进行移植质量的人为控制。然后 ,比较各种移植技术对移植后细胞存活率、胶质细胞反应程度及功能改善的影响。实验动物分 A、B、C、D四组。A组为假手术组 ,B组为立即单靶点移植组 ,C组为立即多靶点微移植组 ,D组为培养后多靶点微移植组。结果 :B、C、D组术后均有功能改善 ,C组各时间点均比 B组改善显著 (P<0 .0 1) ,D组术后 1月、2月的功能改善程度较 C组明显 P<0 .0 1)。组织学也证实 :C、D组与 B组相比 ,移植细胞存活率及与宿主脑的整合程度显著提高 ,细胞外溢现象少 ,炎症及胶质细胞反应轻微 ,且移植细胞有存活—迁移—分化—神经纤维再分布的发育规律。结论 :1移植的黑质细胞能通过结构整合重塑神经功能。2多靶点微移植较经典悬液移植技术能提高存活率和神经纤维再分布程度 ,减轻非特异性炎症和胶质细胞反应。 3黑质细胞体外培养为其生物活性鉴定和建立供体组织库提供实验依据。 4移植实验过程中的几点体会值得注意。

人胎黑质细胞的冷冻保存

采用台盼蓝染色法，观察了第３～６月人胎黑质细胞冷冻保存的细胞存活率，结果：①胎龄３～６月人胎黑质细胞冷冻保存后均可存活，但以胎龄３和４月细胞存活率较高。②液氮保存的细胞存活率不受保存时间的影响，而４℃保存的细胞存活率随保存时间的延长而逐渐降低。结果提示，液氮保存人胎黑质细胞的保存条件以胎龄３和４月为宜。

不同剂量左旋多巴对正常大鼠黑质细胞作用的研究

目的 研究不同剂量左旋多巴对正常大鼠黑质细胞作用 ,探讨左旋多巴合理治疗帕金森病的方法。方法 采用TUNEL、Nissl染色 ,电镜观察手段 ,观察小、中、大 3种不同剂量 [10mg/(kg·d)、5 0mg/(kg·d)、2 0 0mg/(kg·d) ]左旋多巴 ,不同作用时间 (1天、7天、14天 )对正常大鼠黑质细胞作用。结果 对照组 ,小、中剂量左旋多巴给药组黑质细胞凋亡数 ,黑质细胞超微结构 ,尼氏细胞数无显著差异 ;大剂量给药组大鼠黑质细胞数随着左旋多巴使用时间、剂量的增加而增加 ,尼氏细胞则随左旋多巴使用时间、剂量增加而减少。结论 大剂量左旋多巴对正常大鼠黑质细胞有神经毒性作用 。

胚鼠黑质细胞悬液移植于帕金森病模型鼠侧脑室的实验研究

将胚鼠中脑腹侧组织制成细胞悬液移植于帕金森病(PD)模型鼠侧脑室,动态观察受体鼠在移植前后的行为变化。移植后16周应用诱发荧光及免疫细胞化学等方法,对移植物在受体鼠脑内的存活及生长情况进行了研究。结果,受体鼠旋转行为明显改善,侧脑室内可见黄绿色荧光细胞及酪氨酸羟化酶(TH)免疫反应阳性细胞,有的发出突起伸向室管膜及迁于尾核区.提示:移植的胚鼠黑质细胞生长良好,似作为触液神经元发挥其作用。

胚鼠黑质细胞分别移植于帕金森病模型鼠纹状体和侧脑室的比较研究

胚鼠黑质细胞悬液分别移植于帕金森病（ＰＤ）鼠纹状体和侧脑室。移植后两组动物的Ａｐｏｍｏｒｐｈｉｎｅ诱导旋转行为均得到极明显改善，移植细胞生长发育良好。移植细胞和宿主细胞间的信息联系，在纹状体内可能以突触传递方式为主。侧脑室内移植的黑质细胞，相当于人工放置的“接触脑脊液神经元”，可能主要通过非实触传递方式而发挥作用。