抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关性僵人综合征并自身免疫性多内分泌腺病综合征Ⅱ型1例并文献复习

目的报告1例抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关性僵人综合征(SPS)并发自身免疫性多内分泌腺病综合征Ⅱ型(APS-Ⅱ)的病例,旨在提高临床医师对该病的认识。方法回顾性分析2022年安徽省某神经病学研究所附院收治的1例51岁女性,临床以反复腰痛、腰腹及双下肢僵硬伴无力为特点的病例资料,并复习相关文献。结果患者临床以反复腰痛、腰腹及双下肢僵硬伴无力为特点,早期误诊为分离转换障碍,后检查发现血清及脑脊液抗谷氨酸脱羧酶65抗体阳性,甲状腺球蛋白抗体及过氧化酶抗体滴度升高,空腹及餐后2 h血糖、糖化血红蛋白升高,神经电生理提示静息状态下以体轴肌为主的连续性运动单位电位发放,诊断为抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关性SPS、APS-Ⅱ(桥本甲状腺炎、1型糖尿病),予免疫治疗和对症治疗后病情改善。结论抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关性SPS并发APS-Ⅱ临床虽具有一定特异性,但由于临床罕见,易误诊、漏诊,尤其是病程早期。

谷氨酸脱羧酶(GAD)的研究进展

谷氨酸脱羧酶(GAD,EC4.1.1.15)是生物体内广泛存在的一种酶,有重要的生理学作用,能催化谷氨酸脱羧生成重要的抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA)。GAD用于医疗和食品中具有很大潜力,本文综述了GAD的研究进展和应用。

芜青中谷氨酸脱羧酶(Gad)酶性质的时空差异

该文对芜青中谷氨酸脱羧酶(Gad)粗酶的提取和优化、酶活力最适反应条件、时空分布差异及光照影响等进行对比分析,同时利用超高效液相色谱法技术(UPLC)分析测定反应产物γ-氨基丁酸(Gaba)的含量.实验结果表明,提取Gad粗酶时加入纤维素酶能提高约70%酶活力.在最适条件对比实验中,对芜青芽苗、块根、茎生长点、茎及顶端分生组织分别进行测定,其中芽苗与顶端分生组织中的酶活力较高.光照对萌发中芽苗的Gad酶活力有较大影响,避光条件下酶活力下降约75%.结果表明,芜青芽苗Gad酶活力好且易于获取,转化谷氨酸反应生成γ-氨基丁酸的转化率高.

大鼠谷氨酸脱羧酶(GAD)毕赤酵母表达重组子的构建

目的 :构建大鼠谷氨酸脱羧酶(glutamicaciddecarboxylase,GAD)巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)表达重组子 ,探索一条真核细胞高效表达rGAD的新途径。方法 :以 pUC18_GAD质粒为模板PCR扩增出大鼠GAD65基因 ,将其克隆入PGEM_Teasy载体 ,继而将其克隆到毕赤酵母分泌型质粒表达载体 pPIC9K中 ,重组质粒线性化后PEG法转染入毕赤酵母菌株GS115,PCR筛选转化子。结果 :DNA序列分析和PCR鉴定表明成功构建了大鼠谷氨酸脱羧酶 (GAD)毕赤酵母表达重组子。结论

锰对仔鼠脑尾壳核与黑质谷氨酸脱羧酶的影响

目的研究大鼠染锰后对其仔鼠脑尾壳核、黑质谷氨酸脱羧酶(GAD)活性的影响。方法将妊娠大鼠随机分为对照组(A组)和染锰组(B、C组),B、C2组染锰剂量分别为38,78mol/L,腹腔注射氯化锰,隔日一次,共8次。待其自然分娩后,取21日龄仔鼠脑组织冰冻切片,用免疫组织化学链霉抗生物素-生物素法(S-P法染色),检测仔鼠脑尾壳核、黑质GAD活性。结果21日龄仔鼠脑黑质、尾壳核GAD活性C组和A组之间比较,差异有统计学意义(P<0.01),B组和A组,B组和C组之间比较差异,有统计学意义(0.01<P<0.05)。结论孕期染锰可引起仔鼠脑尾壳核、黑质GAD活性升高,引起谷氨酸(Glu)含量下降,γ氨基丁酸(GABA)含量升高,Glu/GABA比值降低,引起学习记忆能力下降。

发芽糙米与稻谷的谷氨酸脱羧酶活力及γ-氨基丁酸含量比较

比较了糙米与稻谷发芽期间及培养结束后的静置过程中谷氨酸脱羧酶(GAD)活力、γ-氨基丁酸(GABA)及谷氨酸(Glu)含量变化情况。结果表明,糙米和稻谷在(32±1)℃条件下,以1.2 L/min的通气量,用含有0.1%L-谷氨酸、0.1%抗坏血酸的培养液浸渍发芽,生长速率和呼吸速率均以糙米为快。培养结束时,发芽糙米中GABA含量和Glu含量分别比发芽稻谷增加64.05%和14.68%,空气中放置8 h后发芽糙米中GABA含量比发芽结束时增加了24.32%,整个发芽和静置期间发芽糙米中GAD活力始终高于发芽稻谷。

比色法快速测定乳酸菌谷氨酸脱羧酶活力及其应用

基于Berthelot显色测定ω 氨基酸的反应 ,探讨了比色法快速测定谷氨酸脱羧酶活力的测定条件。结果表明 ,该方法灵敏度较高 ,重现性好 ,成本低 ,快捷 ,可替代氨基酸分析仪分析法。对乳酸菌谷氨酸脱羧酶提取液的适宜反应底物体系为 0 2mol LMacIlvaine ,pH4 7,内含 0 1mmol LPLP (5 磷酸吡哆醛 ) ,1 0mmol L底物L MSG (L 谷氨酸钠 )。 2 0 0 μL底物溶液和 1～ 1 0 0 μL酶液在 3 0℃反应 ,然后冰浴中加入 2 0 0 μL 0 2mol L硼酸缓冲液 (pH9 0 )终止反应 ,再加入 1mL 6%苯酚和 40 0 μL次氯酸钠 ,沸水浴加热 1 0min后 ,迅速冷却 2 0min ,在 63 0nm测定吸光值 ,酶反应产物γ 氨基丁酸的定量以标准曲线确定 。

Lactococcus lactis谷氨酸脱羧酶的分离纯化及部分酶学性质

采用溶菌酶处理、超声破碎、硫酸铵分级、3次DEAE SepharoseCL 6B层析、SephacrylS 200凝胶过滤等手段,从乳酸菌细胞中分离纯化得到谷氨酸脱羧酶(GAD;EC4.1.1.15).纯化酶的比活力为14.4U/mg,纯化倍数31,回收率3.8%,SDS PAGE得到亚基的相对分子质量为65000.L 谷氨酸是测试的18种氨基酸中的惟一作用底物,表明乳酸菌GAD具有高度的底物专一性.酶在pH值3.6～5.4时具有活性,pH值4.7时活性最高,pH值6.0以上时没有活力.耐热性实验表明,pH值4.7条件下处理5h后,60℃时该酶仍能保持80%以上的活性,80℃以上迅速失活,由Lineweaver Burk作图得到的GAD的Km值为1.9mmol/L.

颞叶癫痫大鼠海马内谷氨酸脱羧酶蛋白表达的动态变化及其意义

目的:观察大鼠颞叶癫痫发生后海马谷氨酸脱羧酶(glutamicaciddecar-boxylase,GAD)亚型GAD67蛋白的动态变化,探讨其意义和可能机制。方法:112只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=70)与对照组(n=42),实验组大鼠选用海人酸腹腔注射法建立颞叶癫痫模型,对照组大鼠腹腔注射无菌生理盐水。选取腹腔注射后3,6,12,24,48h,7,30d为研究的时间点,颞叶海马的CA1区、CA3区、齿状回为研究部位。腹腔给药后每天观察大鼠的行为学变化,大鼠处死前进行脑电图描记。免疫组织化学法检测GAD67蛋白的表达。结果:海人酸致痫后6h实验组大鼠海马齿状回、CA3,CA1区的GAD67蛋白表达分别为0.60±0.02,0.61±0.02,0.58±0.02,致痫后24h分别为0.33±0.03,0.32±0.03,0.31±0.02,均较对照组(0.23±0.02,0.21±0.02,0.20±0.02)增高(P<0.05或0.01),6h时增高显著。结论:颞叶癫痫大鼠海马GAD67蛋白表达的增高是癫痫发生后机体的内源性抗痫机制之一。

E.coli谷氨酸脱羧酶高产菌株选育及发酵条件研究

以普通大肠杆菌(E.coli)为出发菌株,以L-谷氨酸、溴甲酚绿(pH3.8～5.4)为筛选及指示剂,经亚硝基胍(NTG)、UV诱变处理,得到L-谷氨酸脱羧酶活性变异菌株,其L-谷氨酸脱羧酶(GAD)活性大幅度提高,比出发菌株酶活性提高了2.22倍。优化试验显示:pH值、发酵时间、诱导剂L-谷氨酸、硫酸镁对GAD产酶有较大影响。通过对产酶发酵培养基中几种成分单因素变动及正交优化实验,对该菌株产GAD的诱导剂L-谷氨酸、营养要求和发酵条件进行了研究,优化后的发酵培养基组成为牛肉膏5g/L,蛋白胨10g/L,氯化钠3g/L,L-谷氨酸0.5g/L,葡萄糖1.5g/L,磷酸二氢钾2g/L,硫酸镁0.7g/L。发酵条件是:pH6.8,接种菌龄20h,发酵时间20h。在优化条件下突变菌株GAD活性可达6790.7U,是出发菌株的2.76倍。

发芽粟谷中谷氨酸脱羧酶的主要酶学性质初探

[目的]探讨发芽粟谷[Setaria italica(L.)Beauv.]中谷氨酸脱羧酶(GAD)的主要酶学性质。[方法]以发芽粟谷为试材,研究发芽粟谷GAD的活性及其主要酶学性质。[结果]发芽粟谷GAD最适温度为40℃,其耐热性较差,32℃保温1 h后其酶活保持率为86.3%;发芽粟谷GAD最适pH值为5.5,在pH值5.0～5.5范围内酶活保持率在80.0%以上;发芽粟GAD对Glu的Km为22.36mmol/L,Vmax为2.28μmol/min;Ca2+、Mg2+、Li+、PLP和VB6对发芽粟谷GAD活力具有促进作用,而Zn2+、La3+、Cu2+起抑制作用,Mn2+、Na+、Fe2+和EGTA则无显著影响。[结论]该研究可为利用发芽粟谷内源GAD富集GABA提供理论依据。

谷氨酸脱羧酶抗体、C-肽及胰岛素测定在糖尿病患者中的临床意义

目的:探讨谷氨酸脱羧酶(GAD)抗体、C-肽(CP)及胰岛素(INS)测定在糖尿病(DM)分型中的临 床意义。方法:采用放射免疫分析(RIA)检测27例1型糖尿病(DM1)患者及49例2型糖尿病(DM2)患者的 GAD抗体、CP及INS含量;采用糖电极法测定了上述对象的空腹血糖(FPG)。结果:GAD抗体阳性率DM1患 者为66.7%,与DM2患者8.2%相比,显著增高(P<0.01);DM1患者CP及INS水平均显著低于DM2患者(P <0.01)。结论:GAD抗体是胰岛β细胞功能损伤的一个预测指标,结合CP/FPG、INS/FPG对DM分型及治疗 有重要意义。

异动症大鼠基底节谷氨酸脱羧酶和胆碱乙酰转移酶表达的变化

观察左旋多巴诱发异动症 (LID)大鼠模型基底节区谷氨酸脱羧酶 (GAD)和胆碱乙酰转移酶 (CAT)表达的变化 ,探讨LID发生过程中纹状体神经元的可塑性。间断性给帕金森病 (PD)大鼠腹腔注射左旋多巴 2 8d(每天 1次 )制备LID大鼠模型 ,应用免疫组织化学方法观察基底节区GAD和CAT的表达。结果发现模型复制成功后出现了与人类LID相似的对侧上肢、躯干和口面部异常不自主运动 (AIM)。与正常组比较尾壳核及苍白球区GAD明显增加 ,黑质网状部GAD明显减少。尾壳核区CAT明显减少。提示慢性间断性给PD大鼠左旋多巴能复制出LID大鼠模型 ,其纹状体区GABA能投射神经元及胆碱能中间神经元功能发生了改变 ,与LID的发生可能有关。

抗谷氨酸脱羧酶65抗体阳性相关中枢神经系统病变临床特点分析

1988年《新英格兰医学杂志》发表的一项研究中首次描述了谷氨酸脱羧酶(GAD)抗体[1],GAD抗体是合成抑制性神经递质γ-氨基丁酸的限速酶,与多种神经系统综合征相关,包括僵硬人综合征、边缘性脑炎、癫痫和小脑共济失调等。目前关于GAD抗体相关的综合征并不常见,本文现报道1例抗GAD抗体相关小脑性共济失调(cerebellar ataxia,CA)和1例抗GAD抗体相关的自身免疫性脑炎(autoimmune encephalitis,AE),以加深临床对本病的认识。

大鼠脑组织中谷氨酸脱羧酶65基因的克隆和序列测定

目的探讨克隆大鼠脑组织中谷氨酸脱羧酶65基因。方法采用RT-PCR方法,将大鼠脑组织中的mRNA逆转录成cDNA,再以cDNA为模板,扩增谷氨酸脱羧酶65基因片段,克隆入T载体,并经序列测定。结果RT-PCR法扩增出一特异产物与预期长度1758bp相符,T载体克隆测序与大鼠谷氨酸脱羧酶65100%同源。结论采用RT-PCR和T载体技术获得了大鼠脑组织中的谷氨酸脱羧酶GAD65基因克隆,为该基因的体外表达打下基础。

Saccharomyces cerevisiae谷氨酸脱羧酶的诱导纯化及其活性的研究

为了了解酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae,S.cerevisiae)谷氨酸脱羧酶(GAD)的情况,分别用酵母提取物及胰蛋白胨(3×YP)+6%棉子糖液体培养基、3×YP+6%半乳糖液体培养基进行诱导培养,粉碎破碎酵母,采用ProfiniaTM蛋白质纯化系统纯化,并用SDS-PAGE凝胶电泳测定分子质量,同时研究了磷酸吡哆醛(PLP)对酿酒酵母谷氨酸脱羧酶(S.cerevisiae GAD)活性的影响。结果表明:转基因酿酒酵母在28℃振动培养47 h,3×YP+6%棉子糖培养基OD600值为7.4,3×YP+6%半乳糖培养基OD600值为6.8。棉子糖诱导的酿酒酵母没有表达目的基因,没有纯化到GAD;相反,半乳糖诱导的酿酒酵母表达了目的基因,纯化到了GAD,其分子质量为67 ku。PLP对GAD的活化作用较显著。

谷氨酸脱羧酶抗体测定在糖尿病分型中的临床意义

目的 探讨谷氨酸脱羧酶抗体测定在糖尿病分型中的临床意义。方法 应用酶联免疫吸附法 (ELISA)测定 12 8例糖尿病患者血清中谷氨酸脱羧酶 (GAD)抗体 ,其中 1型糖尿病患者 74例 (包括青少年患者 2 6例 ,成人迟发自身免疫型糖尿病患者 4 8例 ) ,2型糖尿病患者 5 4例。结果 1型糖尿病中青少年发病组GAD抗体阳性率为73 1% ,成人迟发自身免疫型糖尿病 (LADA)组GAD抗体阳性率为 75 0 % ,与 2型糖尿病组CAD抗体阳性率12 9%相比差异有显著性意义 (P <0 0 1)。结论 GAD抗体是 1型糖尿病自然病程中 β细胞功能损伤的一个预测指标 ,对糖尿病分型 ,指导治疗具有一定意义。

以癫痫发作为首发症状的抗谷氨酸脱羧酶65抗体病患者的临床特点及预后

目的探讨以癫痫发作为首发症状的抗谷氨酸脱羧酶65(GAD65)抗体病的临床特点及预后。方法回顾性分析2018年1月至2021年7月期间就诊于吉林大学第一医院的11例以癫痫发作为首发症状的GAD65抗体病患者的临床资料并随访。结果11例患者的中位发病年龄为49岁,平均(18~76岁),男女比例为1∶2,分别诊断为自身免疫性脑炎8例,免疫检查点抑制剂诱发的脑炎2例,自身免疫相关癫痫1例。9例患者有前驱症状。患者均以癫痫发作为首发症状,以全面性强直阵挛发作类型为主。脑脊液异常主要表现为白细胞增多和(或)蛋白水平升高;颅脑核磁共振(MRI)主要表现为颞叶和海马T2加权和FLAIR高信号;脑电图监测到发作间期以颞区、额区为主的尖波、尖慢波或慢波放电。2例患者筛查到潜在肿瘤,3例患者筛查到胸腺异常。6例患者免疫治疗后再无癫痫发作,5例患者因肿瘤的存在意识水平下降或癫痫持续状态而死亡,1例合并肿瘤的幸存患者6个月后出现了复发。结论以癫痫发作为首发症状的GAD65抗体病以中年女性最为常见,常伴有前驱症状、认知障碍及精神障碍。主要引起脑脊液、颞叶及海马的炎性改变,抗体滴度与病情严重程度及免疫治疗效果无关,早期免疫治疗可改善患者预后,肿瘤的存在对预后影响较大。

抗谷氨酸脱羧酶65抗体相关性小脑性共济失调1例报道

抗谷氨酸脱竣酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)抗体相关性小脑性共济失调主要表现为共济失调、构音障碍及眼球震颤。本文就我科收治的1例GAD65抗体相关性小脑性共济失调病例报道如下,并对其临床表现、诊断及治疗进行简要总结。

抗谷氨酸脱羧酶抗体在糖尿病相关癫痫发作中的作用及研究进展

糖尿病（DM）是一种累及全身各个系统的代谢性疾病，糖尿病各种代谢条件可引起痫性发作。抗谷氨酸脱羧酶抗体（anti-glutamic acid decarboxy-lase antibodies，AGAD-Ab）是糖尿病的免疫标志物，它与癫痫关联的研究在逐渐增多，并发现AGAD-Ab与难治性癫痫和颞叶癫痫均密切相关。所以AGAD-Ab可能在两者之间的关联上扮演着某种角色，可能成为诊断糖尿病相关癫痫的重要的免疫标志物。