黑附球菌YP1分泌物的广谱抗霉菌活性和化学成分多样性分析

霉菌的滋生是导致果蔬、粮食和食品腐败变质的主要原因之一。采用黑根霉孢子萌发抑制法从70个真菌菌株中初步筛选到一株对黑根霉的孢子萌发具有强烈抑制效果的真菌菌株YP1,通过ITS序列遗传学鉴定结合形态学特征将其鉴定为附球孢菌属的黑附球菌(Epicoccum nigrum,又名Epicoccum purpurascens,同物异名)。从YP1发酵液中制备的橙黄色固体分泌物对常见霉菌的孢子萌发和菌落生长都具有非常显著的抑制能力,显示出广谱的抗霉菌活性,进一步的对比研究证明,分泌物抑制霉菌和其他多孢子真菌的生长是通过抑制孢子萌发实现的,对真菌菌丝的生长没有影响,产孢早而多的真菌尤其是霉菌生长更易受到分泌物的抑制。高压液相色谱分析显示该橙黄色分泌物由10种成分组成,经质谱分析鉴定出其中3种成分的化学组成,均为由C、H、N、O四种元素组成的化合物,其余7种未鉴定出的成分很可能属于新化合物。YP1外分泌物可以作为新的抗霉菌剂资源,用于果蔬、食品的保鲜防腐,在植物病害的防治领域也显示出很好的应用潜力。

黑附球菌在植物病害生物防治中的研究与应用进展

通过对国内外文献资料的收集、整理和分析,结合本研究室的系统研究,对黑附球菌(Epicoccum purpur as cens Ehveub ex Schlecht=E.nigrumLink)的分类地位、形态特征、防病作用、生防作用机制以及生防制剂的制备、保存和应用前景等方面的研究进展进行了综述。

黑附球菌抗紫外线保护剂的筛选

为减少紫外线对黑附球菌Epicoccum purpurascens分生孢子的影响,提高分生孢子在田间的生物活性,在室内检测了6种紫外线吸收剂和4种光稳定剂之间的不同组合(复合型抗紫外线保护剂)对黑附球菌XF1菌株分生孢子抗紫外线的保护作用。结果表明:不同复合型抗紫外线保护剂对XF1分生孢子的保护效率差异较大,其中苯并三唑类与六甲基磷酰三胺的组合(a3b1)及苯甲酮与六甲基磷酰三胺的组合(a4b1和a5b1)保护作用较强,在253.7 nm波长紫外灯下照射40 min,保护效率均达90%以上;水杨酸苯酯类与六甲基磷酰三胺的组合(a1b1)对分生孢子的保护效率较低,仅为37.12%;水杨酸苯酯类、苯并三唑类、苯甲酮类与光稳定剂770(b2)的组合(a1b2、a3b2、a4b2和a5b2)则无保护作用。对于选出的3种复合型抗紫外线保护剂(a3b1、a4b1、a5b1),其最适宜的溶剂组合为V(正己烷)∶V(花生油)=1∶1,a4b1和a5b1使用时的质量浓度应大于7.5 mg/mL,而a3b1的质量浓度应大于10 mg/mL。采用波长为253.7 nm的紫外灯照射90 min,所选出的3种复合型抗紫外线保护剂对分生孢子的保护效率均保持在88%以上;照射180 min后,保护效率均大于63%。

黑附球菌XF1菌株分生孢子产生和保存条件研究

为了快速获得大量高活性黑附球菌(Epicoccum purpurascens)XF1分生孢子,并探索XF1分生孢子的保存条件,为后续生防测试提供材料。本试验测试了5种不同培养基对黑附球菌XF1菌株分生孢子产生量与分生孢子活力的影响。结果表明:5种培养基中,黄豆浆培养基在3个测试指标(菌落生长直径、产孢量、孢子活力)中有2项(产孢量、孢子活力)均表现为最优,其余1项(菌落生长直径)也仅次于最优处于第2位。综合测评,黄豆浆培养基(12d长满全皿,其单位面积产孢量为47.93×105个/cm2,孢子萌发率平均值为96.02%)有利于黑附球菌XF1菌株分生孢子快速大量生成并且保持很高活力。经抽滤干燥的黑附球菌XF1菌株分生孢子在4℃黑暗条件下进行了1年的保存,其萌发率仍然能达到86.57%,是一种较好的分生孢子保存方法。

黑混合感染链球菌和附红细胞体病的诊治

随着我县养猪业迅速发展,适度规模养殖定安黑猪的数量不断扩大,做好猪疫病防控尤为重要.猪链球菌和附红细胞体病是兽医常见的传染性强、病死率高的疾病,两者混合感染会使病情复杂化,加上黑猪皮肤病症难觉察,易误诊延治,给养猪生产造成较大的损失.通过了解发病情况,结合临床症状、病理剖检和实验室检验等,确诊为猪链球菌和附红细胞体混合感染,经采取综合防治措施,控制了该病.

PEG介导的黑附球菌遗传转化体系的建立

以生防真菌黑附球菌原生质体为受体、潮霉素抗性基因(hph)为筛选标记,应用PEG介导法进行了遗传转化体系的研究。潮霉素敏感性测试结果表明,黑附球菌对潮霉素的耐受浓度为50mg/L。PEG介导的黑附球菌原生质体最佳遗传转化体系为:30℃下用2%裂解酶酶解黑附球菌菌丝2h,过滤收集原生质体,经MTC清洗重悬后将质粒p YF11-hph转化黑附球菌原生质体,在RM培养基中混匀再生;经潮霉素药剂筛选和PCR验证,表明外源基因hph已转入到黑附球菌中并获得稳定表达。本实验成功地建立了稳定的PEG介导的黑附球菌遗传转化体系,为研究其代谢途径、生防机制及构建工程菌株提供了技术保障。

云杉叶枯病新病原的鉴定及其生物学特性测定

在甘肃省天水市林区采集到一种症状与已报道略有差别的云杉叶枯病,对病原菌进行分离与鉴定,并测定其致病性和生物学特性。结果表明,在云杉上引起叶枯病症状的分离物SJ1菌丝呈白色、红橙色、深黄棕色,后期菌落表面出现红黑色液滴,分生孢子黑色,扁圆形或近球形,表面有褶皱。ITS、TUB2和RPB2基因序列分析表明其与黑附球菌(Epicoccum nigrum)同源性最高,且在系统发育树上聚在一起,因此将其鉴定为黑附球菌(E.nigrum)。生物学特性测定结果表明,最适菌丝生长的培养基为麦芽浸粉琼脂培养基,温度为25℃,pH为7,光照对菌丝生长影响不大,最适碳、氮源分别为淀粉和蛋白胨,氮源为尿素时不生长。

一种引起火龙果茎病害的病原菌鉴定

对贵州省西南地区火龙果种植园发生的一种茎病害进行发病率调查，并对其病原菌进行鉴定。结果表明：该茎病害的发病率为10％-20％，病原菌显微结构观察和分子鉴定结果表明其为黑附球菌（Epicoccumnigrum）。本研究是该病原菌对火龙果危害的初次报道。

具有抗菌活性的水杉内生真菌的分离及筛选

从水杉(Metasequoia glyptostroboides Hu et Cheng)树皮、叶片中分离筛选得到了17株形态各不相同的内生真菌,采用对峙培养法筛选对植物病原真菌,层出镰孢菌(Fusarium proliferatum)﹑禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)﹑玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)﹑玉米小斑病菌(Helminthosporium maydis)具有拮抗作用的菌株,筛选得到了1株对以上4种病原菌具有广谱抗菌活性的菌株,命名为SS-17。通过对SS-17菌株的形态特征观察及ITS分子鉴定,初步鉴定为黑附球菌(Epicoccum nigrum)。

内生真菌FXZ2对玉米生长及重金属累积的影响

【目的】探索菌株FXZ2(黑附球菌,Epicoccum nigrum)对玉米生长及重金属累积的影响,为内生菌与植物互作机制的探索提供理论基础。【方法】通过盆栽实验探索在不同重金属胁迫下,重金属耐受内生真菌FXZ2对玉米生长及重金属积累的影响。【结果】在复合重金属胁迫下,接种FXZ2显著促进了玉米的生长、影响了玉米对Pb、Zn、Cd的吸收和累积。在单一重金属Cd胁迫下,FXZ2对玉米的影响与重金属含量相关:高含量Cd胁迫下,FXZ2显著促进玉米生长,但在低含量Cd胁迫下,其影响不显著。【结论】在Pb、Zn、Cd胁迫下,内生真菌菌株FXZ2对玉米的生长及重金属累积能力具有显著影响。

一株植物内生真菌Epicoccum nigrum 14one次生代谢产物研究

对分离自地衣Leptogium masiaticum的一株内生真菌黑附球菌Epicoccum nigrum 14one的化学成分进行研究,获得11个化合物,通过核磁共振和质谱技术对化合物结构进行了确证,分别鉴定为1个生物碱化合物fusaricide(1),7个苯并呋喃类化合物epicoccone B(2),4,6-dihydroxy-5-methoxy-7-methyl-1,3-dihydro isobenzofuran(3),5-methyl-epicoccone B(4),3,6,7-trihydroxy-5-methoxy-4-methylisobenzo furan-1(3H)-one(5),3-methoxyepicoccone B(6),2,3,4-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)-5-methylbenzyl-alcohol(7),isoochracinic acid(8)和3个epicoccolide类化合物epicocconigrones A(9),epicoccolide B(10),epicocconigrones B(11)。化合物1,9和10具有很强的抗菌活性,该研究结果显示该地衣内生菌株具有开发为微生物源杀菌剂的前景。

兽医临床难病新解

兽医临床工作者廖斌发、廖启武编著的《兽医临床难病新解》一书已于近期由湖北科学技术出版社出版,面向全国公开发行。书中就当前流行或散发的猪瘟、疑似猪瘟、圆环病毒病、蓝耳病、伪狂犬病、链球菌病、水肿病、附红细胞体病、无名高热等病毒、细菌、原虫病以及其混合感染的温热病等一百多个热门话题,运用中兽医模糊黑箱理论。