我国南方媒介蜱中首次检出黑龙江立克次体(R.heilongjiangii)及马赛立克次体(R.massilliae)近缘菌

目的研究我国南方媒介蜱斑点热群立克次体带菌状况。方法采用斑点热群立克次体外膜蛋白ompA基因特异引物,对我国广东省连平县采集的长角血蜱进行检测分析。结果15组蜱标本中,14组检测阳性,阳性率为93.3%。通过测序分析,发现当地长角血蜱携带黑龙江立克次体及马赛立克次体近缘菌。结论我国南方地区除已证实的北亚蜱传斑点热外,还应加强当地其他斑点热的监测及临床鉴别诊断。

黑龙江立克次体的血清学及分子生物学研究

本文应用血清学方法和分子生物学技术，从不同角度探讨与比较ＳＦＧ立克次体种间的差异，为黑龙江立克次体的分类鉴定提供依据。ｍｉｃｒｏ—ＩＦ、ＩＥ及ｍｉｃｒｏ－ＢＡＰＳ试验表明，黑龙江立克次体的血清反应模式和国际参考株及国内分离株不同，具有独特的抗原结构。进一步应用ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和免疫印迹分析，该立克次体结构多肽的数量与分子量和其它立克次体有明显差别，并具有两种特有的主要抗原多肽（２１５ＫＤ与６６ＫＤ），提示在抗原结构上的差异性。ＤＮＡ限制片段分析证明该立克次体的酶切图谱有明显的特征性，易与己知斑点热毒株相鉴别。研究结果表明，黑龙江立克次体可能是ＳＦＧ立克次体一新的血清型式种。对人的致病力需进一步研究。

黑龙江立克次体与黑龙江蜱传斑点热研究概况

黑龙江立克次体是近年发现的斑点热群立克次体新种,由其引起的疾病为黑龙江蜱传斑点热。综述了黑龙江立克次体的发现、分离鉴定、病原学和分子生物学特征,介绍了黑龙江蜱传斑点热的流行病学、临床表现及治疗与预防。

从病人血液分离的斑点热群黑龙江立克次体H-5株的初步鉴定

为证实黑龙江立克次体对人的致病性,于1996年5～6月在黑龙江省绥芬河、东宁地区进行了斑点热病的调查,发现被蜱叮咬后斑点热临床表现的疑似病人7例,其中血清检测有4例早期与恢复期血清抗斑点热群(SFG)立克次体IgM、IgG抗体滴度≥4倍升高。采用micro-IF、病原分离及PCR/RFLP等方法,从病人血液中分离到一株SFG立克次体H-5株,该分离株与黑龙江立克次体54株一致,与SFG各标准株及国内分离株有明显差异。结论:该病人为SFG黑龙江立克次体感染,从病原学角度证实了该立克次体对人的致病性。

黑龙江立克次体的分子生物学鉴定

为对我国东北地区分离的斑点热群立克次体分离株作鉴定,建立并应用了分子立克次体学方法,包括单克隆抗体、SDS-PAGE、免疫印迹、DNA 酶切图谱、PCR/RFLP、PCR/SSCP 及 DNA 序列分析等。结果表明:①在种的水平上研究了黑龙江分离株(代表株 HLJ-54、36),从分类学上确定其属立克次体属、斑点热群的一个新种,命名为黑龙江立克次体(R.heilongjiangii);②发现从疑似病人血液分离的 H-5株的分子生物学特征与黑龙江立克次体一致,证实了其对人的致病性。

黑龙江立克次体感染血管内皮细胞的初步研究

目的通过黑龙江立克次体感染体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)探讨其在内皮细胞内的生长规律。方法将泛影葡胺密度梯度超速离心纯化的黑龙江立克次体(HLJ-054株)感染体外培养的HUVEC,通过间接免疫荧光和扫描电镜检测与观察不同时相黑龙江立克次体在内皮细胞内的生长状况。热灭活黑龙江立克次体做平行对照。结果立克次体粘附并侵入内皮细胞,在感染后第6 h及第24 h分别为感染高峰;感染5 d后细胞内立克次体逐渐增殖,第8～9 d细胞内立克次体急剧增殖,并见细胞核内有少量立克次体,细胞出现病变,第12 d细胞内充满立克次体,大部分细胞皱缩脱落。结论黑龙江立克次体能够感染血管内皮细胞,在血管内皮细胞内不断增殖而使细胞死亡。

黑龙江立克次体外膜蛋白B基因表达及表达重组蛋白的抗原性分析

黑龙江立克次体为远东蜱传斑点热病原体,本文以黑龙江立克次体基因组为模板,扩增ompB的4段基因,利用原核表达载体构建重组表达质粒,IPTG诱导重组质粒转化的大肠杆菌表达重组目的蛋白,并对其抗原性进行分析.免疫印迹反应表明,重组表达的4个蛋白均与黑龙江立克次体感染小鼠血清反应.该4个重组蛋白分别免疫小鼠后,分析其血清的特异性结果显示,4个重组蛋白免疫血清,其特异性抗体效价均≥1：5 120,与斑点热群立氏立克次体有相对明显的血清学交叉反应（≥1：40）,而和斑疹伤寒群立克次体仅有轻度交叉反应（≤1：40）.结果表明,重组OmpB蛋白能有效诱导机体产生特异性体液免疫应答,并能与黑龙江立克次体抗体产生特异反应,显示其具有良好的抗原性.

黑龙江立克次体与远东蜱传斑点热研究进展

黑龙江立克次体分离自中国黑龙江省林区的森林革蜱（1983年），1996年首次证实对人的致病性，2003年被正式确定为斑点热群立克次体（spotted fever group rickettsiae，SFGR）新种，

黑龙江立克次体感染对小鼠脾脏免疫相关基因转录的影响

目的分析黑龙江立克次体感染小鼠脾脏免疫相关基因的转录变化,筛选影响黑龙江立克次体感染致病进程的关键靶标。方法取20只雌性C3H/HeN小鼠,随机分为未感染组(0 hpi)、感染3 h组(3 hpi)、感染3 d组(3 dpi)及感染6 d组(6 dpi),每组5只,采用尾静脉注射法感染黑龙江立克次体,在4个时相点解剖小鼠取脾,提取总RNA进行测序,筛选出特异性转录基因并进行GO注释、R语言富集及KEGG可视化功能分析。结果小鼠感染黑龙江立克次体后,脾脏有219930个mRNA发生了特异性转录,通过GO注释及富集筛选出显著性变化的3类基因:(1)35个天然免疫相关基因,其中参与γ干扰素(IFN-γ)信号通路的irg1、gbp10基因转录上调最明显(P<0.05);(2)31个获得性免疫相关基因,其中参与细胞凋亡通路的gzmb基因转录上调最明显(P<0.05);(3)41个炎症反应相关基因,其中参与细胞因子与细胞因子受体信号通路的ccl4基因转录上调最明显(P<0.05)。结论宿主IFN-γ信号通路中的irg1、gbp10基因,细胞凋亡通路中的gzmb基因,细胞因子及细胞因子受体信号通路中的ccl4基因影响黑龙江立克次体感染的致病进程。

黑龙江立克次体重组外膜蛋白B激活树突状细胞诱导C3H/HeN小鼠特异性免疫应答

专性胞内寄生的黑龙江立克次体是远东斑点热的病原体,外膜蛋白B(OmpB)是其最主要的表面蛋白抗原.本研究将黑龙江立克次体ompB基因分成4段插入原核表达载体,制备出4个重组OmpB抗原(OmpB-P1,OmpB-P2,OmpB-P3和OmpB-P4).将4个重组OmpB抗原分别刺激体外培养的C3H/HeN小鼠树突状细胞,再将这些抗原激活树突状细胞分别腹腔接种正常C3H/HeN小鼠.接种第14天用黑龙江立克次体攻击小鼠,7天后活杀小鼠并用实时定量PCR检测小鼠主要脏器的立克次体的载量.结果显示,OmpB-P2,OmpB-P3或OmpB-P4激活树突状细胞受体小鼠的立克次体载量显著低于OmpB-P1激活树突状细胞受体小鼠.将不同抗原激活小鼠树突状细胞分别与同源抗原激活小鼠树突状细胞受体小鼠的CD4+和CD8+T细胞体外共培养.用流式细胞仪分析共培养后CD4+和CD8+T细胞的表面分子和细胞因子表达,结果显示,OmpB-P2,OmpB-P3或OmpB-P4抗原激活树突状细胞共培养的CD4+或CD8+T细胞的CD69表达水平高于OmpB-P1激活树突状细胞共培养的T细胞.此外,OmpB-P2,OmpB-P3或OmpB-P4激活树突状细胞共培养的CD4+或CD8+T细胞的TNF-?和IFN-?水平均显著高于OmpB-P1激活树突状细胞共培养的T细胞.本研究结果表明,OmpB-P2,OmpB-P3或OmpB-P4为保护性抗原,其激活的树突状细胞可以有效地诱导T淋巴细胞活化,使CD4+T细胞和CD8+T细胞分别向Th1细胞和Tc1细胞分化,产生高水平TNF-?和IFN-?共同对抗立克次体感染.

立克次体病

立克次体病（表1）正在全世界出现。沉寂了数十年后，毁灭性的斑疹伤寒（普氏立克次体）大流行再次出现，并且斑疹热在旅行者中越来越多地被确认。至少已确认了6种新的立克次体斑疹热（瑞士立克次体，帕氏立克次体，猫立克次体，斯洛伐克立克次体，黑龙江立克次体和aeschlamanni立克次体）。立克次体病经节肢动物媒介传播。主要的感染宿主是人类（普氏立克次体）和小型哺乳动物（斑疹伤寒立克次体和斑疹热组）。

我国东北地区远东蜱传斑点热的流行病学调查

远东蜱传斑点热是黑龙江立克次体引起的蜱传自然疫源性疾病。该立克次体是我们从黑龙江省蜱中分离出的，经国内外专家鉴定，最终确定为斑点热群立克次体新种，正式命名为黑龙江立克次体。

应用变性高效液相色谱法对蜱传立克次体的鉴定和分型

目的建立PCR-DHPLC检测法,对5种蜱传人类致病性立克次体进行准确、快速的分型检测。方法针对蜱传5种致病性立克次体的Osp A为靶基因进行PCR扩增,本研究所用目的片段为合成片段,连接于18-T载体,选用1对特异性通用引物扩增此片段。扩增产物长度分别为513 bp、533 bp、533 bp、533 bp、533 bp。应用42株菌株进行特异性实验,建立PCR-DHPLC反应体系,并将此方法应用到实际样本检测。结果应用PCR-DHPLC技术可很好的区分5种致病菌,在核酸水平上达0.01 pg/μl。实际样本的峰型与标准峰型有较好对应性。结论 PCR-DHPLC法在实际样本检测中具有灵敏性和特异性。

中国东北地区远东蜱传斑点热流行病学调查

目的了解远东蜱传斑点热在东北地区感染情况、分布及其流行规律。方法选择东北三省9市（县）作为调查地区，采集正常人群血清、鼠血清、游离蜱及疑似患者血液等标本，用间接免疫荧光法检测蜱传斑点热抗体，豚鼠接种法分离立克次体。结果调查地区总体人群蜱传斑点热检出率17．46％，除瑷辉县外其余8市（县）人群以黑龙江立克次体抗体为优势；人群当年蜱传斑点热感染率为9．4％，2年内蜱叮咬率林业工人为92．8％，军人为33．5％，抗体阳性率与蜱叮咬率呈正比关系；鼠种调查经鉴定为3科12种，以黑线姬鼠为优势种占58．6％，大林姬鼠占13．7％，其他鼠种占27．7％。鼠血清阳性率为27．3％，不同鼠种阳性率各有差异，黑线姬鼠为21．9％，大林姬鼠23．1％，棕背鼠平33．3％，大仓鼠55．6％。从蜱及疑似病例血液标本中分离到黑龙江立克次体共20株，证实远东蜱传斑点热病例16例。结论东北三省东部与北部普遍存在远东蜱传斑点热感染，存在蜱传斑点热的自然疫源地。