鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr)的生物信息学分析及原核表达载体构建

为了获得高纯度的鼠伤寒沙门氏菌细菌铁蛋白(Bfr),试验利用生物信息学软件对Bfr的结构、翻译后修饰和抗原表位等进行预测分析;通过PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌Bfr基因,将其与pET-32a(+)载体连接并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,通过SDS-PAGE分析和Western-blot检测表达及纯化后的目的蛋白。结果表明:Bfr由476个氨基酸组成,分子式为C_(1440)H_(2406)N_(476)O_(606)S_(85),相对分子质量为38808.87,理论等电点为5.25;无信号肽和跨膜区,二级结构包含α-螺旋(81.01%)、无规则卷曲(13.19%)、β-折叠(3.16%)和延伸链(1.90%);含有9个线性B淋巴细胞抗原表位和5个T淋巴细胞抗原表位,以及10个磷酸化位点和10个互作蛋白,Bfr和Bfrd蛋白表面匹配良好、结合稳定。试验成功克隆出Bfr基因,其大小约为476 bp,获得大小约为35 ku的高纯度重组蛋白Bfr。说明Bfr蛋白具有良好的反应原性,有可能成为鼠伤寒沙门氏菌的疫苗开发和疾病诊断的候选蛋白。

鸽源鼠伤寒沙门氏菌的分离鉴定及耐药与毒力基因检测

旨在鉴定广西某鸽场分两批送检的疑似鸽副伤寒病例的病原并对病原菌的耐药性和毒力基因进行检测分析;对从病鸽肝脏组织分离的病原菌进行培养特性观察、生化鉴定、血清型鉴定及16S rRNA测序分析,并通过药敏试验、耐药基因和毒力基因检测对分离菌株进行耐药性和毒力分析。分离到2株革兰氏阴性短杆菌,结合生化鉴定、血清型鉴定和16S rRNA分析结果,表明2株分离菌株均为鼠伤寒沙门氏菌。药敏试验结果表明,2株鼠伤寒沙门氏菌均对萘啶酸、链霉素和四环素耐药,并呈现多重耐药表型,耐药基因检测结果与耐药表型相符。2株鼠伤寒沙门氏菌中invA等12种毒力基因检测呈阳性。结果表明,成功分离鉴定2株具有多重耐药性并携带大量毒力基因的鸽源鼠伤寒沙门氏菌,可为鸽源鼠伤寒沙门氏菌的防治和研究提供参考。

1起ST19型鼠伤寒沙门氏菌引起的食物中毒调查、溯源分析与探讨

目的分析武汉市某区1起食物中毒事件的致病原因,探讨分离菌株之间的分子流行病学关系,为食源性疾病暴发溯源和临床诊治提供参考依据。方法采集食物中毒相关样本20份,提取样本总DNA进行18种食源性致病菌多重PCR检测,同时按时GB4789.4-2016进行病原菌分离鉴定;应用传统玻片凝集法和微量肉汤稀释法对阳性菌株进行血清型分型和耐药性检测,并提取所有菌株核酸进行全基因组测序组装,利用Abricate和SeqSero在线预测每株菌的血清型和耐药基因,然后与传统方法进行比较分析。对分离的9株沙门氏菌分别采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和全基因组序列方法(WGS)递进分析。结果共检出12株沙门氏菌(菌株编号DXH001~DXH012),其中病例肛拭子样本7份、病例粪便样本2份,工作人员肛拭子样本3份。常规血清型分型均为B群鼠伤寒沙门氏菌,与全基因组测序鉴定分型结果一致。12株菌株耐药谱完全一致,对阿米卡星、氨苄西林、头孢唑啉、庆大霉素、哌拉西林、四环素均耐药。基于全基因组预测的氨基糖苷类、头孢菌素、青霉烷、四环素的耐药性与耐药表型结果完全一致。选取DXH001~DXH009开展PFGE和WGS分析。9株鼠伤寒沙门氏菌获得完全一致的PFGE图谱,全基因组序列大小无明显差异,约为4.9 Mbp,MLST型均为ST19。从SNP的最小生成树来看共存在17个变异位点,各菌株间SNP差异数为1~6。全基因组系统发育进化树分析显示,9株沙门氏菌自成一簇,与数据库其他沙门氏菌相差甚远,属于新的克隆分支。同源性最高的来源于江西的GCF_020221795.1参考样本。结论本次食物中毒事件致病源为鼠伤寒沙门氏菌ST19,为同一暴发来源。9株沙门氏菌遗传距离较近,但与数据库中其他沙门氏菌遗传距离较远,自成一簇属于新的克隆分支。本研究中沙门氏菌具有多重耐药性,需加强对多重耐多药菌株的监控及抗菌药物使用的监管。

萌发芝麻提取物改善鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠焦虑和肠道炎症

芝麻是一种在我国被广泛种植的作物,它含有大量的脂肪和蛋白质,还有膳食纤维、芝麻木酚素及γ-氨基丁酸(GABA)等活性营养成分。近几年很多研究指出,GABA和芝麻木酚素中的芝麻酚具有缓解焦虑、抑制炎症的作用,但其在食源性致病菌侵染过程中的具体作用及机制尚未报道。对乙醇浸提萌发芝麻得到的萌发芝麻提取物进行检测,发现与芝麻相比芝麻酚和GABA含量分别提升6倍和4倍。使用鼠伤寒沙门氏菌SL1344侵染小鼠构建动物模型,探究萌发芝麻提取物、芝麻酚和GABA对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的影响,发现萌发芝麻提取物可以减少沙门氏菌感染小鼠的体重降低、改善焦虑行为、减少对小鼠脾脏的侵染、增加感染小鼠结肠绒毛长度和黏蛋白含量、抑制结肠炎症因子、增加粪便中乙酸和丙酸含量。萌发芝麻提取物缓解了沙门氏菌感染小鼠的焦虑,同时对小鼠的肠道具有保护作用。本研究为饮食干预缓解焦虑、保护肠道提供相关理论参考。

鼠伤寒沙门氏菌的感染及治疗研究进展

鼠伤寒沙门氏菌是一种食源性致病菌,严重威胁畜禽养殖业和人类公共卫生安全。其依靠自身致病性岛和Ⅲ型分泌系统,能够在宿主体内存活、繁殖和扩散,从而引发全身感染。传统治疗鼠伤寒沙门氏菌感染的方法是使用抗生素,但多药耐药菌株的出现给其治疗带来了巨大的挑战,因此迫切需要开发新的治疗方法。近年来,小分子疗法、噬菌体疗法、减毒疫苗疗法等逐渐兴起,有望成为治疗感染的有效方法。该文旨在对鼠伤寒沙门氏菌的感染及其治疗措施进行综述。

ε-聚赖氨酸盐酸盐对鼠伤寒沙门氏菌的抑制效果及其在湿米粉中的应用

为了研究ε-聚赖氨酸盐酸盐(ε-Poly-Lysine hydrochloride,ε-PLH)对鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.typhimurium)的抑菌作用,测定最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)和绘制生长曲线评估ε-PLH对S.typhimurium的抑菌效果。通过碘化丙啶渗透和胞内大分子泄露实验探究ε-PLH对S.typhimurium细胞膜的作用,并测定胞内活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)和超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性以及ATP酶活性和ATP含量,探究ε-PLH对S.typhimurium氧化应激和能量代谢的影响。研究发现:ε-PLH对S.typhimurium有良好抑菌性,MIC为128μg/mL,能够有效抑制S.typhimurium的生长,经MICε-PLH处理后的S.typhimurium细胞膜完整性被破坏,细胞膜渗透性改变,活性氧过量积累,处理6 h后核酸泄露量和ROS水平分别为对照组的2.45倍和1.99倍,SOD和ATP酶活性以及ATP含量分别比对照组下降29.60%、10.00%和67.63%。ε-PLH作用于细胞膜,造成S.typhimurium氧化损伤,破坏细菌胞内能量平衡,进而影响其正常生命活动导致死亡。此外,将ε-PLH应用于湿米粉,发现ε-PLH对S.typhimurium仍有一定抑菌效果,并且具有良好保鲜效果。综上,ε-PLH具有控制食品中沙门氏菌污染的潜力。

鼠伤寒沙门氏菌CRISPR/Cas12a检测方法的建立与应用

目的建立快速、超灵敏检测食品中鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法根据鼠伤寒沙门氏菌fliC基因保守片段设计并合成特异性CRISPR RNA(crRNA),并根据crRNA所在的基因序列区域设计重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)特异性引物,利用RPA技术扩增样本核酸,并对扩增产物进行CRISPR/Cas12a荧光检测。结果该检测方法克服了传统鼠伤寒沙门氏菌检测方法的缺陷,耗时短且具有较高的灵敏度,对鼠伤寒沙门氏菌的检出限低至1copy/μL,与乙型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌、阪崎肠杆菌、大肠埃希氏菌等常见食源性致病菌核酸检测无交叉反应,且建立的方法在检测人工污染的食品样品时具有较高的灵敏度和准确性。结论本研究建立的检测方法耗时短、灵敏度高,可用于鼠伤寒沙门氏菌的快速检测。

基于CRISPR-Cas12a系统的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法的建立

为了建立一种特异性强、灵敏度高的鼠伤寒沙门氏菌可视化检测方法,试验将聚合酶链式反应(PCR)与成簇的有规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated, CRISPR-Cas)系统相结合,首先根据鼠伤寒沙门氏菌的spy基因序列3′末端的保守区设计crRNA及靶标序列扩增引物,根据可视化检测原理设计单链DNA(single-stranded DNA, ssDNA)荧光报告探针;然后对靶标序列进行PCR扩增,将扩增产物加入CRISPR-Cas12a系统,在蓝光下通过肉眼观察是否产生绿色荧光实现对靶标的检测;最后进行特异性试验和灵敏度试验。结果表明:建立的方法仅能检测到鼠伤寒沙门氏菌,检测不到除鼠伤寒沙门氏菌外其他血清型的沙门氏菌及大肠杆菌、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌,能检测到循环数为14个的PCR产物和0.53 copies/μL的重组质粒,灵敏度优于常规PCR方法和实时荧光定量PCR方法。说明本试验建立的方法可以实现鼠伤寒沙门氏菌的可视化检测,具有特异性强、灵敏度高的特点。

鼠伤寒沙门氏菌SptP蛋白与RAW264.7细胞互作蛋白的筛选及分析

为了确定宿主与鼠伤寒沙门氏菌关键毒力蛋白SptP相互作用的蛋白,为鼠伤寒沙门氏菌的防治提供理论依据。通过诱导可溶性His-SptP融合蛋白表达,进行His pull-down试验筛选RAW264.7与SptP互作的蛋白,并经SDS-PAGE及质谱验证,最后通过生物信息学工具分析潜在互作蛋白。结果表明,可溶性His-SptP成功诱导表达;经His pull-down及质谱分析,鉴定到SptP与RAW264.7的153种潜在互作蛋白。另根据GO富集分析,这些互作蛋白主要集中于细胞构造、细胞内部结构和细胞器等,大部分为结合(binding)蛋白质,主要参与细胞过程、代谢过程和有机物代谢过程等。KEGG通路富集结果表明,互作的蛋白质主要参与聚集的通路为细菌对上皮细胞的侵袭、肌动蛋白细胞骨架的调节及沙门氏菌感染等。综上所述,在RAW264.7细胞中筛选到153个与SptP潜在互作的蛋白,这些蛋白在细菌侵入过程中发挥着重要的作用,为SptP在入侵宿主细胞过程中的具体的作用机制的研究提供了一定的理论依据。

抗鼠伤寒沙门氏菌的乳酸菌细菌素生物学特性及其抑菌机制初步研究

试验旨在研究拮抗鼠伤寒沙门氏菌的新型乳酸菌细菌素生物学特性及其抑菌机制。采用全基因组测序分析产细菌素的乳酸菌基因组信息,琼脂扩散法和透析法测定细菌素抑菌活性及分子量范围,有机酸、过氧化氢排除试验和蛋白酶敏感试验确定细菌素性质,通过设置pH值与温度梯度测定乳酸菌生长曲线与细菌素抑菌曲线,研究细菌素生物学特性,扫描电子显微镜观察初步探索细菌素抑菌机制。结果显示,试验筛选出的1株具有抑菌活性的乳酸菌PG-9,经分子生物学鉴定为发酵黏液乳杆菌。全基因组大小为1985177 bp,包含1947个编码基因。其产细菌素PG-9B对鼠伤寒沙门氏菌抑菌活性良好,分子量小于1 kDa,排除有机酸、过氧化氢影响后发现其对多种蛋白酶敏感,在pH值3.0~7.0、-20~121℃范围内均保留了较高的抑菌活性。扫描电镜显示,发酵黏液乳杆菌细菌素PG-9B通过破坏鼠伤寒沙门氏菌细胞表面形态而抑制和杀死细胞。研究表明,发酵黏液乳杆菌细菌素PG-9B具有良好的生物学特性和抑菌活性,在饲料工业中可作为潜在的替抗添加剂防治鼠伤寒沙门氏菌。

辣蓼上调cGAS-STING信号通路改善鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠的脾脏免疫损伤

为了探究辣蓼水提液对鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠脾脏免疫损伤的保护作用及其潜在机制,试验将48只健康、体重接近的SPF级雌性Balb/c小鼠随机分为6组,分别为空白对照组、模型组、阳性药物组及辣蓼高、中、低剂量组,每组8只。空白对照组和模型组灌胃PBS,阳性药物组每天按体重灌胃给予庆大霉素20 mg/kg,辣蓼高、中、低剂量组分别灌胃给予20,10,5 g/kg的辣蓼水提液,小鼠给药体积为按体重0.2 mL/10 g,连续给药8 d。给药2 d后,除空白对照组外其余组小鼠均灌胃LD50(5×104cfu/mL)鼠伤寒沙门氏菌0.2 mL,末次给药后禁食不禁水12 h,麻醉小鼠安乐死后取脾脏组织进行组织病理学检查、鼠伤寒沙门氏菌负荷量测定,以及α-干扰素(IFN-α)、β-干扰素(IFN-β)、γ-干扰素(IFN-γ)、干扰素调节因子3(IRF3)、磷酸化干扰素调节因子3(p-IRF3)、TANK结合激酶1(TBK1)、磷酸化TANK结合激酶1(p-TBK1)、干扰素刺激基因(STING)与环腺苷酸鸟苷酸合成酶(cGAS)蛋白相对表达量的检测。结果表明:模型组小鼠脾脏结构不清晰,红髓、白髓分辨不清,增生明显,有炎性细胞浸润,出血、渗出物明显;而辣蓼高、中、低剂量组小鼠脾脏均无明显病理变化,减轻了脾脏组织病理学损伤。模型组小鼠脾脏中鼠伤寒沙门氏菌负荷量较空白对照组显著增加(P<0.05),而辣蓼高、中、低剂量组小鼠脾脏中鼠伤寒沙门氏菌负荷量显著低于模型组(P<0.05)。模型组小鼠脾脏干扰素(IFN-α、IFN-β、IFN-γ)、IRF3、p-IRF3、p-TBK1与STING蛋白相对表达量较空白对照组均显著下降(P<0.05);而与模型组比较,辣蓼高、中剂量组干扰素(IFN-α、IFN-β、IFN-γ)、TBK1、p-TBK1、p-IRF3、cGAS和STING蛋白相对表达量均显著升高(P<0.05)。说明辣蓼具有改善鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠脾脏免疫损伤的作用,作用机理可能是通过上调cGAS-STING通路从而诱导干扰素产生而得以实现。

基于pH响应聚合物的比色法检测牛奶中的鼠伤寒沙门氏菌

目的基于pH响应聚合物构建一种用于检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌的比色传感器。方法通过溶剂诱导法,使用酚酞、适配体、牛血清白蛋白制备pH响应聚合物,基于适配体对鼠伤寒沙门氏菌的特异性结合与pH响应聚合物遇碱释放酚酞的比色反应建立鼠伤寒沙门氏菌比色检测方法,优化反应条件,并将其用于检测牛奶。结果该传感器在鼠伤寒沙门氏菌菌液浓度10^(2)~10^(7)CFU/mL范围内与吸光度呈现良好的线性关系,线性系数为0.982,检出限可达52 CFU/mL。将此法用于牛奶中鼠伤寒沙门氏菌的检测,加标回收率为83.2%~102.0%。结论该方法操作简便、结果可视化,为牛奶中鼠伤寒沙门氏菌的快速检测提供了一种新思路。

天蚕素抗菌肽对肉鸡感染鼠伤寒沙门氏菌的保护作用

为研究抗菌肽对感染鼠伤寒沙门氏菌肉鸡的保护作用,试验研究了不同剂量天蚕素抗菌肽对感染肉鸡生长性能、病理变化、血清和肠道免疫指标的影响。试验将240只1日龄红玉380肉仔鸡(公鸡)随机分为4组:对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。对照组饲喂基础日粮,低、中、高剂量组分别在基础日粮中添加500 g/t、1000 g/t和1500 g/t天蚕素抗菌肽,试验鸡10日龄时各组灌服1 mL 1×10^(8) cfu/mL鼠伤寒沙门氏菌,试验期为28 d。结果显示:与对照组相比,中、高剂量组平均日增重显著提高(P<0.05),料重比显著降低(P<0.05),28日龄肉鸡血清IgM、IgG、IgA、IL-6、IL-10含量和肠道组织中分泌型免疫球蛋白(sIgA)、紧密连接蛋白(ZO-1)含量均显著提高(P<0.05)。综上所述,饲粮添加天蚕素抗菌肽能改善感染鼠伤寒沙门氏菌肉鸡的生长性能,提高免疫力,对感染肉鸡具有一定的保护作用;本试验条件下,适宜添加量为1500 g/t。

鼠伤寒沙门氏菌sopF基因缺失突变体的构建及调节宿主自噬功能研究

研究鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)sopF基因对细菌生理特性的影响及在感染巨噬细胞时的作用。应用CRISPR/Cas9系统对S.typhimurium sopF基因进行敲除,PCR扩增得到sg20片段和sopF上下游同源臂片段,利用重叠PCR连接3个DNA片段,并与pTargetF质粒连接后,获得敲除质粒pTargetF-sopF;将pCas与重组质粒PtargetF-sopF电转入S.typhimurium以敲除sopF基因。利用生长曲线测定确定sopF基因对细菌生长的影响,Western blot和免疫荧光试验研究该基因对细菌引起的宿主自噬的影响,CCK8检测该基因对细菌引起的细胞毒性影响。结果显示,S.typhimuriumΔsopF突变体构建成功,sopF基因的缺失并不影响S.typhimurium的生长,但在感染宿主细胞时,会诱导更强的细胞自噬反应,同时导致更弱的细胞毒性,说明sopF基因对S.typhimurium的毒力有影响,为后续用CRISPR/Cas9系统构建S.typhimurium突变体及研究sopF基因功能提供参考。

基于多孔金@铂纳米酶的比色型生物传感器用于检测牛乳中鼠伤寒沙门氏菌研究

建立了一种快速、灵敏检测牛乳中鼠伤寒沙门氏菌ATCC 14028(Salmonella typhimurium,S. typhimurium)的方法。利用鼠伤寒沙门氏菌多克隆抗体(Anti-S. typhimurium-pAb)修饰磁珠(Magnetic nanoparticles, MNPs)形成免疫磁珠(MNPs@pAb),鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体(Anti-S. typhimurium-mAb)标记多孔金@铂纳米酶(gold@platinum nanocatalysts,Au@PtNCs)形成具有催化性能的免疫探针Au@PtNCs@mAb,与鼠伤寒沙门氏菌最终反应形成MNPs@pAb-S. typhimurium-Au@PtNCs@mAb复合物后磁分离富集,在过氧化氢存在下可催化显色底物3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(H2O2-TMB)生成蓝色物质,并在652 nm处产生较强的特征吸收峰。在最佳条件下,最低检测限为81 CFU/mL,线性范围为97~9.7×10^(5) CFU/mL,实际牛乳样本加标实验中加标回收率为96.75%~101.75%,变异系数(CV)为1.10%~5.13%。该方法建立的比色型生物传感器具有简单、快速、灵敏等特性,可用于检测乳品中的鼠伤寒沙门氏菌。

亚甲基蓝介导的电化学传感界面PCR鼠伤寒沙门氏菌检测方法

文章研究一种可用于快速检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的方法,通过在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增体系中加入嵌入式氧化/还原指示剂亚甲基蓝可以实现对扩增产物的电化学检测。文中所提出的基于丝网印刷电极的电化学检测方法可在120 min内完成对鼠伤寒沙门氏菌的检测,线性范围为3×10^(1)~3×10^(7)CFU/mL,且不受牛奶基质影响。该方法快速、简便、特异性好,有望应用于食源性致病菌现场快速检测。

针对鼠伤寒沙门氏菌致病性岛Ⅲ筛选中药活性成分作为鼠伤寒沙门氏菌潜在毒力抑制剂

目的:筛选中药活性成分作为鼠伤寒沙门氏菌致病性岛III(Salmonella pathogenicity island III,SPI-3)潜在毒力抑制剂。方法:通过分子对接技术明确中药成分与SPI-3中的MgtC蛋白的潜在结合关系。使用β-半乳糖苷酶测定法评估中药成分对mgtC转录的影响。最后,通过评估细菌生长曲线和关键代谢基因的转录水平研究药物对细菌生长的影响。结果:所有27个候选中药成分均显示出与MgtC结合的潜力。阿魏酸、对羟基肉桂酸、牛蒡子苷和掌叶防己碱使mgtC的转录活性降低了15%以上。这四个成分对mgtC转录的最低抑制浓度分别为:阿魏酸16μM;对羟基肉桂酸40μM;牛蒡子苷80μM;掌叶防己碱160μM。此外,我们证实这四种成分均未抑制细菌生长。结论:在本研究中,我们建立了一种基于β-半乳糖苷酶测定法的鼠伤寒沙门氏菌毒力抑制剂筛选方法。以SPI-3为靶标,筛选了27种中药成分,发现有4种对鼠伤寒沙门氏菌毒力具有潜在的强效抑制作用。这为未来从草药中开发新型抗生素提供了先导化合物。这种方法也可用于筛选其他致病菌的毒力抑制剂。

鼠伤寒沙门氏菌荧光定位报告菌株的构建及其在猪肺泡巨噬细胞的示踪应用

利用增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表征鼠伤寒沙门氏菌株14028(Sal-14028),以研究其在猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)中的示踪作用,首先将增强型绿色荧光蛋白基因通过电击法转入Sal-14028,经卡那霉素抗性培养基筛选和测序鉴定,获得了具有绿色荧光信号的阳性菌株并检测其荧光稳定性,命名为Sal-pPpagC-EGFP。接着在同等条件下对比荧光菌株和野生菌株(WT)的生长特性,通过小鼠感染试验检测EGFP基因的插入对荧光菌株毒力有无明显影响,以分析荧光菌株的生物学特性;应用荧光显微镜和间接免疫荧光法检测荧光菌株在猪肺泡巨噬细胞3D4/21吞噬溶酶体中的定位情况。结果显示,在不同时间点,EGFP标记的鼠伤寒沙门氏菌在荧光显微镜下发出强烈的绿色荧光,且所带荧光不受抗性选择的影响,可稳定遗传。相同培养条件下,荧光菌株Sal-pPpagC-EGFP生长曲线的变化趋势与野生株基本相同。另外,经过改良寇氏法计算出的LD_(50)与野生株相比无显著差异(P>0.05),说明EGFP基因的插入对荧光菌株毒力无明显影响。荧光菌株在感染猪肺泡巨噬细胞后,吞噬溶酶体内可观察到标记菌株,并随着时间增加菌株数量呈现增长趋势。表明荧光菌株除了具备发光特性外,其他生物学性状没有明显改变。

化学发光磁酶免疫分析法检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌

建立化学发光磁酶免疫分析法检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌,并优化化学发光条件和免疫反应条件。结果表明:最佳发光条件为鲁米诺、过氧化氢、对碘苯酚的浓度分别为5.0×10^(-3)、1.76×10^(-2)、5.0×10^(-3)mol/L,辣根过氧化物酶的质量浓度为5.0×10^(-5)mg/mL;最佳免疫条件为免疫磁珠用量50μL、一抗体积稀释比1∶8000;方法的检出限为3.0×10^(3)CFU/mL,回收率为87.94%~113.04%。建立的方法可用于牛奶中鼠伤寒沙门氏菌的检测。

低聚木糖下调鼠伤寒沙门氏菌STM0306基因表达并抑制其黏附能力的作用

试验旨在探究低聚木糖(xylooligosaccharides,XOS)对鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium,S.typhimurium)黏附素基因表达及黏附能力的影响,为畜禽养殖中缓解沙门氏菌的感染提供基础。以IPEC-J2细胞为模型,探究了XOS对鼠伤寒沙门氏菌黏附能力的影响和黏附素STM0306基因表达的调控效果及机制。结果表明,XOS显著降低了鼠伤寒沙门氏菌对IPEC-J2细胞的黏附能力(P<0.05);qRT-PCR结果表明,XOS处理导致鼠伤寒沙门氏菌黏附素基因STM0306表达量极显著降低(P<0.01);进一步研究发现,XOS处理后,鼠伤寒沙门氏菌培养基的pH显著降低(P<0.05),Mg^(2+)浓度显著提高(P<0.05)。说明,XOS可能通过调控菌液的Mg^(2+)浓度在一定程度上抑制鼠伤寒沙门氏菌PhoP/PhoQ调控系统,进而抑制其下游基因STM0306表达,从而降低细菌对IPEC-J2细胞的黏附能力。