肺腺癌组织转化生长因子β_(1)、鼠双微体2表达变化及其与患者临床病理特征的关系

目的 分析转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))和鼠双微体2(MDM2)在肺腺癌组织中的表达变化及其与患者临床病理特征的关系,探讨二者在肺腺癌发生发展中的作用。方法 选择手术切除且经术后病理确诊的肺腺癌患者60例,术中收集其肺腺癌组织和癌旁正常肺组织各60例份。采用免疫荧光法观察TGF-β_(1)、MDM2蛋白定位情况,采用免疫组化法检测TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达情况,并比较不同病理特征的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率,分析肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白表达的关系。结果 与癌旁正常肺组织比较,肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白均呈过表达状态,TGF-β_(1)大量表达于细胞质、少量表达于细胞核,MDM2绝大多数表达于细胞质。肺腺癌组织TGF-β_(1)蛋白阳性表达42例份(70.00%)、MDM2蛋白阳性表达47例份(78.33%),癌旁正常肺组织分别为24例份(40.00%)、24例份(40.00%);肺腺癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均高于癌旁正常肺组织(P均<0.05)。不同性别、年龄、吸烟情况的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期及低分化的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期及高中分化者(P均<0.05)。肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白表达呈正相关关系(r=0.539,P<0.05)。结论 肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均升高,且淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期及低分化的肺腺癌组织升高更明显,二者可能共同参与了肺腺癌的发生发展。

微小RNA-34a-5p通过靶向鼠双微体4抑制巨噬细胞氧化应激损伤的作用

目的探讨微小RNA-34a-5p(miR-34a-5p)通过靶向鼠双微体4(MDM4)抑制巨噬细胞氧化应激损伤的作用。方法THP-1人单核细胞复苏后,培养分化为巨噬细胞。设立空白对照组。剩余细胞加入人源氧化低密度脂蛋白,孵育48 h,分化为巨噬泡沫细胞。设立动脉粥样硬化(AS)对照组。miR-34a-5p质粒转染,设为miR-34a-5p质粒转染组。每组24个重复。比较三组巨噬细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)蛋白及活性氧(ROS)水平,MDM4阳性率。结果空白对照组凋亡率为(2.55±0.32)%,AS对照组凋亡率为(28.16±4.23)%,miR-34a-5p转染组为(13.48±1.66)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。AS对照组高于空白对照组与miR-34a-5p转染组,miR-34a-5p转染组高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。三组MDA、SOD蛋白及ROS水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);AS对照组MDA、ROS水平最高,SOD水平最低,其次为miR-34a-5p转染组,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组MDM4阳性率为(8.33±0.35)%,AS对照组为(29.26±3.48)%,miR-34a-5p转染组为(14.26±1.59)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-34a-5p可下调MDM4,进而抑制巨噬细胞氧化应激损伤。

磷酸酶与张力蛋白同源物/蛋白激酶B/鼠双微体基因2信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联

目的探究磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/鼠双微体基因2(MDM2)信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联。方法回顾性分析2017年6月至2019年6月江苏大学附属医院收治的130例胃癌患者手术切除胃癌组织及癌旁组织。采用GEPIA数据库分析PTEN、p-AKT、p-MDM2在胃癌组织中的表达,比较癌旁组织、胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。随访至2022年6月,按照复发转移情况将患者分为复发转移组和无复发转移组。比较两组患者胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。采用Logistic回归分析法分析胃癌复发转移的影响因素。结果GEPIA分析TCGA数据库和GTEx项目来源的数据发现,胃癌组织的PTEN水平低于正常组织,p-AKT、p-MDM2水平均高于正常组织(P<0.05)。与癌旁组织比较,胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。与无复发转移组比较,复发转移组胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。对130例患者进行随访,随访时间36~60个月,平均随访时间(49.31±8.35)个月,中位随访时间为46个月。其中复发转移患者59例,无复发转移患者71例。与无复发转移组比较,复发转移组Ⅲ-Ⅳ期、中低分化、浸润深度T 3-T 4构成比升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,TNM分期(OR=2.125,95%CI:1.101~3.150)、分化程度(OR=2.659,95%CI:1.365~3.953)、浸润深度(OR=3.037,95%CI:1.254~4.821)、p-AKT(OR=3.142,95%CI:2.379~3.906)、p-MDM2(OR=6.666,95%CI:3.241~10.091)均是胃癌复发转移的危险因素;PTEN是胃癌复发转移的保护因素(OR=0.394,95%CI:0.014~0.774,P<0.05)。结论胃癌中PTEN/AKT/MDM2信号通路PTEN表达下调,p-AKT、p-MDM2表达上调,与胃癌复发转移密切相关,可能作为候选治疗靶点。

肺腺癌组织中赖氨酸乙酰转移酶5、鼠双微体2表达观察

目的 观察肺腺癌组织中赖氨酸乙酰转移酶5[K(lysine) acetyltransferase,KAT5]和鼠双微体2(Murine double minute2,MDM2)的表达变化,探讨其临床意义。方法 60例通过手术切除且经过病理学确诊肺腺癌患者,留取癌组织和癌旁肺组织。采用荧光免疫组织化学法对肺腺癌组织及癌旁组织KAT5、MDM2进行定位检测,采用免疫组织化学法对肺腺癌组织及癌旁组织KAT5、MDM2进行半定量检测,分析KAT5、MDM2阳性表达与肺腺癌患者临床病理参数的关系,采用Spearman相关检验法分析肺腺癌组织KAT5、MDM2表达的相关性。结果 相比于癌旁组织,肺腺癌组织中KAT5、MDM2高表达。肺腺癌组织及癌旁组织KAT5阳性表达率分别为65.00%(39/60)、45.00%(27/60),二者比较,P<0.05;MDM2阳性表达率分别为78.33%(47/60)、40.00%(24/60),二者比较,P<0.05。KAT5、MDM2阳性表达与肺腺癌患者的TNM分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关(P均<0.05)。肺腺癌组织中KAT5、MDM2的表达呈正相关(r=0.632,P<0.05)。结论 肺腺癌组织中KAT5、MDM2呈高表达。KAT5、MDM2阳性表达与肺腺癌患者的TNM分期和淋巴结转移相关。KAT5、MDM2可能协同促进肺腺癌的发生发展。

鼠双微体2与核糖体蛋白L23在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:研究胃癌中鼠双微体2(murine double mimute 2,MDM2)与核糖体蛋白L23(ribosomal protein L23,RPL23)的表达及其临床相关性,初步探讨他们在胃癌发生发展中的生物学意义.方法:采用免疫组织化学染色方法检测90例胃癌组织和30例胃癌旁正常组织中MDM2和RPL23蛋白的表达;统计学分析他们表达的相关性及其与临床病理因素、患者生存时间的联系.结果:胃癌组织中MDM2表达阳性率与癌旁对照组比较显著性增高(62.2%vs 40.0%,P<0.05),而RPL23蛋白表达显著性降低(30.0%vs 63.3%,P<0.05).MDM2和RPL23在胃癌中的表达呈负相关(r=-0.23,P=0.029).多因素分析显示MDM2高表达和RPL23低表达、淋巴结转移、肿瘤入侵深度、肿瘤的大小对胃癌患者生存预后的影响有统计学意义.结论:MDM2、RPL23的表达与胃癌的发生发展具有一定的相关性,针对两者的信号通路或许可作为胃癌预后的标志和新型治疗靶标.

鼠双微体2在卵巢浆液性和黏液性肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨原癌基因鼠双微体2(MDM2)在浆液性和黏液性卵巢上皮肿瘤(良性、交界性和恶性)中的表达特点及临床意义。方法收集手术切除的原发性卵巢浆液性和黏液性肿瘤标本82例,其中良性囊腺瘤22例(浆液性12例,黏液性10例)、交界性囊腺瘤30例(浆液性22例,黏液性8例)、恶性囊腺癌30例(浆液性18例,黏液性12例)。用免疫组织化学法检测标本中MDM2的水平,比较它们的表达强度。结果 MDM2在良性、交界性和恶性囊腺癌中的表达阳性率分别为0.0%、20.0%和66.7%,恶性囊腺癌组织中MDM2的表达高于交界性、良性囊腺瘤(P<0.05)。恶性浆液性囊腺癌中MDM2的阳性率低于恶性黏液性囊腺癌(44.4%比83.3%,P<0.05)。结论良性卵巢浆液性和黏液性囊腺瘤组织中MDM2未见表达,而恶性卵巢浆液性囊腺癌,尤其是恶性黏液性囊腺癌中MDM2表达的阳性率更高。

鼠双微体和PTEN在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的研究鼠双微体和PTEN在肝细胞癌中的表达,并分析二者的相关性及与患者临床因素的关系。方法应用免疫组织化学SP法检测60例肝细胞癌组织、27例癌旁肝组织和5例正常肝组织标本中的鼠双微体和PTEN蛋白的表达水平;采用SPSS13.0统计软件包进行统计学处理。结果(1)正常肝组织、癌旁肝组织和肝细胞癌组织中MDM2蛋白的阳性表达率分别是0%(0/5)、7.41%(2/27)、31.67%(19/60),差异有统计学意义(χ2=7.977,P=0.019)。鼠双微体蛋白阳性表达与门脉癌栓、包膜侵犯、病灶数目及TNM分期密切相关(P<0.05)。(2)正常肝组织、癌旁肝组织和肝细胞癌组织中PTEN蛋白的阳性表达率分别是100%(5/5)、96.30%(26/27)、56.67%(34/60),差异有统计学意义(χ2=23.956,P=0.001)。PTEN蛋白阳性表达与Endmanson分级、TNM分期、门脉癌栓、包膜侵犯、病灶数目及AFP水平密切相关(P<0.05)。(3)在肝细胞癌组织中,鼠双微体和PTEN蛋白表达呈负相关关系(rs=-0.423,P=0.001)。结论鼠双微体和PTEN的异常表达在肝细胞癌发生、发展、侵袭和转移过程起重要作用,二者可作为判断肝细胞癌生物学行为和预后的参考指标。

ERG和鼠双微体2蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义

目的检测ERG蛋白和鼠双微体(MDM2)蛋白在前列腺癌组织中的表达情况,并探讨其相关性。方法收集经病理学确诊为前列腺癌标本48例,良性前列腺增生10例,采用免疫组织化学二步法或SP法检测组织标本的ERG蛋白和MDM2蛋白的表达情况,采用χ~2检验及Spearman等级相关分析ERG和MDM2表达与前列腺癌分级的关系。结果前列腺癌组织中ERG和MDM2蛋白阳性表达率分别为33.3%和47.9%,在良性前列腺增生组未见表达,差异有统计学意义(P<0.05)。ERG和MDM2蛋白表达与前列腺癌Gleason评分分级不相关(P>0.05);但ERG与MDM2蛋白在前列腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.831,P=0.001)。结论 ERG和MDM2蛋白在前列腺癌组织中的高表达,与前列腺癌的发生、发展密切相关。前列腺癌中ERG蛋白表达与MDM2蛋白的异常表达密切相关说明这两个蛋白可能存在协同作用。

Musashi-2和鼠双微体2在卵巢上皮肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨Musashi-2和鼠双微体2(MDM2)在卵巢上皮肿瘤中的表达及临床意义。方法选择2014年1月至2016年6月在巴中市中心医院手术切除的原发性卵巢上皮肿瘤标本89例,其中良性囊腺瘤24例(浆液性11例、黏液性13例),恶性囊腺癌65例(浆液性30例、黏液性24例、其他组织学类型11例)。采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中Musashi-2和MDM2的表达,观察卵巢恶性上皮肿瘤Musashi-2和MDM2阳性表达与病理学参数的关系。结果恶性卵巢上皮肿瘤Musashi-2和MDM2的阳性表达率明显高于良性肿瘤(P<0.05);卵巢恶性上皮肿瘤直径≥2.5cm和FIGO分期Ⅲ/Ⅳ期患者Musashi-2表达阳性率明显增高,黏液性癌和FIGO分期Ⅲ/Ⅳ期患者MDM2的表达阳性率明显增高;Musashi-2阳性表达和MDM2阳性表达无关(r=-0.203,P=0.104)。结论Musashi-2和MDM2在卵巢恶性上皮肿瘤中阳性表达率高,这2种蛋白的阳性表达可能提示肿瘤分期晚,预后不良。

骨肉瘤组织p53、鼠双微体2蛋白表达及意义

目的观察骨肉瘤患者癌组织p53、鼠双微体2(MDM2)蛋白表达变化,并探讨其与化疗疗效、预后的关系。方法选择新辅助化疗前的骨肉瘤患者39例,取其活检获得的骨肉瘤组织及肿瘤周围正常骨组织,采用免疫组化法检测p53、MDM2蛋白表达。患者经新辅助化疗及手术后取其肿瘤组织,HE染色后以肿瘤坏死率评价化疗敏感性。分析骨肉瘤组织p53、MDM2蛋白表达与患者临床病理参数(性别、年龄、组织学类型、化疗敏感性)及无病生存时间(DFS)的关系。结果 39例患者术前活检肿瘤组织中p53蛋白阳性表达率为23.1%(9/39),MDM2蛋白阳性表达率为76.9%(30/39),肿瘤周围正常骨组织中均未见p53、MDM2蛋白阳性表达;两者比较P均<0.05。39例患者中,肿瘤坏死率<90%者27例,对化疗敏感性低;≥90%者12例,对化疗敏感性高。化疗敏感性低者肿瘤组织p53、MDM2蛋白阳性表达率明显高于化疗敏感性高者(P均<0.05);肿瘤组织p53、MDM2蛋白阳性表达率与患者性别、年龄、组织学类型均无关(P均>0.05)。肿瘤组织p53蛋白阴性与阳性表达者DFS分别为34.0(18.8,42.0)、12.0(9.0,17.0)个月,两者比较P<0.05;MDM2蛋白阴性与阳性表达者DFS分别为53.0(42.0,63.5)、18.5(12.0,34.0)个月,两者比较P<0.05。结论骨肉瘤组织p53、MDM2蛋白阳性表达率升高,可导致患者化疗敏感性降低及预后不良。

RNA干扰抑制乳腺癌MCF-7细胞鼠双微体-2基因表达及细胞增殖的实验研究

目的研究乳腺增生症、乳腺导管内癌和浸润性乳腺癌组织中mdm2蛋白的表达及siRNA mdm2对肿瘤细胞增殖的影响。方法采用免疫组织化学方法检测乳腺增生症、乳腺导管内癌和浸润性乳腺癌组织中mdm2蛋白的表达;将siRNA mdm2质粒转染乳腺癌MCF-7细胞,应用MTT检测siRNA mdm2对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果 mdm2蛋白在乳腺导管内癌组织和浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率均为100%(18/18,20/20),在乳腺增生症组织中表达阳性率为20%(4/20)。与乳腺增生症组织比较,乳腺导管内癌组织和浸润性乳腺癌组织中mdm2蛋白阳性表达率明显增高(P<0.01)。MTT结果表明转染pGCsiRNA-mdm2后MCF-7细胞生长受到抑制,与mock组和pGCsiRNA-scramble组比较差异有统计学意义(P<0.01)。转染pGCsiRNA-mdm2 72 h后与48 h比较,MCF-7细胞生长受抑制明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 mdm2在乳腺癌组织中存在广泛表达,其阳性表达可能促进肿瘤细胞的增殖过程。

卵巢癌荷瘤裸鼠鼠双微体扩增基因siRNA分子探针显像研究

目的:探究放射性核素^(99)Tc^(m)标记siRNA制备的鼠双微体扩增基因(murine double minute 2,MDM2)分子探针特性及卵巢癌荷瘤裸鼠显像效果。方法:将针对目的基因MDM2设计的siRNA1及对照组NC siRNA与^(99)Tc^(m)通过HYNIC链接,合成分子探针^(99)Tc^(m)-siRNA1、^(99)Tc^(m)-NC siRNA,检测探针的标记率、放射性化学纯度、稳定性、生物活性、细胞摄取率。应用TurboFect体内转染试剂包裹^(99)Tc^(m)-siRNA1、^(99)Tc^(m)-NC siRNA探针,进行高表达MDM2的荷瘤裸鼠显像,测量不同时间点肿瘤/对侧肌肉组织(T/M)的放射性计数比值,并分析探针在小鼠体内分布的情况。结果:^(99)Tc^(m)-siRNA1、^(99)Tc^(m)-NC siRNA标记率分别为(62.17±3.16)%、(61.56±4.08)%,P>0.05(n=3),^(99)Tc^(m)-siRNA1的放化纯度为(94.5±3.8)%,经体外孵育2 h、4 h、6 h后分子探针并未发生明显解离,放化纯度均达到90%以上,稳定性好。经^(99)Tc^(m)-siRNA1探针干扰后MDM2基因mRNA相对表达量为0.34±0.06(n=3),蛋白相对表达量为0.46±0.09(n=3)。体外摄取试验中,SKOV3细胞在不同时间段对探针的摄取率持续上升,在体内显像中,^(99)Tc^(m)-siRNA1探针组1 h、4 h、10 h各时间点的T/M比值分别为3.079±0.568、2.927±0.140、3.465±0.432(n=4),^(99)Tc^(m)-NC siRNA组1 h、4 h、10 h各时间点的T/M比值分别为:1.472±0.272、1.272±0.165、1.804±0.165(n=4),^(99)Tc^(m)-siRNA1不同时间点在肿瘤组织中分布均较高。结论:^(99)Tc^(m)-siRNA1探针的标记方法、递呈方式可行,能够在肿瘤内特异性聚集,可为卵巢癌的诊断提供一种实时无创显像的方式。

鼠双微体2在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的通过检测鼠双微体2(murine double minute 2,MDM2)在人乳腺癌中的表达,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用。方法选取拟手术切除的70例乳腺癌患者,自乳腺癌癌灶中心非坏死部位及距肿瘤切缘5 cm以外的配对正常乳腺组织分别收集标本。采用实时荧光定量RT-PCR和免疫组化法检测乳腺癌组织中MDM2 mRNA及其蛋白的表达水平,定量分析其表达与临床病理特征的关系。结果 MDM2在乳腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常乳腺组织,差异有统计学意义(P=0.001)。MDM2 mRNA水平与肿瘤大小、分期、组织学类型、淋巴结转移和HER-2阳性表达有关(P<0.05),与雌、孕激素受体无关(P>0.05);MDM2蛋白表达与肿瘤组织学类型、淋巴结转移和HER-2阳性表达有关(P<0.05),与肿瘤大小、分期、和雌、孕激素受体无关(P>0.05)。结论乳腺癌组织中MDM2表达明显升高,在乳腺癌的浸润与转移中具有重要作用。

微小RNA-4478下调鼠双微体-2对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨微小RNA-4478(miR-4478)对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用并阐明相关机制。方法实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-4478在结肠癌组织中的表达。结肠癌SW1116细胞转染miR-4478 mimics及阴性对照后,分别采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)和小室(Transwell)法检测细胞的增殖、迁移及侵袭。预测miR-4478的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证靶基因。结肠癌SW1116细胞转染miR-4478 mimics或抑制物后,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测细胞靶基因表达。靶基因过表达验证细胞增殖、迁移及侵袭。Western blot法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、P21、钙粘附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达。结果相对于癌旁组织,miR-4478在结肠癌组织中的表达显著降低[(0.84±0.07)比(0.26±0.02),t=48.461,P<0.05];转染miR-4478 mimics可显著抑制细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.001)。miR-4478可负向调控MDM2表达(P<0.001)。miR-4478过表达可抑制由MDM2过表达导致的结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.001)。结论miR-4478通过抑制MDM2表达而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

鼠双微体基因在肝癌组织中表达的意义

目的:探讨肝癌中鼠双微体基因(MDM2)表达的临床病理意义。方法:免疫组织化学法检测MDM2在172例肝癌组织中的表达,分析MDM2表达与病人临床病理特征的关系,并对临床数据进行分析。log-rank行生存检验,Cox比例风险模型分析MDM2在肝癌组织中预后。siRNA下调Hep G2肝癌细胞MDM2蛋白,观察对HepG2细胞增殖、克隆形成影响。结果:肝癌病人中MDM2阳性率为53.2%,高MDM2表达与病人肝内淋巴结转移、肿瘤级别高、微血管浸润均有一定关系(P<0.05~P<0.01),与病人性别、年龄、乙型肝炎状态、肿瘤大小、包膜完整性、肿瘤是否多发、BCLC分期及肿瘤复发均无明显关系(P>0.05)。单因素分析显示高MDM2表达与病人较差的生存率有一定关系(P<0.05~P<0.01),而Cox比例风险模型分析提示高MDM2表达在肝癌生存预测中提示预后较差(P<0.01)。siRNA下调Hep G2肝癌细胞MDM2蛋白表达可抑制细胞增殖、克隆形成。结论:肝癌病人中MDM2高表达与肿瘤进展有关,MDM2可能与肝癌病人预后较差有关。

鼠双微体基因2与恶性肿瘤相关性的研究进展

鼠双微体基因2（murine doubleminute 2,MDM2）是一种癌基因,MDM2基因的扩增或过度表达与多种恶性肿瘤的发生和发展密切相关,本文主要对MDM2基因与恶性肿瘤的相关性进行综述。1 MDM2基因MDM2是1987年克隆出来的一个高度扩增的基因[1],存在于一个含有双微体（double minutes,DM）的自发转化小鼠Balb/c3T3成纤维细胞系中。

微小RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取2016年5月至2018年11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作56例为研究对象。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测56例胶质瘤组织和56例正常脑组织中miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤U251细胞,转染miR模拟对照序列(miR-NC)、miR-520a-5p9模拟物(miR-520a-5p mimics)至U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、流式细胞仪、Transwell和蛋白质印迹法检测过表达miR-520a-5p对U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因(MDM2)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证miR-520a-5p与MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂(anti-miR-520a-5p)对U251细胞中MDM2蛋白表达的影响。共转染miR-520a-5p mimics和MDM2过表达载体(pcD⁃NA3.1-MDM2)至U251细胞,上述相同方法观察过表达MDM2能否逆转过表达miR-520a-5p对U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中miR-520a-5p表达降低(P<0.05)。与转染miR-NC的U251细胞比较,转染miR-520a-5p mimics的U251细胞24 h、48 h和72 h的OD值[(0.36±0.04)比(0.50±0.05)、(0.49±0.05)比(0.95±0.09)、(0.71±0.07)比(1.36±0.13)]、迁移细胞数[(67±6.26)比(144±13.38)]、侵袭细胞数[(59±5.47)比(135±13.12)]均降低(P<0.05),凋亡率[(21.17±2.06)%比(7.82±0.77)%]升高(P<0.05),细胞中cyclinD1、Bcl-2和MMP-2的蛋白表达水平均降低(P<0.05),而P21、Bax和E-cadherin的蛋白表达水平均升高(P<0.05)。miR-520a-5p可与MDM2的3’UTR靶向结合,同时转染miR-520a-5p mimics的U251细胞中MDM2蛋白水平显著低于转染miR-NC的细胞,而转染anti-miR-520a-5p的U251细胞中MDM2的蛋白水平显著高于转染anti-miR-NC的细胞。与共转染miR-520a-5p mimics与pcDNA3.1的U251细胞比较,共转染miR-520a-5p mim⁃ics与pcDNA3.1-MDM2的U251细胞24 h、48 h和72 h的OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),细胞中cyclinD1、Bcl-2和MMP-2的蛋白表达水平均升高(P<0.05),而P21、Bax和E-cadherin的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达miR-520a-5p可能通过靶向负调控MDM2抑制胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。

富含脯氨酸蛋白11和鼠双微体基因2在结直肠癌组织的表达及其临床意义

目的:探讨结直肠癌组织中富含脯氨酸蛋白11(PRR11)和鼠双微体基因2(MDM2)的表达及临床意义。方法:选取青岛市中医医院(青岛市海慈医院、青岛大学附属青岛市海慈医院)2019年1月至2022年12月收治的125例结直肠癌组织样本作为研究对象,采用免疫组织化学法检测结直肠癌组织和癌旁组织中PRR11和MDM2的表达,采用χ^(2)检验分析PRR11和MDM2表达与结直肠癌患者病理特征及预后的相关性。结果:结直肠癌组织中PRR11表达率为79.20%(99/125),明显高于癌旁组织[28.80%(36/125)],两者比较差异有统计学意义(χ^(2)=63.913,P<0.01)。结直肠癌组织中MDM2表达率为63.20%(79/125),明显高于癌旁组织[21.60%(27/125)],两者比较差异有统计学意义(χ^(2)=44.287,P<0.01)。PRR11表达水平与结直肠癌患者组织学分化程度、淋巴结转移、TNM分期(TNM stage)、浸润深度明显相关(χ^(2)=4.636、5.900、4.616、5.007,P<0.05),PRR11表达水平与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤部位无相关(χ^(2)=0.024、0.019、0.075,P>0.05)。MDM2表达水平与结直肠癌患者TNM分期、淋巴结转移、浸润深度明显相关(χ^(2)=5.871、4.952、5.566,P<0.05),MDM2表达水平与结直肠癌患者组织学分化程度、性别、年龄、肿瘤部位无相关(χ^(2)=0.021、0.028、0.183、0.005,P>0.05)。结论:结直肠癌组织中PRR11和MDM2呈高表达,PRR11和MDM2表达水平在结直肠癌的发生发展过程中起促进作用,两者表达的检测可为结直肠癌的诊断及预后提供判断依据。

miR-513a-3p靶向鼠双微体基因2对胃癌细胞增殖迁移侵袭的影响

目的探讨miR-513a-3p靶向鼠双微体基因2(MDM2)对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用脂质体法将miR-NC、miR-513a-3p、anti-miR-NC、anti-miR-513a-3p、si-NC、si-MDM2、miR-513a-3p+pcDNA3.1和miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2转染至BGC-823细胞中,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-513a-3p的表达水平,采用Western blot检测cyclin D1、MMP-2、p21、E-cadherin和MDM2蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝法检测各组胃癌细胞BGC-823的活性,Transwell法检测各组胃癌细胞BGC-823的迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-513a-3p与MDM2的靶向关系。结果胃癌细胞BGC-823、MGC-803中miR-513a-3p的表达水平分别为0.21±0.02和0.34±0.03,与胃上皮细胞GES-1(0.76±0.08)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,miR-NC组细胞的吸光度(A)值分别为0.57±0.05、1.03±0.10和1.43±0.14,miR-513a-3p组细胞的A值分别为0.36±0.03、0.48±0.05和0.63±0.06,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(130±11.80)个和(117±10.60)个,miR-513a-3p组细胞分别为(58±5.64)个和(50±5.13)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,si-NC组细胞的A值分别为0.53±0.05、0.95±0.10和1.36±0.14,si-MDM2组细胞的A值分别为0.39±0.04、0.57±0.06和0.80±0.08;si-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(141±12.02)个和(109±10.60)个,si-MDM2组的迁移和侵袭数分别为(66±6.67)个和(61±6.18)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,miR-513a-3p+pcDNA3.1组细胞的A值分别为0.34±0.03、0.46±0.05和0.61±0.06,miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2组细胞的A值分别为0.48±0.05、0.82±0.08和1.17±0.12,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-513a-3p+pcDNA3.1组细胞的迁移和侵袭数分别为(56±5.71)个和(51±5.16)个,miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2组分别为(113±10.28)个和(104±10.02)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-513a-3p可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与靶向调控MDM2的表达有关,可为胃癌的预防和治疗提供新靶点。

微小RNA-339-5p通过靶向鼠双微体基因调节乳腺癌MCF-7细胞p53肿瘤抑制通路的研究

目的 观察微小RNA（miRNA,miR）-339-5p通过鼠双微体基因（MDM2）对乳腺癌MCF-7细胞p53肿瘤抑制通路调节的效果.方法 建立高通量筛选方法,将hsa-miR-339-5p前体miRNA、hsa-miR-192-5p前体miRNA、hsa-miR-605前体miRNA、小干扰RNA（siRNA） p53和siRNA MDM2转染至MCF-7、HEK293、ACNH和BJ-人端粒酶反转录酶（hTERT）细胞中,5-氟尿嘧啶（5-Fu）水溶液或雷公藤甲素处理转染细胞,Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测MDM2表达.结果 转染miR-339-5p后,MCF-7和HCT116细胞系中p53蛋白水平分别升高2.60倍及2.48倍;在无遗传毒性应激情况下,MDM2蛋白水平显著降低.5-Fu处理后,p53蛋白及目标MDM2和p21水平均上调.miR-339-5p与siRNA MDM2可降低MDM2 mRNA水平.MCF-7细胞株中,与对照组比较,MDM2mRNA水平均由于转染siRNA MDM2或miR-339-5p而分别降低至0.48±0.15和0.47±0.08.雷公藤甲素处理后,MDM2 mRNA水平下降更加明显,分别为0.19±0.05和0.23 ±0.10.p53敲除试验则表明miR-339前体水平升高不依赖于p53.MDM2基因3＆#39;端非编码区域（3＆#39;-UTR）包含有能与miR-339-5p结合的功能位点,正是这些位点的存在介导了转录本抑制.结论 miR-339-5p通过靶向MDM2调节乳腺癌MCF-7细胞p53肿瘤抑制通路.