磷酸酶与张力蛋白同源物/蛋白激酶B/鼠双微体基因2信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联

目的探究磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/鼠双微体基因2(MDM2)信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联。方法回顾性分析2017年6月至2019年6月江苏大学附属医院收治的130例胃癌患者手术切除胃癌组织及癌旁组织。采用GEPIA数据库分析PTEN、p-AKT、p-MDM2在胃癌组织中的表达,比较癌旁组织、胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。随访至2022年6月,按照复发转移情况将患者分为复发转移组和无复发转移组。比较两组患者胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。采用Logistic回归分析法分析胃癌复发转移的影响因素。结果GEPIA分析TCGA数据库和GTEx项目来源的数据发现,胃癌组织的PTEN水平低于正常组织,p-AKT、p-MDM2水平均高于正常组织(P<0.05)。与癌旁组织比较,胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。与无复发转移组比较,复发转移组胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。对130例患者进行随访,随访时间36~60个月,平均随访时间(49.31±8.35)个月,中位随访时间为46个月。其中复发转移患者59例,无复发转移患者71例。与无复发转移组比较,复发转移组Ⅲ-Ⅳ期、中低分化、浸润深度T 3-T 4构成比升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,TNM分期(OR=2.125,95%CI:1.101~3.150)、分化程度(OR=2.659,95%CI:1.365~3.953)、浸润深度(OR=3.037,95%CI:1.254~4.821)、p-AKT(OR=3.142,95%CI:2.379~3.906)、p-MDM2(OR=6.666,95%CI:3.241~10.091)均是胃癌复发转移的危险因素;PTEN是胃癌复发转移的保护因素(OR=0.394,95%CI:0.014~0.774,P<0.05)。结论胃癌中PTEN/AKT/MDM2信号通路PTEN表达下调,p-AKT、p-MDM2表达上调,与胃癌复发转移密切相关,可能作为候选治疗靶点。

鼠双微体基因2与恶性肿瘤相关性的研究进展

鼠双微体基因2（murine doubleminute 2,MDM2）是一种癌基因,MDM2基因的扩增或过度表达与多种恶性肿瘤的发生和发展密切相关,本文主要对MDM2基因与恶性肿瘤的相关性进行综述。1 MDM2基因MDM2是1987年克隆出来的一个高度扩增的基因[1],存在于一个含有双微体（double minutes,DM）的自发转化小鼠Balb/c3T3成纤维细胞系中。

微小RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取2016年5月至2018年11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作56例为研究对象。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测56例胶质瘤组织和56例正常脑组织中miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤U251细胞,转染miR模拟对照序列(miR-NC)、miR-520a-5p9模拟物(miR-520a-5p mimics)至U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、流式细胞仪、Transwell和蛋白质印迹法检测过表达miR-520a-5p对U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因(MDM2)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证miR-520a-5p与MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂(anti-miR-520a-5p)对U251细胞中MDM2蛋白表达的影响。共转染miR-520a-5p mimics和MDM2过表达载体(pcD⁃NA3.1-MDM2)至U251细胞,上述相同方法观察过表达MDM2能否逆转过表达miR-520a-5p对U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中miR-520a-5p表达降低(P<0.05)。与转染miR-NC的U251细胞比较,转染miR-520a-5p mimics的U251细胞24 h、48 h和72 h的OD值[(0.36±0.04)比(0.50±0.05)、(0.49±0.05)比(0.95±0.09)、(0.71±0.07)比(1.36±0.13)]、迁移细胞数[(67±6.26)比(144±13.38)]、侵袭细胞数[(59±5.47)比(135±13.12)]均降低(P<0.05),凋亡率[(21.17±2.06)%比(7.82±0.77)%]升高(P<0.05),细胞中cyclinD1、Bcl-2和MMP-2的蛋白表达水平均降低(P<0.05),而P21、Bax和E-cadherin的蛋白表达水平均升高(P<0.05)。miR-520a-5p可与MDM2的3’UTR靶向结合,同时转染miR-520a-5p mimics的U251细胞中MDM2蛋白水平显著低于转染miR-NC的细胞,而转染anti-miR-520a-5p的U251细胞中MDM2的蛋白水平显著高于转染anti-miR-NC的细胞。与共转染miR-520a-5p mimics与pcDNA3.1的U251细胞比较,共转染miR-520a-5p mim⁃ics与pcDNA3.1-MDM2的U251细胞24 h、48 h和72 h的OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),细胞中cyclinD1、Bcl-2和MMP-2的蛋白表达水平均升高(P<0.05),而P21、Bax和E-cadherin的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达miR-520a-5p可能通过靶向负调控MDM2抑制胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。

富含脯氨酸蛋白11和鼠双微体基因2在结直肠癌组织的表达及其临床意义

目的:探讨结直肠癌组织中富含脯氨酸蛋白11(PRR11)和鼠双微体基因2(MDM2)的表达及临床意义。方法:选取青岛市中医医院(青岛市海慈医院、青岛大学附属青岛市海慈医院)2019年1月至2022年12月收治的125例结直肠癌组织样本作为研究对象,采用免疫组织化学法检测结直肠癌组织和癌旁组织中PRR11和MDM2的表达,采用χ^(2)检验分析PRR11和MDM2表达与结直肠癌患者病理特征及预后的相关性。结果:结直肠癌组织中PRR11表达率为79.20%(99/125),明显高于癌旁组织[28.80%(36/125)],两者比较差异有统计学意义(χ^(2)=63.913,P<0.01)。结直肠癌组织中MDM2表达率为63.20%(79/125),明显高于癌旁组织[21.60%(27/125)],两者比较差异有统计学意义(χ^(2)=44.287,P<0.01)。PRR11表达水平与结直肠癌患者组织学分化程度、淋巴结转移、TNM分期(TNM stage)、浸润深度明显相关(χ^(2)=4.636、5.900、4.616、5.007,P<0.05),PRR11表达水平与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤部位无相关(χ^(2)=0.024、0.019、0.075,P>0.05)。MDM2表达水平与结直肠癌患者TNM分期、淋巴结转移、浸润深度明显相关(χ^(2)=5.871、4.952、5.566,P<0.05),MDM2表达水平与结直肠癌患者组织学分化程度、性别、年龄、肿瘤部位无相关(χ^(2)=0.021、0.028、0.183、0.005,P>0.05)。结论:结直肠癌组织中PRR11和MDM2呈高表达,PRR11和MDM2表达水平在结直肠癌的发生发展过程中起促进作用,两者表达的检测可为结直肠癌的诊断及预后提供判断依据。

miR-513a-3p靶向鼠双微体基因2对胃癌细胞增殖迁移侵袭的影响

目的探讨miR-513a-3p靶向鼠双微体基因2(MDM2)对胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法采用脂质体法将miR-NC、miR-513a-3p、anti-miR-NC、anti-miR-513a-3p、si-NC、si-MDM2、miR-513a-3p+pcDNA3.1和miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2转染至BGC-823细胞中,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-513a-3p的表达水平,采用Western blot检测cyclin D1、MMP-2、p21、E-cadherin和MDM2蛋白的表达水平,四甲基偶氮唑蓝法检测各组胃癌细胞BGC-823的活性,Transwell法检测各组胃癌细胞BGC-823的迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告基因检测实验检测miR-513a-3p与MDM2的靶向关系。结果胃癌细胞BGC-823、MGC-803中miR-513a-3p的表达水平分别为0.21±0.02和0.34±0.03,与胃上皮细胞GES-1(0.76±0.08)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,miR-NC组细胞的吸光度(A)值分别为0.57±0.05、1.03±0.10和1.43±0.14,miR-513a-3p组细胞的A值分别为0.36±0.03、0.48±0.05和0.63±0.06,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(130±11.80)个和(117±10.60)个,miR-513a-3p组细胞分别为(58±5.64)个和(50±5.13)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,si-NC组细胞的A值分别为0.53±0.05、0.95±0.10和1.36±0.14,si-MDM2组细胞的A值分别为0.39±0.04、0.57±0.06和0.80±0.08;si-NC组细胞的迁移和侵袭数分别为(141±12.02)个和(109±10.60)个,si-MDM2组的迁移和侵袭数分别为(66±6.67)个和(61±6.18)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。培养24、48和72 h后,miR-513a-3p+pcDNA3.1组细胞的A值分别为0.34±0.03、0.46±0.05和0.61±0.06,miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2组细胞的A值分别为0.48±0.05、0.82±0.08和1.17±0.12,差异均有统计学意义(均P<0.05);miR-513a-3p+pcDNA3.1组细胞的迁移和侵袭数分别为(56±5.71)个和(51±5.16)个,miR-513a-3p+pcDNA3.1-MDM2组分别为(113±10.28)个和(104±10.02)个,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-513a-3p可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与靶向调控MDM2的表达有关,可为胃癌的预防和治疗提供新靶点。

鼠双微体基因2和锌指转录因子Snail在甲状腺癌组织的表达及其临床意义

目的探讨鼠双微体基因2(MDM2)和锌指转录因子Snail在甲状腺癌组织的表达及其临床意义。方法收集2016年3月至2021年2月吉林省肿瘤医院病理确诊的125例甲状腺肿瘤患者的组织标本,其中94例甲状腺癌组织、31例甲状腺瘤组织,同时选择24例正常甲状腺组织为对照组。采用免疫组织化学法检测各组织中MDM2和Snail表达水平,进行χ^(2)检验统计学分析MDM2和Snail的表达与甲状腺癌临床病理学参数之间的关系。结果甲状腺瘤组织、正常甲状腺组织和甲状腺癌组织中MDM2表达率分别为35.48%(11/31)、8.33%(2/24)和82.98%(78/94),两两之间比较差异有统计学意义(χ^(2)=25.645、48.793、5.525,P<0.05);MDM2表达水平与甲状腺癌TNM分期、组织学分级、颈淋巴结转移、包膜浸润明显相关(χ^(2)=7.592、8.516、5.829、5.048,P<0.05),差异有统计学意义。甲状腺瘤组织、正常甲状腺组织和甲状腺癌组织中Snail表达率分别为38.71%(12/31)、12.50%(3/24)和67.02%(63/94),两两之间比较差异有统计学意义(χ^(2)=7.786、23.057、4.685,P<0.05);Snail表达水平与甲状腺癌颈淋巴结转移、TNM分期和包膜浸润明显相关(χ^(2)=5.966、5.457、4.250,P<0.05),差异有统计学意义。结论 MDM2和Snail在甲状腺癌组织过表达,MDM2和Snail的表达与甲状腺癌的发生、发展及预后密切相关。

MDM2-309T/G基因多态性与食管癌易感性关系的Meta分析

目的探讨MDM2基因多态性与食管癌易感性关联性。方法计算机检索PubMed、中国生物医学期刊网、中国知网、万方、维普数据库,收集有关双微体基因2(MDM2)基因多态性与食管癌易感性关系的病例对照研究,提取纳入文献的相关数据进行Meta分析,以病例组与对照组MDM2各种模型的比值比(OR)为效应指标,Egger's检验和Bggerg检验发表偏倚。结果共7篇研究符合纳入标准,累计病例组2 206例,对照组3 327例。荟萃分析结果显示:与野生型纯合子(309T/T)基因型个体相比,变异纯合子(309G/G)与杂合子(309G/T)基因型个体中食管癌风险增高且有统计学意义[GG vs.TT:OR=11.64,95%CI10.17~13.31;GT vs.TT:OR=11.07,95%CI10.02~12.22]。在隐性遗传模型中(GG vs.GT/TT)食管癌风险增高有统计学意义[GG vs.GT/TT:OR=1.17,95%CI 1.03~1.32],但在显性遗传模型中(GG/GT vs.TT)发病率风险增高无统计学意义[GG/GT vs.TT:OR=1.02,95%CI0.94~1.11]。在按地区分组的亚组分析中,Meta分析结果显示:MDM2-309T/G基因多态性与中国人群食管癌风险显著相关[GG vs.TT:OR=10.77,95%CI9.35~I2.42,P=0.000;GTvs.TT:OR=10.11,95%CI9.11~11.23,P=0.000;GG vs.GT/TT:OR=7.03,95%CI6.44~7.67,P=0.000;GG/GT vs.TT:OR=5.86,95%CI5.12~6.69,P=0.000]。结论MDM2-309T/G基因多态性与中国人群食管癌风险显著相关,MDM2-309G/G基因型个体食管癌患病风险可能增高。

miR-758-3p通过靶向作用鼠双微体基因2对胃癌细胞MGC803侵袭和增殖的影响

目的观察微小RNA(miR)-758-3p对鼠双微体基因2(MDM2)表达的调控作用及对胃癌细胞MGC803侵袭和增殖的影响。方法采用生物信息学软件预测MDM2为miR-758-3p靶基因,分别将野生型MDM2基因3’端非翻译区荧光素酶报告基因载体和miR-758-3p靶序列突变型载体及相应的miRNA转染至胃癌细胞MGC803,双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶活性。采用脂质体转染法将miR-758-3p模拟物转入胃癌细胞MGC803,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染效果,Real-time PCR和Western blotting检测转染miR-758-3p后在胃癌细胞中MDM2的表达水平。TransweU实验和CCK.8实验检测细胞侵袭和增殖。采用SPSS 20.0进行统计分析。结果双荧光素酶报告基因检测系统证实miR.758.3p能够靶向调控MDM2基因(P<0.05)。胃癌细胞MGC803转染miR-758-3p模拟物后,miR-758-3p的表达水平(6.68±0.53)明显高于miR-NC组(0.84±0.12),差异有统计学意义(P<0.01)。与miR.NC组比较,转染miR-758-3p模拟物后MGC803细胞中MDM2的表达下调(P<0.05)。miR-NC组和miR-758-3p组侵袭细胞数量分别为(136.00±16.62)个和(79.49±6.42)个,敲减MDM2之后,细胞的侵袭能力明显下降(P<0.05)。CCK-8结果显示,与miR-NC组的增殖比较,转染miR-758-3p组胃癌细胞MGC803的增殖能力明显降低,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-758-3p能够通过靶向调控MDM2而降低胃癌细胞MGCS03的侵袭和增殖能力。

鼠双微体同源基因2SNP309多态性与亚洲人群消化道肿瘤遗传易感性研究的Meta分析

目的综合评价鼠双微体同源基因2（MDM2）基因启动子区309位点单核苷酸多态（SNP309T〉G）与亚洲人群消化道肿瘤易感性的关系。方法检索中国学术期刊全文数据库（CNgI）、万方数据库、SpringerLink数据库和PubMed数据库，以得到MDM2SNP309T〉G和消化道肿瘤易感性关系的所有病例对照研究文献（2005年至2012年），并用RevMan4．2软件中Meta分析法合并SNP309T〉G与亚洲人群消化道肿瘤易感性关系的OR值，然后对入选文献的所有数据进行敏感性分析和发表偏倚检验。结果共有国内外17篇合格文献纳入研究，累计病例和对照病例分别为5183例和6660例。合并结果显示，携带MDM2SNP309GG基因型者患消化道肿瘤的危险性相对于携带TG＋TT基因型的合并0R值是2．23[95％可信区间（95％CI）=1．73～2．89，P〈0．01]。发表偏倚评估未发现明显的偏倚。结论MDM2SNP309GG基因型可能是亚洲人群消化道肿瘤易感性的危险因素。

鼠双微体基因2和细胞分裂周期蛋白20在肝癌组织的表达及其临床意义

目的探讨鼠双微体基因2(MDM2)和细胞分裂周期蛋白20(CDC20)在原发性肝癌(PLC)组织中的表达、及其与PLC临床病理特征的关系。方法收集2016年3月至2021年9月临沂市人民医院和山东医学高等专科学校附属医院病理确诊的25例正常肝组织标本、41例肝硬化组织标本、81例PLC组织标本, 采用免疫组织化学方法检测上述组织中MDM2和CDC20表达, 采用χ2检验分析两者的表达与PLC临床病理特征的关系。结果正常肝组织、肝硬化组织与PLC组织中MDM2阳性表达率分别为12.00%(3/25)、36.59%(15/41)、62.96%(51/81), 两两之间比较差异有统计学意义(χ^(2)= 4.733、19.854、7.627, P<0.05);MDM2表达水平与PLC肿瘤大小、癌细胞分化程度、TNM分期(TNM stage)和血管浸润明显相关(χ^(2)=5.006、7.836、5.871、4.669, P<0.05)。正常肝组织、肝硬化组织与PLC组织中CDC20阳性表达率分别为16.00%(4/25)、34.21%(19/41)、67.90%(55/81), 两两之间比较差异有统计学意义(χ^(2)=6.297、5.302、20.852, P<0.05);CDC20表达水平与PLC血管浸润、肿瘤大小、TNM分期明显相关(χ^(2)=6.860、5.299、6.800, P<0.05)。结论 MDM2和CDC20在PLC组织中表达上调, MDM2和CDC20表达可能与PLC的发生、发展、转移有关, MDM2和CDC20有助于预测PLC进展和预后。

鼠双微体基因2和高迁移率族蛋白B1在骨肉瘤组织的表达及其临床意义

目的探讨鼠双微体基因2(MDM2)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在骨软骨瘤组织和骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。方法收集2016年1月至2020年12月辽宁省人民医院和中国医科大学附属盛京医院资料病理学确诊的27例骨软骨瘤组织和80例骨肉瘤组织标本,应用免疫组织化学法检测上述组织MDM2蛋白和HMGB1蛋白的表达水平,采用χ^(2)检验进行统计学分析。结果骨肉瘤组织中MDM2表达率为68.75%(55/80)、明显高于骨软骨瘤组织MDM2表达率[7.41%(2/27)],两者差异有统计学意义(χ^(2)=30.515,P<0.01),MDM2表达水平与骨肉瘤恩内金分期(Eneeking分期)、肺转移明显相关(χ^(2)=5.1239、4.4649,P<0.05),差异有统计学意义。骨肉瘤组织中HMGB1表达率为56.25%(45/80)、明显高于骨软骨瘤组织中HMGB1表达率[14.82(4/27)],两者差异有统计学意义(χ^(2)=13.962,P<0.01)。HMGB1表达水平与骨肉瘤Eneeking分期、肺转移、软组织浸润明显相关(χ^(2)=5.261、4.127、4.898,P<0.05),差异有统计学意义。结论 MDM2蛋白和HMGB1蛋白表达与骨肉瘤转移、侵袭明显相关,检测MDM2和HMGB1有助于诊断骨肉瘤患者病情进展。

Polo样激酶1和鼠双微体基因2在胃癌组织的表达及其临床意义

目的探讨Polo样激酶1(PLK1)以及鼠双微体基因2(MDM2)在胃癌组织的表达及其与临床病理因素之间的关系。方法选取长治医学院附属和济医院和长治市人民医院2017年4月至2021年3月病理确诊的99例胃癌组织和癌旁组织,应用免疫组织化学方法检测组织中PLK1蛋白以及MDM2蛋白表达水平,采用χ^(2)检验并结合临床资料分析PLK1蛋白和MDM2蛋白与胃癌临床病理特征之间的关系。结果胃癌组织PLK1蛋白表达率为79.80%(79/99)、对应癌旁组织PLK1蛋白表达率为12.12%(12/99),两者差异有统计学意义(χ^(2)=91.283,P<0.01),胃癌组织MDM2蛋白表达率为66.67%(66/99)、对应癌旁组织MDM2蛋白表达率为26.26%(26/99),两者差异有统计学意义(χ^(2)=32.486,P<0.01)。PLK1表达水平与胃癌TNM分期、淋巴结转移明显相关(χ^(2)=5.602、6.550,P<0.05);MDM2表达水平与胃癌TNM分期、组织学分化程度、淋巴结转移明显相关(χ^(2)=5.263、9.949、4.583,P<0.05)。结论 PLK1蛋白和MDM2蛋白过度表达可能促进胃癌恶性增殖及转移,联合检测上述两项指标有助于判断胃癌恶性程度、转移潜能和预后。

HAX-1通过调控MDM2/SMAD3通路对TGF-β1诱导的特发性肺间质纤维化的作用机制

目的探讨造血细胞特异性蛋白1相关蛋白X-1(HAX-1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的特发性肺间质纤维化的作用及机制。方法将A549细胞分为对照组(无处理)、TGF-β1组(用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、NC si组(用阴性对照siRNA转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+pcDNA3.1组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用pcDNA3.1空质粒转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2+DMSO组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,向细胞培养液中加入溶剂DMSO处理细胞30 min,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2+SIS3组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,用终浓度为1μmol·L^(-1)溶于DMSO的SIS3处理细胞30 min,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)。相应处理结束后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;Western blot检测HAX-1、鼠双微体基因2(MDM2)、SMAD3、p-SMAD3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)蛋白表达水平。结果TGF-β1诱导细胞后,细胞由鹅卵石形或多角形转变为梭形、纺锤形,E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),HAX-1、α-SMA和COL1A1蛋白表达升高(P<0.05)。干扰HAX-1可提高E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MDM2、p-SMAD3、α-SMA和COL1A1蛋白表达(P<0.05),并且细胞形态又转变为鹅卵石形或多角形。MDM2过表达抵消HAX-1干扰对p-SMAD3、E-cadherin、α-SMA和COL1A1蛋白表达的影响(P<0.05)。SMAD3抑制剂SIS3处理后细胞形态又转变为鹅卵石形或多角形,E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),α-SMA和COL1A1蛋白表达下降(P<0.05)。结论HAX-1在TGF-β1诱导的A549细胞中高表达,HAX-1敲低可通过MDM2/SMAD3通路抑制TGF-β1诱导的肺泡细胞纤维化过程。

微小RNA-214-5p靶向鼠双微体2调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-214-5p对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(KF)(购自上海信裕生物技术有限公司)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法检测62例正常皮肤组织和62例皮肤瘢痕疙瘩患者miR-214-5p表达。将miR-NC(miR-NC组)、miR-214-5p(miR-214-5p组)、si-NC(si-NC组)、si-鼠双微体2基因(MDM2)(si-MDM2组)、anti-miR-NC(anti-miR-NC组)、anti-miR-214-5p(anti-miR-214-5p组)、miR-214-5p+pcDNA3.1(miR-214-5p+pcDNA3.1组)和miR-214-5p+pcDNA3.1-MDM2(miR-214-5p+pcDNA3.1-MDM2组)转染至KF细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-214-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测细胞荧光活性。采用t检验或单因素方差分析比较两组或多组间均数差异。结果与miR-NC组比较,miR-214-5p组KF细胞细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、吸光度(A450)值和B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)显著降低(分别为0.23±0.02比0.80±0.08、0.52±0.05比0.97±0.09、0.16±0.02比0.68±0.06,t=20.737、13.695、24.661,P<0.05),miR-214-5p、p21、bcl-2相关X蛋白(bax)和凋亡率显著升高[分别为0.51±0.05比0.14±0.01、0.95±0.09比0.27±0.02、0.79±0.08比0.14±0.04、(23.57±2.23)%比(8.16±0.85)%,t=21.769、22.127、21.802、19.371,P<0.05]。与si-NC组比较,si-MDM2组KF细胞MDM2、Cyclin D1、A450和bcl-2显著降低(分别为0.33±0.03比0.84±0.07、0.37±0.03比0.82±0.07、0.64±0.06比0.97±0.08、0.26±0.03比0.66±0.05,t=14.621、12.328、7.926、6.112,P<0.05),p21、bax和凋亡率显著升高[分别为0.73±0.07比0.26±0.03、0.61±0.06比0.13±0.05、(18.27±1.53)%比(8.23±0.95)%,t=15.477、10.386、11.149,P<0.05]。与miR-214-5p+pcDNA3.1组比较,miR-214-5p+pcDNA3.1-MDM2组KF细胞MDM2、Cyclin D1、A450值和bcl-2显著升高(分别为0.57±0.06比0.23±0.02、0.50±0.05比0.22±0.03、0.73±0.07比0.51±0.05、0.48±0.05比0.17±0.02,t=18.324、15.122、10.784、16.131,P<0.05),p21、bax和凋亡率显著降低[分别为0.62±0.06比0.97±0.09、0.43±0.04比0.76±0.08、(12.37±1.24)%比(23.42±2.20)%,t=9.123、13.244、18.024,P<0.05]。结论miR-214-5p可抑制KF细胞增殖并促进凋亡,其机制可能与靶向调控MDM2有关。

p53基因在黑素瘤发生、发展及治疗中的作用

p53是ARF-MDM2-p53信号通路的转录激活因子,是一种重要的抑癌基因,参与调节新陈代谢、自噬、细胞迁移和侵袭等过程,其在人类的大部分肿瘤细胞中均可检测出。黑素瘤中80%表达野生型p53,只有极少数表达突变型p53。近来研究表明,p53失活在黑素瘤中起着重要作用。本文就p53基因在黑素瘤发生、发展及治疗中的作用做一综述。

上调NDRG1基因表达对肺腺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:建立稳定转染N-myc下游调节基因1(N-myc downstream-regulated gene 1,NDRG1)的A549细胞株,探讨NDRG1对A549细胞增殖与凋亡的影响及其可能的分子机制。方法:经脂质体介导将含有NDRG1的重组表达质粒转染人肺腺癌A549细胞株,采用G418筛选阳性细胞克隆并进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹鉴定;qRT-PCR和蛋白质印迹检测阳性细胞克隆P21及鼠双微体基因2(murine doubleminute 2,MDM2)的表达;MTT比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性;流式细胞仪检测阳性细胞克隆凋亡率。结果:成功建立高表达NDRG1的阳性A549细胞克隆(N11);N11细胞P21表达及细胞凋亡率显著增高(P<0.05),而MDM2表达及细胞增殖显著降低(P<0.05)。结论:上调A549细胞NDRG1表达后,细胞凋亡增加而细胞增殖降低,其作用机制可能与P21表达增高而MDM2表达降低有关。

RNA干扰生存素基因表达对肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的采用RNA干扰技术探讨生存素(survivin)对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的影响及其可能的分子机制。方法采用脂质体介导将pGCsi-sh survivin与pGCsi质粒转染人肺腺癌细胞株A549,经G418筛选获得稳定抑制survivin表达的肺腺癌细胞模型;Western blot检测转染细胞survivin、p21、鼠双微体基因2(MDM2)蛋白表达;MTT比色法检测阳性细胞克隆的增殖活性;流式细胞仪检测各组细胞凋亡。结果成功构建稳定抑制survivin表达的肺腺癌细胞模型。与对照组相比,反义组p21表达及细胞凋亡率显著增加,而MDM2表达及细胞增殖显著降低。结论下调A549细胞survivin表达后,细胞增殖降低而细胞凋亡增加,其作用机制与p21表达增加和MDM2降低有关。

Mdm2和pAkt在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:探讨肝细胞癌(HCC)组织中鼠双微体基因2(Mdm2)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(pAkt)的表达和临床意义。方法:采用免疫组织化学EliVision法测定70例HCC样本和40例癌旁组织样本中Mdm2和pAkt的表达,分析它们与临床病理特征之间的关系。结果:Mdm2在HCC中阳性率为34.3%,显著高于癌旁组织(P<0.01),其表达在肿瘤>5 cm和有淋巴结转移患者的HCC样本中显著增高(P<0.05)。pAkt在HCC中表达率为37.1%,显著高于癌旁组织(P<0.01),其表达在肿瘤大小、病理分级、TNM分期和淋巴结转移等临床病理参数上差异有统计学意义(P<0.05)。Mdm2与pAkt表达在HCC组织中呈正相关关系(r's=0.441,P<0.01)。结论:Mdm2和pAkt与HCC进展有关,有可能作为评价HCC预后的指标。

小檗胺通过OTUB1和MDM2-p53通路调控肺癌A549细胞的增殖、凋亡和侵袭转移

目的:探讨小檗胺对肺癌细胞A549的增殖、侵袭转移和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:用MTT试验和EdU试剂盒检测小檗胺对A549细胞增殖的影响,划痕试验和Transwell试验检测小檗胺对A549细胞侵袭转移的影响,台盼蓝染色实验和Cell Death Detection Elisa Kit检测小檗胺对A549细胞凋亡的影响;Western blotting检测小檗胺对A549细胞中卵巢肿瘤相关蛋白酶B1(OTUB1)、鼠双微体2基因(MDM2)、p53及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响。结果:小檗胺以浓度依赖和时间依赖的形式抑制A549细胞增殖,在小檗胺处理A549细胞72 h时,小檗胺抑制细胞增殖的IC50为(22.7±2.3)μmol/L。与对照组比较,小檗胺能够明显诱导A549细胞凋亡(P<0.05)。划痕试验和Transwell试验结果表明小檗胺能够明显抑制A549细胞的侵袭转移(P<0.05)。Western blotting结果提示小檗胺能够明显下调OTUB1、MDM2的表达(P<0.05),上调p53和cleaved-Caspase-3/Caspase-3的表达(P<0.05)。结论:小檗胺能够抑制A549细胞增殖与侵袭转移,诱导细胞凋亡,这种作用可能是通过调控OTUB1和MDM2-p53信号通路来实现的。

MDM2启动子309位点多态性与稽留流产关系的研究

目的探讨鼠双微体基因2(MDM2)启动子309位点单核苷酸多态性(SNP)与稽留流产的关系。方法对40例稽留流产妇女(研究组)的绒毛标本进行聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),与40例健康早期妊娠妇女(对照组)的绒毛标本进行PCR-RFLP对照。结果根据显性基因模型计算,研究组T/T型占27.5%(11/40),T/G型+G/G型占72.5%(29/40),对照组分别为35.0%(14/40)、65.0%(26/40),两组基因型分布比较,差异无统计学意义(P>0.05)。根据隐性基因模型计算,研究组G/G型占32.5%(13/40),T/T型+T/G型占67.5%(27/40),对照组分别为12.5%(5/40)、87.5%(35/40),两组基因型分布比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MDM2 SNP309 G/G基因型与稽留流产的发病风险增加有关,其确切的分子机制有待进一步研究。