芍药苷调节丝氨酸/苏氨酸激酶/鼠双微基因2/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响实验研究

目的:探讨芍药苷(PAE)调节丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)/鼠双微基因2(MDM2)/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以OCI-LY3细胞为研究对象,分别设置PAE低浓度组(15μmol/L PAE)、PAE中浓度组(30μmol/L PAE)、PAE高浓度组(60μmol/L PAE)、PAE高浓度+SC79(AKT激活剂)组(60μmol/L PAE+8μg/ml SC79),同时以未经处理的细胞为对照组。48 h后,分析细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期和凋亡变化,检测AKT/MDM2/p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,PAE低浓度组、PAE中浓度组、PAE高浓度组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期增加,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期降低(均P<0.05)。与PAE高浓度组比较,PAE高浓度+SC79组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期降低,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期增加(均P<0.05)。结论:PAE通过抑制AKT/MDM2上调p53表达,抑制DLBCL细胞增殖、细胞周期进展,诱导其凋亡。

肺腺癌组织转化生长因子β_(1)、鼠双微体2表达变化及其与患者临床病理特征的关系

目的 分析转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))和鼠双微体2(MDM2)在肺腺癌组织中的表达变化及其与患者临床病理特征的关系,探讨二者在肺腺癌发生发展中的作用。方法 选择手术切除且经术后病理确诊的肺腺癌患者60例,术中收集其肺腺癌组织和癌旁正常肺组织各60例份。采用免疫荧光法观察TGF-β_(1)、MDM2蛋白定位情况,采用免疫组化法检测TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达情况,并比较不同病理特征的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率,分析肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白表达的关系。结果 与癌旁正常肺组织比较,肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白均呈过表达状态,TGF-β_(1)大量表达于细胞质、少量表达于细胞核,MDM2绝大多数表达于细胞质。肺腺癌组织TGF-β_(1)蛋白阳性表达42例份(70.00%)、MDM2蛋白阳性表达47例份(78.33%),癌旁正常肺组织分别为24例份(40.00%)、24例份(40.00%);肺腺癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均高于癌旁正常肺组织(P均<0.05)。不同性别、年龄、吸烟情况的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期及低分化的肺腺癌患者癌组织TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均高于无淋巴结转移、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期及高中分化者(P均<0.05)。肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白表达呈正相关关系(r=0.539,P<0.05)。结论 肺腺癌组织中TGF-β_(1)、MDM2蛋白阳性表达率均升高,且淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期及低分化的肺腺癌组织升高更明显,二者可能共同参与了肺腺癌的发生发展。

磷酸酶与张力蛋白同源物/蛋白激酶B/鼠双微体基因2信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联

目的探究磷酸酶与张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)/鼠双微体基因2(MDM2)信号通路相关蛋白表达及与胃癌复发转移的关联。方法回顾性分析2017年6月至2019年6月江苏大学附属医院收治的130例胃癌患者手术切除胃癌组织及癌旁组织。采用GEPIA数据库分析PTEN、p-AKT、p-MDM2在胃癌组织中的表达,比较癌旁组织、胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。随访至2022年6月,按照复发转移情况将患者分为复发转移组和无复发转移组。比较两组患者胃癌组织PTEN、p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平。采用Logistic回归分析法分析胃癌复发转移的影响因素。结果GEPIA分析TCGA数据库和GTEx项目来源的数据发现,胃癌组织的PTEN水平低于正常组织,p-AKT、p-MDM2水平均高于正常组织(P<0.05)。与癌旁组织比较,胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。与无复发转移组比较,复发转移组胃癌组织PTEN蛋白表达水平降低,p-AKT、p-MDM2蛋白表达水平升高(P<0.05)。对130例患者进行随访,随访时间36~60个月,平均随访时间(49.31±8.35)个月,中位随访时间为46个月。其中复发转移患者59例,无复发转移患者71例。与无复发转移组比较,复发转移组Ⅲ-Ⅳ期、中低分化、浸润深度T 3-T 4构成比升高(P<0.05)。Logistic回归分析显示,TNM分期(OR=2.125,95%CI:1.101~3.150)、分化程度(OR=2.659,95%CI:1.365~3.953)、浸润深度(OR=3.037,95%CI:1.254~4.821)、p-AKT(OR=3.142,95%CI:2.379~3.906)、p-MDM2(OR=6.666,95%CI:3.241~10.091)均是胃癌复发转移的危险因素;PTEN是胃癌复发转移的保护因素(OR=0.394,95%CI:0.014~0.774,P<0.05)。结论胃癌中PTEN/AKT/MDM2信号通路PTEN表达下调,p-AKT、p-MDM2表达上调,与胃癌复发转移密切相关,可能作为候选治疗靶点。

鼠双微染色体2基因对鳞状细胞癌预后评估的研究进展

鼠双微染色体2（murinedoubleminute2，MDM2）是1991年从一个含有双微体（murinedoublemimut，MDM）的自发转化的BAI，B／ST3DM细胞中克隆出来的一个高度扩增的基因，其产物MDM2蛋白是p53的重要负性调节因子，通过p53途径、非p53依赖途径等多种方式调节细胞异常增殖和凋亡，在肿瘤发生、发展中起重要作用。

肺腺癌组织中赖氨酸乙酰转移酶5、鼠双微体2表达观察

目的 观察肺腺癌组织中赖氨酸乙酰转移酶5[K(lysine) acetyltransferase,KAT5]和鼠双微体2(Murine double minute2,MDM2)的表达变化,探讨其临床意义。方法 60例通过手术切除且经过病理学确诊肺腺癌患者,留取癌组织和癌旁肺组织。采用荧光免疫组织化学法对肺腺癌组织及癌旁组织KAT5、MDM2进行定位检测,采用免疫组织化学法对肺腺癌组织及癌旁组织KAT5、MDM2进行半定量检测,分析KAT5、MDM2阳性表达与肺腺癌患者临床病理参数的关系,采用Spearman相关检验法分析肺腺癌组织KAT5、MDM2表达的相关性。结果 相比于癌旁组织,肺腺癌组织中KAT5、MDM2高表达。肺腺癌组织及癌旁组织KAT5阳性表达率分别为65.00%(39/60)、45.00%(27/60),二者比较,P<0.05;MDM2阳性表达率分别为78.33%(47/60)、40.00%(24/60),二者比较,P<0.05。KAT5、MDM2阳性表达与肺腺癌患者的TNM分期、肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关(P均<0.05)。肺腺癌组织中KAT5、MDM2的表达呈正相关(r=0.632,P<0.05)。结论 肺腺癌组织中KAT5、MDM2呈高表达。KAT5、MDM2阳性表达与肺腺癌患者的TNM分期和淋巴结转移相关。KAT5、MDM2可能协同促进肺腺癌的发生发展。

MDM2的异常表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移以及对CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞免疫浸润的影响

目的 探讨鼠双微体同源基因2(murine double minute 2,MDM2)在胃癌中的表达,以及MDM2的表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移以及CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞免疫浸润的影响。方法 从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库中提取胃癌芯片数据集GSE62254,统计分析MDM2在胃癌中的表达情况。通过基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库分析MDM2表达对胃癌患者预后的影响。基于单样本基因集富集分析(single-sample gene-set enrichment analysis,ssGSEA)探讨GSE62254中23种免疫细胞的浸润情况。免疫组织化学法检测临床样本组织中MDM2和CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞的表达。细胞实验,分为sh组(shRNA-MDM2下调MDM2表达)和sh-NC组(shRNA-MDM2-NC无下调MDM2表达的作用),si组(siRNA-MDM2降低MDM2表达)和si-NC组(siRNA-MDM2-NC无降低MDM2表达的作用),pc组(pcDNA3.1-MDM2过表达MDM2)和pc-NC组(pcDNA3.1-MDM2-NC无过表达MDM2的作用),mimic组(MDM2 mimic上调MDM2表达)和mimic-NC组(MDM2-NC无上调MDM2表达的作用)。动物实验,分为si组(下调MDM2表达)、si-NC组(无下调MDM2表达),mimic组(升高MDM2表达)、mimic-NC组(无升高MDM2表达),每组各5只小鼠。5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine,EdU)以及Transwell小室检测各组细胞的增殖、迁移与侵袭性能。动物实验检测各组细胞的体内生长与转移能力;Western blot检测细胞和小鼠瘤体组织中MDM2、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达;同时细胞计数试剂盒(cell counting kit 8,CCK-8)检测小鼠脾组织单细胞悬液中CD8^(+)T细胞的体外杀伤肿瘤细胞的能力。结果 与癌旁正常组织相比,MDM2在胃癌组织的表达明显升高(P<0.05);与MDM2高表达患者相比,MDM2低表达患者的总生存期生存曲线明显升高(P<0.05);与MDM2高表达组相比,MDM2低表达组中CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的浸润明显升高(P<0.05);临床样本的免疫组织化学和相关性分析结果显示,MDM2的表达与CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的浸润水平呈负相关关系。细胞实验结果显示,与si-NC组相比,si组PAMC-82细胞中EDU阳性细胞比例、细胞侵袭和迁移数量以及细胞中MDM2、PCNA以及Vimentin的表达明显下降,E-cadherin的表达明显升高(P均<0.05);与mimic-NC组相比,mimic组PAMC-82细胞中EDU阳性细胞比例、细胞侵袭和迁移数量以及细胞中MDM2、PCNA以及Vimentin的表达明显升高,E-cadherin表达明显下降(P均<0.05)。动物实验结果显示,与si-NC组相比,si组小鼠瘤体组织的质量、病灶转移比例、瘤体组织中MDM2、PCNA和Vimentin的表达明显下降,瘤体组织中E-cadherin表达、CD4^(+)T免疫组织化学评分、CD8^(+)T免疫组织化学评分明显升高(P均<0.05);与mimic-NC组相比,mimic组小鼠瘤体组织的质量、病灶转移比例、瘤体组织中MDM2、PCNA和Vimentin的表达明显升高,瘤体组织中E-cadherin表达、CD4^(+)T免疫组织化学评分、CD8^(+)T免疫组织化学评分明显下降(P均<0.05)。小鼠脾组织中CD8^(+)T细胞对各组PAMC-82细胞的体外杀伤实验结果显示,si组细胞的存活率明显下降(P<0.05);与mimic-NC组相比,mimic组细胞的存活率明显升高(P<0.05);酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)结果显示,与si-NC组相比,si组细胞上清液中γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)的含量明显升高(P均<0.05),与mimic-NC组细胞相比,mimic组细胞中IFN-γ及TNF-α的含量明显下降(P均<0.05)。结论 在胃癌中,MDM2的表达升高,高表达的MDM2能明显促进细胞的增殖、迁移和侵袭,增强肿瘤细胞抵抗CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的杀伤能力,促进胃癌进展。

鼠双微体2与核糖体蛋白L23在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:研究胃癌中鼠双微体2(murine double mimute 2,MDM2)与核糖体蛋白L23(ribosomal protein L23,RPL23)的表达及其临床相关性,初步探讨他们在胃癌发生发展中的生物学意义.方法:采用免疫组织化学染色方法检测90例胃癌组织和30例胃癌旁正常组织中MDM2和RPL23蛋白的表达;统计学分析他们表达的相关性及其与临床病理因素、患者生存时间的联系.结果:胃癌组织中MDM2表达阳性率与癌旁对照组比较显著性增高(62.2%vs 40.0%,P<0.05),而RPL23蛋白表达显著性降低(30.0%vs 63.3%,P<0.05).MDM2和RPL23在胃癌中的表达呈负相关(r=-0.23,P=0.029).多因素分析显示MDM2高表达和RPL23低表达、淋巴结转移、肿瘤入侵深度、肿瘤的大小对胃癌患者生存预后的影响有统计学意义.结论:MDM2、RPL23的表达与胃癌的发生发展具有一定的相关性,针对两者的信号通路或许可作为胃癌预后的标志和新型治疗靶标.

POK红骨髓性致癌因子和鼠双微基因2蛋白在大鼠肺鳞状细胞癌发生中的表达及意义

目的探讨POK红骨髓性致癌因子(Pokemon)和鼠双微基因2(MDM 2)蛋白在大鼠肺鳞状细胞癌发生、发展中的关系及意义。方法 90只大鼠分为实验组75只和对照组15只,通过建立大鼠不同阶段肺组织鳞状细胞癌模型,采用免疫组织化学法检测肺鳞状细胞癌、癌前病变及正常肺组织中Pokemon和MDM 2蛋白的表达。结果 Pokemon和MDM 2蛋白从正常组织到鳞状细胞癌呈现逐渐增高的趋势。对照组的Pokemon和MDM 2蛋白表达与增生组比较差别无统计学意义(P>0.05),但低于非典型增生组及鳞状细胞癌组,差别有统计学意义(P<0.05);鳞状细胞癌组的Pokemon和MDM 2蛋白表达明显高于增生组和非典型增生组,差别有统计学意义(P<0.05)。转移癌组的Pokemon和MDM 2蛋白表达高于非转移癌组,差别有统计学意义(P<0.05)。Pokemon与MDM 2蛋白表达呈正相关(r=0.692,χ2=43.080,P<0.05)。结论 Pokemon和MDM 2蛋白在大鼠正常肺组织到肺鳞状细胞癌组织的演变过程中表达逐渐增高,Pokemon和MDM 2蛋白可能共同参与了肺癌的发生、发展和转移过程。

鼠双微体2在卵巢浆液性和黏液性肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨原癌基因鼠双微体2(MDM2)在浆液性和黏液性卵巢上皮肿瘤(良性、交界性和恶性)中的表达特点及临床意义。方法收集手术切除的原发性卵巢浆液性和黏液性肿瘤标本82例,其中良性囊腺瘤22例(浆液性12例,黏液性10例)、交界性囊腺瘤30例(浆液性22例,黏液性8例)、恶性囊腺癌30例(浆液性18例,黏液性12例)。用免疫组织化学法检测标本中MDM2的水平,比较它们的表达强度。结果 MDM2在良性、交界性和恶性囊腺癌中的表达阳性率分别为0.0%、20.0%和66.7%,恶性囊腺癌组织中MDM2的表达高于交界性、良性囊腺瘤(P<0.05)。恶性浆液性囊腺癌中MDM2的阳性率低于恶性黏液性囊腺癌(44.4%比83.3%,P<0.05)。结论良性卵巢浆液性和黏液性囊腺瘤组织中MDM2未见表达,而恶性卵巢浆液性囊腺癌,尤其是恶性黏液性囊腺癌中MDM2表达的阳性率更高。

ERG和鼠双微体2蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义

目的检测ERG蛋白和鼠双微体(MDM2)蛋白在前列腺癌组织中的表达情况,并探讨其相关性。方法收集经病理学确诊为前列腺癌标本48例,良性前列腺增生10例,采用免疫组织化学二步法或SP法检测组织标本的ERG蛋白和MDM2蛋白的表达情况,采用χ~2检验及Spearman等级相关分析ERG和MDM2表达与前列腺癌分级的关系。结果前列腺癌组织中ERG和MDM2蛋白阳性表达率分别为33.3%和47.9%,在良性前列腺增生组未见表达,差异有统计学意义(P<0.05)。ERG和MDM2蛋白表达与前列腺癌Gleason评分分级不相关(P>0.05);但ERG与MDM2蛋白在前列腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.831,P=0.001)。结论 ERG和MDM2蛋白在前列腺癌组织中的高表达,与前列腺癌的发生、发展密切相关。前列腺癌中ERG蛋白表达与MDM2蛋白的异常表达密切相关说明这两个蛋白可能存在协同作用。

Musashi-2和鼠双微体2在卵巢上皮肿瘤中的表达及临床意义

目的探讨Musashi-2和鼠双微体2(MDM2)在卵巢上皮肿瘤中的表达及临床意义。方法选择2014年1月至2016年6月在巴中市中心医院手术切除的原发性卵巢上皮肿瘤标本89例,其中良性囊腺瘤24例(浆液性11例、黏液性13例),恶性囊腺癌65例(浆液性30例、黏液性24例、其他组织学类型11例)。采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中Musashi-2和MDM2的表达,观察卵巢恶性上皮肿瘤Musashi-2和MDM2阳性表达与病理学参数的关系。结果恶性卵巢上皮肿瘤Musashi-2和MDM2的阳性表达率明显高于良性肿瘤(P<0.05);卵巢恶性上皮肿瘤直径≥2.5cm和FIGO分期Ⅲ/Ⅳ期患者Musashi-2表达阳性率明显增高,黏液性癌和FIGO分期Ⅲ/Ⅳ期患者MDM2的表达阳性率明显增高;Musashi-2阳性表达和MDM2阳性表达无关(r=-0.203,P=0.104)。结论Musashi-2和MDM2在卵巢恶性上皮肿瘤中阳性表达率高,这2种蛋白的阳性表达可能提示肿瘤分期晚,预后不良。

骨肉瘤组织p53、鼠双微体2蛋白表达及意义

目的观察骨肉瘤患者癌组织p53、鼠双微体2(MDM2)蛋白表达变化,并探讨其与化疗疗效、预后的关系。方法选择新辅助化疗前的骨肉瘤患者39例,取其活检获得的骨肉瘤组织及肿瘤周围正常骨组织,采用免疫组化法检测p53、MDM2蛋白表达。患者经新辅助化疗及手术后取其肿瘤组织,HE染色后以肿瘤坏死率评价化疗敏感性。分析骨肉瘤组织p53、MDM2蛋白表达与患者临床病理参数(性别、年龄、组织学类型、化疗敏感性)及无病生存时间(DFS)的关系。结果 39例患者术前活检肿瘤组织中p53蛋白阳性表达率为23.1%(9/39),MDM2蛋白阳性表达率为76.9%(30/39),肿瘤周围正常骨组织中均未见p53、MDM2蛋白阳性表达;两者比较P均<0.05。39例患者中,肿瘤坏死率<90%者27例,对化疗敏感性低;≥90%者12例,对化疗敏感性高。化疗敏感性低者肿瘤组织p53、MDM2蛋白阳性表达率明显高于化疗敏感性高者(P均<0.05);肿瘤组织p53、MDM2蛋白阳性表达率与患者性别、年龄、组织学类型均无关(P均>0.05)。肿瘤组织p53蛋白阴性与阳性表达者DFS分别为34.0(18.8,42.0)、12.0(9.0,17.0)个月,两者比较P<0.05;MDM2蛋白阴性与阳性表达者DFS分别为53.0(42.0,63.5)、18.5(12.0,34.0)个月,两者比较P<0.05。结论骨肉瘤组织p53、MDM2蛋白阳性表达率升高,可导致患者化疗敏感性降低及预后不良。

RNA干扰抑制乳腺癌MCF-7细胞鼠双微体-2基因表达及细胞增殖的实验研究

目的研究乳腺增生症、乳腺导管内癌和浸润性乳腺癌组织中mdm2蛋白的表达及siRNA mdm2对肿瘤细胞增殖的影响。方法采用免疫组织化学方法检测乳腺增生症、乳腺导管内癌和浸润性乳腺癌组织中mdm2蛋白的表达;将siRNA mdm2质粒转染乳腺癌MCF-7细胞,应用MTT检测siRNA mdm2对肿瘤细胞增殖的抑制作用。结果 mdm2蛋白在乳腺导管内癌组织和浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率均为100%(18/18,20/20),在乳腺增生症组织中表达阳性率为20%(4/20)。与乳腺增生症组织比较,乳腺导管内癌组织和浸润性乳腺癌组织中mdm2蛋白阳性表达率明显增高(P<0.01)。MTT结果表明转染pGCsiRNA-mdm2后MCF-7细胞生长受到抑制,与mock组和pGCsiRNA-scramble组比较差异有统计学意义(P<0.01)。转染pGCsiRNA-mdm2 72 h后与48 h比较,MCF-7细胞生长受抑制明显,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 mdm2在乳腺癌组织中存在广泛表达,其阳性表达可能促进肿瘤细胞的增殖过程。

食管鳞癌患者紫杉醇联合顺铂新辅助化疗疗效与癌组织XRCC1、MDM2表达的相关性研究

目的探究食管鳞癌患者紫杉醇联合顺铂新辅助化疗疗效与癌组织X线修复交叉互补基因1(X-ray repair cross-complementary gene 1,XRCC1)、鼠双微染色体2(Murine double mimute2,MDM2)表达的相关性。方法回顾性分析2017年1月至2018年1月期间于我院接受紫杉醇联合顺铂新辅助化疗的70例食管鳞癌患者临床资料,根据其治疗6个月后疗效表现分为缓解组32例与未缓解组38例,比较两组癌组织XRCC1、MDM2表达水平,分析癌组织XRCC1、MDM2表达水平与化疗疗效的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估上述指标对化疗疗效的预测效能,随后依据XRCC1和MDM2的ROC曲线截断值将患者分为高表达组和低表达组,并比较两组两年内生存情况。结果未缓解组癌组织XRCC1、MDM2表达水平显著高于缓解组(P<0.05)。Spearman分析显示,癌组织XRCC1、MDM2表达水平与化疗疗效呈显著负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,上述指标预测化疗疗效的ROC曲线AUC分别为0.857、0.899,截断值分别为2.48、74.61。Kaplan-Meier生存曲线显示,XRCC1高表达组生存时间均显著短于XRCC1低表达组(P<0.05),MDM2高表达组生存时间均显著短于MDM2低表达组(P<0.05)。结论食管鳞癌患者癌组织XRCC1、MDM2表达情况与紫杉醇联合顺铂新辅助化疗疗效、肿瘤分期具有显著相关性,二者水平变化在预测化疗疗效方面具有显著效能,同时可反映患者生存情况,可为临床接受此类化疗治疗患者的后续治疗方案更替提供一定参考。

鼠双微体2在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的通过检测鼠双微体2(murine double minute 2,MDM2)在人乳腺癌中的表达,探讨其在乳腺癌发生发展中的作用。方法选取拟手术切除的70例乳腺癌患者,自乳腺癌癌灶中心非坏死部位及距肿瘤切缘5 cm以外的配对正常乳腺组织分别收集标本。采用实时荧光定量RT-PCR和免疫组化法检测乳腺癌组织中MDM2 mRNA及其蛋白的表达水平,定量分析其表达与临床病理特征的关系。结果 MDM2在乳腺癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常乳腺组织,差异有统计学意义(P=0.001)。MDM2 mRNA水平与肿瘤大小、分期、组织学类型、淋巴结转移和HER-2阳性表达有关(P<0.05),与雌、孕激素受体无关(P>0.05);MDM2蛋白表达与肿瘤组织学类型、淋巴结转移和HER-2阳性表达有关(P<0.05),与肿瘤大小、分期、和雌、孕激素受体无关(P>0.05)。结论乳腺癌组织中MDM2表达明显升高,在乳腺癌的浸润与转移中具有重要作用。

微小RNA-4478下调鼠双微体-2对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨微小RNA-4478(miR-4478)对结肠癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用并阐明相关机制。方法实时定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-4478在结肠癌组织中的表达。结肠癌SW1116细胞转染miR-4478 mimics及阴性对照后,分别采用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)和小室(Transwell)法检测细胞的增殖、迁移及侵袭。预测miR-4478的靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证靶基因。结肠癌SW1116细胞转染miR-4478 mimics或抑制物后,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测细胞靶基因表达。靶基因过表达验证细胞增殖、迁移及侵袭。Western blot法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、P21、钙粘附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达。结果相对于癌旁组织,miR-4478在结肠癌组织中的表达显著降低[(0.84±0.07)比(0.26±0.02),t=48.461,P<0.05];转染miR-4478 mimics可显著抑制细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.001)。miR-4478可负向调控MDM2表达(P<0.001)。miR-4478过表达可抑制由MDM2过表达导致的结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭(P<0.001)。结论miR-4478通过抑制MDM2表达而抑制结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

鼠双微体基因2与恶性肿瘤相关性的研究进展

鼠双微体基因2（murine doubleminute 2,MDM2）是一种癌基因,MDM2基因的扩增或过度表达与多种恶性肿瘤的发生和发展密切相关,本文主要对MDM2基因与恶性肿瘤的相关性进行综述。1 MDM2基因MDM2是1987年克隆出来的一个高度扩增的基因[1],存在于一个含有双微体（double minutes,DM）的自发转化小鼠Balb/c3T3成纤维细胞系中。

微小RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取2016年5月至2018年11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作56例为研究对象。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测56例胶质瘤组织和56例正常脑组织中miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤U251细胞,转染miR模拟对照序列(miR-NC)、miR-520a-5p9模拟物(miR-520a-5p mimics)至U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法(MTT)、流式细胞仪、Transwell和蛋白质印迹法检测过表达miR-520a-5p对U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因(MDM2)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、P21、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证miR-520a-5p与MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂(anti-miR-520a-5p)对U251细胞中MDM2蛋白表达的影响。共转染miR-520a-5p mimics和MDM2过表达载体(pcD⁃NA3.1-MDM2)至U251细胞,上述相同方法观察过表达MDM2能否逆转过表达miR-520a-5p对U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中miR-520a-5p表达降低(P<0.05)。与转染miR-NC的U251细胞比较,转染miR-520a-5p mimics的U251细胞24 h、48 h和72 h的OD值[(0.36±0.04)比(0.50±0.05)、(0.49±0.05)比(0.95±0.09)、(0.71±0.07)比(1.36±0.13)]、迁移细胞数[(67±6.26)比(144±13.38)]、侵袭细胞数[(59±5.47)比(135±13.12)]均降低(P<0.05),凋亡率[(21.17±2.06)%比(7.82±0.77)%]升高(P<0.05),细胞中cyclinD1、Bcl-2和MMP-2的蛋白表达水平均降低(P<0.05),而P21、Bax和E-cadherin的蛋白表达水平均升高(P<0.05)。miR-520a-5p可与MDM2的3’UTR靶向结合,同时转染miR-520a-5p mimics的U251细胞中MDM2蛋白水平显著低于转染miR-NC的细胞,而转染anti-miR-520a-5p的U251细胞中MDM2的蛋白水平显著高于转染anti-miR-NC的细胞。与共转染miR-520a-5p mimics与pcDNA3.1的U251细胞比较,共转染miR-520a-5p mim⁃ics与pcDNA3.1-MDM2的U251细胞24 h、48 h和72 h的OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05),细胞中cyclinD1、Bcl-2和MMP-2的蛋白表达水平均升高(P<0.05),而P21、Bax和E-cadherin的蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达miR-520a-5p可能通过靶向负调控MDM2抑制胶质瘤U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。

HAX-1通过调控MDM2/SMAD3通路对TGF-β1诱导的特发性肺间质纤维化的作用机制

目的探讨造血细胞特异性蛋白1相关蛋白X-1(HAX-1)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的特发性肺间质纤维化的作用及机制。方法将A549细胞分为对照组(无处理)、TGF-β1组(用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、NC si组(用阴性对照siRNA转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+pcDNA3.1组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用pcDNA3.1空质粒转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2+DMSO组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,向细胞培养液中加入溶剂DMSO处理细胞30 min,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)、HAX-1 si+MDM2+SIS3组(用HAX-1 siRNA转染细胞,再用MDM2过表达质粒pcDNA3.1-MDM2转染细胞,用终浓度为1μmol·L^(-1)溶于DMSO的SIS3处理细胞30 min,再用5μg·L^(-1)的TGF-β1诱导48 h)。相应处理结束后,采用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;Western blot检测HAX-1、鼠双微体基因2(MDM2)、SMAD3、p-SMAD3、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原α1链(COL1A1)蛋白表达水平。结果TGF-β1诱导细胞后,细胞由鹅卵石形或多角形转变为梭形、纺锤形,E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),HAX-1、α-SMA和COL1A1蛋白表达升高(P<0.05)。干扰HAX-1可提高E-cadherin蛋白表达(P<0.05),抑制MDM2、p-SMAD3、α-SMA和COL1A1蛋白表达(P<0.05),并且细胞形态又转变为鹅卵石形或多角形。MDM2过表达抵消HAX-1干扰对p-SMAD3、E-cadherin、α-SMA和COL1A1蛋白表达的影响(P<0.05)。SMAD3抑制剂SIS3处理后细胞形态又转变为鹅卵石形或多角形,E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05),α-SMA和COL1A1蛋白表达下降(P<0.05)。结论HAX-1在TGF-β1诱导的A549细胞中高表达,HAX-1敲低可通过MDM2/SMAD3通路抑制TGF-β1诱导的肺泡细胞纤维化过程。

MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白原核表达载体的构建与蛋白制备

目的:采用分子克隆技术和大肠杆菌原核表达系统制备具备生物学活性MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白。方法:首先应用PCR合成大肠杆菌硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)A的c DNA序列,将其插入到大肠杆菌原核表达载体p ET40b中,将人工合成的人免疫缺陷病毒(human immuno-deficiency virus,HIV-1)反式激活蛋白(transactivator,TAT)的蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD)和MDM2/4双抑制肽p DI(peptide double inhibition)的c DNA序列分别插入到Trx序列的C端和核心位点,从而构建出可表达MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白的原核表达载体p ET-TAT-Trx A-p DI。然后将p ET-TAT-Trx A-p DI原核表达载体转化大肠杆菌表达菌种BL21感受态细胞,应用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导蛋白表达,筛选最优表达的单克隆菌种,分析重组蛋白的表达部位,并了解不同IPTG浓度(0.1mmol/L、0.4mmol/L、0.7mmol/L、1.0mmol/L)、温度(16℃、25℃、37℃)、表达诱导时间(1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h)对MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白表达的影响,以获得最优的蛋白表达条件。最终利用MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白携带的His标签,采用能够特异性结合His标签的蛋白纯化柱进行蛋白纯化,并应用梯度透析法和氧化还原法进行MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白的体外折叠。结果:成功构建可以表达MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白的原核表达载体p ET-TAT-Trx A-p DI,并实现MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白在大肠杆菌表达菌种BL21(DE3)中的高效表达,表达量占总蛋白表达量的60%以上,并且主要存在于包涵体中。蛋白表达条件优化结果发现,温度对重组蛋白表达无明显影响,而应用0.4mmol/L的IPTG浓度和3h的诱导时间即可获得重组蛋白的高效表达。经过蛋白纯化后获得纯度99.99%的重组蛋白,将纯化的MDM2/MDM4双靶点抑制蛋白溶液用梯度透析复性和氧化还原复性法最终成功获得包涵体蛋白的体外正确折叠,复性效率约为80%。结论:成功实现MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白在大肠杆菌原核表达系统中的高效表达、纯化以及体外的正确折叠,最终获得高纯度并具有生物学活性的MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白,从而为进一步MDM2/4-p53双靶点抑制蛋白抗肿瘤活性与机制的研究奠定了基础。