鼠尾草提取物对鲢鱼肌原纤维蛋白结构及功能特性的影响

为了探究鼠尾草提取物对冷藏(4℃)鲢鱼肌原纤维蛋白(myofibrillar protein,MP)结构和功能特性的影响,以质量浓度1 g/L茶多酚(TP)、0.1 g/L二丁基羟基甲苯(BHT)处理作为参照,试验组用10、20、30 g/L的鼠尾草提取物处理,在冷藏期内考察MP结构和功能指标的变化。结果表明,随着冷藏时间延长,所有组鲢鱼MP的溶解度、巯基含量、乳化性质、凝胶硬度和弹性、保水性以及白度值逐渐下降,表面疏水性、羰基含量逐渐上升,且20 g/L鼠尾草提取物处理的鲢鱼MP羰基含量比空白对照组降低了31.09%,显著抑制了鲢鱼MP的氧化,同时在一定程度促进了凝胶的形成。添加鼠尾草提取物、TP、BHT均能显著抑制鲢鱼MP的氧化,且20 g/L的鼠尾草提取物抑制效果最好,表明鼠尾草提取物是一种应用前景广阔的抗氧化剂。

云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤保护作用的机制。方法:建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,并采用云南鼠尾草提取物进行干预。将体外培养的H9c2大鼠心肌细胞随机分为6组:正常对照(C)组、缺氧/复氧模型(H/R)组、缺氧/复氧模型+维拉帕米阳性对照(H/R+V)组、缺氧/复氧模型+云南鼠尾草低(H/R+L,0.01 mg·L^(-1))、中(H/R+M,0.1 mg·L^(-1))、高(H/R+H,1.0 mg·L^(-1))剂量组。采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,利用检测试剂盒测定丙二醛(MDA)的含量和乳酸脱氢酶(LDH)的活性,通过荧光酶标仪测定荧光吸光度(A)值反映细胞内活性氧(ROS)水平。结果:与模型组比较,云南鼠尾草低、中、高剂量组均能显著提高心肌细胞存活率(P<0.05或P<0.01),云南鼠尾草高剂量组显著减少细胞内LDH漏出量(P<0.05或P<0.01)、胞浆内MDA的含量(P<0.01)和细胞内ROS水平(P<0.05)。结论:云南鼠尾草提取物对大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,其相关作用机制可能与其减少脂质过氧化物和清除细胞氧自由基有关。

甘西鼠尾草提取物对正常大鼠全血粘度影响及对水负荷大鼠利尿作用

目的:研究甘西鼠尾草提取物对正常大鼠全血粘度影响及对水负荷大鼠利尿作用。方法:Wistar正常大鼠灌胃给予50,100,200 mg·kg-1体质量的甘西鼠尾草提取物,qd,连续给药15 d,末次给药1 h后心脏取血,检测全血粘度。Wistar水负荷大鼠灌胃给予50,100,200 mg·kg-1体质量的甘西鼠尾草提取物,qd,连续给药3 d,末次给药后在代谢笼内收集给药后7 h的尿量。结果:甘西鼠尾草提取物能降低Wistar正常大鼠的全血粘度;能增加Wistar水负荷大鼠7 h内的尿量,且主要增加1～3 h的尿量,增加尿量程度远小于氢氯噻嗪。结论:甘西鼠尾草提取物灌胃给药能够明显降低全血粘度、改善血液循环状态,并具有温和的利尿作用。

甘西鼠尾草总酚酸提取物对电离辐射诱导小鼠肠道炎症的保护作用及机制

目的研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对电离辐射诱导小鼠肠道炎症的保护作用,探讨其调节Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路抑制电离辐射的作用机制。方法选取48只雄性KM小鼠,按照随机数字表法分为正常对照组、辐射模型组、SPE低剂量组、SPE中剂量组、SPE高剂量组和阳性药白藜芦醇组(白藜芦醇组),每组8只。除正常对照组不予以辐射外,其余各组小鼠均接受5.5 Gy^(60)Coγ射线一次性照射。辐射前2 d及辐射后7 d,SPE低、中、高剂量组小鼠分别以75 mg/kg、150 mg/kg、300 mg/kg剂量给予相应的SPE溶液灌胃;正常对照组、辐射模型组小鼠分别给予0.9%氯化钠溶液灌胃,白藜芦醇组小鼠给予剂量为30 mg/kg的白藜芦醇溶液灌胃。辐射7 d后,观察各组小鼠小肠肠道组织病理损伤、外周血常规指标(白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白)、脾脏系数及小肠肠道组织中NLRP3、NF-κB、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达的变化。结果与辐射模型组相比,白藜芦醇组小鼠肠道组织浸润性炎症损伤程度显著降低,SPE各组小鼠肠道组织炎性症状均减轻。各组白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白水平比较差异有统计学意义(均P<0.01)。与正常对照组相比,辐射模型组、SPE低、中、高剂量组和白藜芦醇组白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白水平均降低(均P<0.01)。与辐射模型组相比,SPE低、中、高剂量组和白藜芦醇组白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白水平均升高(P<0.05或P<0.01)。各组小鼠的脾脏系数比较差异有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组相比,辐射模型组、SPE低、中和高剂量组的脾脏系数均降低(P<0.01)。与辐射模型组相比,SPE高剂量组、白藜芦醇组脾脏系数均升高(0.58±0.09、0.64±0.14比0.46±0.08)(P<0.05或P<0.01)。各组NLRP3、NF-κB、IL-1β蛋白表达比较差异有统计学意义(均P<0.01)。与正常对照组相比,辐射模型组、SPE低、中、高剂量组、白藜芦醇组NLRP3、NF-κB、IL-1β蛋白表达均升高(P<0.05);与辐射模型组相比,SPE低、中、高剂量组和白藜芦醇组NLRP3、NF-κB、IL-1β蛋白表达均降低(P<0.05)。结论SPE可以通过调节NLRP3炎症小体减轻电离辐射引起的肠道炎症。SPE通过抑制TLR4蛋白,降低NLRP3炎症小体的表达,有效抑制电离辐射诱导的肠道炎症产生。

甘西鼠尾草总酚酸提取物对嘌呤霉素氨基核苷诱导损伤的足细胞中Toll样受体4表达的影响

目的:探讨SPE及其单体对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的损伤足细胞中Toll样受体4(TLR4)通路表达的影响。方法:足细胞与含有甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)、迷迭香酸(RA)、丹酚酸B(SalB)、RA+SalB混合及他克莫司的完全培养液预先孵育30 min,再加入PAN(100μg/ml)继续作用24 h,观察足细胞骨架结构F-actin变化,western blot及半定量RT-PCR检测足细胞中TLR4、myd88、phosphor-NF-κB(pp65)在蛋白及mRNA水平的表达量变化。结果:(1)PAN作用24 h后,足细胞骨架蛋白F-actin明显损伤,微丝解聚、胞体回缩,少数细胞尚存排列紊乱的丝状结构,而提前给予保护药物SPE、SalB、RA、SalB+RA混合药物及他克莫司组的足细胞损伤明显减弱。(2)western blot数据显示,PAN诱导的损伤足细胞中TLR4、myd88及pp65蛋白的表达与正常组相比均有明显上调(P<0.05);保护药物组:TLR4蛋白表达较模型组有明显下降(P<0.05);My D88蛋白表达除SalB高剂量组及SalB+RA低剂量组较模型组无显著下降外,其余均能明显下调其表达量(P<0.05);pp65在保护药物组中的表达均较模型对照组低(P<0.05)。(3)半定量RT-PCR结果显示,模型对照组中TLR4、My D88及NF-κB的mRNA表达量明显高于正常对照组;保护药物组中:TLR4 mRNA表达量在各药物处理组中均明显低于PAN组(P<0.05),其中的SPE高、低剂量组,RA高、低剂量组,SalB+RA高剂量组与正常组相接近(P>0.05);My D88 mRNA表达量在SPE及其单体处理后均有明显下调(P<0.05);NF-κB mRNA表达量除SalB高剂量组中无明显下调外(P>0.05),其余各保护药物组均下调(P<0.05)。结论:SPE及其活性单体对PAN诱导损伤足细胞的保护作用机制可能部分通过抑制TLR4信号相关蛋白表达来实现;甘西鼠尾草总酚酸提取物中的单体迷迭香酸对TLR4及其下游信号分子My D88、NF-κB的抑制作用优于丹酚酸B和混合给药组。

鼠尾草提取物对类风湿性关节炎的治疗作用及其机制研究

目的:探讨鼠尾草提取物对类风湿性关节炎的治疗作用及其机制。方法:选择6个月龄SD大鼠,采用胶原诱导法建立类风湿关节炎(CIA)大鼠模型,并灌胃给予鼠尾草提取物(ST)治疗3周,测量大鼠的体质量变化、关节炎评分及踝关节肿胀度;采用病理苏木精-伊红(HE)染色和番红固绿染色检测大鼠踝关节组织的病理变化;采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠外周血液中炎症因子白细胞介素(IL)-1β,IL-6和TNF-α的含量;采用RT-PCR法检测大鼠滑膜组织中炎症因子IL-1β,IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达水平;采用蛋白印迹法检测大鼠滑膜组织中TLR4,p-p65/p65和p-p50/p50的表达水平。结果:与模型组相比,ST组大鼠的体质量显著增加,且关节炎评分和关节肿胀度显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);同时,ST组大鼠的踝关节组织完整,软骨细胞排列规则且紧密,软骨基质损伤缓解,外周血液和滑膜组织中炎症因子IL-1β,IL-6和TNF-α的表达水平显著下调,差异有统计学意义(P<0.05);除此之外,ST组大鼠关节滑膜组织中TLR4,p-p65/p65和p-p50/p50的表达水平显著下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:鼠尾草提取物治疗类风湿性关节炎具有潜在价值,且这种作用可能与抑制TLR4-NF-κB信号介导的炎症反应有关。

甘西鼠尾草总酚酸提取物对嘌呤霉素氨基核苷大鼠足细胞损伤的保护作用

目的:研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对嘌呤霉素氨基核苷(PAN)大鼠足细胞损伤的保护作用。方法:建立PAN肾病大鼠动物模型,给予他克莫司和SPE干预治疗,分别在第5、10、15、21天留取血尿标本,同时采用肾组织病理观察大鼠肾小球组织形态学改变,透射电镜观察肾小球足细胞超微结构改变,并分别从mRNA和蛋白水平分析足细胞裂孔膜蛋白的表达水平。结果:(1)除正常组外,各组大鼠尿蛋白定量第5天时已明显升高,第10天上升至高峰,而后开始下降,第15天时仍明显高于正常。给予药物干预后,可降低大鼠的尿蛋白排泄量,且阳性对照组与SPE高剂量组降低尿蛋白的程度较为接近。(2)光镜下未见肾小球形态异常。电镜结果显示第5天时已出现肾小球足细胞足突融合,第10天时足突融合最明显,随后开始恢复,第21天基本恢复正常;SPE高剂量组和阳性对照组的足突融合程度较轻。(3)阳性对照组和SPE组大鼠的nephrin、podocin蛋白表达水平高于模型对照组。第5天时各组大鼠蛋白表达低于正常,第10天时下降更为明显,第15天蛋白表达已开始回升,至第21天时恢复至正常水平。阳性对照组和SPE高剂量组大鼠蛋白表达均明显高于其余三组。(4)大鼠nephrin、podocin的mRNA表达量在第5天时已下降,至第10天明显下降至最低水平,而后开始上升,直至第21天恢复至正常水平。阳性对照组和SPE高剂量组的表达水平明显高于其他各组(P<0.05)。结论:SPE对PAN大鼠肾小球足细胞损伤有一定的保护作用,可降低PAN大鼠蛋白尿。

甘西鼠尾草总酚酸提取物对辐射损伤大鼠的保护作用

目的研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对辐射损伤大鼠的保护作用。方法选取SD雄性大鼠40只,随机分为正常对照组(N组),辐射模型组(M组)和SPE低剂量组(SPE1组)、中剂量组(SPE2组)、高剂量组(SPE3组),每组8只。除N组不予辐射外,其余各组大鼠均接受直线加速器X射线源一次全身均匀辐射,辐射剂量为6 Gy。辐射后,SPE各剂量组分别给予SPE溶液50、100、200 mg/kg灌胃,N组、M组给予空白对照溶液灌胃,1/d,连续给药34 d。于辐射前1 d及辐射后1、4、7、14、21、28、35 d给药前观察各组大鼠体征变化并称定其体质量,检测外周血常规指标;于辐射后35 d给药前称定大鼠心脏、肺脏、肾脏、肝脏、脾脏、胸腺、睾丸质量,计算各脏器系数。结果口服2周以上SPE,可促进大鼠体征持续好转。辐射后21、28 d,SPE2组、SPE3组大鼠体质量显著高于M组(P<0.05),且SPE3组与M组具有极显著性差异(P<0.01);SPE2组、SPE3组大鼠红细胞显著高于M组(P<0.05)。辐射后21~35 d,SPE2组、SPE3组大鼠血红蛋白显著高于M组(P<0.01)。辐射后21 d,SPE各剂量组大鼠血小板显著高于M组(P<0.05)。辐射后35 d,SPE3组大鼠肝脏系数显著高于M组(P<0.05);SPE2组、SPE3组大鼠脾脏系数显著高于M组(P<0.05)。结论SPE具有提高辐射损伤大鼠体质量,增加红细胞、血红蛋白、血小板数量,增强了肝脏损伤、脾脏损伤的保护作用。

甘西鼠尾草总酚酸提取物对电离辐射大鼠急性放射性肠炎的保护作用

目的:研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(Salvia prezewalskii extract of total phenolic acids,SPE)对电离辐射大鼠急性放射性肠炎损伤的保护作用。方法:60只SD雄性大鼠随机分为6组,每组10只。除正常对照组不予辐射外,其余各组大鼠均经麻醉后接受10 Gy高能X射线单次腹部照射1次,建立大鼠急性放射性肠炎模型。辐射后,SPE各组大鼠以20,40,80 mg·kg^(-1)剂量分别灌胃给予SPE混悬溶液,1次/天,连续给药7 d。于辐射前及辐射后第1~7天观察各组大鼠体征并称定体质量。第7天处死大鼠后,光学显微镜下观察结肠组织病理,采用ELISA试剂盒检测外周血清炎性因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量及结肠组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量,采用蛋白印迹法检测结肠组织炎症小体NLRP3及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase-3、Cyto-C表达。结果:治疗后,SPE可显著增加辐射损伤大鼠体质量,改善结肠组织病理状态,降低血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量及结肠组织MPO含量,同时抑制结肠组织NLRP3及Bax、caspase-3、Cyto-C蛋白表达。结论:SPE对电离辐射大鼠急性放射性肠炎具有保护作用。

甘西鼠尾草总酚酸提取物的质量标准研究

目的建立甘西鼠尾草总酚酸提取物的质量标准。方法采用薄层色谱法进行鉴别,对水分和灼烧残渣检查进行限度控制,采用紫外分光光度法进行含量测定。结果甘西鼠尾草总酚酸提取物的薄层色谱分离效果良好,荧光斑点清晰;确定甘西鼠尾草总酚酸提取物中水分不得超过5%,炽灼残渣不得超过10%,总酚酸含量不得少于35%。结论所建立的甘西鼠尾草总酚酸提取物的鉴别、检查及含量测定方法能够较好地控制甘西鼠尾草总酚酸提取物的质量。

甘西鼠尾草总酚酸提取物对电离辐射血管内皮细胞损伤的保护作用及机制研究

目的研究甘西鼠尾草总酚酸提取物(SPE)对电离辐射血管内皮细胞损伤的保护作用,探讨其抗电离辐射作用机制。方法人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分别给予10000、1000、500、250、125、62.5、30、15、5、1μg/ml SPE溶液处理24 h;HUVEC细胞暴露于10 Gy;Coγ射线照射后培养30 h,分别给予125、250、500μg/ml SPE溶液处理24h;HUVEC暴露于10 Gy;Coγ射线照射后培养1 h,加入100μl组织细胞淋巴瘤细胞(U937细胞)溶液,1 h后除去未黏附的细胞,分别给予125、250、500μg/ml SPE溶液处理3 h。采用MTS法检测以上溶液细胞活力变化。HUVEC暴露于10 Gy;Coγ射线照射后培养6 h,分别给予125、250、500μg/ml SPE溶液处理3 h后,测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)含量,继续培养6 h后,采用Western印迹检测Bcl-2、Bax、THBD、γH2AX、ICAM-1、VCAM-1等蛋白表达。结果HUVEC可耐受1000μg/ml以下的SPE溶液。对10000μg/ml SPE溶液,其细胞活力下降极显著(P<0.0001)。与辐射模型组相比,250和500μg/ml SPE剂量组的辐射HUVEC活力显著升高(P<0.01)、与U937细胞间黏附比例显著降低(P<0.01);SPE各组的ROS、MDA水平显著降低(P<0.01),SOD、GSH水平显著升高(P<0.01),且效应强度与剂量均呈正相关。SPE各组Bcl-2、THBD蛋白表达显著升高,Bax、γH2AX、ICAM-1及VCAM-1蛋白表达显著降低。结论SPE可通过调节凋亡及细胞周期相关蛋白,增强血管内皮细胞抗凋亡能力和细胞活力,通过抑制单核细胞黏附、降低脂质过氧化、减轻血管内皮细胞氧化应激及炎症损伤等机制,对电离辐射血管内皮细胞损伤具有保护作用。