代谢工程改造热带假丝酵母生产鼠尾草酸

鼠尾草酸(carnosic acid,CA)是一种酚类二萜化合物,广泛存在于鼠尾草等唇科类植物中。CA具有抗肿瘤等多种生理以及药理活性,在日化、食品、医疗领域应用价值巨大。热带假丝酵母具有鲁棒性强、耐高温、产油脂等特性,因而在萜类化合物高效生产方面极具潜力。该研究根据热带假丝酵母密码子偏好性对来源于鼠尾草的铁锈醇合酶基因CYP76AH24和鼠尾草酸合酶基因CYP76AK6、来源于拟南芥的细胞色素还原酶基因ATR1进行全序列密码子优化以及基因合成。以生产鼠尾草酸前体次丹参酮二烯热带假丝酵母1C2PM04作为出发菌株,将上述基因整合到其基因组中成功合成鼠尾草酸。利用模块化工程与酵母不同亚细胞区室的空间组合,将上述3条基因以模块化的方式导入胞质和过氧化物酶体中进行表达,鼠尾草酸产量分别为10.25 mg/L和4.64 mg/L。通过下调角鲨烯合酶基因ERG9,降低法尼基焦磷酸池的消耗进而改变代谢通量进一步提高鼠尾草酸产量,效价达到26.3 mg/L。将细胞色素P450酶和细胞色素还原酶进行融合表达,测试以刚性linker(E3AK,E3AK×2,E3AK×3)和柔性linker(G4S,G4S×2,G4S×3)为连接肽,融合表达CYP76AH24和ATR1,鼠尾草酸产量提高1.54倍。该文通过增加CPR拷贝数,增加电子供体,进一步提高鼠尾草酸表达水平,产量达到78.24 mg/L。

鼠尾草酸影响线粒体功能抑制破骨细胞分化

背景:鼠尾草酸是在迷迭香中发现的一种生物活性化合物,已被证明可减少炎症和活性氧,但在破骨细胞分化进程中的作用机制尚不明确。目的:探讨鼠尾草酸对破骨细胞活化、活性氧产生及线粒体功能的影响。方法:体外提取培养小鼠来源的原代骨髓源巨噬细胞,使用CCK-8细胞活力实验检测不同浓度(0,10,15,20,25和30μmol/L)鼠尾草酸对骨髓源巨噬细胞的增殖和毒性作用,筛选出安全作用浓度。将骨髓源巨噬细胞按照浓度梯度分组培养,核因子κB受体活化因子配体诱导破骨细胞5-7 d后,分别进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色、F-actin染色、H2DCFDA探针和线粒体活性氧、Mito-Tracker荧光检测,观察鼠尾草酸对破骨细胞分化和功能的影响;通过Western Blot及RT-PCR实验检测鼠尾草酸对核因子κB受体活化因子配体诱导的丝裂原激活蛋白激酶信号通路上下游基因和蛋白的影响。结果与结论:①抗酒石酸酸性磷酸酶和F-actin染色显示:鼠尾草酸以浓度依赖性地抑制体外破骨细胞分化及细胞骨架肌动蛋白环形成,其中鼠尾草酸30μmol/L组的抑制作用最显著;与其他干预时期相比,鼠尾草酸在破骨分化的早期(第1-3天)抑制作用最显著;②H2DCFDA探针和线粒体活性氧、Mito-Tracker荧光显示:鼠尾草酸抑制细胞活性氧和线粒体内活性氧的产生,同时减少线粒体膜电位,影响线粒体的功能;③Western Blot及RT-PCR结果显示:鼠尾草酸可抑制与破骨分化相关的NFATc1、CTSK、MMP9、C-fos蛋白的表达,下调与破骨分化相关的NFATc1、Atp6vod2、ACP5、CTSK和C-fos基因的表达;鼠尾草酸还可以增强抗氧化酶蛋白的表达,减少破骨分化过程中活性氧的产生;④鼠尾草酸抑制P38/ERK/JNK蛋白的磷酸化修饰,通过激活MAPK信号通路抑制骨髓源巨噬细胞破骨细胞分化。

鼠尾草酸对热加工菜籽油品质特性的影响

本研究以菜籽油为原料,通过添加不同浓度的(0、200、400、700 mg/kg)鼠尾草酸和200 mg/kg特丁基对苯二酚对比分析,系统研究菜籽油热加工过程中(180℃,0、8、16、24、32 h)的色度、酸价、过氧化值、生育酚、黏度、脂肪酸组成与极性组分等的变化规律,以揭示鼠尾草酸对热加工菜籽油品质特性的影响规律。结果显示,鼠尾草酸添加量为700 mg/kg时表现出最优作用:延缓了菜籽油色度的劣变和抑制了油脂黏度的增大;热加工32 h后,酸价增幅最小,由0.280±0.030 mg/g升至0.757±0.020 mg/g,过氧化值较其余添加量低,为0.138 g/100 g;在热加工过程中α-生育酚损耗率与γ-生育酚损耗率均最低,分别为95.51%±0.96%与83.37%±0.39%;在热加工32 h时的极性组分含量为26.62%±0.03%,使菜籽油的热加工寿命得到延长。鼠尾草酸在热加工菜籽油中的使用可更好地实现对风险因子的控制,减少油脂浪费。

鼠尾草酸对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎的改善作用

研究了鼠尾草酸(CA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎(UC)的改善作用。小鼠自由饮用含3%DSS的蒸馏水,连续7 d造模。将60只小鼠随机分为5组:空白对照组(CK)、DSS模型组(DSS)、鼠尾草酸低剂量组(CAL)、鼠尾草酸高剂量组(CAH)、美沙拉嗪组(PC)。通过小鼠体质量变化、疾病活动指数(DAI)评分、结肠组织病理学和肠道通透性变化评估CA对UC小鼠的干预作用。通过测定结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性、超过氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达及肠道菌群组成的变化探讨可能的影响机制。与DSS组相比,CA干预降低了UC小鼠的质量损失和DAI评分、改善了结肠组织病理损伤。同时,CAL和CAH组结肠组织MPO活性显著降低、MDA含量分别降低了13.75%、70.00%(P<0.05),SOD活性分别升高了6.12倍、9.62倍(P<0.05),肠道通透性显著降低、ZO-1和Occludin蛋白的表达得到恢复。50 mg/kg mb的CA灌胃提高了厚壁菌门和拟杆菌门的丰度比值,恢复了DSS诱导的UC小鼠中Akkermansia等有益菌属的丰度下降,降低了Alistipes等有害菌属的相对丰度。CA对UC具有良好的改善作用,其机制可能与降低氧化应激水平、保护肠屏障和调控肠道微生物组成有关。

鼠尾草酸对产后抑郁小鼠模型的作用研究

目的探讨鼠尾草酸对产后抑郁小鼠模型的治疗作用。方法选取雌性C57BL/6小鼠70只行双侧卵巢去势手术,后激素撤退模拟妊娠制备产后抑郁模型。根据糖水偏爱试验筛选50只产后抑郁模型小鼠,随机分为模型对照组,雌激素组(20μg·kg^(-1),sc),鼠尾草酸低、中、高剂量组(25、50、100 mg·kg^(-1),ig)。另取10只雌性C57BL/6小鼠行假手术作为假手术对照组。给药组每日给药1次,连续28 d,给药体积20 mL·kg^(-1)。末次给药后进行糖水偏爱、强迫游泳及自主活动等行为学试验评价抑郁样行为,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中成纤维生长因子9(FGF9)、雌二醇(E2)及海马组织中5-羟色胺(5-HT)、脑源性神经营养因子(BDNF)含量。Western blot检测小鼠海马组织中BDNF、FGF9蛋白表达。苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠海马组织CA1区组织病理改变。结果与假手术对照组比较,模型对照组小鼠行为学检测中糖水偏爱指数显著下降(P<0.01),强迫游泳不动时间显著增加(P<0.01),小鼠运动总路程和平均速度显著减少(P<0.01)。海马组织CA1区神经元细胞散乱分布,细胞形态异常,神经元碎片化。ELISA法检测发现血清E2及海马组织中5-HT、BDNF含量显著下降,FGF9含量显著上升(P<0.05或P<0.01)。Western blot法检测发现BDNF蛋白表达下降,FGF9表达升高(P<0.05或P<0.01)。与模型对照组比较,在给予鼠尾草酸治疗后,各组小鼠糖水偏爱指数增加(P<0.01)。雌激素组及鼠尾草酸中、高剂量组小鼠游泳不动时间减少,自主活动的运动总路程和平均速度增加(P<0.05或P<0.01);海马组织神经元损伤程度减轻,细胞排列紧密,形态正常化。雌激素组血清E2水平显著升高(P<0.05),雌激素组及鼠尾草酸各剂量组海马5-HT含量均有不同程度的增加(P<0.01)。雌激素组及鼠尾草酸中、高剂量组能显著降低FGF9含量(P<0.05)。雌激素组和鼠尾草酸高剂量能显著增加BDNF含量,上调BDNF表达水平,下调FGF9表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论鼠尾草酸可显著改善产后抑郁小鼠海马神经元损伤和抑郁样行为,其作用机制可能与增加海马5-HT、BDNF含量、降低FGF9水平有关。

响应面法优化低共熔溶剂提取迷迭香中迷迭香酸和鼠尾草酸的工艺

目的:采用低共熔溶剂(Deep Eutectic Solvents,DESs)同时提取迷迭香中的迷迭香酸(Rosmarinic acid,RA)和鼠尾草酸(Carnosic acid,CA),并对提取工艺进行优化,为迷迭香抗氧化成分的有效开发利用提供参考。方法:首先制备37种不同组分的DESs,从中筛选出提取RA和CA得率最高的DESs组合;然后通过单因素实验研究不同的摩尔比、含水量(%)、液固比(mL/g)、提取时间(min)和提取温度(℃)对RA和CA得率的影响,在此基础上采用响应面法对提取工艺进行优化及验证,最后比较了DESs和传统溶剂(80%乙醇、正己烷)提取RA和CA的得率以及对DPPH·清除能力的差异。结果:乳酸/1,4-丁二醇(摩尔比1:2)的DESs是同时提取RA和CA的DESs的最佳溶剂,优化的提取条件为:含水量12%、液固比44:1 mL/g、提取时间60 min,提取温度40℃。在该条件下RA和CA的得率分别为20.247和34.086 mg/g,相较于传统溶剂提取,DESs提取RA和CA的总得率分别提高了1.4倍(乙醇)和1.5倍(正己烷),且耗时更短。以维生素C清除DPPH·的能力(浓度为0.03 mg/mL,清除率89.77%)为对照,相同浓度迷迭香药材(0.625 mg/mL)下,DESs提取物清除率为73.17%,优于乙醇提取物(66.93%)和正己烷提取物(62.57%)。结论:DESs能够同时提取迷迭香中的水溶性成分RA和脂溶性成分CA,得率高且能够保持良好的抗氧化活性,是一种绿色、环保、高效的迷迭香抗氧化剂提取方法。

鼠尾草酸、α-倒捻子素联合不同作用机制抗生素的抗金黄色葡萄球菌作用研究

目的探究植物源抗菌天然产物鼠尾草酸、α-倒捻子素分别与抗生素的联合应用效果,发现不同联合应用效果的抗菌组合物。方法分别以敏感金黄色葡萄球菌ATCC25923、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA 01为指示菌株,采用微量肉汤稀释法,测定鼠尾草酸、α-倒捻子素和不同作用机制抗生素对指示菌株的最低抑菌浓度;再采用棋盘格法,分别测定鼠尾草酸、α-倒捻子素与不同作用机制抗生素联用对测试菌株的部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)。结果鼠尾草酸、α-倒捻子素联合硫酸庆大霉素对测试菌株的FICI范围分别为0.28~0.62、0.31~0.50,前者对两株测试菌株分别显示协同或无关作用,后者均显示协同作用;鼠尾草酸、α-倒捻子素分别与其他抗生素对测试菌株的FICI范围为0.52~1.12,均显示无关作用。结论靶向细胞膜的鼠尾草酸、α-倒捻子素与作用于核糖体影响细胞膜的氨基糖苷类庆大霉素联用时,主要呈现协同的联合抗菌效果,进一步证实了课题组发现的联合用药效果的相关规律;组合物鼠尾草酸/硫酸庆大霉素对金黄色葡萄球菌的不同菌株既可显示协同,又可显示无关作用,为联合用药防细菌耐药的进一步研究打下了基础。

鼠尾草酸在帕金森病中的神经保护作用机制研究进展

鼠尾草酸(CA)是一种存在于迷迭香中的天然酚类二萜化合物,其特征为邻二氢醌型分子。研究表明,鼠尾草酸在体外和体内对帕金森病(PD)有很强的神经保护作用。本文综述了鼠尾草酸在帕金森病中的神经保护作用,并对鼠尾草酸发挥神经保护作用的分子机制进行了总结。本综述表明鼠尾草酸是治疗帕金森病的潜在药物。

鼠尾草酸调节PINK1/Parkin信号通路对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞的影响

目的探究鼠尾草酸调节磷酸酶基因(PTEN)诱导假定激酶(PINK)1/E3泛素连接酶(Parkin)信号通路对高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)的影响。方法将HBZY-1细胞分为对照组(含糖量5.8 mmol/L),高糖组(含糖量26 mmol/L),低剂量鼠尾草酸组(含50 mg/kg鼠尾草酸),高剂量鼠尾草酸组(含100 mg/kg鼠尾草酸)。采用透射电镜、流式细胞仪观察高糖诱导大鼠肾小球系膜细胞自噬、凋亡变化状况,Western印迹检测PINK1/Parkin信号通路蛋白的表达量。结果与对照组相比,高糖组、低剂量鼠尾草酸组、高剂量鼠尾草酸组HBZY-1细胞自噬率、PINK1、Parkin、超氧化物歧化酶(SOD)表达显著降低,细胞凋亡率、白细胞介素(IL)-1β、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平显著升高(P<0.05);与高糖组对比,低剂量鼠尾草酸组、高剂量鼠尾草酸组HBZY-1细胞自噬率、PINK1、Parkin、SOD水平显著升高,细胞凋亡率、MDA、TNF-α、IL-1β表达显著下降(P<0.05);与低剂量鼠尾草酸组相比,高剂量鼠尾草酸组的HBZY-1细胞自噬率、PINK1、Parkin、SOD表达上升,细胞凋亡率、TNF-α、MDA、IL-1β表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论鼠尾草酸可加强高糖诱导的肾小球系膜细胞自噬率,抑制HBZY-1的凋亡,可能与其调节PINK1/Parkin信号通路有一定的关联性。

鼠尾草酸对慢性不可预见性轻度应激诱导的抑郁大鼠的抗抑郁作用及其SIRT1/ERS调控机制

目的:探讨鼠尾草酸(CA)对慢性不可预见性轻度应激(CUMS)诱导的抑郁大鼠内质网应激(ERS)的影响,并阐明其抗抑郁机制。方法:采用随机数字表法从66只SD大鼠中随机选取12只为对照组,剩余54只大鼠采用CUMS联合孤养诱导建立抑郁模型,取48只建模成功的大鼠随机分为模型组、氟西汀(3.17 mg·kg^(-1))组、CA (40 mg·kg^(-1))组和CA (40 mg·kg^(-1))+EX527沉默信息调节因子1 (SIRT1)抑制剂(5 mg·kg^(-1))组,每组12只。给予相应的药物干预后,旷场实验(OFT)检测大鼠运动总距离和中间停留时间;强迫游泳实验(FST)检测大鼠强迫游泳时的不动时间;糖水偏好实验(SPT)检测大鼠糖水偏好度;TUNEL法检测各组大鼠海马组织中TUNEL阳性细胞百分率;免疫荧光法检测各组大鼠海马组织中C/EBP同源蛋白(CHOP)和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)阳性表达强度;实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组大鼠海马组织中SIRT1、GRP78、CHOP和Caspase-12 mRNA表达水平;Western blotting法检测各组大鼠大脑海马组织CA1区中SIRT1、 GRP78、 CHOP、 Caspase-12和裂解的Caspase-12 (cleavedCaspase-12)蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠OFT中的总距离、中间停留时间、糖水偏好百分率及海马组织CA1区中SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);强迫游泳时的不动时间,TUNEL阳性细胞百分率,GRP78、CHOP、Caspase-12和cleaved Caspase-12蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,氟西汀组和CA组大鼠OFT中的运动总距离、中间停留时间、糖水偏好度及海马组织CA1区中SIRT1 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),强迫游泳时的不动时间,TUNEL阳性细胞百分率,GRP78、CHOP、Caspase-12和cleaved Caspase-12蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与CA组比较,CA+EX527组大鼠OFT中的总距离,中间停留时间,糖水偏好度,大脑海马组织CA1区中SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);强迫游泳时的不动时间,TUNEL阳性细胞百分率,GRP78、CHOP、Caspase-12和cleaved Caspase-12蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:CA可减轻CUMS引起的大鼠抑郁样行为,其抗抑郁机制可能与SIRT1介导的ERS抑制有关。

鼠尾草酸调节CXCR7/CXCL12轴对胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨鼠尾草酸(CA)通过调节CXC基序趋化因子受体7(CXCR7)/CXC基序趋化因子配体(CXCL12)轴对胃癌AGS细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:用不同浓度(0、5、10、20、40、80μg/mL))的CA处理胃癌AGS细胞,采用CCK-8法筛选合适的CA浓度;将AGS细胞分为对照组(未经处理的AGS细胞)、CA组(20μg/mL CA处理)、CA+siCXCR7组(转染siCXCR7+20μg/mL CA处理)、CA+siNC组(转染siNC+20μg/mL CA处理)、CA+vectorNC组(转染vectorNC+20μg/mL CA处理)、CA+vectorCXCR7组(转染vectorCXCR7+20μg/mL CA处理),采用CCK-8法检测AGS细胞增殖的变化,qPCR法检测细胞中CXCR7、CXCL12 mRNA表达水平的变化,Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化,划痕实验检测细胞迁移能力的变化,WB法检测周期蛋白D1、Bcl-2、CXCR7、CXCL12、MMP-2蛋白表达的变化。结果:不同浓度CA均可抑制AGS细胞存活率,且浓度为20μg/mL时,细胞存活率接近50%,故选择20μg/mL CA用于后续研究。与对照组相比,CA组增殖率、侵袭数、迁移率、周期蛋白D1、MMP-2、Bcl-2、CXCR7、CXCL12 mRNA及蛋白表达显著降低(均P<0.05);与CA+siNC组相比,CA+siCXCR7组增殖率、侵袭数、迁移率、周期蛋白D1、MMP-2、Bcl-2、CXCR7、CXCL12 mRNA及蛋白表达显著降低(均P<0.05);与CA+vectorNC组相比,CA+vectorCXCR7组增殖率、侵袭数、迁移率、周期蛋白D1、MMP-2、Bcl-2、CXCR7、CXCL12 mRNA及蛋白表达显著增加(均P<0.05)。结论:CA可抑制AGS细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制CXCR7/CXCL12轴有关。

鼠尾草酸的生物学功能及其在畜禽生产中的应用

在饲料禁抗令全面实施的大背景下,我国畜禽生产面临着严峻挑战,如肠道健康受损、生长性能降低、肉蛋等动物产品品质下降等。因此,天然、安全、高效的植物提取物等替抗产品成为研究热点。鼠尾草酸是一种天然的酚萜类化合物,广泛存在于鼠尾草、迷迭香等植物中。本文通过对国内外文献的分析整理,介绍鼠尾草酸的来源、提取方法与理化性质,对其抗氧化、抗炎、抑菌及脂肪代谢调节等生物学功能及其潜在的作用机理进行综述,并在此基础上探讨了鼠尾草酸及其主要来源迷迭香、鼠尾草等在畜禽生产中的应用前景,旨在为推动新型生物活性添加剂的开发及其在畜禽生产中的应用提供参考。

鼠尾草酸通过抑制阿尔茨海默病小鼠脑内炎症反应减少β淀粉样蛋白沉积的机制

目的研究鼠尾草酸(CA)通过抑制阿尔茨海默病(AD)小鼠脑内免疫炎症反应,减少β淀粉样蛋白(Aβ)沉积的机制。方法将18只APP/PS1转基因小鼠(AD模型)分为对照组和CA组,每组9只。CA组小鼠给予CA(20 mg·kg^(-1)·d^(-1)),对照组给予相同体积的生理盐水。水迷宫实验检测小鼠的认知能力;免疫荧光染色检测Aβ和神经胶质细胞(星形胶质细胞和小胶质细胞)在小鼠脑内的共定位情况;ELISA检测炎性细胞因子、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的含量;Western blotting检测IL-6、NLRP3、TNF-α、IL-1β和转录因子核因子κB(NF-κB)的表达。结果与对照组相比,CA组小鼠脑内Aβ沉积数量明显减少(P<0.05),星形胶质细胞和小胶质细胞的活化被抑制。CA干预处理后,小鼠脑内炎性细胞因子的表达明显降低,转录因子NF-κB的表达被抑制(P<0.05)。行为学结果提示,CA组小鼠学习记忆能力明显改善(P<0.05)。结论CA可通过抑制APP/PS1转基因小鼠脑内免疫炎症反应,减少AD小鼠脑内Aβ沉积数量,最终改善AD小鼠的认知功能障碍。

鼠尾草酸对自由基诱导蛋白质氧化损伤的保护作用

评价鼠尾草酸对自由基诱导蛋白质氧化损伤的保护作用。采用Cu2+/H2O2诱导牛血清白蛋白(BSA)和SD大鼠肝匀浆蛋白氧化损伤反应体系,通过考马斯亮蓝R-250染色法和免疫印迹法检测蛋白质氧化降解和羰基化程度。结果表明:鼠尾草酸能够抑制Cu2+/H2O2诱导BSA和SD大鼠肝匀浆蛋白的氧化降解和羰基化损伤。

pH控制匀浆法从迷迭香中提取鼠尾草酸

采用pH控制匀浆法从迷迭香枝叶中提取鼠尾草酸，研究了提取过程中不同影响因子对提取效果的影响。确定的匀浆提取优化条件为：以盐酸调节pH=3．0的80％乙醇（体积分数）为提取溶剂，料液比1：12，匀浆4min，匀浆提取1次。与超声波法、回流法、冷浸提取法、水浴振荡法相比，具有设备和操作简单、提取率高、快速等特点。使用盐酸将提取溶剂调节为酸性（pH为3～4）可有效避免鼠尾草酸在提取过程中的氧化降解。

高效液相色谱法测定迷迭香超临界提取物中的鼠尾草酸和鼠尾草酚

采用HPLC法测定了迷迭香超临界提取物（SFE）中的鼠尾草酸与鼠尾草酚。SFE样品用甲醇超声提取，以C18为固定相，乙腈-水为流动相，在285nm检测波长下，用外标法进行定性定量分析，鼠尾草酸与鼠尾草酚校正曲线的线性范围分别为0．1—50mg／L与0．5—50mg／L，相关系数分别为0.9998与0.9996，检出限分别为0．1和0．8mg／L，平均凹收率分别为98％和95％。本方法快速准确，分离效果好。

反相液相色谱法测定迷迭香中鼠尾草酸的含量

建立反相高效液相色谱法分离和测定迷迭香中鼠尾草酸的含量。以Hil sil C18反相键合硅胶色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),乙腈+甲醇(85:15)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长为210nm,外标法定量。鼠尾草酸在20～200μg/ml范围有良好的线性关系,r=0.9998,回收率为98.6%。本方法准确、可靠、简便,可用于迷迭香中鼠尾草酸的含量测定。

鼠尾草酸对α-淀粉酶的抑制作用

抑制α-淀粉酶的活性可以有效降低餐后血糖浓度升高,故本实验从抑制率、抑制类型、荧光猝灭效应及分子模拟几个方面出发研究鼠尾草酸对α-淀粉酶的抑制作用。结果显示,鼠尾草酸对α-淀粉酶有较为显著的抑制作用,半数抑制浓度为1.12 mg/mL,以可逆的竞争性方式抑制α-淀粉酶的活性。荧光猝灭实验结果表明,鼠尾草酸与α-淀粉酶结合后使α-淀粉酶的荧光特性发生静态猝灭。分子对接结果显示鼠尾草酸与α-淀粉酶作用后没有催化底物生成新的产物,而是形成可逆的酶-抑制剂复合物,引起变构调节,从而扰乱了α-淀粉酶的构象动力学,最终导致酶催化活性降低。

鼠尾草酸提取和纯化方法研究进展

综述了鼠尾草酸的各种提取方法,包括:传统溶剂提取法、匀浆提取法、超声辅助提取法、超临界二氧化碳萃取法等,同时介绍了鼠尾草酸的各种纯化方法。

鼠尾草酸对β-淀粉样蛋白损伤的神经干细胞增殖的影响

目的观察鼠尾草酸对β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)损伤的神经干细胞的影响,为通过促进神经新生治疗Aβ损伤所致疾病提供理论依据。方法使用Aβ建立神经干细胞损伤模型,使用鼠尾草酸治疗神经干细胞,通过细胞计数法计算神经干细胞的增殖速度,噻唑蓝(MTT)测定神经干细胞活性,逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)测定神经干细胞中Nestin m RNA及凋亡相关基因Caspase3 m RNA表达,免疫组化测定神经干细胞向神经元和星形胶质细胞的分化潜能。结果鼠尾草酸能增加神经干细胞的增殖速度,增加神经干细胞活力,减少神经干细胞Caspase3 m RNA表达,增加神经干细胞向神经元分化比例,逆转Aβ损伤造成的神经干细胞凋亡。结论鼠尾草酸促进神经干细胞增殖,促进神经干细胞向神经元分化,逆转Aβ对神经干细胞的损伤可能是由于抑制了凋亡基因表达。