鼠卵透明带3在Pichia pastoris酵母中的分泌表达

本研究通过酵母Pichiapastoris表达鼠卵透明带 3(mZP3)蛋白 ,获得控制害鼠生育研究的抗原物质。根据国际基因库已发表的mZP3基因序列设计引物 ,并分别在 5’引物和 3’引物中引入EcoRI和XbaI酶切位点。经PCR扩增 ,将mZP3克隆至穿梭质粒pGAPZαA上 ,获得的重组穿梭质粒pGAPZαA mZP3经线性化后 ,采用LiCl法转入毕赤酵母SMD1 1 68菌株中 ,Zeocin+ 筛选阳性克隆 ,酵母发酵上清液进行SDS PAGE和Western blot检测 ,结果表明mZP3在酵母中得到了特异性表达 ,表达产物的分子量约为 60kDa ,说明mZP3能够在酵母真核系统中成功表达 ,并可以用作mZP3免疫不育控制鼠害的检测抗原。

分子佐剂C3d增强草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗的免疫应答

为增强免疫不育的效果,探讨分子佐剂C3d对草原兔尾鼠透明带3(LaguruslagurusZonaPellucida3,LZP3)基因免疫的调节作用。构建了含3个拷贝C3d的lzp3基因真核细胞表达质粒pcDNA3-LZP3-C3d3(pcD-LC),以不含C3d的质粒pcDNA3-LZP3(pcD-L)为对照,体外转染HeLa细胞,RT-PCR和Westernblot分别检测到lzp3mRNA和蛋白的表达。对NIH雌性小鼠肌肉进行基因免疫注射,ELISA结果表明pcD-LC免疫诱导的特异性抗LZP3-IgG水平明显高于pcD-L对照组(P<0.05),且有长期免疫应答效应;MTT结果显示pcD-LC能够诱导淋巴细胞增殖活性的提高。抗生育实验表明pcD-LC免疫组显著降低窝产仔数(P<0.05),且卵巢切片正常。研究结果证实C3d能够增强lzp3DNA疫苗的特异性免疫应答并达到抗生育效果,为DNA疫苗控制草原兔尾鼠的深入研究提供了基础。

草原兔尾鼠卵透明带3融合蛋白抗原的制备及免疫反应性

目的大量制备重组的草原兔尾鼠卵透明带3（Recombinant Lagurus lagurus zona pellucida 3, r-LZP3 ）融合蛋白，并检测其免疫反应性。方法经密码子优化的Lzp3基因在E.coli BL21（DE3）中以包涵体形式表达融合蛋白，表达产物经洗涤、纯化、溶解、复性后，用Western blot、ELISA和抗生育试验鉴定免疫反应性。结果得到纯度达93％的r-LZP3蛋白。Western blot显示表达产物与LZP3小鼠抗血清出现特异性反应条带。ELISA表明免疫小鼠血清中LZP3抗体滴度达1：45000以上。抗生育试验表明r-LZP3蛋白免疫小鼠的避孕率为25％，平均每胎产仔数减少4-5只。结论已获得了大量具有显著免疫活性的r-LZP3蛋白，为控制草原兔尾鼠鼠害的研究提供了重要的抗原。

HSP70C融合草原兔尾鼠卵透明带3对小鼠抗生育的研究

目的:探讨分枝杆菌热休克蛋白(HSP70)对草原兔尾鼠卵透明带3(LZP3)免疫不育效果的增强作用。方法:将HSP70全长和C端分别与LZP3融合构建pcD-L-HSP70和pcD-L-HSP70C重组质粒,同时与具有免疫不育功能的pcD-L和pcD-ACLC一起分别免疫NIH小鼠,分别检测重组质粒在机体真核细胞中的表达情况、T细胞增殖及体液免疫水平、抗生育效果、卵巢的病理变化和免疫荧光定位。结果:LZP3构建的重组质粒均能在小鼠肝脏中表达;免疫后能刺激机体T细胞增殖,尤其是pcD-ACLC和pcD-L-HSP70C免疫组(P<0·01);同时激发机体产生特异性抗体(P<0·05);除pcD-L-HSP70免疫组外其他3种重组质粒均具有抗生育效果(P<0·05),且pcD-ACLC和pcD-L-HSP70C极明显地降低了小鼠平均窝仔数(P<0·01)且未引发机体产生卵巢炎;直接免疫荧光结果表明在绿色激发光下小鼠卵母细胞的卵透明带均能发出绿色荧光。结论:与pcD-L-HSP70免疫相比,pcD-L-HSP70C能明显地降低小鼠平均窝仔数,这表明分枝杆菌热休克蛋白HSP70C端对增强LZP3免疫不育效果具有明显的基因佐剂功效。

草原兔尾鼠卵透明带3蛋白的免疫原性及其抗血清对体外精卵结合的影响

目的:大肠杆菌表达的重组草原兔尾鼠透明带3(Recombinant Luguruszone pellucida3,r-LZP3)蛋白的免疫原性直接影响抗体的滴度,通过对r-LZP3免疫原性的分析,获得特异性的抗血清,并探讨r-LZP3和抗血清对体外精卵结合的影响。方法:在大肠杆菌中以包涵体形式表达r-LZP3,经过变性、复性及纯化后作为抗原,用LZP3DNA疫苗初免小鼠后,再用r-LZP3进行免疫加强,产生特异性的LZP3抗血清;通过EL1SA测定抗体应答的水平;蛋白印迹、间接免疫荧光和免疫组化方法检测抗血清同r-LZP3、鼠卵母细胞表面天然ZP的反应性;精卵结合实验观察r-LZP3、抗血清体外对鼠精卵结合能力的影响。结果:用LZP3DNA疫苗免疫制备的抗血清在免疫鼠中产生了较高的抗体滴度,并且可以识别大肠杆菌表达的r-LZP3以及鼠卵细胞表面天然的ZP,抗血清和r-LZP3也都能在体外抑制鼠的精卵结合。结论:大肠杆菌表达的r-LZP3有较好的免疫原性,r-LZP3和抗血清能够在体外阻止鼠的精卵结合。

ADSC-bFGF对大鼠背部带蒂皮瓣存活率的实验研究

目的:脂肪来源间充质干细胞复合碱性成纤维细胞生长因子(ADSC-bFGF)对大鼠背部带蒂皮瓣模型存活率的影响。方法:获得SD大鼠腹股沟脂肪,经体外分离、培养并进行多功能分化潜能的鉴定。MTT法检测bFGF培养液对ADSC的影响。建立大鼠背部自身对照带蒂皮瓣模型。应用CM-DiI荧光染料标记ADSC。在皮瓣可预测坏死区域分别给予A1组bFGF、A2组ADSC、A3组bFGF-ADSC、B组生理盐水。全部动物于术后7天测量皮瓣成活面积、HE染色、冰冻切片的CD31荧光显影,统计学分析ADSC-bFGF促进皮瓣成活的作用。结果:bFGF有明显促ADSC增殖作用,增值最快的最低浓度为5μg/L。A3组皮瓣成活率、毛细血管增生均显著高于其它组。结论:bFGF可促ADSC增值,具有协同作用。ADSC-bFGF可高效的刺激大鼠背部自身对照带蒂皮瓣的血管新生,显著的提高皮瓣的成活率。

小鼠卵透明带3(mZP3)质粒DNA体外瞬时表达的研究

为探讨小鼠卵透明带 3 (mZP3 )质粒DNA在真核细胞中的表达效率 ,筛选出高效表达mZP3的质粒 DNA ,提高DNA疫苗对小鼠的免疫不育效果 ,本研究采用阳离子多聚糖 纳米颗粒Puchio为转染介质 ,将mZP3质粒DNA转染真核细胞COS 7,用半定量 PCR检测mZP3的特异性mRNA表达。结果显示 :Puchio与pcDNA3 mZP3紧密结合 ,在COS 7细胞中有mZP3基因的特异性mRNA表达 ;Puchio的介导可能提高真核细胞的转染效率 ,有助于通过真核细胞的瞬时表达系统筛选出用于小鼠免疫不育的DNA疫苗 ,为深入开展鼠卵透明带

带“鼠”字的日戳和风景日戳

2008年初起的农历戊子年为鼠年，笔者曾收集到带“鼠”字的日戳和风景日戳如下，以飨同好： 黄鼠村所（河北献县，062252），白鼠（江苏宝应，225818）、鼠场（贵州长顺，550711）、鼠场（贵州安顺，561004）日戳。

精子—去透明带仓带鼠卵穿透试验与精液分析主要参数的关系

目的：了解精液分析（SA）与精子－去透明带仓带鼠卵穿透试验（ZHOT）检测结果的关系，以评价此两种实验方法对评估男性生育力的临床实用价值。方法：对22例男性不育症患者作了SA和ZHOT（改良的Yangimachi方法）的检测，并对SA主要参数指标的检测结果与ZHOT的检测结果（穿卵率）进行统计分析。结果ZHOT之穿卵率与SA主要参数：精子密度、正常形态精子百分率间有显著的正相关（P<0.05)，与a,b级活动精子百分率间则有非常显著的正相关（P＜0．01）。另外，以ZHOT检测结果正常与否分成之两组间其SA主要参数的检测结果间均有显著的差异（t检验），其中a,b级活动精子百分率之差异最为显著（P＜0．001）。结论：改良的Yamagimchi精子－去透明带仓带鼠卵穿透试验确实能比较好的综合反映精液的质量，但因其方法较复杂，设备较高，精液分析仍应是一般临床单位评估男性生育力的首选实验室方法。特别是其中精子活动力的测定对男性生育力的评估更具临床实用价值。

城市拆迁地区防制家栖鼠扩散措施的研究

目的：了解拆迁地带采取防灭鼠措施，遏止家栖鼠扩散的作用。方法：现场调查试验，设试验区与对照区，灭鼠措施以毒鼠为主，并设１～２条防鼠屏障，用鼠夹法、粉块法及食饵法测定拆迁地周围鼠密度变化。结果：发现（１）拆前灭鼠，周围遭鼠侵害明显减轻，对照区四周鼠密度粉块法阳性率增加５０７倍，拖食阳性率增加３９８倍；（２）灭鼠并加设防鼠带，四周鼠密度夹日法减轻２９８０％，对照区则增加５１６倍；（３）拆迁地区２次灭鼠加防鼠带比一次灭鼠加防鼠带对四周鼠害减轻６６２４％。结论：拆前于搬迁前及拆房前进行两次灭鼠，并设置防鼠带，能完全控制拆迁地区家栖鼠向外扩散。

草原兔尾鼠ZP3基因密码子优化及其在酵母中的表达

目的:提高草原兔尾鼠(L agurus lagurus)卵透明带3(LZP 3)基因在酵母细胞中表达的水平.方法:利用重叠PCR技术,定点突变LZP 3基因上6个稀有的密码子簇,将LZP 3基因中11个稀有的密码子更换成毕赤酵母(P ich ia Pastoris)最常用的相应密码子.将获得的LZP 3突变基因(LZP 3m)插入pGAPZαA中,构建穿梭表达载体.以重组体转化P ich ia Pastoris SM D 1168菌株进行表达.结果:LZP 3m基因的表达量比野生型LZP 3基因明显提高.结论:通过密码子优化,能显著提高LZP 3基因在酵母细胞中的表达水平.

东阳市鼠疫历史疫区啮齿动物生态调查

对东阳市鼠疫历史疫区开展啮齿动物生态调查,共捕鼠16143只,计3目5科9属20种。室内优势种为褐家鼠(60.37％)、黄胸鼠(35.53％);野外优势忡为黑线姬鼠(39.13％)、黑腹绒鼠(23.69％)。不同年代鼠类优势种群的空间分布和数量出现了明显的变动,室内褐家鼠和黄胸鼠互为升降,50年代、80年代、90年代两者之比分别为0.54:1、5.51:1、1.52:1;野外黑线姬鼠和黑腹绒鼠,至90年代出现了明显的交替倒置现象。随着季节、地区和地理环境不同,鼠密度有显著性差异(P<0.05)。不同鼠体的染蚤率和蚤指数均有所不同,褐家鼠的染蚤率(24.91％)及蚤指数(0.81)为最高,其次为黄胸鼠,染蚤率和蚤指数分别为22.22％和0.62％。可见褐家鼠和黄胸鼠与疾病关系密切,是重点防制对象。

四川省1993-2001年钩端螺旋体病传染源监测分析

目的 调查研究四川省 1993 -2 0 0 1年钩端螺旋体 (简称钩体 )病传染源情况 ,为防治该病提供科学依据。方法 按全国钩体病监测方案全省选择 10个监测点 ,进行钩体病主要传染源调查。结果 黑线姬鼠带菌率占第 1位 ,主要携带黄疸出血群钩体 ,首次从牛尿中检出七日热群钩体 结论 鼠密度、鼠带菌率、带菌鼠密度分别与钩体发病率呈正相关。黑线姬鼠是四川省稻田型钩体主要传染源。耕牛作为七日热群钩体宿主和重要传染源应继续调查。

浮动铰刀加工小直径孔的工艺研究

主要介绍在批量大、孔径小、材质较软的情况下,如何采用特殊的工具及工艺来提高产品的合格率和效率,从而达到事半功倍的效果。

2005-2014年峨眉山市钩端螺旋体病监测结果分析

目的了解峨眉山市2005-2014年钩端螺旋体病疫情动态、鼠密度及鼠带菌率和健康人群对钩体病的免疫水平,为有效预防和控制钩体病提供科学依据和参考。方法按照全国钩体监测方案要求,进行鼠密度、鼠带菌率和健康人群钩体抗体水平调查。结果 2005-2014年峨眉山市监测点平均鼠密度为2.46%,春季略高于秋季,密度较低;在鼠种构成中四川短尾鼩居首位,占总数的82.51%,黑线姬鼠位列第三;仅2007年从蛙肾中培养出一株流感伤寒型钩体菌株,其它培养结果为阴性;健康人群钩体抗体监测显示,黄疸出血群是峨眉山市人间钩体病流行的主要血清群,占42.93%,其次为澳洲群。结论峨眉山市钩体疫情呈下降趋势,健康人群血清钩体抗体阳性率和种类均在减少,地形地貌和气候条件适合钩体的繁殖和生长,增加了钩体防制的难度,需加大监测工作力度,加强综合干预措施。

2002-2006年江油市钩端螺旋体病监测分析

目的了解江油市2002-2006年钩端螺旋体(以下简称钩体)病疫情动态及健康人群对钩体的免疫水平,为制定防治措施提供科学依据。方法按照全国钩体病监测方案,进行鼠密度、鼠带菌率和健康人群钩体抗体水平调查。结果平均鼠密度为5.10%,最高为9.55%。平均带菌率为0.73%,褐家鼠带菌率最高,为2.50%。健康人群血清钩体抗体以澳州群为主(37.88%)。结论江油市鼠密度,鼠带菌率较低。野鼠是稻田型钩体最重要的传染源,褐家鼠带菌值得重视。健康人群血清钩体抗体水平正在下降,钩体病监测力度应加强。

精索静脉曲张不育患者术后未育者精子穿卵率的远期观察

目的 :对精索静脉曲张不育患者术后未育者的精子穿卵率作远期观察。方法 :1双侧经髂窝或经腹腔镜精索静脉高位结扎术 ;2人精子去透明带地鼠卵穿透试验 (SPA)。结果 :2 9例精索静脉曲张不育患者 ,术后 1 .5～ 2年随访仍未育 ,作 SPA,与术前 SPA穿卵率对比 ,精索静脉曲张 °组 (n=1 7)有 7例改善了穿卵率 ,精索静脉曲张 °组 (n=1 2 )有 2例改善了穿卵率。但两组穿卵率的升高幅度不大。结论 :精索静脉曲张不育患者术后较长时间仍未育者 ,虽部份患者的精子穿卵率已有改善 ,但穿卵率的增加程度不高。术前精索静脉曲张严重的患者 ,术后可能难以提高穿卵率。应建立 SPA对患者术后精子受精能力作评估 ,以及时调整治疗措施。