大鼠心肌细胞条件培养基对兔胚胎干细胞分离培养效果的影响

采用大鼠心肌细胞条件培养基对兔胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESC)进行分离、传代培养,研究大鼠心肌细胞条件培养基对兔ESC分离培养效果的影响。结果显示,用SD大鼠心肌细胞条件培养基培养的兔ESC集落呈岛屿状生长,碱性磷酸酶染色呈强阳性,体外分化可形成类胚体状结构,贴壁的类胚体周边会出现许多分化的上皮样细胞或单个散在的细胞;常规冻存后再传代的兔ESC集落具有较为一致的生长特征,并呈现胚胎干细胞集落所特有的岛屿状生长形态;传至第5代的兔ESC集落核型正常率>75％。表明SD大鼠心肌细胞条件培养基可用于兔胚胎干细胞分离培养。

活血化瘀经典古方对乳鼠体外心肌细胞培养缺氧缺糖性损伤的保护作用

8个活血化瘀经典古方,在临床防治心脑血管病中收到较好疗效。实验研究证8个古方对在体动物心脏血流动力学及实验性心肌缺血有不同程度的影响。本实验利用体外心肌细胞培养在缺氧缺糖条件下模拟心肌缺血,在细胞水平观察了8个活血化瘀经典古方对心肌细胞缺氧缺糖性损伤的作用。

培养心肌细胞内的SDH图象分析——大豆磷脂脂质体对缺血再灌心肌膜损伤的影响

琥珀酸脱氢酶(SDH)的活性在判断心肌缺血,再灌性损伤中起重要作用。本文通过IBAS图象分析系统对缺血再灌的培养心肌细胞内的SDH定量评估,以求探讨大豆磷脂脂质体对心肌缺血再灌性损伤的保护作用。结果表明,在缺血及再灌组的心肌细胞内出现较强的SDH损伤性反应,大豆磷脂脂质体能明显减轻这种反应,提示大豆磷脂脂质体对缺血及缺血/再灌心肌具有明显的保护作用。

碘化N-正丁基氟哌啶醇对培养大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤及蛋白激酶C活性的影响

目的：前期研究表明，碘化N-正丁基氟哌啶醇（F2）心肌保护作用的机制可能与其拮抗钙超载及抑制早期生长反应基因-1（Egr—1）mRNA及蛋白表达相关，作为Egr-1的上游信号分子蛋白激酶C（PKC），

辛伐他汀对高糖诱导乳鼠心肌细胞损伤的干预作用及其机制研究

目的 (1)观察乳鼠心肌细胞对高浓度葡萄糖刺激的反应,探讨其可能的机制。(2)观察辛伐他汀对高浓度葡萄糖刺激下心肌细胞损伤的干预作用,并探讨其可能机制。方法 (1)取SD乳鼠心肌细胞做原代培养。(2)空白对照组(control组):不加任何刺激药物,仅用含有20%胎牛血清的DMEM培养基继续培养72小时。(3)高糖刺激组(high glucose,GS组):含有20%胎牛血清的DMEM培养基中加入终浓度为25 mmol/L的葡萄糖培养72小时。(4)辛伐他汀(simvastatin,Sim)干预组:含有20%胎牛血清的高糖(葡萄糖终浓度为25 mmol/L)DMEM培养基中,加入终浓度分别为10^(-7)、10^(-6)、10^(-5) mol/L(M)的辛伐他汀培养72小时,分别为GS+10^(-7)MSim组、GS+10^(-6)MSim组、GS+10^(-5)MSim组。(5)甲羟戊酸对照组(GS+MVA组):含有20%胎牛血清的高糖(葡萄糖终浓度为25 mmol/L)DMEM培养基中,加入终浓度为0.2 mmol/L(mM)甲羟戊酸培养72小时。(6)甲羟戊酸干预组(GS+10^(-5)MSim+MVA组):含有20%胎牛血清的高糖(葡萄糖浓度为25 mmol/L)DMEM培养基中加入终浓度10^(-5)M辛伐他汀及0.2 mmol/L甲羟戊酸培养72小时。(7)用MTT比色法测细胞活力,按照各自检测试剂盒说明测定培养基中LDH活力、MDA含量、NO含量、SOD活力、Caspase-3表达、细胞内GSH的含量和ROS浓度,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞内NADPH氧化酶p22phox、p47phox亚基mRNA的表达水平,Western blot测定细胞内p38MAPK蛋白的表达。结果 (1)与空白对照组比较,高糖刺激组细胞活力明显降低(P<0.01),LDH活力、MDA水平显著增加(P<0.01),SOD活力、GSH含量显著降低(P<0.01),ROS产生显著增高(P<0.01),Caspase-3表达显著升高(P<0.01),细胞内NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA表达明显增加(P<0.01),分别达对照组的2.26及2.08倍;且p38MAPK蛋白表达明显增加(P<0.01),达对照组的2.6倍。(2)在终浓度为25 mmol/L葡萄糖基础上,分别加入终浓度为10^(-7)、10^(-6)、10^(-5)M辛伐他汀干预后,与GS组比较,辛伐他汀(simvastatin,Sim)干预组心肌细胞活力、SOD活力、GSH含量明显增加(P<0.05),LDH活力、MDA含量、Caspase-3表达显著降低(P<0.05),ROS产生显著降低,细胞内NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA及p38MAPK蛋白表达显著降低(P<0.05),且呈剂量依赖性。辛伐他汀浓度与心肌细胞活力显示出良好的剂量一效应关系,随着辛伐他汀浓度的增加,心肌细胞活力相应提高。当辛伐他汀终浓度为10^(-5)M时,显示出对培养乳鼠心肌细胞最佳的保护作用,心肌细胞活力达90.80%。(3)在终浓度为25 mmol/L葡萄糖基础上,单纯加入甲羟戊酸组与加入10^(-5)M辛伐他汀、200μmol/L甲羟戊酸后,上述指标的表达与葡萄糖刺激组无明显差异(P>0.05),甲羟戊酸完全逆转了辛伐他汀对高糖诱导的心肌细胞损伤的保护作用。结论 (1)高浓度葡萄糖刺激诱发心肌细胞氧化应激反应,损伤心肌细胞;(2)辛伐他汀干预减轻高浓度葡萄糖刺激诱发的心肌细胞损伤,这种作用与辛伐他汀抑制高浓度葡萄糖刺激诱发的心肌细胞氧化应激反应有关;(3)辛伐他汀对高糖刺激心肌细胞损伤的保护作用可被甲羟戊酸阻断;(4)辛伐他汀抑制高浓度葡萄糖刺激诱发的心肌细胞氧化应激损伤的作用是通过NADPH氧化酶-ROS-p38MAPK信号通路及抑制甲羟戊酸通路实现的。

阿霉素对心肌细胞损伤的实验研究

目的研究阿霉素对体外培养乳鼠心肌细胞的损伤作用。方法采用MTT法观察阿霉素对乳鼠心肌细胞活性的影响;通过检测乳酸脱氢酶(LDH)释放量,观察阿霉素作用下的乳鼠心肌细胞的坏死程度;采用流式细胞仪检测阿霉素诱发的心肌细胞凋亡百分率。结果(1)MTT实验发现:阿霉素浓度在0.3～10.0μg/ml均能抑制心肌细胞活性并成剂量依赖性;(2)细胞心肌酶谱检测到LDH释放量与阿霉素浓度呈正相关;(3)流式细胞仪发现心肌细胞凋亡率与阿霉素浓度有相关性。结论一定浓度的阿霉素对心肌细胞有毒性作用,可致心肌细胞损伤,表现为心肌细胞坏死和凋亡发生率增加。

腺病毒过表达TNNI3K基因对成年大鼠心肌细胞肌丝钙敏感度的影响

目的检测TNNI3K基因过表达对成年大鼠心肌细胞肌丝钙敏感度变化的影响,为进一步研究TNNI3K基因在心肌收缩功能、心肌肥厚、心衰及其它心脏疾病中的作用提供了可靠有效的研究模型。方法恒压Langedoff灌流装置逆向灌流法分离成年大鼠心肌细胞,之后对该心肌细胞进行逐级复钙。然后,将心肌细胞接种于改良的M199培养基中。分别感染Ad.GFP病毒和Ad.TNNI3K病毒,24小时后,以IonOptix单细胞可视化动缘系统检测心肌细胞肌丝钙敏感度。结果成功分离培养了成年大鼠心肌细胞,并在该细胞中成功过表达了TNNI3K基因。钙敏感度测定结果表明,TNNI3K基因能够增强心肌细胞肌丝钙敏感度。结论在本实验成功分离培养的成年大鼠心肌细胞中以腺病毒载体过表达TNNI3K基因,可增强心肌细胞肌丝的钙敏感度,该模型为进一步研究TNNI3K基因在心肌收缩功能中的作用及机制奠定了基础。

X射线对体外培养乳鼠心肌细胞损伤的实验研究

目的研究X射线对体外培养的心肌细胞活性及凋亡的影响。方法体外培养新生大鼠心肌细胞,分为对照组和放射组,放射组分别用X射线10Gy、20Gy、30Gy、40Gy单剂量照射心肌细胞,采用MTT法观察X射线对乳鼠心肌细胞活性的影响;血生化自动分析仪定量测定X射线作用后心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)的改变;吖啶橙/碘化丙啶(AO/PI)双染色法在激光扫描共聚焦显微镜下观察心肌细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪定量检测心肌细胞的凋亡率。结果①X射线剂量在10～40Gy均能抑制心肌细胞活性并成剂量依赖性;②细胞心肌酶谱检测到LDH释放量与X射线剂量相关;③流式细胞仪发现心肌细胞凋亡率与X射线照射剂量有相关性。结论本研究结果显示X射线对心肌细胞有毒性作用,可致心肌细胞损伤,表现为心肌细胞坏死和凋亡发生率增加。

T_(2)毒素对大鼠脂质过氧化物代谢的影响

目的 T2 毒素对大鼠脂质过氧化物代谢的影响 ,探讨 T2 毒素的损伤作用机制。方法 通过离体及在体实验方法 ,观察 T2 毒素对实验动物及体外培养心肌细胞的过氧化损伤作用及微量元素硒及 VE的保护作用。结果 T2 毒素可以对实验动物产生过氧化损伤 ,此作用随着时间延长而加重。另外 ,T2 毒素可以对体外培养心肌细胞产生直接过氧化损伤作用 ,且此作用随 T2 毒素浓度增高而加重。结论 T2

抗β_2-AR肾上腺素受体自身抗体功能的初步研究

目的研究抗β2-肾上腺素受体(β2-adrenoceptor,β2-AR)自身抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。方法①手术结扎大鼠冠状动脉建立心梗模型;②在大鼠心力衰竭(心衰)的不同时期采用链霉亲和素-酶联免疫吸附法(SA-ELISA)检测大鼠血清中抗β2-AR自身抗体的滴度,同时检测大鼠的心功能;③将β2-AR激动剂硫酸特布他林、抗β2-AR自身抗体的阳性血清及抗β2-AR自身抗体+β2-AR组的血清加至培养的乳鼠心肌细胞中,观察该自身抗体对乳鼠心肌细胞跳动频率的影响。结果①将β2-AR激动剂硫酸特布他林(4.5μmol/L)加入培养的乳鼠心肌细胞中,加药前心肌细胞跳动频率(次/15 s)为20.0±6.20,加入后第5,15和30 min分别为16.92±4.89,13.17±3.21和11.85±2.84。②将大鼠抗β2-AR自身抗体的阳性血清加至培养的乳鼠心肌细胞中,加样前心肌细胞跳动频率(次/15 s)为26.43±3.63,加入后第5,15和30 min分别为9.42±3.03,10.00±1.76和9.25±2.56,心肌细胞跳动频率减慢,且在观察时间内不随时间递减,表现出类激动剂样生物效应。③大鼠抗β2-AR自身抗体+β2-AR组的血清加至培养的乳鼠心肌细胞中,加样前心肌细胞跳动频率(次/15 s)为21±3.4,加入后第5,15和30 min分别为18.9±2.72,17.6±2.48和16.1±2.9,心肌细胞的跳动频率无明显减慢。结论抗β2-AR自身抗体作用于培养的乳鼠心肌细胞,可使其跳动频率减慢,且在观察时间内不随时间递减,表现出类激动剂样生物学效应,加入相应抗原后基本可中和其效应。