抗角蛋白16单克隆抗体对角质形成细胞增殖活性的影响

目的研究抗角蛋白单克隆抗体(mAb)对体外培养的角质形成细胞增殖活性与细胞周期的影响。方法以无血清培养基体外原代培养角质形成细胞。应用3H-TdR掺入DNA合成测定法,观察抗角蛋白16mAb(anti-K16mAb)对角质形成细胞代谢增殖的影响。用流式细胞仪分析anti-K16mAb作用后角质形成细胞的细胞周期变化。结果mAb作用后,角质形成细胞样品的cpm降低,并呈抗体剂量依赖方式。流式细胞仪分析表明,处于S期的细胞比例由27%上升至42.2%,同时处于G1期与G2期的细胞比例分别相应下降。结论anti-K16mAb可抑制体外培养的角质形成细胞的增殖活性,且将细胞阻滞于S期,无法进入G2期与M期分裂增殖。

抗角蛋白14单克隆抗体对无血清培养角质形成细胞增殖的影响

目的:建立一种无血清传代培养人角质形成细胞(KC)的方法,并观察角蛋白14单克隆抗体(anti-K14 mAb)对无血清培养人角质形成细胞体外增殖的影响。方法:应用角质形成细胞无血清培养基(KC-SFM)添加重组表皮生长因子(EGF)和牛垂体浸出液(BPE)传代培养角质形成细胞,培养均至第3代时于培养基中加人不同浓度的anti-K14 mAb,用MTT法观察对角质形成细胞增殖的影响。结果:应用无血清培养基成功地传代培养了角质形成细胞,MTT法结果显示各浓度组对培养的角质形成细胞的增殖有显著抑制作用并有浓度依赖性。结论:建立了一种无血清培养人角质形成细胞的方法a,nti-K14mAb对人角质形成细胞体外的增殖有显著抑制作用。

一株高滴度广谱抗HFRS病毒单克隆抗体的建立

本文用抗原上有些不同的肾综合征出血热(HFRS)病毒湖北毒株HA1018免疫BALB／c小鼠，与Sp2／0细胞融合，获得分泌抗HFRS单克隆抗体(MCAb)的杂交瘤E5细胞株。McAbE5为IgG1亚类，间接免疫荧光(IFA)测定腹水抗体滴度可达1：100万。

分泌抗Bt Cry1Ac蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

从苏云金芽孢杆菌HD-73中提取Bt Cry1Ac蛋白,电镜观察Bt Cry1Ac蛋白为标准的菱形.用SP2/0-Ag14骨髓瘤细胞与经该Bt Cry1Ac蛋白免疫的BALB/c小鼠的脾细胞融合,经3次克隆化,筛出两株稳定分泌Bt Cry1Ac单克隆的杂交瘤细胞株1C3、2F3.两株细胞均具有抗Bt Cry1Ac特异性,与Bt Cry1Ab和Bt Cry2A无明显的交叉反应,经亚型鉴定均为IgG1.腹水滴度均为1∶1024000.

抗粒细胞单克隆抗体与HIG在炎症模型鼠体内生物分布的对比

通过对抗人粒细胞单克隆抗体 (McAb)及人丙种球蛋白 (HIG)在炎症模型鼠体内生物分布的对比性研究 ,比较两种炎症显像剂在炎症模型鼠体内生物分布的差异。结果表明McAb和HIG在肝、脾和骨髓均浓聚较高放射性 ,但McAb组浓聚量明显高于HIG组 ,差异显著 (P <0 .0 1) ;McAb组肺、胃肠及肌肉的放射性明显低于HIG组 ;McAb组外周血放射性明显低于HIG组 ,且消退迅速 ;两组肾脏均有较高放射性浓聚。注射抗体后 6h及 9h ,两组炎症肢体 (靶 )与对侧健肢 (非靶 )的 %ID值的比值 (T NT)差异不显著 ,但 2 4hMcAb组T NT明显高于HIG组 ,差异显著 (P <0 .0 5)。McAb可使炎症肢体炎症部位明显显影 ,但早期优越性并不比HIG明显 ,延迟显像时McAb比HIG优越 ;McAb对肺。

高压液相纯化小鼠单克隆抗体及其在免疫学中应用

本文采用Deschamps方法加以修改,40％饱和硫酸铵沉淀小鼠腹水中免疫球蛋白,然后用TSK-DEAE 5PW高压液相离子交换层析柱,应用线性梯度洗脱条件,纯化TLiSAl IgG1单克隆抗体,回收率为50～60％、纯度>90％。纯化后的单克隆抗体在荧光细胞激活分类仪分析、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶染色、^(125)I标记单抗进行竞争结合试验、功能性实验以及制备Sephorose CL-4B亲和层析柱纯化相应抗原进行氨基酸列序分析中均显示良好的生物学活性。

抗角蛋白抗体进入活细胞的共聚焦显微镜观察

目的 观察抗角蛋白抗体能否进入活细胞。方法以鼠单克隆抗体 (mAb)IgG作用于培养中的人Tca8113细胞 ,以黑素瘤细胞和抗HBsAg抗体作用的Tca细胞作为阴性对照。细胞固定后与FITC标记的羊抗鼠IgG结合 ,用荧光显微镜及共聚焦显微镜 ,观察细胞的荧光着色。结果抗角蛋白mAb作用的Tca8133细胞胞浆呈亮绿色 ,着色较均匀 ,细胞核未见着色。两种对照均未见着色。结论抗角蛋白mAb可进入活细胞 。

天然属性的抗角蛋白单克隆IgM抗体的制备

目的制备天然属性的抗角蛋白单克隆IgM抗体。方法取饲养在无特殊病原体条件下BALB/c小鼠的脾细胞,直接与SP2/0细胞融合。以提取的角蛋白抗原对阳性杂交瘤细胞生长孔进行ELISA筛选。采用免疫组化、免疫印迹技术对获得的抗体进行鉴定。结果不经任何免疫,细胞融合率为60%;14%的杂交瘤细胞生长孔上清液与角蛋白抗原结合;获得3株稳定分泌IgM型天然抗角蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。免疫组化结果初步显示天然抗角蛋白IgM可以和表皮、皮脂腺、毛囊、肌肉组织结合。结论正常小鼠脾脏内存在自发分泌天然抗角蛋白IgM的B淋巴细胞。

抗SARS病毒N蛋白单克隆抗体的制备和初步应用

目的 制备抗SARS病毒N蛋白的单克隆抗体并研究其初步应用。方法 用基因重组N蛋白免疫小鼠 ,取免疫后的鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合 ,筛选分泌抗SARS病毒N蛋白单克隆抗体细胞株。将阳性细胞株接种小鼠腹腔制备单克隆抗体腹水并对抗体进行纯化 ,分析纯化抗体的相对亲和力。选择亲和力较高的抗体制备检测SARS病毒抗原的酶联免疫诊断试剂 ,并对其敏感性和特异性进行分析。结果 共获得 11株单克隆抗体细胞株 ,其中 3株单抗与N蛋白具有较高的亲和力 ,4株纯化单抗与N蛋白反应很弱 ,其余 4株单抗介于两者之间。用亲和力较高的单抗制备检测SARS病毒抗原的诊断试剂 ,其敏感性可达 31PFU ml,而且与其他呼吸道病毒无交叉反应。结论 该试剂特异性较好 ,可用于SARS病毒抗原的检测 ,其敏感性仍需用临床急性期样品进行评价。

口腔粘膜上皮细胞的体外培养

为了给口腔粘膜的体外研究提供实验模型,我们以胶原为底物,对新西兰幼兔口腔粘膜上皮细胞进行了体外培养,获得成功。现报告如下。1 材料与方法1.1 原代培养 取刚离乳的新西兰幼兔,雌雄不限,体重0.3kg,全麻后以酒精消毒术区,剪取面积0.3cm×0.2cm菲薄颊部粘膜组织块。标本放入加有青、链霉素及氟康唑的D-Hanks液中漂洗,加入DispaseⅡ消化液。

不同抗原修复方法对内翻性乳头状瘤石蜡切片Pan染色的影响

目的:探讨不同修复条件及修复液对细胞角蛋白(广谱)单克隆抗体(Pan)的阳性表达程度的影响,筛选优势抗原修复方法。方法:对11例鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(SNIP)组织石蜡切片,分别采用高温高压EDTA修复、微波EDTA修复、微波柠檬酸钠修复、高温高压柠檬酸钠修复,利用Image-Pro Plus图像分析仪对每张切片随机取5个视野,平均计算200个单位染色区域面积,测定染色区阳性反应的平均吸收度值。结果:高温高压柠檬酸钠修复、微波EDTA修复、微波柠檬酸钠修复与高温高压EDTA修复Pan的阳性表达分别为0.324±0.051、0.325±0.056、0.303±0.061及0.365±0.023;前3种方法与高温高压EDTA修复比较,均差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:应用高温高压EDTA修复液可最大化增加Pan的阳性表达强度,达到最佳染色结果,是一种值得推广的免疫组织化学修复方法,可为临床工作提供更好的指导作用。

亲毛囊性蕈样肉芽肿伴嗜酸粒细胞增多一例

患者男，69岁。3年来，头、躯干和四肢出现散在红斑、毛囊性丘疹及痤疮样皮损（如粟丘疹、囊肿等）和脱发，病程中伴外周血嗜酸粒细胞增多。皮损组织病理检查示真皮内灶性慢性炎细胞浸润伴毛细血管增生，毛囊周围慢性炎细胞浸润伴血管增生，伴少许嗜酸粒细胞，考虑为毛囊炎，予抗组胺药和抗生素治疗后皮损炎症消退，瘙痒减轻。3个月后，枕部出现斑块伴脱发，组织病理检查示真皮内密集淋巴样细胞、嗜酸粒细胞浸润，毛囊周围大量淋巴样细胞浸润伴较多嗜酸粒细胞，可见不典型淋巴细胞，部分侵入毛囊，毛囊上皮黏液样变性。阿新蓝染色阳性。免疫组化染色：CD20、CD79a、EB病毒（EBV）、CD56、磷酸葡萄糖变位酶-1（PGM-1）、髓过氧化物酶（MPO）、CD7、抗角蛋白单克隆抗体AEI／AE3均阴性，异形细胞CD3、CD4、CD5、CD2、CD43、泛素羧基末端水解酶-L1（UCHL-1）均阳性。T细胞受体基因重排结果为阴性。诊断：亲毛囊性蕈样肉芽肿。予光化学疗法（PUVA）联合阿维A治疗，仍有新发皮损，目前患者在随访中。

涎腺肿瘤中α-血管平滑肌肌动蛋白表达

作者应用单克隆抗肌动蛋白抗体(HUC(?)-1,1 A4)、抗角蛋白抗体(AE-1,34βE12)和抗波形蛋白抗体(V 9),通过免疫组化法检测了23例多形性肿瘤、22例囊腺癌和17例正常涎腺,以确定多形性腺瘤和囊腺癌二者是否来源于肌上皮细胞。作者认为有两种特异性抗肌动蛋白单克隆抗体(HUC 1-1和1 A4),它们不仅能辨认β-和α-细肌浆肌动蛋白,而且还能与肌肉肌动蛋白发生反应。因此,这两种抗体可特异性地检测涎腺肿瘤中的肌上皮成分。肌动蛋白是微丝中普遍存在的细胞骨架蛋白,它大量存在于肌肉中。细胞类型不同,所含有肌动蛋白的生物学性质不同。