红鳍东方鲀IgM重组表达及多克隆抗体制备

红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)是我国重要的海水养殖经济鱼类,探究红鳍东方鲀IgM的结构与功能对其病害防治与免疫系统的研究均有重要意义。本研究克隆获取了红鳍东方鲀IgM的重(H)链恒定(C)区序列(大小为1326 bp),并将获得的IgM序列连接至pET28a表达载体上,利用大肠杆菌BL21进行体外重组表达。SDS-PAGE结果表明:重组蛋白红鳍东方鲀IgM(TrIgM)大小约为62 kDa,重组表达的IgM主要以包涵体形式表达。通过体外复性获得可溶性TrIgM蛋白,将制备的TrIgM蛋白免疫BALB/c小鼠,获得了TrIgM鼠抗血清,Western Blot检测结果表明:制备的鼠抗血清可以与重组TrIgM蛋白和红鳍东方鲀天然血清中的IgM重链蛋白特异性结合。本研究中制备的抗血清可作为检测红鳍东方鲀IgM的特异性抗体,为红鳍东方鲀相关免疫检测提供基础。