中华按蚊幼虫肠壁膜泡的制备及其鼠抗血清对幼虫的作用

目的：搞清Ｂ．ｓ杀虫蛋白对蚊幼虫肠细胞膜的作用机理，从而改进杀虫蛋白活性。方法：差速离心制备肠细胞膜泡，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析其蛋白组分；测试其鼠抗血清对蚊幼虫的效应。结果：膜制备物蛋白组分分析显示了膜泡的纯度，而抗血清则对Ⅰ龄幼虫有明显的致死效应；日龄越小，致死率越高。

中华按蚊幼虫肠细胞膜级分的制备及其鼠抗血清对幼虫的效应 (英文)

已知芽孢杆卤杀虫蛋白的毒效依赖于它们与幼虫肠细胞膜的亲合力。对于其机理的研究和应用蛋白质工程手段改造杀蚊蛋白来说,蚊幼虫肠细胞膜的制备是必不可少的。本研究收集了万余只中华按蚊幼虫肠道,用于分离其细胞膜级分,进行蛋白组分分析,鼠抗血清的制备以及该抗血清对幼虫的作用的观察。仅在一龄幼虫观察到致死效应。

原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。

以兔抗鼠淋巴细胞血清为非条件刺激的条件性免疫抑制

采用一种生物类免疫抑制剂—兔抗鼠淋巴血清 (rabbitanti ratlymphocyteserum ,ALS)为非条件刺激(UCS)、糖精水为条件刺激 (CS) ,以双瓶给水法置于鼠笼前端饮用偏好侧。在一次性CS—UCS结合训练后 ,单独再次给予CS ,使卵清蛋白 (OVA)免疫过的大鼠表现出脾淋巴细胞对有丝分裂原PWM的增殖反应降低、血抗OVA抗体的总量及脾内抗OVA抗体生成细胞的减少。但动物未表现出条件性味觉厌恶的行为反应。这些结果表明条件性免疫抑制与味觉厌恶性行为条件反射没有必然联系 ,并非是厌恶行为反应或情绪应激的伴随产物 ,UCS也并非必需具有感觉的毒副作用。

不同品系小鼠异种被动皮肤过敏试验反应耳廓蓝染与血液抗体IgE和IgG水平的研究

目的观察卵白蛋白(OVA)致大鼠过敏抗血清对不同品系小鼠被动皮肤过敏试验(PCA)及血液免疫球蛋白E(IgE)和免疫球蛋白G(IgG)抗体水平变化的影响。方法 Wistar大鼠随机分为生理盐水(NS)组、NS佐剂组、OVA组、OVA佐剂组,采用皮下注射方式给予相应药物致敏,制备大鼠OVA抗体血清,并分别将其注入不同品系小鼠耳廓内,于致敏后3 h或48 h以相应药物激发,观察各组小鼠耳廓蓝染情况,并用酶联免疫吸附剂测定(ELISA)检测小鼠体内抗体水平变化。结果各品系小鼠(KM、BALB/c、ICR、C57BL/6、B6;129S-Fcgr2btm1Ttk/J)NS组、NS佐剂组、OVA组耳廓蓝染阴性,OVA佐剂组耳廓蓝染阳性,其中各品系间存在差异,小鼠耳异种PCA敏感程度强度依次为KM、BALB/c>ICR、C57BL/6、B6;129S-Fcgr2btm1Ttk/J。结论小鼠异种PCA试验中,不同品系动物对OVA抗血清的敏感性存在差异,其中KM,BALB/c小鼠较为敏感,但PCA强度与血液IgE水平无明显的相关性。

用基因融合技术进行杀蚊幼毒蛋白基因的研究Ⅱ.蚊幼虫肠壁细胞膜抗体基因的克隆

为了提高 Ｂ．ｓ．对蚊幼虫肠壁细胞膜的识别与结合力从而提高其杀蚊活性，本实验解剖了万余只中华按蚊幼虫肠道，制备了按蚊幼虫肠壁膜泡抗原及其鼠抗血清。抗原蛋白组分分析表明膜泡的纯度较高，而抗血清实验则显示出抗体组分与肠壁的结合作用。利用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术成功扩增了小鼠抗体重链区基因，借助 Ｔ４ Ｄ Ｎ Ａ 聚合酶的修饰，使抗体基因得以成功克隆，为研制抗体基因与毒蛋白基因融合编码的“生物导弹”打下了基础。

造血干细胞抗原的研究

兔抗鼠脑血清(RAMBS)系多价免疫血清.经同种红细胞、骨髓细胞和脚细胞吸收的RAMBS,在体外和体内,分别使83%和55%的骨髓造血干细胞丧失增殖分化和生成脾结书的活力.抗CFU-S的细胞毒作用能用成年鼠脑组织吸收而清除.实验结果表明,造血干细胞和成年鼠脑带有一种相同的抗原.本文对RAMBS的性质和少量存在的抗RAMBS的细胞亚群作了分析讨论.