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鼠源细胞TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 苏佳 赵炜 +6 位作者 秦义娴 邓永 高月异 白洪旭 薛青红 陈晓春 吴华伟 《中国兽药杂志》 2023年第3期10-16,共7页
为对鼠源细胞进行鉴别检测,以鼠线粒体16S rRNA基因序列为靶位点设计特异性引物及探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并评价该方法的特异性及敏感性。结果显示,所建立的检测方法特异性好,针对鼠源细胞基因组荧光定量PCR扩增曲线良好,其... 为对鼠源细胞进行鉴别检测,以鼠线粒体16S rRNA基因序列为靶位点设计特异性引物及探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并评价该方法的特异性及敏感性。结果显示,所建立的检测方法特异性好,针对鼠源细胞基因组荧光定量PCR扩增曲线良好,其他物种来源细胞基因组及生物制品原辅材料未出现特异性扩增曲线;敏感性高,基因拷贝数检出限度为45.3拷贝。本试验建立的荧光定量PCR检测方法能够有效地对鼠源细胞进行快速检测,为细胞质量控制提供了有效方法。 展开更多
关键词 鼠源细胞 荧光定量PCR 线粒体16S rRNA 检测
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鼠源M2型巨噬细胞对KYSE30细胞克隆、侵袭、迁移及EMT相关蛋白表达的影响
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作者 崔萌菲 王柯 +5 位作者 何晓彤 尹圆 钟影 张宝华 岳娅乐 范天黎 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2023年第6期746-750,共5页
目的:探讨鼠源M2型巨噬细胞对食管鳞状细胞癌KYSE30细胞克隆、侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达的影响。方法:将鼠源巨噬细胞RAW264.7分为诱导组和空白对照组。诱导组细胞以含0.02 mg/L IL-4和IL-13的DMEM培养基培养;空白对... 目的:探讨鼠源M2型巨噬细胞对食管鳞状细胞癌KYSE30细胞克隆、侵袭、迁移及上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达的影响。方法:将鼠源巨噬细胞RAW264.7分为诱导组和空白对照组。诱导组细胞以含0.02 mg/L IL-4和IL-13的DMEM培养基培养;空白对照组以DMEM培养基培养。细胞培养48 h后,采用流式细胞术检测CD206^(+)F4/80^(+)细胞百分比;qRT-PCR检测CD206、Mgl-2、Clec10a mRNA的表达情况;Western blot检测CD206蛋白的表达。将KYSE30细胞分为对照组(仅培养)和共培养组。共培养组KYSE30细胞与鼠源M2型巨噬细胞共培养。采用平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-9蛋白的表达;Transwell及划痕实验检测细胞侵袭和迁移情况。结果:与空白对照组相比,诱导组中RAW264.7细胞的CD206^(+)F4/80^(+)细胞百分比增加,CD206、Mgl-2、Clec10a mRNA和CD206蛋白的表达上调(P均<0.05)。与对照组相比,共培养组细胞的克隆形成能力增强(P<0.001),E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-9蛋白的表达均上调(P<0.05),侵袭和迁移能力均增强(P<0.001)。结论:诱导后的鼠源M2型巨噬细胞能够增强KYSE30细胞的克隆形成能力、侵袭和迁移能力及EMT相关蛋白的表达。 展开更多
关键词 鼠源M2型巨噬细胞 KYSE30细胞 克隆 侵袭 迁移 上皮间质转化 食管鳞状细胞
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桑园常用杀菌剂多菌灵诱导鼠源神经细胞PC12凋亡的研究 被引量:3
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作者 朱俭勋 钟石 +2 位作者 王新全 李有贵 计东风 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期668-673,共6页
多菌灵是桑园病虫害防治的常用农药,并用于家蚕微粒子病的防治。研究多菌灵对哺乳动物神经系统的毒性损伤作用及可能的作用机制,为避免蚕区桑园用药污染环境的危害提供理论依据。采用MTT法、流式细胞计数法测定用质量浓度为50、100和200... 多菌灵是桑园病虫害防治的常用农药,并用于家蚕微粒子病的防治。研究多菌灵对哺乳动物神经系统的毒性损伤作用及可能的作用机制,为避免蚕区桑园用药污染环境的危害提供理论依据。采用MTT法、流式细胞计数法测定用质量浓度为50、100和200μg/m L的多菌灵药液分别与鼠源神经细胞PC12共同孵育48 h后,可极显著抑制PC12细胞的增殖(P〈0.01),诱导PC12细胞凋亡,特别是早期凋亡(P〈0.01)。实时荧光定量PCR检测经50μg/m L多菌灵药液处理后培养48 h的PC12细胞内,促凋亡蛋白基因Bax和凋亡相关基因Cyt-C、Fas、Caspase-8、Caspase-9的表达水平极显著上调(P〈0.01);同时检测50μg/m L多菌灵药液处理组PC12细胞中Caspase-3的酶活性也极显著提高(P〈0.01)。研究结果显示50~200μg/m L多菌灵药液对哺乳动物神经细胞具有一定的毒性作用,推测其可能通过启动死亡受体介导途径和线粒体介导途径诱导神经细胞凋亡,因此在桑园施用多菌灵时,应注意防护以及远离居住区。 展开更多
关键词 杀菌剂 多菌灵 鼠源神经细胞PC12 细胞凋亡 凋亡蛋白基因
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三个鼠源性肿瘤细胞系的RAPD分析 被引量:2
4
作者 李淑蓉 陈意生 魏泓 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期292-294,共3页
目的 探讨鼠源性肿瘤细胞系基因组不稳定程度或基因组损伤与肿瘤发生的关系。方法 用 14 5条RAPD引物对鼠源性Lewis肺癌、SCC891乳腺癌及B16黑色素瘤及其相应正常组织基因组DNA进行RAPD扩增 ,扩增产物在含溴化乙锭的 1.5 %琼脂糖凝胶... 目的 探讨鼠源性肿瘤细胞系基因组不稳定程度或基因组损伤与肿瘤发生的关系。方法 用 14 5条RAPD引物对鼠源性Lewis肺癌、SCC891乳腺癌及B16黑色素瘤及其相应正常组织基因组DNA进行RAPD扩增 ,扩增产物在含溴化乙锭的 1.5 %琼脂糖凝胶中电泳 ,紫外透射仪上观察照相。结果  14 5条引物绝大多数能扩增出清晰、明显的条带。多数引物扩增出的条带呈单态性 ,在肿瘤及其相应正常组织之间无差异。部分引物扩增出的DNA序列在肿瘤组织与其相应正常组织间存在差异 ,表现为多态性 ,即肿瘤组织与其相应正常组织的DNA片段相比 ,出现带的缺失、增加、移动和强度变化。扩增Lewis肺癌的 10 5条引物中有 2 5条表现出多态性 ;扩增B16黑色素瘤的 10 5条引物中有 2 4条表现出多态性 ;扩增SCC891乳腺癌的 12 0条引物中有 18条表现出多态性。结论 RAPD扩增结果表明三个恶性度较高的瘤株 ,其基因组损伤程度亦较高 ,表现为基因拷贝数的增加或等位基因的丢失 。 展开更多
关键词 肿瘤 遗传改变 随机扩增多态DNA RAPD 鼠源性肿瘤细胞
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卡介苗对鼠源性巨噬细胞株释放一氧化氮和IFN-γ的影响
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作者 华树成 许力军 曾慧 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期158-160,共3页
目的 :观察卡介苗 ( BCG)对鼠源性巨噬细胞株 RAW2 64释放的诱导型一氧化氮 ( NO)合成酶 ( i NOS)及γ干扰素 ( IFN-γ)表达的影响。方法 :在鼠源性巨噬细胞株 RAW2 64培养液中加入BCG,Griess检测法测定 NO释放量 ,半定量 RT- PCR法检测... 目的 :观察卡介苗 ( BCG)对鼠源性巨噬细胞株 RAW2 64释放的诱导型一氧化氮 ( NO)合成酶 ( i NOS)及γ干扰素 ( IFN-γ)表达的影响。方法 :在鼠源性巨噬细胞株 RAW2 64培养液中加入BCG,Griess检测法测定 NO释放量 ,半定量 RT- PCR法检测 i NOS及 IFN-γ的表达。结果 :BCG添加后使巨噬细胞 NO产生量增加 ,IFN-γ、i NOS的 m RNA表达增强。结论 :在巨噬细胞吞噬、杀灭结核分枝杆菌时 IFN- 展开更多
关键词 鼠源性巨噬细胞 一氧化氮 卡介苗 IFN-Γ 结核病
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鼠源性抗星形胶质细胞上调基因1单克隆荧光抗体在恶性浆膜腔积液检测中的应用
6
作者 路蔓 龙敏 +3 位作者 刘冲 陈曦 王琛 张惠中 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第3期289-290,293,共3页
目的应用鼠源性抗星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)单克隆荧光抗体检测恶性浆膜腔积液中的肿瘤细胞。方法应用PCR及Western-blot方法检测浆膜腔积液脱落细胞中的AEG-1表达;用鼠源性抗AEG-1单克隆荧光抗体与恶性浆膜腔积液中的肿瘤细胞共孵... 目的应用鼠源性抗星形胶质细胞上调基因1(AEG-1)单克隆荧光抗体检测恶性浆膜腔积液中的肿瘤细胞。方法应用PCR及Western-blot方法检测浆膜腔积液脱落细胞中的AEG-1表达;用鼠源性抗AEG-1单克隆荧光抗体与恶性浆膜腔积液中的肿瘤细胞共孵育,同时采用良性病变的浆膜腔积液作为阴性对照。结果恶性浆膜腔积液脱落细胞中AEG-1表达呈阳性,而良性病变的浆膜腔积液脱落细胞中AEG-1表达为阴性或弱阳性;同时鼠源性抗AEG-1单克隆荧光抗体直接标记脱落细胞的结果与PCR和Western-blot检测结果一致。结论鼠源性抗AEG-1单克隆荧光抗体为浆膜腔积液中的肿瘤细胞鉴定提供了新的实验手段。 展开更多
关键词 鼠源性抗星形胶质细胞上调基因1 单克隆抗体 荧光标记 浆膜腔积液
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布鲁氏菌BP26蛋白对鼠源树突状细胞分化及抗原提呈作用 被引量:3
7
作者 徐龙 曹小安 +6 位作者 刘永生 周建华 张广林 孙晶晶 李玲霞 赵永婕 胡永浩 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第4期984-991,共8页
构建pET-30a-BP26并在大肠杆菌中表达获得重组布鲁氏菌BP26蛋白,研究重组表达蛋白对鼠髓源树突状细胞分化及抗原提呈作用。设计布鲁氏菌BP26蛋白引物,PCR扩增该基因并酶切、连接在pET-30a载体上。将构建成功的pET-30a-BP26转化至感受态... 构建pET-30a-BP26并在大肠杆菌中表达获得重组布鲁氏菌BP26蛋白,研究重组表达蛋白对鼠髓源树突状细胞分化及抗原提呈作用。设计布鲁氏菌BP26蛋白引物,PCR扩增该基因并酶切、连接在pET-30a载体上。将构建成功的pET-30a-BP26转化至感受态细胞BL21表达获得重组BP26蛋白。采用SDS-PAGE和Western-Blot检测蛋白表达量和反应原性后,用重组蛋白刺激BALB/C小鼠分离髓源树突状细胞(BM-DCs),观察BM-DCs的成熟分化并利用流式细胞术进行表型分析。成功获得BP26重组蛋白,SDS-PAGE和Western-Blot分析结果表明,BP26重组蛋白可溶性高且具有良好的反应原性,流式细胞术检测结果显示,BP26能刺激BM-DCs分化成熟和抗原提呈作用。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 BP26 鼠源树突状细胞 抗原提呈
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雌激素受体α、β亚型在血管瘤血管内皮细胞的表达分析
8
作者 宋晓峰 王宁 +4 位作者 李亚莎 周德凯 金先庆 王佚 李晓庆 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第30期4197-4199,共3页
目的探讨雌激素受体亚型α(ERα)和β(ERβ)在鼠源性血管瘤内皮细胞(EOMA)上的表达及其意义。方法通过免疫组织化学法检测ERα和ERβ在EOMA上的表达与分布,通过免疫组织化学法及实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)研究ERα和ERβ的表... 目的探讨雌激素受体亚型α(ERα)和β(ERβ)在鼠源性血管瘤内皮细胞(EOMA)上的表达及其意义。方法通过免疫组织化学法检测ERα和ERβ在EOMA上的表达与分布,通过免疫组织化学法及实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)研究ERα和ERβ的表达水平。结果免疫组织化学法显示ERα、ERβ均表达在EOMA细胞的细胞质。免疫组织化学法及RTPCR均提示ERα表达水平明显高于ERβ,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ERα、ERβ均表达在EOMA细胞的细胞质,ERα表达水平明显高于ERβ。 展开更多
关键词 雌激素受体亚型α 雌激素受体亚型β 鼠源性血管瘤内皮细胞 体外培养 血管瘤
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巴豆生物碱对Lewis小鼠肺腺癌细胞生长和凋亡的影响及机制研究 被引量:1
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作者 武晓 谷勤勤 +2 位作者 于淼淼 刘凤娟 孙荣丽 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2022年第15期59-66,共8页
目的通过研究巴豆生物碱(CA)对Lewis小鼠肺腺癌细胞生长及对凋亡相关蛋白(Survivin、Caspase-3、Bax)、YAP蛋白的调控作用,探讨CA对肺腺癌细胞生长和凋亡的影响及其具体的作用机制。方法培养Lewis鼠源性肺腺癌细胞(LLC),复制小鼠皮下成... 目的通过研究巴豆生物碱(CA)对Lewis小鼠肺腺癌细胞生长及对凋亡相关蛋白(Survivin、Caspase-3、Bax)、YAP蛋白的调控作用,探讨CA对肺腺癌细胞生长和凋亡的影响及其具体的作用机制。方法培养Lewis鼠源性肺腺癌细胞(LLC),复制小鼠皮下成瘤模型,分为5组,每组10只,分别为对照组、低剂量CA组、中剂量CA组、高剂量CA组及顺铂组。皮下成瘤1周后给予药物干预,第22天对5组小鼠取瘤称重,计算抑瘤率并通过光学显微镜观察各组病理形态学的变化,判断CA对瘤体生长的抑制作用;Western blotting检测Survivin、Caspase-3、Bax及YAP蛋白相对表达量;qRT-PCR法检测Survivin、Caspase-3、Bax及YAP mRNA相对表达量。结果中剂量CA组和高剂量CA组小鼠的一般生存状态较对照组、低剂量CA组及顺铂组好。低剂量CA组、中剂量CA组、高剂量CA组及顺铂组肿瘤细胞出现不同程度细胞凋亡现象,对照组肿瘤细胞多为坏死细胞。低剂量CA组、中剂量CA组、高剂量CA组及顺铂组的抑瘤率分别是13.91%、14.83%、27.84%和68.45%,4组抑瘤率比较,差异有统计学意义(P<0.05),各组抑瘤率依次升高,顺铂组肿瘤生长最慢。不同剂量CA组中Survivin mRNA相对表达量低于对照组(P<0.05),CA剂量越高,Survivin mRNA相对表达量越低;而不同剂量CA组中Caspase-3和Bax mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05),CA剂量越高,Caspase-3和Bax mRNA的相对表达量越高;各组YAP mRNA的相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论CA对Lewis肺腺癌小鼠瘤体生长有抑制作用,并引起细胞凋亡。CA通过促进Bax和Caspase-3表达及抑制Survivin表达来调控Lewis小鼠肺腺癌细胞凋亡;其调控机制可能是通过下调Survivin的表达,从而使得Survivin对Caspase-3的抑制作用减弱,而Bax上调可进一步激活Caspase-3,从而诱导Caspase级联效应促进细胞凋亡,为肺腺癌治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 肺腺癌 Lewis鼠源性肺腺癌细胞 小鼠 巴豆生物碱 凋亡 机制
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体外胰岛细胞共培养及化学因子联合诱导NOD鼠源性诱导性多能干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究 被引量:2
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作者 余丹峰 蔡德鸿 +6 位作者 严婷 刘锻 李迪 刘海明 杨锐 张振 张桦 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期170-173,共4页
目的建立更为高效的NOD鼠体外胰岛素分泌细胞诱导体系。方法化学因子分步加入培养基,将大鼠胰岛细胞以半透膜相隔与NOD鼠源性诱导性多能干细胞(NOD-iPSCs)共培养约20d,检测胰岛素分泌细胞的相关功能,并与纯化学因子诱导方法进行对比。... 目的建立更为高效的NOD鼠体外胰岛素分泌细胞诱导体系。方法化学因子分步加入培养基,将大鼠胰岛细胞以半透膜相隔与NOD鼠源性诱导性多能干细胞(NOD-iPSCs)共培养约20d,检测胰岛素分泌细胞的相关功能,并与纯化学因子诱导方法进行对比。结果诱导后成团生长,双硫腙染色呈棕红色,RT-PCR显示胰十二脂肠同源异型盒基因1(PDX-1)从第8天起开始表达,并逐渐增强。免疫荧光染色显示细胞表达胰岛素及C-P,联合组及纯化学因子组诱导培养每隔4d检测至20d,高糖刺激后两组胰岛素分泌均呈逐渐升高趋势。结论 NOD-iPSCs能够在体外诱导生成胰岛素分泌细胞。联合培养体系提供大鼠胰岛细胞功能因子可加速分化,提高效率,可能为一种更高效的诱导方法。 展开更多
关键词 NOD鼠源性诱导性多能干细胞 共培养 胰岛细胞 化学因子 胰岛素分泌细胞
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白纹伊蚊唾液ralb34k2-1对DENV2在不同细胞中复制的影响 被引量:1
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作者 李莹 黄贞植 +3 位作者 覃燕春 朱亚妮 吴家红 商正玲 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第6期683-688,694,共7页
目的探讨白纹伊蚊ralb34k2-1对DENV2在不同宿主细胞中复制的影响。方法采用Dot-ELISA和间接ELISA检测ralb34k2-1与DENV2/DENV-EDⅢ的结合特性。采用qRT-PCR检测不同剂量ralb34k2-1对蚊细胞C6/36、Aa23T,哺乳动物细胞BHK-21、RAW264.7、H... 目的探讨白纹伊蚊ralb34k2-1对DENV2在不同宿主细胞中复制的影响。方法采用Dot-ELISA和间接ELISA检测ralb34k2-1与DENV2/DENV-EDⅢ的结合特性。采用qRT-PCR检测不同剂量ralb34k2-1对蚊细胞C6/36、Aa23T,哺乳动物细胞BHK-21、RAW264.7、HacaT、THP-1中DENV2-E基因表达的影响;检测C6/36细胞中抗菌肽DEFE、DPT以及RAW264.7、THP-1细胞中抗病毒因子IFN-β、ISG15、ISG56基因表达的影响。结果Dot-ELISA和间接ELISA检测显示ralb34k2-1能与DENV2、DENV-EDⅢ结合,其中与DENV-EDⅢ结合的A值最高,为0.9177±0.04422。ralb34k2-1预孵育可促进DENV2在C6/36、Aa23T细胞中的复制(2^(-ΔΔCT)值最高为2.0419±0.1027)。5μg ralb34k2-1对C6/36中DEFE的抑制率可达73%(P<0.05)。ralb34k2-1能促进HacaT、THP-1细胞中DENV2的复制,瞬时混合组DENV-E2^(-ΔΔCT)值最高,为2.8024±0.3091,高于预孵育组的2.1325±0.06746,但对鼠源细胞BHK21、RAW264.7中DENV-E基因的表达无显著影响(均P>0.05)。抗病毒因子检测显示,ralb34k2-1单独作用能诱导RAW264.7、THP-1中IFN-β、ISG15、ISG56的表达,其中5μgralb34k2-1作用于RAW264.7细胞后ISG56RNA相对表达(2^(-ΔΔCT))值为377.9795±12.5457,THP-1细胞ISG56RNA的相对表达(2^(-ΔΔCT))值为9.5703±1.0332。结论ralb34k2-1可与DENV2、DENV-EDⅢ结合,推测该蛋白可能通过抑制蚊细胞中抗菌肽的表达协助蚊源细胞中DENV2的复制,而在人源细胞中ralb34k2-1协助DENV2复制的机制与蚊源细胞不同,可为伊蚊雌蚊唾液中34k2蛋白参与DENV2在蚊-人细胞中循环的研究提供实验线索。 展开更多
关键词 白纹伊蚊 重组34k2蛋白 DENV2 蚊源细胞 鼠源细胞 人源细胞
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融合蛋白hVEGF121/βhCG与mGM-CSF/βhCG联合抗肿瘤作用及其机制 被引量:3
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作者 井亮亮 苗梓韬 +4 位作者 李曼曼 叶佳 金亮 曹荣月 龙军 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期102-109,共8页
探讨m GM-CSF/βh CG(GC)和h VEGF121/βh CG(VC)两种融合蛋白联用对C57BL/6J小鼠RM-1前列腺癌和B16F10黑色素瘤的抑制效果,并对其抗肿瘤作用机制进行初步研究。采用含有p ET-28a-m GM-CSF-X10-βh CGCTP37和p ET-28a-VEGF-M2-X10-βh C... 探讨m GM-CSF/βh CG(GC)和h VEGF121/βh CG(VC)两种融合蛋白联用对C57BL/6J小鼠RM-1前列腺癌和B16F10黑色素瘤的抑制效果,并对其抗肿瘤作用机制进行初步研究。采用含有p ET-28a-m GM-CSF-X10-βh CGCTP37和p ET-28a-VEGF-M2-X10-βh CG-CTP37的两个重组菌进行乳糖诱导表达,分离纯化融合蛋白。将两种蛋白制备抗肿瘤蛋白疫苗(VC蛋白疫苗和GC蛋白疫苗),并将两蛋白混合制备联合蛋白疫苗(VGC蛋白疫苗),免疫C57BL/6J接瘤小鼠,测量瘤块生长状态;检测免疫小鼠脾细胞增殖以及对肿瘤细胞的细胞毒作用;ELISA检测小鼠体内细胞因子IFN-γ和抗h VEGF抗体浓度。结果发现,在前列腺癌和黑色素瘤小鼠移植瘤模型中,与生理盐水NS组相比,各实验组均具有统计学意义(P<0.05)。其中VGC组抗肿瘤效果优于GC组和VC组(P<0.01),且对前列腺癌和黑色素瘤的抑瘤率分别达到(41.7±0.83)%和(46.4±1.27)%。由此可见,VC和GC两种蛋白联合后,通过发挥抗肿瘤免疫和抗肿瘤血管生成双重作用,高效地抑制了RM-1前列腺癌和B16F10黑色素瘤的生长。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子(VEGF) 人绒毛膜促性腺激素(hCG) 鼠源细胞巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF) 前列腺癌 黑色素瘤
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mGM-CSF-GnRH3与mGM-CSF-GRP6融合蛋白体外抗肿瘤作用及生物信息学预测 被引量:3
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作者 刘淑君 韦晓芳 +3 位作者 刘生凤 黄滢霜 张焱 曹荣月 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期582-589,共8页
目的:制备鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse granulocyte-macrophage colony stimulating factor,m GM-CSF)与促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,Gn RH)的融合蛋白m GM-CSF-Gn RH3(m GGn)和m GM-CSF与胃泌素释放... 目的:制备鼠源粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mouse granulocyte-macrophage colony stimulating factor,m GM-CSF)与促性腺激素释放激素(gonadotropin releasing hormone,Gn RH)的融合蛋白m GM-CSF-Gn RH3(m GGn)和m GM-CSF与胃泌素释放肽(gastrin-releasing peptide,GRP)的融合蛋白m GM-CSF-GRP6(m G6),探讨这两种融合蛋白在体外对黑色素瘤B16F10细胞的抑制效果,并对其等电点、相对分子质量、疏水性、稳定性、亚细胞定位、信号肽、空间结构、潜在抗原表位等进行初步预测。方法:m GGn与m G6融合蛋白制备成功后,通过显微观察、划痕实验、CCK-8法、流式细胞术分别检测不同浓度蛋白对B16F10细胞形态、细胞迁移、细胞增殖、细胞周期的影响,利用蛋白质在线分析系统EXPASY、GOR4、SWISS MODEL对重组融合蛋白进行基本属性、二三级结构分析预测,运用IEDB和ABCpred软件综合预测其B细胞抗原表位,采用SYFPEITHI、Bl MAS和Net CTL软件综合预测其CTL表位,利用Net MHCIIpan 3.1 Server和IEDB软件综合预测其Th表位。结果:m GGn和m G6融合蛋白均抑制肿瘤细胞的增殖和迁移;m GGn能使B16F10细胞周期阻滞于G1期,m G6能使B16F10细胞周期阻滞于S期,不能进入G2期,从而抑制瘤细胞的增殖。m GGn和m G6结构丰富,含有较多潜在的B细胞、CTL和Th表位。结论:m GGn与m G6融合蛋白在体外对黑色素瘤B16F10细胞具有抑制作用,其生物信息学预测为进一步研究两种融合蛋白的生物学功能和免疫活性奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠源细胞-巨噬细胞集落刺激因子 促性腺激素释放激素 胃泌素释放肽 黑色素瘤 B16F10细胞 生物信息学分析
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Management of carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats by syngeneic hepatocyte transplantation in spleen and peritoneal cavity 被引量:2
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作者 Charalampos Pilichos Despina Perrea +2 位作者 Maria Demonakou Athena Preza Ismini Donta 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2004年第14期2099-2102,共4页
AIM:Acute hepatitis may seldom have a fulminant course. In the treatment of this medical emergency,potential liver support measure must provide immediate and sufficient assistance to the hepatic function.The goal of o... AIM:Acute hepatitis may seldom have a fulminant course. In the treatment of this medical emergency,potential liver support measure must provide immediate and sufficient assistance to the hepatic function.The goal of our study was to study the adequacy of hepatocyte transplantation (HCTx)in two different anatomical sites,splenic parenchyma and peritoneal cavity,in a rat model of reversible acute hepatitis induced by carbon tetrachloride(CCl_4). METHODS:After CCl_4 intoxication,84 male Wistar rats used as recipients were divided in to four experimental groups accordingly to their treatment:Group A(n=-24):intrasplenic transplantation of 10×10~6 isolated hepatocytes,Group B(n=24): intraperitoneal transplantation of 20×10~6 isolated hepatocytes attached on plastic microcarriers,Group C(n=-18):intrasplenic injection of 1 mL normal saline(sham-operated controls), Group D(n=-18):intraperitoneal injection of 2.5 mL normal saline(sham-operated controls).Survival,liver function tests (LFT)and histology were studied in all four groups,on d 2, 5 and 10 post-HCTx. RESULTS:The ten-day survival(and mean survival)in the 4 groups was 72.2%(8.1±3.1),33.3%(5.4±3.4),0% (3.1±1.3)and 33.3%(5.4±3.6)in groups A,B,C,D, respectively(P_(AB0<0.05,P_(AC)<0.05,P_(BD)=NS).In the final survivors,LFT(except alkaline phosphatase)and hepatic histology returned to normal,independently of their previous therapy.Viable hepatocytes were identified within splenic parenchyma(in group A on d 2)and both in the native liver and the fatty tissue of abdominal wall(in group B on d 5). CONCLUSION:A significantly better survival of the intrasplenically transplanted animals has been demonstrated. Intraperitoneal hepatocytes failed to promptly engraft.A different timing between liver injury and intraperitoneal HCTx may give better results and merits further investigation. 展开更多
关键词 Carbon Tetrachloride Acute Disease Animals Comparative Study Hepatitis Toxic HEPATOCYTES Male Peritoneal Cavity RATS Rats Wistar SPLEEN Survival Analysis
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Role of calcium in differentiation of murine erythroleukemia cells 被引量:1
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作者 ZHU DAN, NONGGAO HE, SHAOBAI XUE Department of Biology, Beijing Normal University 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1993年第2期157-164,共8页
Calcium plays a crucial role in the normal and abnormal cell metabolism. The role of calcium in the differentiation process of murine erythroleukemia cells(MELC) remains controversial. Here, based upon quantitative me... Calcium plays a crucial role in the normal and abnormal cell metabolism. The role of calcium in the differentiation process of murine erythroleukemia cells(MELC) remains controversial. Here, based upon quantitative measurement of fluorescence in single cells, a method was developed to investigate the intracellular free calcium [Ca2+]i concentration and DNA contents simultaneously, by employing the fluorescent probe, fluo-3 acetoxymethyl ester and DNA dye Hoechst 33342. During MELC differentiation, [Ca2+]i concentration incresed. We also demonstrated that calcium ionophore, A23187, enhanced the HMBA-induced MELC differentiation, while verapamil, an inhibitor of calcuim uptake, slightly reduced differentiation. These results suggested that an increase in the [Ca2+]i level was an essential step in HMBA-induced MELC differentiation. 展开更多
关键词 CALCIUM Buo-3 AM microphotometry murme erythroleukemia cells.
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Screening of stimulatory effects of dietary risk factors on mouse intestinal cell kinetics 被引量:1
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作者 Pooja Shivshankar Shyamala C.S.Devi 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第2期242-248,共7页
AIM: Although epidemiological and experimental studies validate influence of genetic, environmental and dietary factors in the causation of various types of cancers including colon, results from all these sources are ... AIM: Although epidemiological and experimental studies validate influence of genetic, environmental and dietary factors in the causation of various types of cancers including colon, results from all these sources are inconclusive. Hypothesizing that high fat diet and obesity are among the major predisposing factors in the incidence of colon cancer, we evaluated the role of diet constituted with food material derived from a tropical plant, Tamarindus indica Linn (TI). METHODS: A two part randomized double-blind study was conducted employing inbred Swiss albino mice from a single generation for the whole investigation. One day-old neonates (n=12) were subcutaneously administered with monosodium glutamate (MSG) to induce obesity (OB). At weaning these animals were maintained on modified AIN-76 diet supplemented with 10% TI and 10% fat bolus (w/w,TIFB) for 8 wk. Subsequently, in the second part of study, four groups of animals belonging to the same generation, age and gender (n=12 per group), were maintained on: AIN-76 control diet (CD); AIN-76 mixed with 10% TI extract (TI); and, mixed with 10% TI and 10% FB (TIFB) for 8 wk, to determine intestinal crypt cell proliferation, functionally-specific enzyme activities, fermentation profile, and energy preferences. RESULTS: We observed a significant increase in the crypt cell production rate in distal colonic segment of experimental animals when compared with the controls. This segment also contained significantly low butyrate levels compared to control and TIFB groups. All the experimental groups showed a gross decrease in the enzyme activities viz., succinate dehydrogenase, acid-galactosidase and dipeptidyl amino peptidase IV demonstrating pathological stress caused by the test regimens, and an altered metabolic flux in the cellular environment. CONCLUSION: We have demonstrated a cumulative response to the three dietary factors, one of which (TI) is reported, herein, for the first time to modulate kinetics of large intestinal mucosa, contributing to total risk posed by these test agents. 展开更多
关键词 Large intestinal mucosa Kinetics Tamarindus indica Linn DIET
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雌二醇对EOMA细胞增殖、ERα、ERβ及VEGF表达的影响 被引量:2
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作者 宋晓峰 王宁 +4 位作者 李亚莎 金先庆 王佚 李晓庆 周德凯 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第14期1878-1880,1884,共4页
目的探讨17β-雌二醇(E2)对鼠源性血管瘤血管内皮细胞(EOMA细胞)生长,雌激素α、β受体亚型(ERα、β)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法用1、10、100nmol/L浓度的E2分别作用于EOMA细胞,同时设对照组(不加E2)。四甲基偶氮唑蓝(M... 目的探讨17β-雌二醇(E2)对鼠源性血管瘤血管内皮细胞(EOMA细胞)生长,雌激素α、β受体亚型(ERα、β)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法用1、10、100nmol/L浓度的E2分别作用于EOMA细胞,同时设对照组(不加E2)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同时间点其对EOMA细胞生长的影响;Western blot检测EOMA细胞的ERα、β表达强度;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中VEGF的分泌水平。结果 1nmol/L E2组在36h时高于对照组(P<0.05);10nmol/L E2组、100nmol/L E2组各个时间点OD值均明显高于对照组(P<0.05),36h时OD值最高(P<0.01)。E2作用下10nmol/L E2组ERα和ERβ水平及100.0nmol/L E2组ERα水平较对照组均明显增高(P<0.05)。24、48h时,各浓度E2组与对照组的VEGF水平比较均差异有统计学意义(P<0.05),48h时100nmol/L E2组和10nmol/L E2组VEGF水平均高于1nmol/L E2组(P<0.05)。结论 E2可促进EOMA细胞增殖,可能主要通过ERα、VEGF表达水平上调来实现。 展开更多
关键词 雌二醇 雌激素受体α 雌激素受体Β 内皮 血管 血管瘤 鼠源性血管内皮瘤内皮细胞 血管内皮生长因子
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乙脑病毒SA_(14-14-2)减毒株病毒外源因子污染检测分析 被引量:2
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作者 王红 彭维 +3 位作者 刘菊 嫣然 屈三甫 郑从义 《预防医学情报杂志》 CAS 2012年第10期768-771,共4页
目的检测乙脑病毒SA14-14-2减毒株的病毒外源因子。方法用乙脑病毒免疫血清(阳性)将乙脑病毒SA14-14-2减毒株中和后,采用中和后的样品分别感染指示细胞(3T3、NRK、C3/36细胞),直接培养观察及红细胞吸附试验;中和后样品感染小鼠细胞系(3... 目的检测乙脑病毒SA14-14-2减毒株的病毒外源因子。方法用乙脑病毒免疫血清(阳性)将乙脑病毒SA14-14-2减毒株中和后,采用中和后的样品分别感染指示细胞(3T3、NRK、C3/36细胞),直接培养观察及红细胞吸附试验;中和后样品感染小鼠细胞系(3T3)培养14d的上清液再接种指示细胞(MRC-5、Vero、BHK21、3T3)培养观察及红细胞吸附试验;同时将流感病毒接种MDCK细胞,作为试验阳性对照。结果乙脑病毒SA14-14-2减毒株中和后的样品接种指示细胞(3T3、NRK、C6/36细胞),直接培养观察7 d、14 d,细胞形态正常,无细胞病变征兆,红细胞吸附试验为阴性;中和后样品感染小鼠细胞系(3T3)培养14 d的上清液再接种指示细胞(MRC-5、Vero、BHK-21、3T3)培养观察7 d、14 d,细胞形态正常,无细胞病变征兆,红细胞吸附试验为阴性。结论乙脑病毒SA14-14-2减毒株中未检测到人源、猴源、鼠源及其他病毒的污染,符合《WHO Technical Report Series,No.910,2002》的质量标准,可安全地用于乙脑减毒活疫苗的生产。 展开更多
关键词 乙脑病毒SA14-14-2减毒株 病毒外源因子 鼠源细胞 蚊子细胞
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五味子醇甲对去甲肾上腺素诱导心肌肥大损伤的cT-I、cT-T、ET-1调控作用的影响 被引量:4
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作者 杨敏 姜兴粲 +7 位作者 冯海鹏 王磊 张康 庞红红 张景艳 张凯 李建喜 王学智 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1553-1559,共7页
培养大鼠源H9C2心肌细胞进行试验,共分为6组,对照组(加入细胞培养液);模型组(10^-6mol/L去甲肾上腺干预48 h);卡托普利组与模型组同样处理后,加入卡托普利5 mg/L;五味子醇甲低、中、高剂量组与模型组同样处理后,分别加入五味子醇甲5,10,... 培养大鼠源H9C2心肌细胞进行试验,共分为6组,对照组(加入细胞培养液);模型组(10^-6mol/L去甲肾上腺干预48 h);卡托普利组与模型组同样处理后,加入卡托普利5 mg/L;五味子醇甲低、中、高剂量组与模型组同样处理后,分别加入五味子醇甲5,10,20 mg/L,作用48 h。通过观察HE染色细胞的形态变化,图像分析系统测定心肌细胞表面积,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33342染色法检测心肌细胞的凋亡率,JC-1法测定线粒体膜电位,Western blot检测CT-I、CT-T、ET-1蛋白表达。结果显示,五味子醇甲可降低心肌细胞凋亡率和提高心肌细胞存活率,对心肌细胞的形态具有改善作用,并下调了CT-1、CT-T、ET-1蛋白表达。结果表明,五味子醇甲对去甲肾上腺素诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,可能通过下调CT-I、CT-T、ET-1蛋白表达,降低炎性反应,减少对心肌细胞的损伤凋亡。 展开更多
关键词 鼠源H9C2心肌细胞 五味子醇甲 去甲肾上腺素 心肌细胞肥大 心肌肌钙蛋白I和T 内皮素-1
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