鼠牙乳头细胞核心结合因子cDNA片段的克隆与序列测定

目的 从培养的大鼠牙乳头细胞中克隆核心结合因子 (cbfa1)的cDNA片段。方法 原代培养大鼠牙乳头细胞 ,提取培养细胞的总RNA ,逆转录合成cDNA ,用PCR的方法扩增cbfa1基因片段。将获得的预期大小的PCR产物插入pUC18克隆载体中 ,转化TOP10感受态细胞 ,蓝白筛选白色克隆 ,进行体外扩增 ,提取质粒进行酶切鉴定 ,含目的插段的克隆在PE317 A自动测序仪上进行序列测定。结果 从培养的鼠牙乳头细胞提取的总RNA中成功克隆出 6 91bpcbfa1基因片段 ,测序结果和GenBank报道序列完全一致。结论 从鼠牙乳头细胞中成功克隆到cbfa1基因片段 ,确切的证实了核心结合因子 (cbfa1)基因在鼠牙乳头细胞中的表达。

半导体量子点对原代培养大鼠牙乳头细胞生物相容性的研究

目的:研究半导体量子点(QDs)对原代培养的大鼠牙乳头细胞(Rat dental papillae cells,RDPCs)的生物相容性。方法:①选择刚出生3天的新生SD大鼠,取出磨牙牙胚,分离牙乳头,用酶消化法培养SD大鼠牙乳头细胞,用波形丝蛋白和细胞角蛋白免疫化学染色鉴定细胞来源,观察细胞的生长规律;②把605QDs、525QDs及两种量子点等浓度的混合物按3种不同浓度与RDPCs共同培养,观察QDs对RDPCs生长和形态的影响;③用MTT法检测不同浓度的605QDs、525QDs及两种量子点等浓度的混合物对RDPCs的毒性作用结果:①:体外培养的RDPCs生长良好,波形丝蛋白染色阳性而细胞角蛋白染色阴性。②不同浓度的605QDs、525QDs及两种量子点的等浓度混合物对体外培养的RDPCs没有毒性作用,对其生长和形态也没有影响。结论:605QDs、525QDs及两种量子点等浓度的混合物在一定的浓度范围内时RPDCs具有良好的生物相容性,为605QDs、525QDs在活体生理条件下用于活细胞内的多通道信号研究提供了科学依据。

不同生长因子对大鼠牙乳头细胞生物学特性的影响

目的:探讨bFGF+IGF1、TGFβ1+BMP4、bFGF+IGF1+TGFβ1+BMP4对体外培养的大鼠牙乳头细胞(rDPCs)增殖、分化的影响并筛选出最佳的组合因子。方法:分离培养、鉴定rDPCs,应用四唑盐(MTT)比色法和酶动力学法分别检测不同组合因子刺激后的第1/4/7/10/14天rDPCs的增殖活性、细胞内总蛋白合成量、碱性磷酸酶(ALP)的分泌水平,应用罗式诊断分析法和放射免疫分析法检测细胞上清液内钙、磷浓度和骨钙素含量。结果:组①bFGF(10ng/mL)+IGF1(100ng/mL)在P4d能最显著地促进rDPCs的增殖、分化与矿化,并在P10d能显著地升高细胞外液的钙离子、磷离子浓度;组②TGFβ1(5ng/mL)+BMP4(10ng/mL)在P4d能最大程度地促进rDPCs的分化、矿化并显著促进细胞外液骨钙素的分泌合成,且在P7d能最显著地促进rDPCs内总蛋白的合成(P<0.05)。结论:bFGF+IGF1、TGFβ1+BMP4两组因子均可促进rDPCs的增殖活性和分化潜能,为体外牙齿再生提供实验依据。

果蝇裸露角蛋白2在大鼠牙本质发育过程中的表达

目的明确果蝇裸露角蛋白2(Nkd2)在大鼠下颌第一磨牙牙本质发育过程中表达。方法取出生后1d、3d、5d、7d、9d的SD乳鼠下颌骨制作石蜡切片免疫组化染色,倒置显微镜观测Nkd2在大鼠牙胚中的表达;体外培养大鼠牙乳头细胞并采用细胞免疫组化染色进行组织来源鉴定,诱导其成牙本质向分化后茜素红染色,荧光定量RT-qPCR和Western blot检测Nkd2在此过程中的表达变化趋势。结果免疫组织化学染色显示Nkd2在牙乳头、成牙本质细胞层和成釉细胞和牙囊中均阳性,在牙本质形成早期的成牙本质细胞层中强表达,随后减弱。Nkd2在大鼠牙乳头细胞中的表达呈阳性,矿化诱导4周后茜素红染色显示有矿化结节形成。荧光定量RT-qPCR和Western blot检测显示矿化诱导培养过程中Nkd2的表达呈先上调后下调趋势。结论Nkd2在大鼠牙胚组织中的表达分布具有时空特异性,体外大鼠牙乳头细胞诱导成牙本质细胞向分化过程中,Nkd2表达呈先上调后下调的趋势,推测Nkd2可能在牙本质形成早期发挥作用。