补肾药与祛风药配伍控制狼疮小鼠狼疮肾炎进展的实验研究

[目的]观察补肾中药与祛风中药配伍对狼疮小鼠病情活动的影响。[方法]50只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为5组,补肾组、祛风组、补肾祛风组、西药组、生理盐水组,同时设置10只BAbl/c小鼠对照。分别给予对应的中西药物治疗6周,观察小鼠体质量、尿蛋白、尿红细胞、尿白细胞及双链(天然)脱氧核糖核酸(ds-DNA)、白介素-17(IL-17)变化。[结果]各组小鼠随着周龄增长体质量均有增加,其中祛风组增加较少,与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.05)。各给药组ds-DNA水平低于生理盐水组(P<0.05)。补肾祛风组ds-DNA下降明显,优于其他各给药组(P<0.05)。与生理盐水组比较,其他各给药组IL-17下降明显(P<0.05),且补肾祛风组优于西药组,西药组优于补肾组及祛风组(P<0.05)。尿常规情况,生理盐水组7只小鼠出现红细胞,其他各组与生理盐水组比只数较少,但各组与生理盐水组比较差异均无统计学意义(P>0.003 12)。生理盐水组所有小鼠均出现尿蛋白阳性,与其他各组比差异有统计学意义(P<0.003 12);除生理盐水组,其他各给药组之间差异无统计学意义(P>0.003 12)。[结论]补肾药与祛风药配伍能明显降低狼疮小鼠IL-17和ds-DNA表达,起到控制狼疮肾炎的作用,效果优于单独使用补肾药和祛风药。

补肾固精方治疗BXSB小鼠狼疮性肾炎的实验研究

目的:探讨中药补肾固精方对BXSB小鼠狼疮性肾炎的治疗作用。方法:BXSB小鼠随机分为模型组(生理盐水)、中药组(补肾固精方)、激素组(地塞米松)与中西药结合组(补肾固精方与地塞米松合用)。各组均连续用药45d,于第46天取材。考马斯亮蓝G250法检测尿蛋白定量,ELISA法测定血清抗ds-DNA抗体,HE染色光镜下观察肾脏病理改变,直接免疫荧光法观察肾组织中IgG沉积。结果:与模型组比较,中药组尿蛋白定量显著减少,血清抗ds-DNA抗体显著降低,免疫复合物沉积减少,肾脏病理损害有所改善;中西药结合组与模型组相比有显著差异,且优于中药组与激素组。结论:补肾固精方可以降低尿蛋白定量和血清抗ds-DNA抗体水平,改善肾脏损害,其与激素有协同作用。

CTLA-4Ig对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和Treg细胞表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用的相关性研究

目的:初步探讨B7阻断剂CD28与细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(CTLA-4Ig)对B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏Th17和调节性T细胞(Treg细胞)表达的影响与其对小鼠狼疮样病征干预作用之间的相关性。方法:将4个月龄大小雌性B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠16只,随机分为观察组(Ⅰ组)和对照组(Ⅱ组),分别静脉注射CTLA-4Ig及等量PBS,检测小鼠干预前后24 h尿蛋白、ANA抗体、ds-DNA抗体及干预结束2周后血清IL-17A、脾脏中Th17细胞和Treg细胞百分比。结果:末次干预2周后Ⅰ组的24 h尿蛋白、血清ANA及ds-DNA较Ⅱ组下降均有统计学意义(均P<0.05)。末次干预2周后Ⅰ组血清中IL-17A、脾脏Th17细胞比例均较Ⅱ组低,而脾脏的Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例高于Ⅱ组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:CTLA4-Ig具有减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的作用;上调Treg细胞、下调Th17细胞可能是CTLA-4Ig减轻B6.MRL-Faslpr/J狼疮鼠狼疮样病征的重要机制之一。

基于HPV16的新型伪病毒治疗MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的实验研究

目的构建基于人乳头状病毒(human papilloma virus,HPV)16型的新型伪病毒,探讨对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用,为临床治疗系统性红斑狼疮提供实验依据。方法将12只3月龄MRL/lpr狼疮小鼠随机均分为治疗组和对照组,治疗前后测定尿蛋白、血清尿素氮、肌酐及抗ds-DNA抗体滴度。结果治疗组小鼠治疗后的尿蛋白、血清尿素氮、肌酐及抗ds-DNA抗体均下降,与治疗前有显著性差异(P<0.05),而对照组治疗前后无显著性差异(P>0.05),并且治疗组小鼠的平均生存期比对照组明显延长(P<0.05)。结论基于人乳头状病毒16型的新型伪病毒可显著改善MRL/lpr小鼠的免疫状况和肾脏功能,提高平均生存期。该研究结果为临床治疗系统性红斑狼疮提供了新的启示。

BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响

目的:探讨BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响及其治疗作用。方法:12周龄MRL/lpr小鼠分别腹腔注射JQ150 mg/(kg·d)或10%DMSO;每2周检测24 h尿蛋白定量;6周后检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、补体C3、补体C4、抗ds-DNA抗体、ANA及IgG、IgG1、IgG2a、IgM等免疫球蛋白水平;PAS染色观察肾脏组织病理学改变,免疫荧光染色观察IgG和C3免疫复合物沉积情况。利用流式细胞术检测小鼠B细胞各亚群细胞的比例;RT-qPCR检测脾脏prdm1 mRNA表达水平。结果:与DMSO组相比,JQ1治疗组小鼠24 h尿蛋白定量显著减少,血清BUN、Cr水平明显降低,补体C3、C4水平明显升高,抗ds-DNA抗体、ANA以及IgG、IgG1、IgG2a和IgM等免疫球蛋白水平明显降低;此外,JQ1治疗组小鼠肾小球、肾血管的病理损害程度均明显减轻,肾脏IgG和C3免疫复合物沉积显著减少。同时,JQ1治疗组小鼠脾脏、淋巴结、外周血B细胞中浆细胞和记忆B细胞亚群的比例显著下降;JQ1治疗亦显著抑制狼疮小鼠B细胞内调节浆细胞分化的关键转录因子prdm1 mRNA表达。结论:BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠具有显著的治疗作用,通过抑制Blimp1表达进而调节浆细胞分化可能是其发挥治疗作用的机制之一。BET蛋白可能是SLE治疗的新靶标。

β_2微球蛋白缺乏对鼠狼疮的影响

目的 观察 β2 微球蛋白 (β2 microglobulin ,β2 m)基因敲除 (knockout)对狼疮鼠 (NZB×NZW )F1 (β2 m-/ -BWF1 )的影响 ,探讨 β2 m在鼠狼疮发病机制中的作用。方法 制备 β2 m-/ -BWF1。酶联免疫吸附 (ELISA)法检测血清中IgG型抗磷脂抗体、IgG型抗dsDNA抗体、类风湿因子(RF)、IgG和IgG3。比较β2 m-/ -BWF1和野生型 (β2 m+ / + BWF1 )及杂合型 (β2 m+ / -BWF1 )在生存率、自身抗体、IgG和IgG3的差异。 结果 ①BWF1雄性鼠生存率高于雌性鼠 ,β2 m-/ -对狼疮鼠的生存率无明显影响。②β2 m-/ -BWF1鼠 4个月时抗磷脂抗体低 ,β2 m-/ -对抗dsDNA抗体无明显影响 ,β2 m-/ -BWF1鼠RF在 4个月时低于其他两组 ,到 8个月时则高于其他两组。③在 4个月和 6个月时 β2 m-/ -BWF1鼠IgG显著降低 ,8个月时差异不显著可能与低蛋白血症有关。β2 m-/ -BWF1鼠IgG3仅在 6个月时显著降低。 结论 β2 m-/ -对BWF1鼠的影响是多方面的 ,但并未影响系统性红斑狼疮 (SLE)的生存率 ,对三种自身抗体的影响并不一致 ,以抗磷脂抗体和RF的改变明显 ,由于IgG吸收减少、分解加速 。

区分NZB/WF1狼疮鼠不同体质的实验研究

目的检测划分NZB/WF1狼疮鼠体质,将其分为寒、常、热3种体质,并证实这些体质差异的客观存在。方法采用上海中医药大学实验中医学教研室方肇勤教授课题组建立的"实验小鼠四诊工作站",检测158只NZB/WF1小鼠体重、腋温、心率、小鼠35s活动度、爪尾色泽(r值)等指标,根据公式:权重总值=爪校正值×1+尾校正值×0.2+腋温校正值×0.7+心率校正值×0.05+跨格数×0.025计算总权重,根据"总权重值高,体质越热;总权重值低,体质越寒"的原则将NZB/WF1小鼠划分为寒体、常体和热体3种体质小鼠。分别检测不同体质小鼠肾组织羟脯氨酸含量、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)基因表达差异和肾组织免疫荧光染色情况。结果在158只NZB/WF1小鼠中,共分出热体小鼠33只,寒体小鼠34只,常体小鼠91只。常体和寒体小鼠的肾组织羟脯氨酸含量高于热体组(P<0.01),而常体和寒体间比较,差异无统计学意义。寒体及热体小鼠CTGF基因表达量显著高于常体小鼠(P<0.05),寒体与热体间比较,差异无统计学意义。寒体小鼠TGF-β1基因表达量低于常体及热体小鼠,但差异无统计学意义。不同体质小鼠肾组织免疫荧光染色也存在一定的差异。结论 NZB/WF1狼疮鼠存在体质差别。

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠IFN-γ、IL-4表达和Th1/Th2平衡的影响

探讨三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮鼠IFN-γ、IL-4表达和Th1/Th2平衡的影响。将发病早期和晚期的MRL/lpr狼疮鼠分别接受ATO、环磷酰胺(CTX)和生理盐水(NS)治疗2个月,然后用ELISA法测血清中IFN-γ、IL-4的浓度和抗ds-DNA抗体水平及四色流式细胞术测脾脏CD3+(T)细胞、CD3+CD4+(Th)细胞、CD3+CD4+IFN-γ+IL-4-(Th1)细胞和CD3+CD4+IL-4+IFN-γ-(Th2)细胞的百分率,从而研究ATO对MRL/lpr狼疮鼠IFN-γ、IL-4表达和Th1/Th2平衡的影响。发现给药后,3、5月龄ATO组MRL/lpr狼疮鼠血清抗ds-DNA抗体水平明显下降(P<0.05),其血清IFN-γ和IL-4浓度、Th1、Th2和CD3+细胞百分率均低于相应月龄的NS组(P<0.05),且NS组中5月龄组Th1/Th2值较3月龄组显著升高(P=0.003),而在ATO组中差异无统计学意义(P=0.187)。因此,研究显示ATO能显著降低发病早期和发病晚期的MRL/lpr狼疮鼠血清抗ds-DNA抗体的水平,可抑制T细胞和Th细胞增生和活化功能,降低IFN-γ和IL-4的血清水平和细胞诱生水平,并在一定程度上逆转发病晚期的MRL/lpr狼疮鼠的Th1偏移。

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠抗ds-DNA抗体和脾淋巴细胞亚群增殖的影响

目的研究三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮鼠抗ds-DNA抗体和淋巴细胞亚群的影响。方法将MRL/lpr狼疮鼠随机分为:ATO组、生理盐水(NS)组和环磷酰胺(CTX)组。另设正常C57/BL小鼠,随机分为ATO治疗组(0.4 mg/kg.d)和对照组(0.25 mL)。以上每组各6只,隔日腹腔注射,给药2个月后处死,称体重和脾脏重量算出脾脏指数;ELISA法测各组小鼠血清抗ds-DNA抗体水平;流式细胞术测脾脏细胞亚群百分比。结果(1)MRL/lpr小鼠ATO治疗组脾脏指数、血清抗ds-DNA抗体水平和CD19+、CD3+、CD3+CD4+细胞百分比均低于NS对照组(P<0.01或P<0.05),NK细胞百分比明显高于NS对照组(P<0.05);(2)ATO治疗组小鼠的脾脏指数和CD3CD4双阳性细胞百分比显著低于CTX组(P<0.01),CTX治疗组小鼠血清抗ds-DNA抗体水平均较对照组明显降低(P<0.01),但ATO治疗组的抗体水平较CTX治疗组高(P<0.05);(3)在C57/BL小鼠中,ATO治疗组和NS治疗组之间以上指标均无差异。结论ATO抑制MRL/lpr狼疮鼠T、B淋巴细胞活化同时上调NK细胞功能,减少体内自身抗体产生;但是对正常小鼠的抗体水平和细胞亚群并无明显影响。

Pristane诱导狼疮鼠模型

系统性红斑狼疮（Systemic lupus erythematosus,SLE）是一种累及全身多系统器官组织的自身免疫性疾病,血清中存在以抗核抗体、抗dsDNA抗体为代表的多种自身抗体,目前病因、发病机理尚不完全清楚。合适的动物模型有助于对其进行研究。SLE动物模型分为自发性模型和诱导性模型。

原核pprⅠ基因活体转染对系统性红斑狼疮小鼠氧化应激的影响

目的:通过检测耐辐射奇球菌ppr I基因活体转染系统性红斑狼疮(SLE)小鼠的氧化应激和疾病活动性指标,探讨其对SLE小鼠氧化应激状态的影响。方法:62只纯品系B6. MRL-Faslpr NJU雌性小鼠随机分成3组,未转染组(20只),pEGFP-c1空载体转染组(20只),pEGFP-c1-pprⅠ转染组(22只),纯品系C57BL/6健康小鼠作为健康对照组(20只)。应用活体电转染技术将pEGFP-c1空载体及pEGFP-c1-pprⅠ基因重组质粒转入SLE小鼠股前肌肉。Western blot鉴定转染后SLE小鼠外周血pEGFP-c1和pEGFP-c1-pprⅠ融合基因表达。采用化学比色法检测各组小鼠外周血氧化应激标志物,ELISA法检测抗ds DNA抗体,免疫比浊法检测补体C4和C-反应蛋白。结果:(1)Western blot检测结果提示,质粒转染一周后均能在小鼠体内成功表达,且无毒副作用;(2)与未转染质粒和pEGFP-c1转染组SLE小鼠相比,pEGFP-c1-pprⅠ转染组SLE小鼠GSH含量显著升高(P<0. 01),丙二醛(MDA)、蛋白质羰基(Carbonyls)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量显著降低(P<0. 01),超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性明显升高(P<0. 05),血浆抗ds DNA抗体滴度和CRP含量显著降低(P<0. 01),补体C4明显升高(P<0. 05),与健康组相比,各项指标差异无统计学意义(P>0. 05);(3)与未转染质粒和pEGFP-c1转染组SLE小鼠相比,pEGFPc1-ppr I转染组SLE小鼠淋巴细胞凋亡率和死亡率明显下降(P<0. 01),与健康小鼠相比,差异无统计学意义(P>0. 05)。结论:耐辐射奇球菌ppr I基因活体转染后能在SLE小鼠体内稳定表达且能调节体内的氧化应激状态,降低SLE小鼠的疾病活动度。

昆仙胶囊对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的代谢组学研究

目的:探讨昆仙胶囊对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的影响及作用机理。方法:MRL/lpr小鼠随机分为模型对照组、昆仙胶囊组、来氟米特组,各组均连续用药4周。分别于给药前,给药结束后采集小鼠清晨空腹尿液与血清。考马斯亮蓝G250法检测尿蛋白浓度,ELISA法测定血清抗ANA抗体及抗ds-DNA抗体,基于1HNMR的代谢组学方法分析给药后各组小鼠尿液的代谢特征。结果:昆仙胶囊组按照234mg/kg剂量给药后,与模型组比较,小鼠尿蛋白浓度,血清抗ANA抗体及抗ds-DNA抗体水平显著降低;并且尿液中乳酸、TMAO、柠檬酸、葡萄糖、谷氨酰胺、丙氨酸降低,а-酮戊二酸、肌酸/肌酐、马尿酸盐升高。结论:昆仙胶囊可以显著改善MRL/lpr小鼠的免疫状况和肾脏功能,该研究结果为临床治疗LN提供了实验基础。

自发性狼疮鼠模型的研究近况

自发性红斑狼疮鼠模型主要包括NZB、NZB×NZWF1、BXSB和MRL/lpr,这些模型表现出与人类系统性红斑狼疮相似的临床症状,包括多种自身抗体产生、血管炎、淋巴结炎、免疫复合物沉积引起的狼疮肾炎等。由于这些模型之间也存在相应的差异,对其研究近况及异同进行总结,将会为其正确应用提供一定借鉴意义。

肾怡对狼疮小鼠免疫器官内Th1/Th2细胞比例的调节作用

目的 :探讨复方中药肾怡对MRL lpr小鼠免疫器官内Th1 Th2细胞比例的调节作用。方法 :将MRL lpr狼疮小鼠随机分成对照组和中药治疗组 ,从 12周观察到 2 8周后于实验终点处死小鼠。通过流式细胞术分别检测胸腺和脾脏中CD4 + CD30 - (Th1)、CD4 + CD30 + (Th2 )淋巴细胞所占百分比 ,进一步对脾细胞进行CD4 + T淋巴细胞分选 ,并于体外利用PHA P进行刺激后 ,通过RT PCR方法检测IL 4 (Th2细胞因子 )和IFN γ(Th1细胞因子 )的表达丰度 ,比较二者的比值在对照组和中药治疗组之间的差别。结果 :胸腺中几乎检测不到CD4 + CD30 + T淋巴细胞 ;脾脏中虽可检测到CD4 + CD30 + T淋巴细胞 ,但在未加入PHA P的条件下 ,CD4 + CD30 + T淋巴细胞在对照组和中药治疗组中所占的比例没有显著差异 ;经PHAP刺激后对照组和治疗组脾细胞中CD4 + CD30 + T淋巴细胞所占百分比均明显增加 ,但治疗组中CD4 + CD30 + T淋巴细胞所占百分比的增加程度明显低于对照组 ;将脾细胞中CD4 + T淋巴细胞分选出来后进行RT PCR检测 ,结果显示中药治疗组CD4 + T淋巴细胞所表达IL 4 IFN γ(Th2 Th1)比值明显低于对照组。结论 :复方中药肾怡能够纠正MRL lpr狼疮小鼠脾脏中CD4 + T淋巴细胞在PHA P刺激的条件下朝向Th2过度分化的倾向性。

益气利水破血解毒小复方对NZB/WF1狼疮鼠肾脏水通道蛋白干预作用的研究

目的:探索益气利水破血解毒小复方干预对NZB/W F1狼疮鼠肾脏水通道蛋白AQP1和AQP3表达的影响,帮助进一步了解其作用机制和靶点。方法:将NZB/W F1狼疮鼠随机分为对照组(0.5ml/d生理盐水灌胃)、中药治疗组(益气利水破血解毒小复方0.5ml/d灌胃)和西药治疗组(骁悉水溶液0.5ml/d灌胃),分别于干预第0、2、4、6周留取尿液样本检测尿蛋白水平,干预8周后处死小鼠行肾脏免疫组化,半定量分析AQPl、AQP3表达水平。结果:中药组和西药组小鼠尿蛋白定量均明显低于对照组(P<0.01),两治疗组间未见统计差异(P>0.05);中药组和西药组小鼠肾组织AQP1表达量显著高于对照组(P<0.01),西药组AQP1表达量高于中药二组间存在统计学差异(p<0.05)。与对照组相比,中药组和西药组小鼠肾组织AQP3表达量显著较高,有统计学差异(p<0.01),西药组与中药组小鼠肾组织AQP3表达量未见统计学差异(p>0.05)。结论:益气利水破血解毒小复方干预可有效降低NZB/WF1狼疮鼠尿蛋白水平,并加强肾脏水通道蛋白AQP1和AQP3的表达。

中药复方狼疮颗粒3方对BXSB狼疮小鼠的治疗作用

目的:研究中药复方狼疮颗粒3方(LCF-3)对BXSB小鼠狼疮的治疗作用,探讨其对SLE的作用机制。方法:将狼疮模型鼠随机分成4组:空白对照组、LCF-3组、泼尼松组、LCF-3+泼尼松组。四溴酚兰指示剂法测定尿蛋白含量;双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠血清中抗dsDNA抗体含量;对小鼠肾做HE染色,观察各组动物的形态学改变。结果:3个给药组尿蛋白含量均与空白对照组差异有显著性(P<0.05)。3个给药组均能显著降低自身抗体抗双链DNA(dsDNA)水平,使其转为阴性(P<0.01);病理检查发现各给药组均可明显减轻肾损害。其中中西药合用组最为明显。结论:中药复方LCF-3与西药泼尼松均对BXSB小鼠狼疮有明显的治疗作用,中西药合用综合疗效优于单纯使用中药、西药。

解毒祛瘀滋阴方对强的松治疗的MRL/lpr狼疮鼠肺、脾、腹腔巨噬细胞TLR4信号通路的影响

[目的]观察解毒祛瘀滋阴方对MRL/lpr狼疮鼠巨噬细胞TLR4信号通路的影响。[方法]MRL/lpr狼疮鼠分为模型组、强的松组、解毒祛瘀滋阴方组(以下简称:中药组)以及强的松加中药组(以下简称:中西药结合组),分别以生理盐水、强的松、解毒祛瘀滋阴方中药和强的松加解毒祛瘀滋阴方中药灌胃4周,收集肺、腹腔、脾脏巨噬细胞,RT-PCR检测相关基因的表达。[结果]经强的松治疗后狼疮鼠肺巨噬细胞TLR4 mRNA和脾巨噬细胞TLR4蛋白都显著升高(P<0.05),而中西药结合组则可以显著降低升高的脾巨噬细胞TLR4蛋白水平(P<0.05)。强的松还可以显著降低肺、腹腔巨噬细胞MyD88、IFN-α、iNOS mRNA等TLR4下游分子的表达(P<0.05),而中西药结合组可以显著升高已经降低的肺巨噬细胞MyD88 m RNA的表达(P<0.05)。[结论]MRL/lpr狼疮鼠应用糖皮质激素后,巨噬细胞TLR4信号通路发生改变,解毒祛瘀滋阴方中药可以降低糖皮质激素造成的TLR4蛋白的异常表达。

扶正汤对MRL/1Pr红斑狼疮小鼠模型肾脏作用的实验研究

目的研究中药扶正汤对MRL/1Pr红斑狼疮小鼠肾脏的影响。方法将MRL/1Pr模型小鼠随机分成4组:0.9%生理盐水对照组(A组)、西药组(B组)、中药组(C组)、中西医结合组(D组),治疗6周。每两周称重量一次;邻苯三酚红-钼络合显色法测定24h尿蛋白含量;直接免疫荧光法测定小鼠肾脏IgG含量;小鼠肾脏HE染色,观察各组小鼠肾组织的形态学改变。结果治疗后A、C、D组体重较治疗前明显增加(P<0.01),B组体重较治疗前增加不明显并较其它三组下降(P<0.01)。3个给药组尿蛋白含量均有明显下降(P<0.01)。C组尿蛋白缓慢下降,B组后期下降不明显。各给药组均能降低小鼠肾脏IgG沉积的荧光强度和面积,与A组相比有显著差异(P<0.01),B组荧光强度明显强于C和D组(P<0.01)。病理检查发现各给药组均使肾损害明显减轻,D组最为明显。结论扶正汤对狼疮小鼠肾脏有明显的治疗作用,中西药合用和中药组明显优于西药组。