肝纤溶颗粒与复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化模型细胞凋亡及内质网应激相关因子表达影响研究

目的探究肝纤溶颗粒与复方鳖甲软肝片对大鼠肝纤维化模型细胞凋亡及内质网应激相关因子表达影响。方法 48只雄性清洁级SD大鼠随机分为:正常对照组、模型对照组、复方鳖甲软肝片组及肝纤溶颗粒组,每组各12只。除正常对照组外各组复制肝纤维化模型。于复制模型后的3周各组大鼠同时给药,正常对照组与模型对照组大鼠给予生理盐水1.5 ml/kg灌胃,1次/d;复方鳖甲软肝片组给予33.3%复方鳖甲软肝片溶液1.5 ml/kg重灌胃,1次/d;肝纤溶颗粒组给予33.3%肝纤溶颗粒溶液1.5 ml/kg灌胃,1次/d。各组连续用药6周。实验开始后第3、6和9周对各组大鼠肝脏病理学、细胞凋亡数量、肝纤维化指标水平以及内质网应激相关指标进行检测。结果与其他各组相比,肝纤溶颗粒组纤维增生程度评分下降(P<0.05),肝凋亡数下降(P<0.05);透明质酸、层黏连蛋白、血清Ⅲ型前胶原、血清Ⅳ型胶原水平下降(P<0.05);CHOP、ATF6蛋白表达水平下降(P<0.05)。结论肝纤溶颗粒组肝纤维化大鼠细胞凋亡数量和肝纤维化水平较复方鳖甲软肝片组下降,差异有统计学意义(P<0.05),肝纤溶颗粒能够改善肝脏病理变化,调节内质网应激相关指标,对临床有指导意义。

建立大鼠原位肠-肝灌流模型评价绿原酸的代谢

目的:建立大鼠原位肠-肝灌流模型,运用该模型研究绿原酸在大鼠肠、肝中的代谢转化。方法:采用液相色谱质谱联用(HPLC-MS)法测定大鼠原位肠-肝灌流模型灌流液中绿原酸及其代谢产物咖啡酸、阿魏酸和马尿酸。结果:绿原酸十二指肠给药后,灌流液中主要活性代谢产物为阿魏酸,同时在灌流液中也检测到少量活性代谢产物咖啡酸和大量代谢终产物马尿酸。结论:大鼠原位肠-肝灌流模型适用于绿原酸生物转化和代谢动力学的研究;绿原酸在肠中存在广泛的代谢。

重组人干扰素β-1a注射液对大鼠肝纤维化模型的治疗作用

目的研究重组人干扰素β-1a注射液及白蛋白注射液对肝纤维化大鼠的治疗作用。方法通过给大鼠灌服50%的四氯化碳花生油溶液1 mL/kg,每周2-3次,5周后开始使用受试药物（隔日注射1次）,同时继续同上灌服50%的四氯化碳花生油溶液。9周后取血、取肝脏,测定血清ALT、AST、TP、ALB、TBIL,测定肝组织羟脯氨酸含量,并对肝脏做病理组织学检查。结果干扰素β-1a、白蛋白注射液均能明显降低肝纤维化模型大鼠血清的ALT、AST、TBIL,能明显升高肝纤维化大鼠血清ALB、ALB/GLB,且能明显降低肝纤维化大鼠肝组织羟脯氨酸含量。结论干扰素β-1a、白蛋白注射液对肝纤维化模型大鼠的肝纤维化程度均有明显的抑制作用。

大鼠原位肠-肝灌流模型研究小补心汤总黄酮体内效应物质

抗抑郁作用经典古方小补心汤由代赭石、旋复花、竹叶和淡豆豉4味中药组成,含有大量的黄酮类化合物。张有志等研究结果表明,小补心汤乙醇提取物总黄酮（BX-2）具有良好的抗抑郁活性,且BX-2抗抑郁作用的效价强度比小补心汤明显提高,由于BX-2所含成分多,含量低,目前动物体内物质基础研究无法开展,为了研究其体内效应物质基础,本实验尝试用大鼠原位肠肝循环灌流模型对BX-2的体内效应物质基础进行初步研究。

大鼠肝纤维化模型建立及肝纤维化的检测

肝纤维化是各种慢性肝病的共同病理基础,是肝硬化的初始阶段,其本质是细胞外基质的合成与降解失衡,导致细胞外基质在肝内过量沉积,最后导致正常肝脏组织结构及功能的改变。为了研究肝纤维化的发生机制,筛选出治疗肝纤维化的药物,研究其作用及药物作用机制,建立一个理想的肝纤维化模型尤为重要。理想的肝纤维化动物模型应具备以下条件：与人类肝纤维化的基本病变特征相似;肝纤维化的形成具有一定的发生发展及明显的分期过程,

大鼠原位肠肝血管灌流模型的优化及完善

目的:对大鼠原位肠肝血管灌流模型的灌流液组成成分进行优化,以获取最佳灌流液配方。方法:对灌流条件进行优化,分别对Krebs-Rin-ger(K-R)液加牛血清白蛋白和甘露醇、K-R液加牛血清白蛋白和右旋糖酐T-40二者进行对比,找出最佳的灌流介质。然后对最佳的灌流介质中牛血清白蛋白的含量进行了优化。结果:K-R液加牛血清白蛋白和右旋糖酐T-40组优于K-R液加牛血清白蛋白和甘露醇组;5%牛血清白蛋白的灌流液是一个较为经济理想的灌流液。结论:在灌流介质中5%牛血清白蛋白是一个较为理想和经济的比例。

新型复合式肝损伤大鼠模型的建立

目的建立一种由猪血清、四氯化碳、乙醇3种因素刺激的新型肝损伤大鼠模型。方法将56只健康雄性大鼠随机分为A、B、C、D、E 5组,其中A至D组为实验组,E为空白对照组。除空白对照组外,其余各组连续4周多因素诱导肝损伤模型。每周摘眼球取血,测定血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性。第4周取血后处死动物,取肝脏进行切片观察。结果多因素诱导肝损伤各模型组AST和ALT均不同程度的升高,与空白对照组相比,在不同时间点上有显著性差异(P<0.05)或非常显著性差异(P<0.01)。病理切片也证实各实验组出现不同程度的肝损伤。结论由猪血清、四氯化碳、乙醇3种因素诱导可建立较为理想的大鼠肝损伤模型。

人源性肝小鼠模型及其在药物代谢及肝毒性研究中的应用

人源化肝小鼠模型是一种以人肝细胞取代小鼠肝细胞的嵌合小鼠,在过去的二十年里,人源化肝小鼠模型在品质、生产能力和实用性方面有了很大的发展,已经被广泛用于多个领域,包括肝炎病毒研究、药物代谢、干细胞生物学等。临床药物的开发是一个漫长而高成本的过程,近90%的化合物在临床试验期间被宣告失败,其中肝毒性是主要原因之一。预测人体药物代谢和肝毒性是药物开发的关键。人源化小鼠模型被认为是可以模拟药物在人类体内的代谢情况,可以很好的解决物种差异问题。本篇综述描述了人源化肝小鼠模型在药物代谢及肝毒性研究中的应用、存在的问题和未来的研究方向。

复合因子法建立大鼠肝纤维化模型的实验研究

目的:采用复合因子法建立健康SD雄性大鼠肝纤维化模型,探讨复合因子法建立肝纤维化模型的应用价值。方法:于0周、2周、4周、6周分别对以复合因子所建立大鼠肝纤维化模型进行肝组织病理检查及血清纤维化指标检查,以病理诊断结果为标准,探讨复合因子法建立肝纤维化模型的应用价值。结果:以复合因子法成功建立了鼠肝纤维化模型,该模型肝组织病理检查与血清纤维化指标检查相关性良好。结论:复合因子法建立健康SD雄性大鼠肝纤维化模型成功率较高,有较高的应用价值。

健肝乐颗粒对大鼠肝纤维化模型的保护作用及相关机制

目的:观察健肝乐颗粒对大鼠CCl 4损伤肝脏的肝纤维化模型的保护作用,探究相关作用机制。方法:SPF级SD大鼠50只,随机分成正常组,模型组,健肝乐高、中、低剂量组,每组10只,正常组给予相应剂量花生油,其余4组按每100 g体质量皮下注射0.2 ml 50%CCl 4,建立肝纤维化模型,观察大鼠各项生化和生理指标,评价健肝乐颗粒对肝纤维化的药理作用。结果:健肝乐颗粒中、低剂量组可显著性降低CCl 4所致肝纤维化大鼠血清中的ALT、AST、IL-1β、HYP,同时增强SOD、GSH-PX的活性,对血清和肝组织中MDA、TNF-α、HA、LN有一定的逆转作用。结论:健肝乐颗粒可以改善肝纤维化的病理指标,并修复肝细胞。

大鼠原位肝移植模型不同术式改进的研究

目的 比较两种改进后大鼠原位肝移植模型建立的优缺点。方法 对三套袖法的修肝技术及套管制作进行改进，实施大鼠原位肝移植30例，采用改进的缝合法实施大鼠原位肝移植70例。结果 三袖套法手术成功率80％，1周存活率8％，缝合法手术成功率90％，1周存活率72％。结论 改进后的三袖套法虽然明显缩短手术时间及无肝期，但手术后并发症多，缺乏实际应用价值，改进后的缝合法是建立稳定大鼠肝移植模型的有效方法。

大鼠肝肿瘤成模过程中肝组织结构变化

为了解大鼠肝肿瘤成模过程中肝组织结构变化,用二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DENA)灌胃法构建大鼠肝肿瘤模型,按常规方法制备肝组织石蜡切片和镜检.建模第1周大鼠肝脏的肝小叶结构完整,肝细胞排列整齐.从第5周起肝窦扩张,肝细胞变性肿胀并有不同程度的脂肪变性,同时出现炎症细胞浸润.第8周时肝窦充血,肝细胞脂肪变性严重,并出现纤维组织增生和明显的肝细胞增生.第10周时肝小叶结构受到破坏,出现肝细胞增生性结节.第12周时门管区内有不同程度的卵圆细胞增生及结缔组织增生,伴随胆管增生.第16周时肝小叶结构消失,可见典型的假小叶结构,结节内肝细胞异常增生明显,出现"结中结",病理性核分裂相亦较多.第17周时肝肿瘤形成,且主要是肝细胞癌,癌细胞排列为索状、腺状、实片状.根据上述结果得出如下结论:用二乙基亚硝胺灌胃法构建大鼠肝肿瘤模型方便有效,肝组织结构和病理变化有规律,易于观察分析,值得推广应用.

利用bcl-2抗Fas凋亡特性联合Fas抗体促进人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖

目的移植bcl-2转基因HepaRG细胞到小鼠体内,并联合使用Jo2抗体诱导鼠肝细胞凋亡策略,促进人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖。方法SCID鼠经脾移植2×106bcl-2转基因HepaRG细胞,移植后1d始腹腔注射0.2mg/kgJo2抗体,每周1次,持续10周为实验组;移植未转染bcl-2基因的HepaRG细胞,同样给予Jo2抗体腹腔注射为对照1组,移植未转染bcl-2基因的HepaRG细胞,未腹腔注射Jo2抗体为对照2组,建立人鼠嵌合肝动物模型。从2周开始,后4、8、12、16、20、24周,分别采用免疫组化、免疫荧光和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时相点实验组和对照组嵌合肝中肝组织人清蛋白以及人清蛋白mRNA,并用酶联免疫法(ELISA)定量检测鼠血清人清蛋白的含量。结果实验组和对照组小鼠均能存活至24周,鼠肝组织和血清中均能检测到清蛋白的表达。实验组肝组织和血清人清蛋白的表达均可持续到24周,人血清清蛋白高峰值为95.32ng/mL,出现在16周;而对照1组肝组织和血清人清蛋白的表达可持续到20周,人血清清蛋白高峰值为42.37ng/mL,出现在12周;对照2组肝组织和血清人清蛋白的表达可持续到12周,人血清清蛋白高峰值为22.91ng/mL,出现在8周。结论利用bcl-2抗Fas凋亡特性,转染bcl-2基因的HepaRG细胞移植并联合小剂量Jo2抗体腹腔注射SCID鼠,有利于人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖和存活。

构建携带hIL-10基因的腺病毒载体及其对大鼠肝细胞损伤的保护作用

目的:构建携带人白细胞介素(human interleukin,hIL)-10基因的腺病毒载体,细胞学及动物模型实验鉴定其介导的目的基因表达,并验证其对大鼠肝细胞损伤的保护作用。方法:以pORF-hIL10质粒为模板,PCR扩增hIL-10基因,插入腺病毒质粒pDC315,构建pDC315-hIL10。将质粒pDC315-hIL10与腺病毒包装质粒共转染至293细胞,产生复制缺陷型重组腺病毒Ad5-hIL10;感染大鼠肝细胞,免疫学方法鉴定目的基因的表达;建立体内外大鼠肝细胞损伤模型,验证Ad5-hIL10对肝细胞损伤的保护作用。结果:经PCR扩增、鉴定,证明已正确构建重组腺病毒Ad5-hIL10。大鼠肝细胞感染Ad5-hIL10后,随着病毒感染强度的升高,hIL-10表达明显上升。大鼠肝细胞体外培养模型预先感染病毒Ad5-hIL10,经四氯化碳诱导损伤,则细胞存活率随感染强度(multiplicity of infection,MOI)值升高而增加,至MOI=50时,细胞存活率恢复至92%;大鼠体内肝损伤模型显示,与损伤对照组和空白病毒对照组比较,Ad5-hIL10处理的大鼠肝细胞水样变性和间质炎症反应均减轻,肝功能的各项指标均有明显改善(P<0.05)。结论:成功构建了重组腺病毒质粒Ad5-hIL10,且能明显提高肝细胞的存活能力,对肝功能有明显保护作用。

左归丸改善MSG-肝再生大鼠肝肾精血亏虚证的作用机制研究

To study the effect and the mechanism of Zuogui Pill on the deficiency of kidney essence and liver blood.Methods:Established the model of deficiency of kidney essence and liver blood of rat(the model of MSG regeneration rat).Observing the deficiency kidney essence and liver blood and ARN or regeneration liver of expression transforming growth factor type 1 beta(TGF β 1).Results:The liver regeneration of the model of MSG regeneration rat,postoperated on 11th day,the degree of liver regeneration was 0 58±0 03,the rate of liver weight/body weight was 3 27±0 12,MI was 0 11±0 02,RBC was 3 83±0 09×10 12 /L,Hb was 119 0±8 3g/L.The group of treatment by Zuogui Pill(dosage 5g/kg daily),postoperated on 11th day,the degree of liver regeneration was 0 84±0 04,the rate of liver weight/body weight was 3 85±0 14,MI was 0 11±0 02,RBC was 5 12±0 06×10 12 /L,Hb was 172 7±3 9g/L.The above datum were significantly different among the groups.The observation results showed MSG induced injury to ARN of the rat treated with monosodium glutamate.Comparing to the model of MSG regeneration rat group,it showed that Zuogui Pill could obviously inhibited the ARN injury in the rat treated with monosodium glutamate.The maladjustment in liver regeneration of the model of MSG regeneration rat,in the end,the liver regeneration was significantly inhibited.The effect of promoting liver regeneration in the model of MSG regeneration rat treated by gastrogavage Zuogui Pill.All data are reported as means±SE.When this analysis revealed a significant difference(p<0 05 or p<0 01).TGF β 1 has an obviously higher expression in liver and ARN during liver regeneration of the model of MSG regeneration rat.The effect of regulation of TGF β 1 expression in liver and ARN of the model of MSG regeneration rat treated by gastrogavage Zuogui Pill.The effect inhibited the deficiency of kidney essence and liver blood of the model MSG regeneration rat treated by gastrogavage Zuogui Pill.Conclusion:The deficiency of kidney essence and liver blood of the model of MSG regeneration rat can be improved gastrogavage Zuogui Pill.The effect of regulation TGF β 1 expression in liver and ARN of the model of MSG regeneration rat treated by gastrogavage.

徐氏化纤汤对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠影响的实验研究

目的:研究徐氏化纤汤对四氯化碳(CCl_4)诱导的肝纤维化大鼠的作用及其可能的作用机制。方法:将72只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、化纤汤高剂量组、化纤汤中剂量组、化纤汤低剂量组、秋水仙碱组,每组12只。除空白对照组外,其他各组均采用40% CCl_4+花生油腹腔注射制作大鼠肝纤维化模型。空白对照组和模型组每天灌服生理盐水;化纤汤高、中、低剂量组每天分别灌服21 g/(kg·d)、10.5 g/(kg·d)、5.25 g/(kg·d)化纤汤药液;秋水仙碱组按0.35 mg/(kg·d)灌服秋水仙碱药液。检测各组大鼠肝功能、肝纤四项,并作肝组织病理切片分析反映肝脏的损伤程度。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠肝重、肝脏指数明显升高,大鼠体质量明显减轻,血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)显著升高,血清白蛋白(Alb)显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,秋水仙碱组、化纤汤各剂量组大鼠体质量明显升高,大鼠肝重、肝脏指数明显降低,大鼠血清ALT、AST、TBil、HA、CⅣ、PCⅢ显著降低,Alb显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:徐氏化纤汤有一定的保护肝功能及抗肝纤维化的作用。

免疫诱导型和CCl_4诱导型大鼠TIMP-1表达水平的差异及与肝纤维化程度相关性

目的探讨免疫诱导型和CCl4诱导型大鼠肝纤维化模型制备过程中基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)表达水平与肝纤维化程度相关性的差异。方法双夹心ELISA法定量监测免疫诱导和CCl4诱导大鼠肝纤维化模型制备过程中大鼠血清TIMP1水平,与常规病理学检查分级,进行相关性分析,并进一步用原位杂交法观察TIMP1mRNA在两种肝纤维化模型中的表达差异。结果免疫诱导型大鼠肝纤维化模型制备过程中其血清TIMP1水平能较好的反映肝纤维化程度,原位杂交显示TIMP1mRNA表达较强;CCl4诱导型模型制备过程中其血清TIMP1水平与肝纤维化程度相关性无统计学意义,原位杂交显示TIMP1mRNA表达较弱,且在同等级纤维化程度肝组织中表达差异较大。结论免疫诱导大鼠肝纤维化模型病变有一定发展过程,分期明显,血清TIMP1水平能较好的反应其肝纤维化程度;CCl4诱导型大鼠肝纤维化模型病变过程较快,分期不明显,血清TIMP1水平不能作为其肝纤维化程度的指标。

甲乙煎改善肝纤维化大鼠肝细胞的实验研究

目的:观察中药甲乙煎对实验性肝纤维化大鼠肝组织炎症活动度和肝纤维化程度及肝细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白表达水平的影响。方法:60只大鼠除正常组10只外,其余50只通过腹腔注射DMN(二甲基正硝胺)建立肝纤维化大鼠模型。造模成功的30只大鼠随机分为3组(模型组、甲乙煎高剂量、低剂量组各10只),甲乙煎高、低剂量组大鼠分别给予22g/kg.d和5.5 g/kg·d甲乙煎药汁灌胃治疗;正常组和模型组大鼠灌胃生理盐水,共4W。结果:甲乙煎高剂量组、甲乙煎低剂量组大鼠肝组织炎症活动度和肝纤维化程度明显降低,尤其是甲乙煎高剂量组大鼠肝组织肝纤维化程度降低最明显,与甲乙煎低剂量组、模型组比较差异有显著性意义(P<0.05)。高、低剂量甲乙煎不能下调肝纤维化大鼠肝细胞内MMP-2的阳性表达,与模型组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:甲乙煎能明显改善肝纤维化大鼠肝组织炎症活动度和肝纤维化程度,但它不是通过下调肝细胞基质金属蛋白酶-2来改善肝纤维化的。

在“三明治”培养大鼠原代肝细胞中研究利福平及联用丹参酮ⅡA对普伐他汀经BSEP转运的影响

目的 以普伐他汀为BSEP底物,在“三明治”培养大鼠原代肝细胞模型上(sandwich-cultured rat hepatocytes, SCRH),研究利福平及联用丹参酮ⅡA对BSEP转运能力的影响。方法构建SCRH模型,利用MTT筛选给药剂量;建立普伐他汀的HPLC-MS/MS检测方法并进行方法学验证;考察利福平及联用丹参酮ⅡA对胆管内普伐他汀浓度的影响,并计算胆管外排指数(biliary excretion index, BEI)。结果成功构建了SCRH模型,并确定了利福平、丹参酮ⅡA、格列本脲及普伐他汀的合适给药剂量;建立了稳定可靠的普伐他汀HPLC-MS/MS检测方法;与空白组相比,利福平能够降低胆管内普伐他汀的浓度和普伐他汀的BEI,高浓度利福平的降低效果最明显( P <0.01);与利福平高浓度组相比,联用丹参酮ⅡA后,胆管中普伐他汀的浓度以及普伐他汀的BEI增大,高浓度丹参酮ⅡA的增加效果最明显( P <0.01)。结论在SCRH中,利福平能够抑制BSEP的转运能力,丹参酮ⅡA可以逆转利福平对BSEP转运能力的抑制作用。

大鼠肝纤维化及肝硬化成模过程中肝组织结构变化

为了解大鼠肝纤维化及肝硬化成模过程中肝组织结构变化,用四氯化碳-白酒联合诱导法构建大鼠肝纤维化及肝硬化模型,按常规方法制备肝组织石蜡切片和镜检.建模第1～3周,肝脏的汇管区扩大,出现纤维性增生,肝细胞发生脂肪变性.建模第4～6周,肝脏的汇管区周围形成纤维束.建模第7～9周,纤维束更明显,肝小叶结构紊乱.建模第10～12周,肝小叶结构更加紊乱,出现早期肝硬化迹象.建模第13～15周,肝小叶消失,假小叶出现,肝硬化形成.根据上述结果得出如下结论:皮下注射四氯化碳与口服白酒结合能有效诱导大鼠肝纤维化及肝硬化,肝脏组织结构与病理变化有规律,易于观察分析,值得推广应用.