小鼠肝炎病毒金标快速检测方法的建立

本试验旨在探讨一种能够快速、简便及特异检测MHV病毒的金标检测方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗小鼠肝炎病毒(MHV)抗体,选择优化层析条件,建立双抗体夹心模式的免疫层析法试纸条对MHV进行检测。20 nm左右的胶体金颗粒、5.05μg为最低稳定抗体量(稳定0.5 mL胶体金)、M135层析材料、3%BSA是最佳封闭液。640μg/mL抗体蛋白为最适检测线包被浓度,而800μg/mL抗体蛋白为质控线最适包被浓度。此试纸条能10 min快速特异地检测出MHV抗原,阳性时检测线和质控线均显示红色,阴性时则只有质控线显示红色。结果表明,胶体金免疫层析方法能快速、特异、稳定地检测MHV抗原。

双黄连、鱼腥草注射液抗鼠肝炎病毒3型的体外实验研究

目的:探讨双黄连、鱼腥草在细胞水平对鼠肝炎病毒3型(murine hepatitis virus,MHV-3)是否具有抑制作用。方法:细胞培养、蚀斑试验测定病毒滴度;MTT法进行药物毒性试验;蚀斑抑制试验检测双黄连、鱼腥草的抗MHV-3活性。结果:双黄连半数中毒质量浓度(TC50)为6 100μg.m l-1,抗MHV-3病毒的半数抑制质量浓度(IC50)为304.9μg.m l-1;鱼腥草的分别为500、22.06μg.m l-1。治疗指数(TI)双黄连为20.07,鱼腥草为22.67。两种中药成分对MHV-3病毒的抑制作用均存在明显的量效反应关系(P<0.01)。结论:双黄连、鱼腥草在细胞水平有显著的抗MHV-3作用。

大蒜新素注射液抗鼠肝炎病毒3型的体外实验研究

目的:探讨大蒜新素(allitridin)在细胞水平对鼠肝炎病毒3型(mice hepatitis virus,MHV-3)的抑制作用。方法:细胞培养、蚀斑试验测定病毒滴度;MTT法进行药物毒性试验;蚀斑抑制试验检测大蒜新素的抗MHV-3活性,改变给药时间探索大蒜新素抗MHV-3作用环节。结果:大蒜新素半数中毒浓度(TC50)为75mg/L,抗MHV-3病毒的半数有效浓度(IC50)为2.7mg/L,治疗指数(TI)为27.78,大蒜新素对MHV-3病毒的抑制作用存在明显的量效反应关系(P<0.01),并且对MHV-3病毒有预防和中和作用(P<0.01)。结论:大蒜新素在L2细胞中对MHV-3病毒有明显的抑制作用,其作用机制是多途径的。

鼠肝炎冠状病毒非结构蛋白1及其突变体的原核表达

目的:构建鼠肝炎冠状病毒(MHV)非结构蛋白1(NSP1)及其突变体(NSP1 mu)的原核重组表达质粒,在大肠杆菌中分别融合表达重组NSP1及NSP1 mu。方法:以现有质粒载体为模板,扩增编码NSP1及NSP1 mu的基因片段,并克隆至pMD18-T克隆载体;菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析;将阳性克隆的目的片段亚克隆至表达载体pET-28a,并转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,PCR和双酶切鉴定转化菌落;将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并加入IPTG诱导表达,SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的表达。结果:PCR扩增得到表达NSP1及NSP1 mu的特异片段,并克隆到pMD18-T载体,测序结果正确无误;构建了NSP1和NSP1 mu的重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中分别融合表达了重组NSP1及NSP1 mu,表达的目的蛋白均能与His单克隆抗体特异结合;用Ni-NTA琼脂糖试剂盒纯化重组蛋白,获得可溶性的NSP1及NSP1 mu,相对分子质量分别为27×103和28×103。结论:在大肠杆菌中分别表达并纯化获得了大量可溶性重组NSP1及NSP1 mu。

鼠肝炎病毒A59毒株感染性克隆的构建及应用

鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)是研究冠状病毒的模式病毒,但传统的病原学研究方法局限于自然界分离的病毒,不利于研究的开展。反向遗传操作系统可快速获得研究所需的重组病毒,为研究MHV及其他冠状病毒的基因组功能开辟了新途径。本研究通过反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)将MHV的原始毒株A59全长基因组分成6个片段进行扩增,分别克隆到质粒载体,经酶切、体外连接和转录获得全长基因组RNA,然后电转细胞并进行病毒扩增。结果显示,重组病毒rA59与原始毒株的复制特性相似,其为研究MHV的生物学特性提供了实验工具。为方便检测病毒的复制水平,在病毒基因组开放阅读框4(open reading frame 4,ORF4)内分别插入绿色荧光蛋白ZsGreen(Zoanthus sp.green fluorescent protein)和荧光素酶Nluc(NanoLuc luciferase)报告基因,获得rA59-ZsGreen和rA59-Nluc重组报告病毒。结果显示,报告病毒所携带的报告基因并不影响病毒复制,可很好地反映病毒的复制特性。使用这两种病毒验证瑞德西韦(remdesivir)的抗病毒活性,分别检测药物处理后病毒的荧光亮度和荧光素酶活性。结果表明,rA59-ZsGreen和rA59-Nluc重组报告病毒适用于高通量药物筛选,具有重要的应用前景。综上所述,本研究成功建立了MHV A59毒株六质粒反向遗传操作系统,为研究MHV的生物学特性和测试抗病毒药物等提供了有力的工具。

病毒灵、板蓝根对鼠肝炎阳性群小鼠影响的研究

在小鼠育种期内投喂病毒灵和板蓝根，小鼠平均每胎产仔数由７．３只提高到１０．９只（Ｐ＜０．０５），每胎平均产仔数１２只的种鼠由占种群的２０％提高到６４％（Ｐ＜０．０１），小鼠群鼠肝炎血清抗体阳性检出率由４５％下降到５％，经过一年多的观察。

鼠肝炎冠状病毒非结构蛋白1内保守序列LLRKxGxKG的功能研究

目的研究鼠肝炎冠状病毒(MHV)非结构蛋白1(NSP1)内的保守氨基酸序列LLRKxGxKG的功能。方法扩增并构建MHVNSP1正常基因及LLRKxGxKG序列缺失突变的NSP1基因,分别将其插入真核表达载体pcDNA3.1中,获得真核表达质粒。用所构建的真核表达质粒转染L929细胞,经新城疫病毒(NDV)刺激诱导后,采用ELISA法检测IFN-β的表达水平,观察NSP1正常或突变蛋白对IFN-β表达的影响。通过与含CAT和Luc报告基因的重组质粒进行共转染,观察NSP1正常或突变蛋白对IFN-β启动子活性和干扰素刺激应答元件(ISRE)活性的影响。通过与三种报告基因(pRLuc-CMV、pGL3-basic、pGL3-control)共转染,观察NSP1正常或突变蛋白对共转染基因表达的影响。结果MHVNSP1对真核细胞产生干扰素有一定的影响,并可显著抑制IFN-β启动子或ISRE应答元件的活性,且该抑制作用不受LLRKxGxKG序列缺失的影响。同时,MHVNSP1还可强烈抑制多种共转染报告基因的表达。该抑制作用在LLRKxGxKG序列缺失后显著降低。结论MHVNSP1对Ⅰ型干扰素信号通路有特异的抑制作用。LLRKxGxKG序列是MHVNSP1的一个重要功能域,在抑制共转染基因表达过程中发挥着重要作用。

IL-22和SOCS3在3型鼠肝炎病毒诱导的小鼠慢性病毒性肝炎发病中的作用探讨

目的探讨鼠3型肝炎病毒(MHV-3)诱导的慢性病毒性肝炎C3H/Hej小鼠肝组织白细胞介素-22(IL-22)和细胞因子信号抑制因子3(SOCS3)mRNA水平的变化。方法给C3H/Hej小鼠腹腔注射MHV-3(100pfu),诱导慢性病毒性肝炎模型,采用实时荧光定量PCR法检测MHV-3感染后0、5、10、15和20 d时小鼠肝组织IL-22和SOCS3 mRNA水平的变化。结果模型鼠肝组织IL-22和SOC3 mRNA水平在0 d时分别为(0.26±0.15)%和(6.35±2.21)%,在感染后10、15和20 d后IL-22水平分别为(6.28±2.79)%、(2.50±1.24)%和(2.73±0.85)%,SOC3水平分别为(16.92±4.39)%、(14.06±4.09)%和(13.36±1.89)%,均较0 d时显著增高(P<0.05),且在第10 d达到最高峰。结论 IL-22和SOCS3可能参与了MHV-3诱导的小鼠慢性病毒性肝炎的发生发展过程。

SARS相关病毒与鼠肝炎病毒S蛋白的同源暗示一个潜在受体结合区的存在

最近,一种新的冠状病毒被确定为近期爆发的严重急性呼吸综合征(SARS)的病原体。虽然人们对人冠状病毒229E已经有了较多的研究,而且其受体结合位点也被确定在S蛋白第417～547个氨基酸残基之间。但是,这一区域与新分离的SARS相关病毒(香港株,CUHK-W1)没有任何同源性。有意思的是,已知的各种冠状病毒S蛋白S1亚基的序列比对和进化分析显示,鼠肝炎病毒(MHV)与SARS相关病毒的同源性最高。而且,MHV的S蛋白上负责受体结合的重要位点(第62～65和第214～216位氨基酸残基)与SARS相关病毒的相应区域(第51～54和第195～197位氨基酸残基)高度同源。这些生物信息学的分析结果可能对研究SARS相关病毒的受体结合位点和病毒侵染靶细胞的机理有所帮助,进而为设计抗病毒药物和疫苗提供新靶点。

CD4^+CD25^+调节性T细胞在不同类型肝炎小鼠模型中的作用探讨

目的:观察CD4+CD25+Treg细胞(CD4+CD25+调节性T细胞)在不同类型肝炎小鼠模型中的比例变化,探讨CD4+CD25+Treg细胞在不同类型肝炎小鼠模型中的作用。方法:通过腹腔注射3型鼠肝炎病毒(MHV-3),在Balb/cJ和A/J两种小鼠上分别建立暴发型肝炎和无症状携带者两类小鼠病毒性肝炎模型,观察病毒感染后两种小鼠肝脏病理变化,检测其血清中的AST、ALT和TBil水平,比较感染后不同时间点脾脏和外周血CD4+CD25+Treg细胞的比例。结果:Balb/cJ小鼠在3~7天内死亡,其肝脏出现大面积坏死,血清AST、ALT和TBil水平急剧上升,CD4+CD25+Treg细胞比例没有发生变化;A/J小鼠长期存活并且肝脏无病理改变,CD4+CD25+Treg细胞比例明显增加。结论:CD4+CD25+Treg细胞可降低MHV-3病毒感染导致的免疫反应强度,减少肝脏的免疫病理损伤,促进了MHV-3病毒性肝炎的慢性化。

非酒精性脂肪性肝炎大鼠肝细胞和库普弗细胞同时分离及鉴定

目的建立一种稳定、高效、同时分离非酒精性脂肪性肝炎(nonalcohlic steatohepatitis,NASH)大鼠肝细胞(hepatocytes,HCs)和库普弗细胞(Kupffer cells,KCs)的新方法。方法采用离体循环灌注Ⅳ型胶原酶,低速离心获取HCs;差速离心、密度梯度离心和选择性贴壁获得KCs。用Typan blue染色和流式细胞术(FCM)分别进行活性和纯度鉴定。结果每只大鼠获得纯化的HCs[(4.0～4.5)×108]、KCs[(1.5～2.0)×107],经Typanblue染色活力均在95%以上,FCM检测纯度均在90%以上。结论此实验建立同时分离NASH大鼠HCs和KCs的方法高效、稳定,细胞数量和纯度都符合进一步实验的要求。

自身免疫性肝炎小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬及溶酶体功能异常

目的:研究自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis,AIH)模型小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬及溶酶体功能及其与AIH发病的关系.方法:80只C57BL/6小鼠平均分为AIH模型组及对照组,应用腹腔注射小鼠肝特异性抗原S-100与氟式佐剂乳化物建立AIH小鼠模型,提取AIH模型组和对照组小鼠腹腔巨噬细胞,应用荧光显微镜和流式细胞仪检测巨噬细胞对荧光标记大肠杆菌的吞噬率和吞噬指数,比较各组细胞Lysotracker荧光强度分析溶酶体含量.结果:AIH模型组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率(24.07%±10.21%vs 47.27%±15.57%,t=-7.899,P<0.05)及吞噬指数(0.36±0.19 vs0.89±0.34,t=-6.793,P<0.05)较对照组明显下降.AIH模型组巨噬细胞的溶酶体含量低于对照组(5.85±0.35 vs 15.39±0.72,t=-5.296,P<0.05);FITC-E.coli被细胞吞噬后,绝大部分进入溶酶体并刺激巨噬细胞中的溶酶体增多,刺激后AIH模型小鼠巨噬细胞的溶酶体含量仍显著低于对照组(9.45±0.84vs 30.00±1.36,t=-7.889,P<0.05).结论:AIH模型组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬及溶酶体功能较对照组明显下降,这可能是AIH发病机制中的重要一环.

常用消毒剂对鼠肝炎冠状病毒灭活效果比较研究

目的观察常用化学消毒剂对鼠肝炎冠状病毒(MHV)的灭活效果。方法采用悬液定量灭活试验法,对常用消毒剂灭活MHV的效果进行试验研究。结果有效氯100 mg/L含氯消毒剂和浓度100 mg/L过氧乙酸,均作用5 min,可完全灭活MHV。浓度为4000 mg/L过氧化氢作用10 min,可完全灭活MHV。40 mg/L二氧化氯、1000 mg/L单过硫酸氢钾、500 mg/L有效碘、体积分数75%乙醇和500 mg/L季铵盐,均可在1 min内灭活MHV。但浓度为5000 mg/L的醋酸氯己定水溶液和部分植物消毒剂在15 min内不能完全灭活MHV。结论常用高、中效及部分低效消毒剂均可快速灭活MHV。

疏肝健脾补肾方对乙型肝炎病毒转基因小鼠脾T淋巴细胞及病毒载量的影响

目的观察疏肝健脾补肾方对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)转基因(transgenic,Tg)小鼠脾T淋巴细胞及病毒载量的影响,探讨其抗病毒疗效及作用机制。方法 60只SPF级BALB/C雄性小鼠,设10只HBV非Tg小鼠为正常对照组,50只HBVTg小鼠随机分为模型组、阿德福韦(ADV)组及中药小、中、大剂量组,每组10只。中药小、中、大剂量组分别给予疏肝健脾补肾方10、20、40g生药/kg灌胃;ADV组给予ADV50mg/kg灌胃;正常对照组和模型组以等量灭菌等渗生理盐水灌胃,均每天1次,连续21天。采用实时荧光PCR定量检测HBVTg小鼠给药前1天(T0)、给药后10天(T1)、21天(T2)、停药后3天(T3)血清HBVDNA;采用ELISA法检测其T3时血清HBsAg。流式细胞仪测定所有小鼠脾T淋巴细胞百分比。结果各给药组T0时血清HBsAg均为阳性,T3时ADV组HBsAg转阴数高于中药大剂量组,差异有统计学意义(P<0·01)。与本组T0时比较,给药后中药大剂量组可持续降低HBVDNA含量,差异均有统计学意义(P<0·01);ADV组HBVDNA含量亦逐渐下降(P<0·01),但在T3时有所回升。中药各剂量组及ADV组均可提高CD3+细胞百分比(P<0·05,P<0·01);中药各剂量组均可明显降低CD8+百分比(P<0·01)。与其他给药组比较,中药大剂量组CD4+、CD4+/CD8+升高,CD8+降低,差异均有统计学意义(P<0·01)。中药中剂量组CD3+及中药大剂量组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均与本组给药前后HBVDNA滴度减少呈显著正相关(r=0·654,P<0·05;r=0·53,r=0·79,r=0·80,P<0·01)。结论疏肝健脾补肾方具有抑制HBVTg小鼠HBVDNA复制的能力,改善T淋巴细胞亚群的异常,提高机体免疫功能可能是其抗HBV的机制之一。

乙型肝炎表面抗原阳性对免疫抑制状态下小鼠肝癌复发的影响

目的比较免疫抑制状态下血清学乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)阳性与阴性小鼠肝脏肿瘤的复发及进展情况,为临床应用HBs Ag阳性供肝行肝移植治疗以挽救晚期肝癌患者的可行性提供理论依据。方法实验组选用乙型肝炎病毒(HBV)转基因Balb/c小鼠30只,对照组选用普通Balb/c小鼠30只,每组分别给予脾包膜下接种H22肿瘤细胞株,术后给予环孢素A、甲泼尼龙琥珀酸钠进行免疫抑制干预治疗,模拟肝移植术后免疫抑制状态,至观察结束。分别于术后1、2、3周处死小鼠,观察比较两组小鼠肿瘤复发率、荷瘤肝重;苏木素-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态;免疫组化检测肝组织增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果两组小鼠肿瘤复发率:实验组术后1、2、3周分别为20%、50%、80%,对照组术后1、2、3周分别为20%、40%、70%;荷瘤肝重:实验组术后1、2、3周分别为(1.04±0.05)g、(1.16±0.06)g、(1.29±0.06)g,对照组术后1、2、3周分别为(1.01±0.06)g、(1.13±0.05)g、(1.25±0.08)g;肝组织PCNA阳性指数:实验组术后1、2、3周分别为22.20%±5.85%、44.20%±6.07%、53.40%±7.92%,对照组术后1、2、3周分别为22.80%±5.51%、43.60%±6.95%、56.80%±9.14%;VEGF阳性指数:实验组术后1、2、3周分别为20.80%±5.47%、25.90%±5.51%、37.60%±2.16%,对照组术后1、2、3周分别为17.00%±4.14%、26.70%±6.40%、37.30%±1.42%;ICAM-1阳性指数:实验组术后1、2、3周分别为15.40%±3.89%、23.20%±3.61%、31.30%±3.47%,对照组术后1、2、3周分别为14.50%±3.41%、22.80%±2.97%、29.40%±3.69%;实验组和对照组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论通过对免疫抑制状态下HBV转基因Balb/c小鼠移植型肿瘤复发动物模型的观察研究,认为血清学HBs Ag阳性对小鼠肝癌复发及生长无显著影响。

小干扰RNA长期作用乙型肝炎病毒转基因小鼠对机体免疫系统的影响

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)长期作用乙型肝炎病毒(HBV)转基因小鼠对机体免疫系统的影响。方法:siRNA表达载体经微静脉注射转染HBV转基因小鼠,设立特异性siRNA组(pSilencer4.1/C2)、PBS对照组和正常BALB/c小鼠组(n=10);分别于注射后1、3、6、9和12个月经其内眦静脉采血,采用散射比浊法测定IgG、IgA、IgM水平的变化,ELISA测定细胞因子IL-2、IL-4、IL-6和IFN-γ,流式细胞术检测小鼠外周血CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群。结果:pSilencer4.1/C2长期作用转基因小鼠后可以改善机体的先天免疫反应,转基因小鼠机体内的体液免疫和细胞免疫水平较治疗前均有所上调,高于PBS组,几乎接近正常BALB/c小鼠组。结论:pSilencer4.1/C2长期作用转基因小鼠可以上调机体的先天免疫,可为以后免疫疫苗提供应用时机。

MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏和慢加急性肝衰竭患者外周血单个核细胞TLR2表达的变化

目的研究慢性乙型肝炎患者和慢加急性乙型肝炎肝衰竭(HBV-ACLF)患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体2(TLR2)表达,以及鼠三型肝炎病毒(MHV-3)诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏TLR2表达的变化。方法收集慢性乙型肝炎和HBV-ACLF患者外周血,分离PBMC,采用实时定量PCR法检测PBMC中TLR2mRNA;给Balb/cJ小鼠腹腔注射MHV-3(100 pfu),建立小鼠暴发性肝炎模型,观察感染0、24、48和72 h后肝脏TLR2水平变化。结果 BALB/cJ小鼠在感染MHV-3后,与0 h[(0.39±0.06)%]比,肝细胞TLR2 mRNA水平在感染48和72 h均显著升高[分别为(9.06±1.60)%和(6.42±2.42)%,P<0.05)],并于48 h达最高水平,且两时间点细胞TLR2 mRNA水平均与血清ALT和AST水平呈正相关(r=0.804,P<0.01;r=0.797,P<0.01);HBV-ACLF患者PBMC中TLR2 mRNA水平显著高于慢性乙型肝炎患者[(5.92±5.26)%对(1.15±1.59)%,P<0.05)]。结论TLR2参与了MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠以及HBV-ACLF患者肝脏损伤的发病过程。

蒙药给旺—9对非酒精性脂肪肝炎大鼠肝组织中GSH-PX、MDA、SOD的影响

目的探讨蒙药给旺—9对非酒精性脂肪肝炎大鼠模型中GSH-PX、MDA、SOD的影响。方法收集我院制造的非酒精性脂肪肝炎大鼠模型,将所有的大鼠模型随机分为蒙药高、中、低剂量组,天然蒙药组、西药组、空白组、模型组,按分组大鼠依次给药实施治疗,观察其用药后对GSH-PX、MDA、SOD的影响和病理变化。结果模型组和治疗组大鼠肝组织当中的丙二醛(MDA)含量显著下降,且肝组织当中的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量显著上升,病理学变化改善明显。结论蒙药给旺-9对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝炎大鼠模型肝组织中GSH-PX、MDA、SOD有一定的作用,在临床上值得推广应用。

白介素-9在鼠Ⅲ型肝炎病毒诱导的暴发性肝炎小鼠肝脏自然杀伤细胞及自然杀伤T细胞的表达研究

目的:研究MHV-3(鼠Ⅲ型肝炎病毒)感染所致的暴发性肝炎小鼠模型中,IL(白细胞介素)-9在肝脏NK(自然杀伤细胞)及NKT细胞的表达变化,及其与肝损伤之间的关系。方法:BALB/cJ小鼠腹腔注射100pfu(空斑形成单位)MHV-3建立小鼠暴发性肝炎模型,应用流式细胞术荧光分析法检测MHV-3感染0小时、24小时、48小时和72小时肝脏NK及NKT细胞表达IL-9的比例变化,并检测小鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)水平。结果:BALB/cJ小鼠感染MHV-3后,IL-9在肝脏NK细胞的表达在感染24小时显著升高(P<0.05),并于48小时达最高水平(P<0.05);在肝脏NKT细胞的表达于感染24小时显著升高(P<0.05),并于48小时达最高水平,且均与肝损伤指标(血清ALT水平)呈正相关。结论:随着感染时间延长,肝脏分泌IL-9的NK和NKT淋巴细胞显著升高,提示IL-9参与了MHV-3诱导的暴发性肝炎小鼠免疫诱导的肝脏损伤发病过程。

凝血酶原酶基因在小鼠严重急性呼吸综合征肺损伤中的作用

目的:利用鼠肝炎3型病毒(MHV-3)建立小鼠严重急性呼吸综合征(SARS)模型,探讨小鼠fgl2凝血酶原酶基因(mfgl2)与SARS肺损伤,尤其是透明膜和血栓形成之间的关系及其临床意义。方法:Balb/cJ小鼠气管途径感染MHV-3建立小鼠SARS模型,动态观察小鼠一般情况、组织器官的病理学改变及病毒分布情况;免疫组化和原位杂交方法检测其肺组织中mfgl2和纤维蛋白的表达。结果:感染小鼠5 d内死于以肺损伤为主的多器官功能衰竭;肺呈现典型间质性肺炎样改变伴透明膜、血栓形成;所有收集的器官均可检测到病毒的复制;肺支气管浆液腺上皮细胞、间质浸润细胞及肺泡上皮细胞可检测到mfgl2的特异性表达;免疫组化双染色发现肺内透明膜及微血栓形成区域多见mfgl2与纤维蛋白的共沉积。结论:MHV-3诱导的小鼠SARS模型能较好地模拟人类SARS肺损伤的疾病特征,mfgl2在模型肺组织中的特异性高表达可激活凝血酶原,启动局部凝血过程,导致纤维蛋白的沉积,促进肺内血栓和透明膜的形成,提示mfgl2可能是SARS肺损伤又一重要分子机制。