重组骆驼蓬脂转移蛋白与顺铂联合抑制黑色素瘤B16细胞增殖效应的研究

旨在探讨重组骆驼蓬脂转移蛋白(Recombinant Peganum harmala lipid transfer protein,r Ph LTP)与顺铂(DDP)联用对鼠黑色素瘤B16细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。MTT法检测r Ph LTP、顺铂单独及联用后对鼠黑色素瘤B16细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡,活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和线粒体膜电位(Δψm)的变化情况。结果显示,r Ph LTP和DDP联用后细胞生长抑制率和凋亡率显著高于DDP单独处理组(P<0.01);而且胞内ROS升高的水平均高于单独处理组(P<0.01),胞内Δψm水平均低于单独处理组,但无显著性差异。r Ph LTP可增强顺铂对B16细胞的生长抑制并促进细胞凋亡,与顺铂具有协同作用。

重组骆驼蓬脂转移蛋白对B16实体瘤的抑制作用

目的:研究重组骆驼蓬脂转移蛋白(Peganum harmala lipid transfer protein,rPhLTP)对鼠黑色素瘤(B16)的体内抑制作用。方法:取B16细胞接种于C57BL/6J小鼠皮下,随机分为5组。测量各组瘤体积并称瘤重,计算抑瘤率。光镜观察脾脏、肝脏等变化;采用免疫组织化学法检测各肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达。结果:高、中、低剂量处理组肿瘤相对体积(V/Vo)分别为3.21±0.12、3.57±0.07和3.92±0.42,抑瘤率分别为71.7%、58.1%和29.5%。显微镜下可见rPhLTP实验组肿瘤组织的细胞有不同程度的点、片状坏死。而肝、肺等无明显病理损伤。高剂量组中VEGF阳性表达指数低于生理盐水组(P<0.01),rPhLTP能明显抑制肿瘤血管的生成。结论:rPhLTP能有效地抑制小鼠B16细胞实体瘤的生长,其抗肿瘤的机制可能是通过抑制血管的生成来抑制肿瘤的生长。

骆驼蓬脂转移蛋白基因真核表达载体的构建及其体内外抗瘤效应的研究

目的:构建骆驼蓬脂转移蛋白(lipid transfer protein from Peganum harmala,PhLTP)基因真核表达质粒,并探讨其对黑色素瘤B16细胞在体内外的抗肿瘤作用。方法:将PhLTP基因亚克隆至pcDNA3.1上,获得重组质粒pcDNA3.1-PhLTP;用脂质体转染法将重组质粒及空载体外转染B16细胞,MTT检测其对B16细胞生长的影响。建立B16荷瘤小鼠模型,设重组质粒(pcDNA3.1-PhLTP)、空载(pcDNA3.1)、生理盐水和阳性药物(CTX)组,分别处理小鼠后测量各组肿瘤体积并称瘤重,计算抑瘤率。光镜观察鼠脾、肝等组织变化;免疫组织化学法检测各瘤体中PhLTP、血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的表达。结果:pcDNA3.1-PhLTP转染B16细胞72 h后,细胞增殖能力明显受到抑制(P<0.01)。注射pcDNA3.1-PhLTP组的小鼠肿瘤生长速度明显减慢,肿瘤体积小于空载和生理盐水组(P<0.05)。显微镜下可见重组质粒组肿瘤细胞有不同程度的点、片状坏死,而肝、肺等无明显病理损伤。重组质粒组肿瘤组织中有PhLTP蛋白的表达,且VEGF和bFGF的阳性表达指数都低于空载和生理盐水组(P<0.01)。结论:成功构建了重组表达质粒pcDNA3.1-PhLTP,体内外实验结果显示其能有效地抑制B16细胞的生长,预示了该重组质粒在治疗黑色素瘤中的潜在应用价值。