常用实验动物鼻上皮毒性病理学研究简介

目的介绍常用实验动物鼻上皮毒性病理学研究进展,为吸入途径给药及非吸入途径药物临床前安全性评价毒性病理学研究提供参考。方法系统介绍了常见实验动物鼻解剖学与组织学及其种属差异、常用实验动物组织病理学检查鼻腔上皮的取材方法、吸入药物引起的鼻上皮损伤的特点、使用吸入药物的动物数据来评估人类风险以及非吸入途径给药实验引起的鼻上皮病变特点和机制。结果不同种属实验动物鼻大体和显微解剖学及组织学差别显著;常用实验动物例如大鼠、猴、比格犬及兔的组织病理学检查鼻腔上皮的取材方法各有其特点;吸入药物引起的鼻上皮损伤及非吸入途径给药实验引起的鼻上皮病变特点和机制有所不同。结论本文可帮助提高国内常用实验动物鼻上皮的制片和诊断水平,为吸入药物及非吸入途径给药药物的临床前安全性评价提供更加客观、全面、准确的形态学数据。

H3K27乙酰化修饰促进lncRNA OIP5-AS1转录并通过上调TLR4诱导过敏性鼻炎鼻黏膜上皮细胞凋亡

目的本研究旨在探讨组蛋白3的27位赖氨酸(H3K27)乙酰化修饰对长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5-反义RNA1(lncRNA OIP5-AS1)转录的促进作用,探讨其通过调控Toll样受体4(TLR4)对过敏性鼻炎(AR)中鼻黏膜上皮细胞(NEC)凋亡的影响。方法白细胞介素13(IL-13)处理NEC以建立AR细胞模型。采用实时定量PCR检测OIP5-AS1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和体外细胞模型中的表达。ELISA检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、嗜酸性粒细胞趋化因子1(eotaxin-1)和黏蛋白5AC(MUC5AC)的浓度。原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法用于检测NEC的凋亡。双荧光素酶报告实验用于验证OIP5-AS1和TLR4的关系。染色质免疫沉淀(ChIP)实验分析用于验证OIP5-AS1启动子区组蛋白的H3K27乙酰化修饰。结果与健康对照和未处理的NEC相比,OIP5-AS1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和IL-13刺激的NEC中均表达升高。敲减OIP5-AS1可降低IL-13诱导的NEC的TLR4水平,而过表达OIP5-AS1可增加IL-13处理的NEC的TLR4水平。敲减OIP5-AS1可降低IL-13处理的NEC凋亡率及GM-CSF、eotaxin-1和MUC5AC的分泌,而过表达TLR4可部分逆转敲减OIP5-AS1对NEC凋亡及GM-CSF、eotaxin-1和MUC5AC表达的影响。此外,H3K27ac在OIP5-AS1的启动子区域显著富集,H3K27乙酰化可促进OIP5-AS1在IL-13诱导的NEC中的表达。结论H3K27乙酰化修饰促进OIP5-AS1转录并通过上调TLR4诱导AR中NEC凋亡。

骨髓来源的间充质干细胞对变应性鼻炎大鼠鼻黏膜上皮细胞的调控作用

目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)对变应性鼻炎(AR)大鼠鼻黏膜上皮细胞形态、增殖和分泌蛋白的影响。方法分离正常大鼠骨髓MSCs、正常大鼠鼻黏膜上皮细胞以及AR大鼠鼻黏膜上皮细胞并分别培养,细胞培养传代至符合要求时,将骨髓MSCs和AR大鼠鼻黏膜上皮细胞共培养,培养3 d、7 d、14 d时显微镜观察鼻黏膜上皮细胞形态,CCK-8法检测鼻黏膜上皮细胞增殖情况[设模型组(AR大鼠鼻黏膜上皮细胞)和模型MSCs组(AR大鼠鼻黏膜上皮细胞和骨髓MSCs共培养),以OD值表示],Western blot法检测鼻黏膜上皮细胞黏液分泌标志物黏蛋白5AC(MUC5AC)蛋白表达情况[设正常组(正常大鼠鼻黏膜上皮细胞)、正常MSCs组(正常大鼠鼻黏膜上皮细胞和骨髓MSCs共培养)、模型组(AR大鼠鼻黏膜上皮细胞)、模型MSCs组(AR大鼠鼻黏膜上皮细胞和骨髓MSCs共培养)]。结果骨髓MSCs与AR大鼠的鼻黏膜上皮细胞共培养14 d时,鼻黏膜上皮细胞明显增多,细胞生长旺盛,活性好,细胞形成大的集落群。培养14 d时,模型MSCs组的鼻黏膜上皮细胞增殖OD值为0.97±0.06,模型组为0.81±0.05,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。正常组和正常MSCs组鼻黏膜上皮细胞中MUC5AC蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);模型MSCs组鼻黏膜上皮细胞中MUC5AC蛋白相对表达量明显低于模型组(P<0.05)。结论骨髓MSCs能促进AR大鼠鼻黏膜上皮细胞增殖,下调AR大鼠鼻黏膜上皮细胞中MUC5AC蛋白表达。

呼吸道合胞病毒感染对慢性鼻窦炎伴鼻息肉上皮屏障功能的影响

目的为探索呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染对慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)和对照黏膜来源的人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells,hNECs)物理屏障关键分子的影响。方法不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)(0.1和0.3)的RSV分别感染鼻息肉(n=21)和对照黏膜(n=9)的hNECs 24 h和48 h后,提取总RNA,逆转录成cDNA后,采用实时荧光定量PCR检测ZO-1、ZO-2、Claudin-1、Claudin-4、Occludin、E-cadherin和N-cadherin的基因表达变化。结果RSV感染hNECs后,ZO-1、ZO-2、Claudin-1、Claudin-4、Occludin、E-cadherin和N-cadherin的基因表达水平均下降,但只在鼻息肉来源的hNECs中存在统计学差异(P<0.05)。RSV感染嗜酸性粒细胞型CRSwNP(eosinophilic CRSwNP,ECRSwNP)与非嗜酸性粒细胞型CRSwNP(nonECRSwNP)的hNECs相比,无显著差异。结论RSV感染可破坏鼻黏膜上皮屏障,与对照组相比CRSwNP组受RSV感染影响更重,且ECRSwNP组与nonECRSwNP组无显著差异。

微小RNA-142-3p靶向肿瘤坏死因子-α对脂多糖诱导的人鼻黏膜上皮细胞炎症反应的影响

目的探讨微小RNA(miR)-142-3p对脂多糖(LPS)诱导的人鼻黏膜上皮细胞(HNEPC)炎症反应的影响及其与TNF-α的靶向关系。方法选取HNEPC为研究对象,使用LPS诱导建立炎症反应模型。将miR-142-3p上调、miR-142-3p下调、空质粒转染至细胞,分为对照组、LPS组、miR-142-3p上调组、miR-142-3p下调组、空质粒组;将TNF-α下调、下调对照质粒分别与miR-142-3p上调质粒共同转染至细胞,记为miR-142-3p上调+TNF-α下调组、空质粒+TNF-α下调组、miR-142-3p上调组和空质粒组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力;采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-142-3p和白细胞介素(IL)-6、IL-10、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA水平;采用酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中IL-6、IL-10、IFN-γ、TNF-α含量;通过TargetScan网站、荧光素酶报告实验分析miR-142-3p与TNF-α的靶向关系。结果LPS组细胞增殖能力高于对照组,miR-142-3p上调组细胞增殖能力高于空质粒组,miR-142-3p下调组细胞增殖能力低于空质粒组,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS组细胞IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-α蛋白及其mRNA表达水平高于对照组,miR-142-3p上调组细胞相关炎性因子表达水平高于空质粒组,miR-142-3p下调组细胞相关炎性因子表达水平低于空质粒组,差异有统计学意义(P<0.05)。TNF-α下调组细胞IL-6、IL-10、IFN-γ及TNF-αmRNA及细胞上清液中蛋白表达水平低于下调对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-142-3p与TNF-α具有良好的靶向关系。结论miR-142-3p在慢性鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻黏膜组织中高表达,过表达miR-142-3p可促进LPS诱导HNEPC炎性反应,可能与上调TNF-α基因表达有关。

HMGB1小干扰RNA对鼻黏膜上皮细胞HMGB1/TLR4信号通路的影响

目的研究采用小干扰RNA(si-RNA)沉默高迁移率族蛋白1(HMGB1)对人鼻黏膜上皮细胞(HNECs)Toll样受体4(TLR4)及其下游信号通路的影响。方法体外培养人鼻黏膜上皮细胞,分为空白对照组、si-HMGB1组、脂多糖(LPS)组和LPS+si-HMGB1组。RT-PCR检测HNECs中HMGB1 mRNA的表达。Western blot检测4组细胞HMGB1、TLR4表达以及通路下游核因子-κB(NF-κB)和白介素1β(IL-1β)的表达水平。观察siRNA干扰HMGB1蛋白表达后鼻黏膜上皮细胞的相应变化。结果RT-PCR结果显示,LPS组细胞中HMGB1的转录水平显著高于空白对照组(P<0.05)。LPS+si-HMGB1组HMGB1的mRNA转录水平显著低于LPS组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,LPS+si-HMGB1组的TLR4,HMGB1蛋白表达水平明显低于LPS组,结果具有统计学意义(P<0.05)。LPS+si-HMGB1组细胞的NF-κB以及IL-1β水平明显低于LPS组(P<0.05)。结论鼻黏膜上皮细胞表达HMGB1蛋白,通过siRNA沉默手段可以下调HMGB1的表达。LPS可以激活炎症性的HMGB1,TLR4,通路下游信号NF-κB及IL-1β。siRNA可以下调HMGB1蛋白表达水平,进而抑制TLR4-NF-κB以及IL-1β信号传导通路。

麻黄细辛附子汤对尘螨变应原Der p1诱导的鼻黏膜上皮细胞屏障损伤的影响

目的基于RhoA/ROCK信号通路探讨麻黄细辛附子汤及麻黄对尘螨变应原Der p1诱导的人鼻黏膜上皮细胞(HNEpC)屏障损伤的影响及作用机制。方法体外培养HNEpC,将细胞分为对照组、模型组、麻黄组、抑制剂组及麻黄细辛附子汤低、中、高剂量组。电阻仪检测细胞跨膜电阻,酶标仪检测FITCDextran通透性,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测紧密连接蛋白咬合蛋白(Occludin)、闭合蛋白1(Claudin-1)及通路蛋白RhoA、ROCK1表达,免疫荧光染色检测肌动蛋白(F-actin)表达。结果与对照组比较,模型组细胞间隙增大,出现环形损伤,标准化跨膜电阻显著降低(P<0.01),FITC-Dextran通透性显著增加(P<0.01),Occludin、Claudin-1蛋白表达显著降低(P<0.01),RhoA、ROCK1、F-actin蛋白表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,麻黄组、抑制剂组和麻黄细辛附子汤低、中、高剂量组细胞排列紧密,环形损伤被修复,标准化跨膜电阻显著升高(P<0.01),FITC-Dextran通透性显著降低(P<0.01),Occludin、Claudin-1蛋白表达显著升高(P<0.01),RhoA、ROCK1蛋白表达显著降低(P<0.01),麻黄细辛附子汤低、中、高剂量组和抑制剂组细胞F-actin蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论麻黄细辛附子汤及麻黄可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善鼻黏膜通透性,修复Der p1诱导的HNEpC屏障损伤。

白藜芦醇抗黑碳颗粒对人鼻黏膜上皮细胞毒性作用及其机制

目的 探讨黑碳颗粒(BC)对人鼻黏膜上皮细胞(hNECs)的毒性作用、毒性机制以及白藜芦醇的保护作用。方法 先用不同浓度的黑碳(0、6.5、12.5、25.0、50.0、100.0μg/mL)刺激hNECs,观察BC对hNECs的毒性作用;其次,将h NECs随机分成对照组、BC组、白藜芦醇组,BC组用半致死剂量的BC浓度刺激细胞,白藜芦醇组的浓度为50μmol/L,分别检测3组细胞的存活率,细胞内ROS、SOD和CAT活性,以及8-OHdG蛋白的表达,用彗星试验检测3组细胞DNA损伤的程度。结果 BC对hNECs有细胞毒性作用,并呈剂量依赖性,BC浓度为50μg/mL时细胞存活率为(56.67±4.31)%,以此作为后续实验BC组的刺激浓度。与对照组相比,BC组细胞ROS活性升高、SOD和CAT活性下降,8-OHdG蛋白的表达上调,彗星实验中的各项指标尾长、彗星长、尾距显示DNA损伤,差异均有统计学意义(P<0.05);与BC组相比,白藜芦醇组ROS活性下降,SOD和CAT活性升高,8-OHdG蛋白的表达下调,彗星实验的指标尾长、彗星长、尾距显示DNA损伤程度有所减轻,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BC对hNECs有毒性作用,可能与氧化应激有关;白藜芦醇可能通过减轻氧化应激反应对鼻黏膜上皮细胞产生保护作用。

黄芪多糖调控p38 MAPK/NF-κB通路减轻脂多糖诱导鼻黏膜上皮细胞炎症损伤的实验研究

目的探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharide,Asp)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的鼻黏膜上皮细胞(nasal mucosal epithelial cell,NMEC)炎症损伤的影响及作用机制。方法取人NMEC细胞株分为对照组、LPS组、Asp组、Anisomycin组和Asp+Anisomycin组。CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫荧光法检测p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)阳性表达;免疫组织化学法检测磷酸化核因子κB(phosphorylated nuclear factor kappa B,p-NF-κB)阳性表达;酶联免疫吸附测定检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、细胞间黏附因子(intercelluar adhesion molecule,ICAM)-1水平;蛋白质印迹法检测黏蛋白2(mucin 2,MUC2)、p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、p-NF-κB蛋白表达。结果LPS处理的NMEC细胞增殖降低、炎症因子分泌增加、凋亡率升高、p38 MAPK/NF-κB通路磷酸化途径激活(P<0.05)。Asp可阻断p38 MAPK/NF-κB途径,缓解NMEC炎症损伤及凋亡(P<0.05)。Anisomycin可逆转Asp的上述作用(P<0.05)。结论Asp可通过抑制p38 MAPK/NF-κB途径,抑制炎症反应,缓解LPS诱导的NMEC炎症损伤及凋亡。

人胚鼻咽上皮细胞cDNA文库的构建及鼻咽癌相关基因的筛选

为了进一步分离人鼻咽组织特异性表达基因和鼻咽癌特异相关基因 ,采用SMART (switchingmechanismat 5′endofRNAtranscript)技术 ,构建了人胚鼻咽上皮cDNA文库 .从原代培养的人胚鼻咽上皮分离总RNA并纯化mRNA ,利用经修饰的oligo (dT)引物 (含sfiⅠB酶切位点 )合成cDNA第一链 ,同时根据真核生物mRNA5′端帽子结构特点 ,利用SMART核苷酸 (含sfiⅠA酶切位点 )作为cDNA第一链在mRNA 5′端延伸出去的模板 ,进而以此序列为引物利用LD PCR (long distance PCR)合成双链cDNA ,双链cDNA经sfiⅠ (ⅠA和ⅠB)酶切和过柱分级分离后 ,克隆入经sfiⅠ酶切的λTrip1EX2载体后经体外包装而成cDNA文库 .结果表明 ,原始人胚鼻咽上皮cDNA文库获得 1 0× 10 6个重组子 ,重组率达 96 % .文库扩增后 ,滴度达 7 8× 10 9pfu ml,插入cDNA平均长度为 1 2kb ,用PCR从该文库扩增出本实验室新克隆的鼻咽癌相关基因NAG4的全长cDNA .构建的人胚鼻咽上皮cDNA文库具有良好的质量 ,该cDNA文库为进一步筛选。

益气解毒方对DNP诱导TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔/鼻咽上皮癌前病变及p16和c-jun基因表达的影响

背景与目的:有研究表明,益气解毒方中药可通过抑制细胞端粒酶的激活而阻断二亚硝基哌嗪(DNP)诱导大鼠鼻咽癌变和人胚鼻咽上皮细胞转化。本研究探讨益气解毒方对经DNP诱导TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠的鼻腔和鼻咽黏膜上皮增殖及c-jun和p16基因表达的影响,为益气解毒方的疗效和可能作用机制提供新的证据。方法:G4代5月龄TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠20只,随机分为2组:①TgN(p53mt-LMP1)/HT诱癌中药组[中药组,10只,以12.91g/(kg?d)剂量灌胃益气解毒方药液];②TgN(p53mt-LMP1)/HT诱癌0.9%氯化钠溶液对照组(氯化钠溶液对照组,10只,以15ml/kg氯化钠溶液灌胃)。另设阴性对照组(用野生型C57BL/6J小鼠10只,以15ml/kg氯化钠溶液灌胃)。用HE染色法观察各组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织生物学表型特征,比较癌前病变率;免疫组织化学染色法检测各组小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织c-jun和p16基因的表达水平,并采用Western印迹法验证。结果:阴性对照组、氯化钠溶液对照组和中药组鼻腔和(或)鼻咽黏膜上皮癌前病变率分别为0、90%和10%,差异有显著性(P<0.01)。与氯化钠溶液对照组比较,中药组小鼠鼻腔和鼻咽的p16基因表达水平显著上调(鼻腔:157±10vs132±10,鼻咽:155±12vs133±10,P值均<0.01),c-jun基因的表达水平显著下调(鼻腔:111±9vs161±10;鼻咽:110±10vs159±10,P值均<0.01),趋于正常水平,与阴性对照组(鼻腔和鼻咽的p16表达灰度值分别为130±12和129±12,c-Jun分别为164±13和164±9)的差异无显著性(P值均>0.05)。结论:中药益气解毒方可阻逆DNP对TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻腔和鼻咽黏膜上皮组织癌前病变发生和发展的诱导作用,其干预作用与下调c-jun表达和上调p16基因表达密切相关。

EB病毒介导人鼻咽上皮细胞永生化早期阶段的生物学观察

EB病毒转化人鼻咽上皮细胞,建立体外多阶段细胞模型有利于从细胞和分子水平对肿瘤发病机制作深入研究。我们利用与鼻咽癌密切相关的EB病毒和TPA的协同作用,观察原代人胚鼻咽上皮细胞逃避老化期后其生物学特性的变化。结果表明,EB病毒感染的人胚鼻咽上皮细胞在原代培养后期老化相关半乳糖苷酶(SA-β-Gal)表达降低,形态学上发生改变,出现转化灶样集落,群体倍增时间降低,体外培养寿命延长,表明EB病毒促使部分原代人胚鼻咽上皮细胞逃避老化期、进入永生化早期阶段。这些研究资料为进一步阐明上皮细胞永生化分子机制及建立人鼻咽上皮细胞永生化模型提供实验依据。

EB病毒潜伏膜蛋白1诱导人鼻咽上皮细胞端粒酶的表达

上皮细胞逃避老化期是细胞永生化过程中一个重要分子事件,端粒酶活性表达是维持人染色体端粒长度、抑制细胞进入老化期的关键因素之一。我们利用最新的端粒酶PCR-ELISA半定量技术,检测永生化早期阶段人胚鼻咽上皮细胞中端粒酶表达的情况,探讨EB病毒在人胚鼻咽上皮细胞永生化过程中的分子机制。结果表明,EB病毒诱导老化前期人胚鼻咽上皮细胞端粒酶表达,从而促使人胚鼻咽上皮细胞逃避老化期、进入永生化早期阶段。此外,我们还首次发现,人胚鼻咽上皮细胞表达端粒酶活性依赖于EB病毒LMP1蛋白的表达水平和LMP1分子的完整性,LMP1可能通过诱导端粒酶活性表达促进人鼻咽上皮细胞永生化。我们的实验为进一步探讨EB病毒诱导人胚鼻咽上皮细胞永生化的作用机制提供了实验基础。

Epstein-Barr病毒潜伏蛋白1通过核转录因子κB诱导鼻咽上皮细胞表达端粒酶活性

利用已建立的原代人胚鼻咽上皮细胞和Tet on LMP1系统等良好的实验模型 ,采用荧光酶报道基因分析法和端粒酶TRAP ELISA技术 ,分别检测EB病毒潜伏蛋白 1(LMP1)诱导的核转录因子κB (NFκB)活性和端粒酶活性 ,从LMP1介导NFκB信号传导途径角度 ,探讨LMP1诱导端粒酶表达的分子机制 .结果表明 ,LMP1可诱导鼻咽上皮细胞表达端粒酶活性 ,将LMP1羧基端胞浆区突变后 ,可同时下调NFκB活性和端粒酶活性 .在Doxycycline诱导LMP1表达状态下 ,NFκB反式激活活性增强 ,同时端粒酶活性升高 ;进一步应用硫代磷酸化修饰的反义NFκBp6 5寡脱氧核苷酸和IκBα的显性负性突变体分别阻断NFκB活性 ,可降低由LMP1诱导的端粒酶活性 .因此 ,NFκB作为LMP1信号传导途径上的枢纽 ,可能介导了LMP1对端粒酶的表达调控 .

HIF-1α基因干扰对低氧环境下人鼻黏膜上皮细胞TGF-β_1、VEGF、bFGF表达的影响及其机制

目的观察低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因干扰对低氧环境下人鼻黏膜上皮细胞(HNEC)转化生长因子β_1(TGF-β_1)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养HNEC,取传3代对数生长期细胞随机分为空白对照组、NC-shRNA组、HIF-shRNA组和低氧诱导组。空白对照组不予任何处理,NC-shRNA组、HIF-shRNA组分别予NC-shRNA、HIF-shRNA转染,并于转染24 h后经CoCl_2化学诱导模拟低氧环境;低氧诱导组仅经CoCl_2化学诱导模拟低氧环境。采用实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测各组HIF-1α、TGF-β_1、VEGF、b FGF mRNA和蛋白表达;采用Western blotting法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt表达。结果与空白对照组比较,低氧诱导组HIF-1α、VEGF、TGF-β_1、bFGF mRNA和蛋白表达均明显升高(P均<0.05);与NC-shRNA组比较,HIF-shRNA组上述指标mRNA和蛋白表达均明显降低(P均<0.05)。与空白对照组比较,低氧诱导组p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高(P均<0.05);与NC-shRNA组比较,HIF-shRNA组p-PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低(P均<0.05);各组PI3K、Akt蛋白表达比较P均>0.05。结论低氧诱导HIF-1α表达可促进人鼻黏膜上皮细胞TGF-β_1、VEGF、bFGF表达,干扰HIF-1α基因则抑制上述因子的表达;HIF-1α对上述因子的调控机制可能与其抑制PI3K/Akt信号通路有关。

LMP1调节鼻咽上皮与鼻咽癌组织中p27与RPLP0蛋白的表达

目的:观察p27和核糖体磷酸化蛋白大亚基P0(RPLP0)蛋白在潜伏膜蛋白1(LMP1)阳性鼻咽癌细胞中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律及临床病理学意义。方法:采用Western blotting分析p27和RPLP0蛋白表达与LMP1表达之间的关系,S-P免疫组织化学染色检测LMP1、p27和RPLP0蛋白在30例鼻咽上皮组织和60例鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达,并分析其临床病理学意义。结果:(1)LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3%和90.0%;(2)与LMP1(-)组织比较,p27蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中表达降低,而RPLP0蛋白表达与之相反;(3)p27蛋白和RPLP0蛋白表达与鼻咽癌患者年龄、LMP1蛋白的表达、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则反之(P<0.05)。结论:LMP1在鼻咽上皮和鼻咽低分化鳞状细胞癌中下调p27和上调RPLP0蛋白的表达;鼻咽癌患者年龄小、LMP1(-)、无淋巴结转移、TNM I期和II期时,p27蛋白表达阳性率较高,而RPLP0蛋白表达则与之相反。

人鼻咽上皮组织中间隙连接蛋白基因表达谱的研究

目的 :研究细胞间隙连接蛋白基因 (Cx)在正常人鼻咽上皮组织中的表达谱 ,在此基础上探索细胞间隙连接蛋白在鼻咽癌组织中的表达 ,为研究鼻咽组织癌变的原因和机理提供新思路。方法 :根据基因库中人间隙连接蛋白基因的mRNA序列 ,合成间隙连接蛋白基因家族中 1 3个基因的PCR引物 ,用RT -PCR的方法检测这些基因在鼻咽组织中的表达。结果 :1 8例正常人鼻咽组织中 ,检出Cx30、31 .1、37、40、43分别有 1 6、1 6、1 7、1 5、1 7例表达 ,Cx2 6、31、32、45分别有 1 0、1 1、9、9例表达 ,Cx36、46、46 .6、50分别有 1、0、1、3例表达。结论 :正常人鼻咽组织中 ,主要表达的间隙连接蛋白为Cx30、31 .1、37、40。

LMP1-CTAR3调节CK19和vimentin蛋白在鼻咽上皮与鼻咽癌中的表达

目的观察LMP1-CTAR3调节的CK19和vimentin蛋白在鼻咽上皮和鼻咽癌中的表达,揭示蛋白质之间的相互作用规律。方法采用SP免疫组化染色检测LMP1、CTAR3、CK19和vimentin在30例鼻咽上皮组织和60例鼻咽低分化鳞状细胞癌中的表达。结果①LMP1在鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌中的阳性表达率分别为73.3%和90%;②与LMP1(-)组织比较,CK19蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌中的表达降低(P<0.05);③与LMP1(-)组织比较,vimentin蛋白在LMP1(+)的鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌的表达升高(P<0.05)。结论 LMP1-CTAR3在鼻咽上皮组织与鼻咽低分化鳞状细胞癌中下调CK19蛋白和上调vimentin蛋白的表达。

细颗粒物(PM2.5)降低人鼻黏膜上皮细胞闭合蛋白(occludin)的表达

目的探讨细颗粒物(PM2.5)对人正常鼻黏膜上皮细胞间闭合蛋白(occludin)表达及分布的影响。方法采用(0、 50、 100、 200、 400、 500、 800、 1000)μg/mL PM2.5处理体外培养的正常人HNEpC鼻黏膜上皮细胞,采用CCK-8法检测细胞活力,确定最佳处理剂量;后续采用(200、 400、 500)μg/mL PM2.5处理HNEpC细胞,用免疫荧光细胞化学染色法检测细胞occludin的表达和分布情况,实时荧光定量PCR检测occludin的mRNA水平, Western blot法检测occludin蛋白水平。结果与阴性对照组(0μg/mL PM2.5)相比,各剂量PM2.5处理鼻黏膜上皮细胞24 h和48 h后,细胞活性均降低,且细胞活性与PM2.5剂量呈负相关。与阴性对照组相比, 200μg/mL PM2.5组,细胞形态及细胞间occludin蛋白分布表达无明显改变; 400μg/mL PM2.5组,细胞形态变为梭形,细胞间隙增宽; 500μg/mL PM2.5组,细胞数量明显减少,细胞形态变为长梭形,细胞间隙增宽明显;除200μg/mL PM2.5处理细胞24 h外,其余各组细胞occludin mRNA及蛋白水平均下调,且occludin蛋白表达水平呈时间依赖性。结论 PM2.5可降低正常人HNEpC鼻黏膜上皮细胞活性、降低occludin的表达和分布。

EBV诱导鼻咽上皮细胞逃避老化期过程中端粒酶活化和p16^(INK4A)失活

目的 探讨EB病毒诱导人鼻咽上皮细胞逃避老化期的分子机制。方法 SA - β -Gal染色法观察人鼻咽上皮细胞逃避老化期 ;PCR -银染法、S -P免疫组化法分别检测端粒酶活性和 p16 INK4A、p2 1WAF1/CIP1和 p5 3的表达情况。 结果 EB病毒感染组细胞表达SA - β Gal活性下降 ,并表达端粒酶活性 ,而 p16 INK4A蛋白不表达 ,但 p2 1WAF1/CIP1和 p5 3蛋白表达无明显变化。 结论 人鼻咽上皮细胞逃避老化期过程中EB病毒激活端粒酶和抑制 p16