广东鼻咽癌患者ATM基因127464G/A位点单核苷酸多态性研究

目的:研究ATM基因单核苷酸多态性位点127464G/A与鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的发生关系。方法:应用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合测序方法对38例广东NPC患者及40例对照样本ATM基因127464G/A基因分型。结果:在NPC患者及对照个体中G/A杂合型频率分别为57.9%(22/38)、62.5%(25/40),G/G纯合型频率分别为13.2%(5/38)、17.5%(7/40),A/A纯合型频率分别为28.9%(11/38)、20%(8/40)。结论:体细胞ATM基因127464G/A位点变异在广东NPC患者与正常人群中分布差异无统计学意义,推测其与广东NPC的遗传易感性相关性不大。

实时荧光定量PCR法检测BARF1基因在鼻咽癌中的表达

目的通过检测EB病毒编码的BARF1基因在鼻咽癌组织中的表达水平,探讨BARF1基因与鼻咽癌之间的关系。方法应用实时荧光定量PCR法对BARF1基因在鼻咽癌、头颈部其他恶性肿瘤及慢性鼻咽炎病人组织中的表达进行检测。结果BARF1基因在鼻咽癌、头颈部其他恶性肿瘤及慢性鼻咽炎组织中的阳性表达率分别为100%、94.4%和80%,三者组间进行比较差异无统计学意义(P>0.05);鼻咽癌组织中BARF1基因的相对表达强度中位数为11.87,头颈部其他恶性肿瘤为0.07,慢性鼻咽炎组织为0.02。BARF1基因在鼻咽癌组织与头颈部其他恶性肿瘤及慢性鼻咽炎组织中的表达强度进行比较,均有统计学意义(P<0.05)。结论BARF1基因在各种组织中存在着普遍的表达,而在鼻咽癌组织中存在着较高的表达强度,提示BARF1基因在鼻咽癌细胞癌变过程中可能发挥重要作用。

中国四川人群DNA修复基因X射线修复交叉互补基因1-Arg399Gln多态性与鼻咽癌风险的关系

目的:观察中国四川人群X射线修复交叉互补基因1-Arg399Gln多态性,分析其与鼻咽癌发病风险的关系。方法:实验于2005-11/2006-04在泸州医学院分子生物学实验室完成。采用病例-对照研究方法,病例组和对照组均不采取任何干预措施,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性检测220例鼻咽癌患者及性别、年龄(50±4)岁相匹配的250例正常人群X射线修复交叉互补基因1-Arg399Gln基因型频率分布。通过χ2检验、非条件Logistic回归分析相对危险度近似估计值比值比,以估计各研究因素与鼻咽癌发病风险的关系,及基因多态性与环境是否存在交互作用,采用SPSS12.0软件包完成。结果:①病例组和对照组Arg399Gln基因型Arg/Arg,Arg/Gln和Gln/Gln频率分布差异无显著性意义。②Arg399Gln多态性未增加个体患鼻咽癌的风险(P>0.05,OR=0.814,95%CI=0.325～2.037和OR=0.830,95%CI=0.254～2.710)。③EB病毒感染和X射线修复交叉互补基因1-Arg399Gln多态性存在交互作用(Wald=4.391,P=0.036),基因型为Arg/Gln和Gln/Gln同时伴有EB病毒感染的个体患鼻咽癌的风险增加。结论:X射线修复交叉互补基因1-Arg399Gln多态性与鼻咽癌的发生无相关性,但与EB病毒感染存在交互作用,基因型为Arg/Gln和Gln/Gln同时伴有EB病毒感染的个体患鼻咽癌的风险增加。

应用快速引物原位标记技术检测鼻咽癌染色体异常(英文)

目的探讨快速引物原位标记技术检测鼻咽癌染色体异常的可行性。方法采用快速引物原位标记技术,分别以人3号和7号染色体特异性寡核苷酸作引物,检测15例鼻咽癌和5例鼻咽正常冰冻组织切片细胞染色体,染色体异常标准以标记信号≤1的细胞比例≥65%时视为染色体丢失,标记信号≥3的细胞比例≥6.5% 作为染色体拷贝数增加。结果鼻咽癌组织细胞3号染色体标记率为88.6%,10例(66.7%)染色体拷贝数增加;7号染色体标记率87.4%,5例(33.3%)染色体丢失;其中4例同时存在3号染色体拷贝数增加和7号染色体丢失。正常组织3号和7号染色体标记率分别为92%和91.8%,二倍体细胞分别为43.2%和43.6%,与鼻咽癌比较差异均有统计学意义(P<0.05),未发现三体细胞。结论快速引物原位标记技术可用于鼻咽癌冰冻组织切片中染色体的检测,染色体数目的改变可能有助于鼻咽癌的诊断。

鼻咽癌体外传代细胞株SUNE中EBV-LMP_1全基因的扩增

用长片段高保真度ＰＣＲ扩增系统（ｅｘｐａｎｄＴＭｈｉｇｈｆｉｄｅｌｉｔｙＰＣＲｓｙｓｔｅｍ）从鼻咽癌（ＮＰＣ）体外传代细胞株ＳＵＮＥ中扩增出ＥＢ病毒（ＥＢＶ）潜伏膜蛋白（ＬＭＰ１）全基因，经凝胶电泳分析和ＤＮＡ斑点杂交进行鉴定。扩增片段长度为３．４３ｋｂ，相当于Ｂ９５－８细胞ＥＢＶ基因序列位置为１７００３３～１６６６０８ｎｔ，包括ＬＭＰ１基因的上游启动子／增强子序列、ＬＭＰ１编码序列的３个外显子、两个内含子及下游ｐｏｌｙＡ信号序列。ＬＭＰ１全基因的扩增对于深入研究ＬＭＰ１基因的结构与功能以及ＬＭＰ１在ＮＰＣ发生发展中的作用机制具有十分重要的价值。

鼻咽癌患者黏膜组织中Cyclin D1和p16基因的表达及其临床意义

【目的】探讨鼻咽癌（Nasopharyngeal Carcinoma，NPC）患者中CyclinD1和p16基因的表达情况及其临床意义。【方法】选取2009年1月至2015年12月期间于本院就诊的未经放化疗治疗的70例NPC患者以及同期送检的55例慢性炎症患者鼻咽黏膜组织标本作为研究对象，采用免疫组化SP法测定其组织中Cyclin D1和p16蛋白表达，PCR检测p16基因缺失情况。[结果]NPC肿瘤组织中Cyclin D1蛋白的免疫组化评分及表达阳性率高于慢性炎症组织，而p16蛋白的免疫组化评分及表达阳性率低于慢性炎症组织，差异均具有统计学意义（P〈0．05）；高等级TN分期及临床分期的患者Cyclin D1表达阳性率高于低等级TN分期及临床分期的患者的阳性率，而p16表达阳性率低于低等级TN分期及临床分期的患者的阳性率，差异均具有统计学意义（P〈0．05）；NPC组患者p16基因缺失发生率（34．3％）高于慢性炎症组患者缺失发生率（1．8％），差异具有统计学意义（P〈0．05）。【结论】NPc组织中Cyclin D1高表达、p16基因缺失及p16低表达与NPC的发生以及预后具有密切关系。

人鼻咽癌组织定向cDNA文库的构建

目的 快速构建成人鼻咽癌组织cDNA文库。方法 从人鼻咽癌组织分离总RNA ,以含有sfiIB酶切位点的oligo(dT)引物合成第一链cDNA ,以含sfiIA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD PCR扩增双链cDNA ,双链cDNA经sfiI(IA&IB)酶切 ,以CHROMASPIN 4 0 0柱分级分离cDNA ,收集符合需要的cDNA片段并纯化 ,随后将之与λTriplEx2载体连接经体外包装成噬菌体cDNA文库。 结果 经检测共获得 3.6 4× 10 6个重组子 ,重组率 >94 % ,文库经扩增后滴度为 3.8× 10 9pfu/ml。结论 用SMART方法构建的鼻咽癌组织cDNA文库质量较高 。

原发性鼻咽癌中高频率的4q增多和1p丢失

目的 阐明中国广东籍患者原发性鼻咽癌 (NPC)的遗传学变化。方法 用比较基因组杂交技术 (CGH)检测 17例原发性NPC遗传物质的增多和丢失情况。结果 在半数以上患者中发现4q增多和 1p丢失。其他较为常见的染色体变化是 12q、1q、2q、3q和 8q增多 ,以及 3p、11q、14q、15q、13q、Xq、9q、10p、10q和 16q丢失。结论 广东原发性NPC的遗传学改变为 4q、12q和 1q增多以及 1p、3p、11q和 14q丢失 ,这些区域可能含有与NPC发病有关的癌基因与抑癌基因。

热休克蛋白90β(HSP90β)真核表达载体的构建及体外表达

目的克隆人热休克蛋白90β(HSP90β)基因,构建其真核表达载体pcDNA3.1(+)/hHSP90β,并检测其在体外的表达情况,为下一步研究鼻咽癌中HSP90β功能奠定基础。方法提取鼻咽癌总RNA,并经RT-PCR获得hHSP90βcDNA。用纯化的hHSP90βcDNA与PGEM Easy T Vector连接,构建中间载体PGEM-hHSP90β。将PGEM-hHSP90β及pcDNA3.1(+)质粒经AflII和Xbal双酶切、胶回收纯化酶切片段后,体外连接酶切片段,构建hHSP90β真核表达载体pcDNA3.1(+)/hHSP90β。经酶切和测序后,用脂质体包裹转染COS细胞,采用RT-PCR和Western blot检测HSP90β的表达。结果酶切及测序鉴定表明,hHSP90β与pcDNA3.1(+)体外重组成功,命名为pcDNA3.1(+)/hHSP90β。该表达质粒在体外转染COS细胞后可表达HSP90β分子。结论采用体外重组技术,成功地将人HSP90β插到了真核表达载体pcDNA3.1(+)中;pcDNA3.1(+)/hHSP90β表达质粒能在体外表达HSP90β分子。

LIG4及HSPB1基因单核苷酸多态性与鼻咽癌预后的关系

目的 探讨LIG4和HSPB1基因单核苷酸多态性与鼻咽癌预后的关系.方法 采用Taqman real-time PCR对168例鼻咽癌患者外周血DNA进行单核苷酸多态性的基因分型.以单因素和多因素Logistic回归计算比值比（OR）及95％可信区间（CI）表示相对危险度;单变量分析用Long-rank检验,多变量分析用COX比例风险模型.结果 单因素分析及纳入年龄、性别、吸烟状态、饮酒、病理类型及临床分期多因素分析显示LIG4 C/T（rs1805388）和HSPB1 C/G（rs2868371）位点多态性与鼻咽癌复发、转移及总生存无关.结论 LIG4 rs1805388和HSPB1 rs2868371基因多态性与鼻咽癌预后无关.

xCT在鼻咽癌细胞体外迁移侵袭中的作用及机制

目的 观察xCT基因对鼻咽癌细胞侵袭转移能力的影响并初步探寻其可能机制.方法 实时荧光定量PCR和Western blot检测xCT在鼻咽癌高转移性细胞5-8F与低转移性6-10B细胞中的表达差异;建立过表达xCT的6-10B细胞和敲低xCT的5-8F细胞,用划痕实验及Transwell实验观察干预xCT对细胞迁移侵袭能力的影响;用Western blot检测各组细胞中基质金属蛋白酶1（MMP1）表达的改变.结果 鼻咽癌高转移性细胞5-8F中xCT的mRNA及蛋白表达量均高于低转移性6-10B细胞;外源性过表达xCT增强6-10B细胞的迁移侵袭能力,xCT表达沉默或功能抑制能降低5-8F细胞的迁移侵袭能力;5-8F细胞中MMP1的表达明显高于6-10B细胞,且其表达水平与xCT呈正相关.结论 xCT与鼻咽癌的侵袭转移密切相关,xCT能增强NPC细胞的迁移侵袭能力;xCT可能通过上调MMP1来介导NPC细胞的增殖及侵袭转移.