儿童鼻咽部定植菌类型和分布特征对肺炎病情严重程度免疫状态及炎症细胞因子水平的影响

目的观察儿童鼻咽部定植菌的类型和分布特征,分析其与肺炎病情严重程度、免疫状态及炎症细胞因子水平的相关性。方法选取2021年1月1日—2022年10月31日温州医科大学附属第二医院住院部收治的400例肺炎患儿进行研究,排除检出阴性和脱落情况,最终选取180例患儿为研究对象,依据病情严重程度分为轻度组和重度组,每组各90例患者。观察两组患儿鼻咽部定植菌分布情况,观察两组患儿免疫因子和抗炎因子水平,分析鼻咽部定植菌差异与患儿免疫状态的相关性,分析鼻咽部定植菌与患儿抗炎水平的相关性。结果两组患儿鼻咽部定植菌主要包括肺炎链球菌、卡他布兰汉菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌及其他定植菌等,其中轻度组以上各种菌型比例分别为15.56%、22.22%、32.22%、25.56%及4.44%,重度组比例分别为37.78%、10.00%、16.67%、21.11%及14.44%。重度组肺炎链球菌比例高于轻度组,轻度组流感嗜血杆菌比例高于重度组,两组比较差异均有统计学意义(χ^(2)=11.364、5.896,均P<0.05)。轻度组免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)及免疫球蛋白M(IgM)水平[(0.97±0.17)g/L、(6.43±0.96)g/L及(1.12±0.32)g/L]均显著低于重度组[(1.32±0.99)g/L、(8.32±0.98)g/L及(1.58±0.46)g/L],白介素1β(IL-1β)、白介素10(IL-10)水平[(15.87±2.17)ng/L、(13.76±2.54)ng/L]显著高于重度组[(8.96±3.27)ng/L、(7.65±2.16)ng/L],降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)水平[(14.58±3.12)μg/L、(16.56±3.19)mg/L]显著低于重度组[(28.19±3.47)μg/L、(29.14±3.51)mg/L],差异均有统计学意义(t=3.306、13.070、7.788、16.704、17.385、27.669及25.162,均P<0.05)。相关性分析结果显示,鼻咽部定植菌与患儿免疫因子水平均呈正相关关系(均P<0.05),与IL-1β、IL-10均呈负相关关系(均P<0.05),与PCT、CRP均呈正相关关系(均P<0.05)。结论肺炎患儿疾病严重程度不同时鼻咽部定植菌分布也有所不同,且鼻咽部定植菌差异与患儿免疫功能和炎症细胞因子水平具有一定相关性,可作为肺炎患儿干预的临床依据。

减毒沙门菌为载体的PspA优势抗原组合DNA疫苗对肺炎链球菌定植的防御作用评价

目的评价以减毒沙门菌为载体携带PspA不同家族亚类优势抗原的肺炎链球菌DNA疫苗对不同侵袭性肺炎链球菌定植的防御作用,探讨优化肺炎链球菌DNA疫苗增强鼻咽部黏膜免疫的策略。方法应用分子克隆技术,在前期研究基础上,制备携带PspA不同家族亚类优势抗原(PspA-Fam1-Clade1和PspA-Fam2-Clade3)的减毒沙门菌为宿主菌的非抗性基因筛选的真核质粒-宿主致死平衡系统,应用RT-PCR和免疫印迹技术检测优势抗原的表达情况,并在含或不含DAP的SOB培养基中传代培养,抽提质粒PCR检测疫苗携带抗原的稳定性。以PBS为对照,口服免疫接种BABL/c小鼠,ELISA检测鼻咽部sIgA的水平;应用小鼠鼻咽部定植模型检测疫苗对不同侵袭性肺炎链球菌定植的防御作用。结果成功构建出携带PspA不同家族亚类优势抗原(PspA-Fam1-Clade1和PspA-Fam2-Clade3)的减毒沙门菌为宿主菌的非抗性基因筛选的真核质粒-宿主致死平衡系统,且稳定性好;免疫小鼠鼻咽部抗PspA-Fam1-Clade1和PspA-Fam2-Clade3的特异性sIgA的水平显著高于对照组(P<0.01);免疫小鼠鼻咽部肺炎链球菌定植模型的菌落计数较对照组明显减少(P<0.01)。结论以减毒沙门菌为载体携带PspA不同家族亚类优势抗原是增强肺炎链球菌DNA疫苗鼻咽部黏膜免疫的优化策略。

轻型链球菌临床分离株psaA基因敲除株的构建及其毒力影响的初步研究

目的构建轻型链球菌(S.mitis)临床分离株S.mitis008肺炎链球菌表面蛋白A(psaA)基因敲除菌株S.mitis00801,并检测其生长及毒力影响,为进一步分析轻型链球菌属细菌间psaA基因水平转移的功能学意义奠定基础。方法采用长臂同源多聚酶链反应技术(LFH-PCR)构建含红霉素耐药基因(erm)片段及psaA基因上、下游同源序列的连接片段,并转化至S.mitis008中,在含红霉素的平板上筛选psaA基因敲除菌株,并采用PCR鉴定;进一步观察psaA基因敲除株S.mitis00801体外生长情况,并利用小鼠模型观察S.mitis008和S.mitis00801鼻咽部定植能力的差异。结果 PCR结果均证实轻型链球菌psaA基因敲除菌株S.mitis00801构建成功;S.mitis008和S.mitis00801体外生长情况比较无差异;在轻链球菌CBA/n小鼠鼻咽部定植模型中,psaA基因敲除菌株S.mitis00801定植能力较未敲除株S.mitis008明显减少,存在统计学差异(P<0.01)。结论 LFH-PCR技术构建psaA基因敲除菌株S.mitis00801方法切实可行,psaA基因的敲除对细菌的体外生长无影响,但降低了细菌在体内鼻咽部定植的能力。