应用巢氏PCR方法快速检测猪鼻拭子样品中产毒素多杀性巴氏杆菌

根据产毒素多杀性巴氏杆菌的toxA基因序列,设计了2对特异性引物,扩增的片段大小分别为864和447 bp,从而建立了一种能直接从猪鼻拭子中快速检测产毒素多杀性巴氏杆菌的巢氏PCR方法。该方法能检出26CFU菌量以上的模板DNA,且不能从猪的其它7种常见病原菌扩增到特异性条带。通过对5个不同地区阳性猪群中采集的146份临床鼻拭子样品进行巢氏PCR检测和细菌分离鉴定,结果2种方法同时为阳性的样品有44份,同时为阴性的样品有97份,另有5份样品只有巢氏PCR检测为阳性,巢氏PCR检测与细菌分离鉴定的符合率为96.58%。试验表明:巢氏PCR方法能快速、灵敏地从猪鼻拭子样品中检出产毒素多杀性巴氏杆菌,适合临床进行大规模病原学检测,具有良好的应用前景。

猪鼻拭子样品采集及制备方法的标准化

为了黏膜样本采集所用材料及方法标准,并增强所检测样本数据的可比性与稳定性。以猪鼻拭子样品为研究对象,结合猪鼻腔的解剖结构以及所采集样品的特殊性,对猪鼻拭子的采集与处理方法进行探讨并标准化。结果表明:通过标化的方法对所采集的116份猪鼻拭子样本进行总蛋白浓度测定,发现所有鼻拭子样本的总蛋白均值为(6.92±0.41)mg/mL,变异系数为32.58%;对其中7头猪在不同时间采集鼻拭子测定总蛋白,结果同一头猪的检测数据变异系数除1头为13.95%外,其余均>10%。表明标化的猪鼻拭子采集及制备方法使检测结果具备较好的稳定性与科学性。

猪鼻拭子与支气管肺泡灌洗液用于呼吸道分泌性抗体检测

黏膜免疫是机体抵抗细菌或病毒感染的第一道防线[1]。因此，检测黏膜免疫反应对评估黏膜接种方案和病原与宿主之间的相互关系具有重要的意义[2]。目前，支气管。肺泡灌洗液样本（BALF）在下呼吸道样本的采集中占有重要的地位，也是目前评价呼吸道黏膜免疫的常用样本。

咽拭子、鼻拭子、痰液中SARS-CoV-2核酸检测结果一致性及检出率分析

目的通过对不同类型标本严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)核酸检测结果的一致性及检出率分析,明确检测结果较优的标本类型。方法回顾分析郑州市疾病预防控制中心自开展SARS-CoV-2核酸检测以来所有同时采集自同一被检者的不同种类的标本核酸检测结果,利用McNemarχ~2检验分析不同标本病毒核酸阳性检出率的统计学差异;用kappa检验分析不同标本核酸检测结果的一致性。结果本研究共有61例被检者同时进行2种及以上标本的核酸检测,其中检测咽拭子标本158人次,痰液标本144人次,鼻拭子标本35人次;ORF1a/b基因和N基因同时检出率最高的为痰液标本(71.5%),其次是鼻拭子标本(34.3%),咽拭子标本检出率最低(29.1%)。同时进行痰液标本和咽拭子标本检测的有144人次,2者ORF1a/b基因检出率分别为75.0%、33.3%,N基因检出率分别为89.6%、42.4%,差异均有统计学意义(P均<0.05),ORF1a/b基因检出结果中2者间一致性差(k<0.4),N基因检出结果中2者间不存在一致性(k<0),痰液标本病毒核酸阳性检出率明显高于咽拭子标本;同时进行痰液标本和鼻拭子标本检测的有22人次,2者ORF1a/b基因检出率分别为63.6%、27.3%,N基因检出率分别为81.8%、40.9%,差异均有统计学差异(P均<0.05),ORF1a/b基因检出结果中2者间一致性差(k<0.4),N基因检出结果中2者间不存在一致性(k<0),痰液标本病毒核酸阳性检出率亦高于鼻拭子标本;同时进行鼻拭子标本和咽拭子标本检测的有35人次,鼻拭子标本病毒核酸阳性检出率高于咽拭子标本,2者ORF1a/b基因检出率分别为40.0%、25.7%,N基因检出率分别为51.4%、34.3%,但差异均无统计学意义(P均>0.05),一致性检验结果则表明2者一致性差(k均<0.4),因此2者在病毒核酸阳性检出率方面差异无统计学意义,但在核酸检出与未检出的结果方面存在差异,即检测结果可相互补充以提高检出率。结论痰液标本病毒核酸阳性检出率高于咽拭子标本和鼻拭子标本,在人群筛查中3种标本检测结果可互相补充验证以减少漏诊。

副猪嗜血杆菌在感染猪体内的分布及其在血液、鼻拭子中载量的变化

为了解副猪嗜血杆菌感染猪后的组织分布和排毒情况,应用建立的SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法,分析了副猪嗜血杆菌在猪各组织的分布及其在血液、鼻拭子中载量的变化情况。结果显示:高剂量感染组出现明显的临床症状,且平均体温高于其他各组1~2℃;对试验组各组猪内脏组织进行检测发现,副猪嗜血杆菌主要集中在气管、扁桃体、颌下淋巴结、肺等组织中,不同组织器官中的细菌载量也存在着一定的差异;血液中并未检测到副猪嗜血杆菌,但在感染的8~20 d高剂量组鼻拭子中副猪嗜血杆菌的载量显著高于其他组。本文研究了副猪嗜血杆菌感染仔猪后的临床症状和体外排毒情况,为以后副猪嗜血杆菌的防治及致病机理研究奠定一定理论基础。

不同方法检测急性呼吸道感染患儿咽拭子与鼻拭子标本诊断呼吸道合胞病毒感染的评价

目的比较不同方法检测急性呼吸道感染患儿咽拭子与鼻拭子标本的检测结果。方法收集2011年3月-2012年2月本院临床诊断为急性呼吸道感染的315名患儿的咽拭子和鼻拭子标本，采用实时荧光定量qPCR法和传统病毒培养鉴定两种方法同时检测病毒核酸或抗原，比较其结果。结果病毒培养鉴定方法中的鼻拭子和咽拭子阳性率分别为12．1％、6．7％，鼻拭子阳性率高于咽拭子（P〈0．01）。qPCR检测中的鼻拭子阳性率分别为17．1％和6．9％，鼻拭子阳性率高于咽拭子（P〈0．01）。鼻拭子和咽拭子标本分别用两种检测方法进行比较，qPCR的阳性率均高于病毒培养鉴定方法（P〈0．01）。以咽拭子培养与鉴定呼吸道合胞病毒（RSV）结果为标准，鼻拭子培养与鉴定、鼻拭子qPCR检测、咽拭子qPCR检测的敏感性分别为57％、91％、24％；特异性分别为91％、88％、94％。结论鼻拭子标本检测RSV的敏感度高于相应的口咽拭子，且qPCR方法检测RSV的敏感度高于传统病毒培养鉴定法。

鼻拭子和咽拭子在儿童流行性感冒病毒抗原检测中的比较研究

目的比较鼻拭子和咽拭子检测儿童流行性感冒(流感)样病例的流感病毒抗原检出情况。方法回顾分析2020年2月1日—2月29日在湖南省儿童医院就诊的320例有流感样症状患儿的临床资料;同时采集所有患儿鼻拭子和咽拭子,采用胶体金法检测甲型、乙型流感病毒抗原,对检测结果为阳性的患儿留取标本进行荧光聚合酶链反应(PCR)验证;比较两种拭子检测结果的差异。结果320例患儿的检测样本中,鼻拭子检出阳性率明显高于咽拭子〔20.3%(65/320)比14.1%(45/320),P<0.05〕;经荧光PCR验证的34例乙型流感病毒感染患儿中,鼻拭子抗原检测阳性率为100.0%(34/34),明显高于咽拭子抗原检测阳性率〔52.9%(18/34)〕,差异有统计学意义(P<0.01)。0~2岁组、3~5岁组、6~17岁组患儿的阳性检出率分别为14.4%(32/222)、35.7%(25/70)、28.5%(8/28),3组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论采集鼻拭子可以提高流感病毒抗原阳性检出率,特别是对于乙型流感病毒,可以对患儿进行早发现、早隔离,并及时给予抗病毒治疗。

鼻拭子中异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌的流行情况

目的了解我院住院患者鼻腔拭子中异质性万古霉素中介的金黄色葡萄球菌(hVISA)的发生率。方法收集临床57例来自鼻拭子的金黄色葡萄球菌标本,分别采用浓度为2mg/L和4mg/L万古霉素脑心浸液琼脂平皿(BHIA2V、BHIA4V)、浓度为5mg/L替考拉宁脑心浸液琼脂平皿(BHIA5T)和宏量E-test法(MET)进行hVISA筛选,同时应用改良菌群分析-曲线下面积(PAP-AUC)作为hVISA检测的金标准进行确证,从而确定我院hVISA的发生率。结果BHIA2V、BHIA4V和BHIA5T筛选阳性菌株分别为33、0和5株,MET方法阳性菌株数为0,PAP-AUC确证hVISA菌株数为0,因此我院鼻拭子中未分离出hVISA。结论BHIA2V筛选方法假阳性数太高,不适合用于临床hVISA初筛;MET的价格比较高,不适合常规开展;因此我们建议将BHIA4V和BHIA5T作为临床上hVISA的常规筛选方法,筛选阳性结果通过MET方法进行验证,最后通过PAP-AUC确证。虽然从我院鼻拭子中未检出hVISA,但是金黄色葡萄球菌的分离率是比较高的,尤其是ICU和呼吸科监护室的住院患者,这仍然需要引起临床高度重视,合理使用抗生素尤其是糖肽类药物,避免hVISA和VISA的发生。

肛拭子标本和鼻拭子标本核酸检测用于新冠肺炎诊断比较

目的探讨新冠肺炎确诊病例肛拭子标本和鼻拭子标本核酸检测结果的差异对比。方法选取医院2020年2月至2021年9月收治的新冠肺炎确诊患者5例(检次72次),依据不同检测方式划分成观察组(肛拭子标本核酸检测)及对照组(鼻拭子标本核酸检测),各36次。结果72次肛拭子和鼻拭子的标本中,经实施新冠核酸2019-nCoV检测,发现鼻拭子阳性检测率为28次(77.78%),肛拭子阳性检测率为32次(88.89%),显示出对确诊的新冠肺炎患者,肛拭子的检测阳性率高于鼻拭子(P<0.05);肛拭子和鼻拭子标本同时阳性20次,经分析取得的核酸检测结果显示出肛拭子标本Ct值>鼻拭子Ct值标本共7次,<鼻拭子Ct值标本共12次,=鼻拭子Ct值标本共1次。结论与鼻拭子相比,肛拭子的阳性率高于鼻拭子标本,获得的病毒载量更高,漏检率低,有利于病毒的检出,建议优先采集新型状肺炎患者的肛拭子标本。

非瘟检测样本比较:口鼻拭子、口腔液和鼻肛拭子

关于非洲猪瘟早期诊断的样本选择,笔者早就认为:鼻拭子比血液、血清在敏感性和实验精度方面占优势;鼻拭子/口腔液比血液/血清能更早的被监测出非瘟抗原;当时未知鼻拭子与口腔液的优劣,得到的反馈倾向于口腔液+更适合作为早期监测样本。

鼻拭子与咽拭子两种取样方法在新型冠状病毒肺炎核酸筛检中的比较研究

目的探讨新型冠状病毒肺炎(简称新冠肺炎)病毒核酸检测中相对方便安全及敏感度高的方法。方法对武汉市红十字会医院100例新冠肺炎病例同时留取咽拭子和鼻拭子。比较两种方法取样后样本核酸检测的阳性率。结果咽拭子取样标本SARS-CoV-2病毒核酸阳性检出率为54%,而鼻拭子取样标本的病毒核酸阳性率为89%。鼻拭子标本的病毒核酸阳性率高于咽拭子采样标本,差异有统计学意义(χ~2=3.850 4,P=0.049 7)。结论新冠肺炎患者取鼻拭子进行核酸检测的阳性检出率具有明显优势。临床应尽可能使用鼻拭子而非咽拭子作为新冠肺炎患者的优选筛检方式。

鼻拭子和痰标本在新型冠状病毒核酸检测的对比研究

目的分析新型冠状病毒肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)患者鼻拭子和痰标本病毒核酸检测结果,为临床采样方式的选择提供参考依据。方法收集深圳市第三人民医院新型冠状病毒肺炎78例患者共170例次同一天鼻拭子与痰配对标本,进行实时荧光PCR核酸检测,分析比较鼻拭子和痰标本检测情况。结果 78例患者中男性33例,女性45例,年龄1~86岁,中青年(20~<60岁)患者居多(占59.0%),其次为老年(≥60岁)患者(占33.0%),4例为儿童。170例次配对标本中,鼻拭子和痰标本核酸阳性的阳性率分别为34.7%(59/170)和46.5%(79/170),差异有统计学意义(P<0.01)。鼻拭子和痰标本同时阳性共46例次,结果显示27例痰标本Ct值低于鼻拭子Ct值(占58.7%), 17例痰标本Ct值高于鼻拭子Ct值(占37.0%),2例痰标本Ct值等于鼻拭子Ct值(占4.3%),提示痰标本的病毒载量比鼻拭子的病毒载量更高。结论在新型冠状病毒肺炎患者病毒核酸检测中,痰标本的阳性率高于鼻拭子标本,且漏检率低,痰标本的病毒载量比鼻拭子的病毒载量更高,更有利于病毒核酸的检出,同时患者更易接受,建议有痰患者优先采集痰标本。

新型冠状病毒肺炎患者肛拭子和鼻拭子核酸检测结果比较分析

目的比较新型冠状病毒肺炎(COVID-19)确诊病例肛拭子标本和鼻拭子标本核酸检测结果的差异。方法回顾性分析深圳市第三人民医院COVID-19患者不同时间点同步采集肛拭子和鼻拭子检测核酸的结果。结果共有31例COVID-19患者46次同一时间采集的肛拭子和鼻拭子的检测结果。发病早期(0~3 d),肛拭子阳性时,鼻拭子阳性率高达4/5,随着病程延长,鼻拭子阳性率越来越低,病程进展后期(≥16 d),肛拭子阳性确诊病例的鼻拭子阳性率仅为28.6%(6/21)。结论在制定解除隔离出院的标准时,除了留取两次呼吸道标本,建议将肛拭子标本新型冠状病毒核酸检测阴性作为重要参考依据。

咽拭子和鼻拭子标本新型冠状病毒核酸检测效果分析

目的分析COVID-19病例咽拭子与鼻拭子标本新型冠状病毒(novel coronavirus 2019,2019-nCoV)核酸检测效果。方法对541例珠海市疑似病例和密切接触者,同时采集咽拭子和鼻拭子标本,用实时荧光PCR技术检测2019-nCoV核酸,分析两类标本核酸检出阳性率和靶标ORF1ab和N基因Ct值。结果共43例核酸确诊阳性,咽拭子共检测出35例阳性,阳性率6.47%,鼻拭子共检出33例阳性,阳性率6.10%,阳性率差异无统计学意义(χ^(2)=0.06,P=0.80),诊断一致性较好(Kappa=0.72)。两类标本ORF1ab和N基因的Ct值无差异。结论COVID-19病例鼻拭子和咽拭子标本采用实时荧光PCR技术检测2019-nCoV病毒核酸效果无差别。

不同样本保存条件对鼻咽拭子呼吸道病原体的影响分析

研究不同样本保存条件下对鼻咽拭子呼吸道病原体的影响效果。方法 选择2022年1月至2023年12月期间收治的12例病例样本,在不同条件下保存不同时间,对各种保存条件下样本通过实时荧光定量PCR技术检测的结果。结果 室温20℃,和保存0h下相比,腺病毒以及支原体病毒保存6h、12h、24h下的Ct值比较(P>0.05),保存48h、96h、192h下Ct值比较(P<0.05);甲流病毒、乙流病毒保存6h、12h下,Ct值比较(P>0.05),保存24h、48h、96h、192h时的Ct值会明显增加(P<0.05)。在室温下保存下,腺病毒、支原体病毒、甲流病毒以及乙流病毒样本的阳性减弱程度存在明显差异。在4℃保存条件下,和0h相比,腺病毒以及支原体病毒在保存6h、12h、24h、48h、96h下Ct值比较(P>0.05),保存192h后,样本的Ct值会显著提升(P<0.05),甲流病毒以及乙流病毒在保存6h、12h、24h、48h下,其Ct值比较(P>0.05),保持96h、192h下,其Ct值会提升。在4℃的保存在,腺病毒以及支原体病毒的样本阳性程度会逐渐降低,甲流病毒以及乙流病毒可能会产生假阴性反应;在-20℃的保存在,和保存0h相比,腺病毒以及支原体病毒在6h、12h、24h、48h、96h、192h下,Ct值比较(P>0.05),甲流病毒以及乙流病毒在保存6h、12h、24h、48h、96h下,Ct值比较(P>0.05),但在保存192h下,其Ct值会显著改变(P<0.05);在-80℃的保存下,和保存0h相比,腺病毒、支原体病毒、甲流病毒以及乙流病毒在保存192h下,Ct值比较(P>0.05)。结论 鼻咽拭子呼吸道病原体中,在不同样本保存条件下,其Ct值各不相同,在保存运输样本过程中,应尽可能的保持低温保存,减少保存时间,避免影响检验结果。

鼻拭子棉签安置胃管用于鼻中隔偏曲患者的效果

探讨鼻拭子棉签安置胃管用于鼻中隔偏曲患者的效果。方法 将2022年1月-2023年1月本院收治的30例鼻中隔偏曲患者按时间先后分为两组,将其中2022年1月—2022年5月收治的15名患者设为对照组,使用常规方法留置胃管,2022年6月—2023年1月收治的15名患者设为观察组,使用鼻拭子棉签安置胃管。比较两组留置胃管成功率及并发症发生率。结果 观察组胃管无1例失败,置管成功率达到100%,与另一组相比有明显差异意义(P<0.05),观察组带管期间未出现并发症,而对照组出现6例,二者之间差异较大(P<0.05)。结论 运用鼻拭子棉签安置胃管可提高脑部疾病合并鼻中隔偏曲患者的置管成功率,减少意外创伤,防止并发症发生,值得临床广泛使用与推广。

鼻咽拭子与口咽拭子呼吸道病毒抗原检出率比较

目的比较鼻咽拭子与口咽拭子常见呼吸道病毒抗原阳性检出率,为临床选择样本类型提供参考。方法选取199例上呼吸道感染患儿,同时采集其口咽拭子和鼻咽拭子样本,按随机原则确定不同患儿采集2个部位样本的先后顺序。2份样本同时送检,采用胶体金免疫分析法检测流行性感冒病毒(Flu)A、FluB、呼吸道合胞病毒(RSV)和腺病毒(ADV)抗原。结果199例上呼吸道感染患儿中,鼻咽拭子FluA、FluB、RSV、ADV阳性率和4种病毒的总阳性率分别为31.2%、10.6%、6.0%、5.5%和52.3%,口咽拭子分别为20.6%、7.0%、5.0%、5.0%和37.6%;鼻咽拭子FluA、FluB阳性率和4种病毒总阳性率高于口咽拭子(P<0.05),RSV、ADV 2种样本阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。有40例患儿鼻咽拭子阳性、口咽拭子阴性;有11例患儿鼻咽拭子阴性、口咽拭子阳性;以鼻咽拭子检测结果为标准,口咽拭子FluA、FluB、RSV、ADV的检测敏感性分别为59.7%、61.9%、75.0%和45.5%,特异性均>97%。结论结合操作的便利性,对于儿童患者而言,取单个咽拭子样本检测呼吸道病毒时可仅采集鼻咽拭子样本。对于临床高度疑似病例,可同时采集鼻咽拭子和口咽拭子样本,以提高检出率。

鼻咽拭子细菌培养在儿童细菌性呼吸道感染病原诊断中的价值

目的分析鼻咽拭子细菌培养在儿童呼吸道感染病原诊断中的价值。方法同时采集403例类百日咳综合征或肺炎住院患儿鼻咽拭子和口腔吸取物,以分区划种半定量法接种培养后进行菌种鉴定,“+++”及以上考虑有临床意义。对比2种类型样本培养结果及其与患儿临床表现和疾病转归的吻合程度。结果403例患儿中,鼻咽拭子培养阳性率为31.5%(127/403),居前4位的病原分别为百日咳鲍德特菌(13.4%)、流感嗜血杆菌(7.9%)、卡他莫拉菌(4.0%)和肺炎链球菌(3.5%)。口腔吸取物培养阳性率为12.4%(50/403),百日咳鲍德特菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌和肺炎链球菌的分离率分别为0.7%、4.5%、1.0%和1.2%。鼻咽拭子样本4种病原总阳性率均显著高于口腔吸取物样本(P<0.05)。62.0%(31/50)的患儿鼻咽拭子样本病原培养结果与口腔吸取物样本培养结果一致。经鼻咽拭子样本确定的病原中,有98.4%(125/127)经抗菌药物治疗后细菌培养阴转,患儿临床症状有所改善。结论鼻咽拭子样本细菌培养有助于提高儿童呼吸道病原菌的检出率,对临床病原判断有一定参考价值。

新型冠状病毒肺炎病例痰标本和鼻咽拭子标本病毒核酸检测效果比较

目的比较新型冠状病毒肺炎(COVID-19)病例的下呼吸道标本(痰)和上呼吸道标本(鼻咽拭子)病毒核酸的检测效果。方法采用实时荧光PCR方法,分别检测5例COVID-19病例同一时间采集的痰标本和鼻咽拭子标本中新型冠状病毒ORF1ab基因、N基因,并对检测结果进行比较。结果 5例COVID-19病例痰标本核酸检测ORF1ab基因、N基因的CT值低于鼻咽拭子,扩增曲线信号优于鼻咽拭子。结论 COVID-19病例同一时间痰标本病毒载量高于鼻咽拭子标本,核酸检测效果优于鼻咽拭子。