外胚层间充质干细胞来源的外泌体通过控制炎症和氧化损伤减少M1型小胶质细胞并促进H2O2处理后PC12细胞的存活

目的探究外胚层间充质干细胞来源的外泌体(EMSCs-exo)对脊髓继发性损伤的潜在修复作用。方法从大鼠鼻黏膜中分离培养EMSCs,并通过免疫荧光染色鉴定。采用超速离心法获取EMSCs-exo,并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析(NTA)和Westernblot进行鉴定。利用差速贴壁法纯化小胶质细胞,并通过免疫荧光染色鉴定。根据BCA法测得的蛋白浓度对EMSCs-exo进行定量分析。设置对照组、含100μg/L脂多糖(LPS)的组和含LPS及37.5mg/L或75mg/LEMSCs-exo的组对小胶质细胞进行处理。设置对照组、含400μmol/LH2O2的组和含H2O2及37.5mg/L或75mg/LEMSCs-exo的组对PC12细胞进行处理。通过Western blot和qRT-PCR测定小胶质细胞各组Arg1和iNOS蛋白和mRNA表达量。通过酶联免疫吸附实验测定上清中IL-6、IL-10和IGF-1的浓度。通过CCK-8和AnnexinV-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测PC12细胞各组的活力和凋亡情况。结果免疫荧光染色显示EMSCs高表达标志物Nestin、CD44、CD105、Vimentin。透射电镜显示EMSCs-exo呈典型的杯状结构,NTA显示其平均粒径为142nm,Westernblot显示其表达外泌体标志蛋白CD63、CD81、TSG101,不表达Vimentin。当小胶质细胞在LPS环境中时,75mg/L的EMSCs-exo能够有效提高其Arg1蛋白量、降低iNOS蛋白量(P<0.05),且相比于37.5mg/L的浓度,其更能有效提高其Arg1mRNA水平和IGF-1、IL-10(P<0.05)的生成,降低iNOSmRNA水平和IL-6的生成(P<0.05);也更有效促进H2O2环境中PC12细胞的存活,降低凋亡率(P<0.05)。结论75mg/L的EMSCs-exo在体外有效减少M1型小胶质细胞比例,减轻氧化应激下的神经元凋亡,促进神经元存活,因此在控制脊髓继发性损伤中具有一定应用潜能。

纳米二氧化锆对鼻黏膜外胚层间充质干细胞成骨分化的影响

背景:纳米二氧化锆在骨组织修复领域表现出良好的应用潜力,研究纳米二氧化锆对成骨分化的影响将有助于推广纳米二氧化锆治疗骨缺损的临床应用。目的:探究纳米二氧化锆对鼻黏膜外胚层间充质干细胞成骨分化的影响。方法:分离培养大鼠鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞,使用CCK-8法检测纳米二氧化锆的细胞毒性,根据细胞毒性选择生物安全浓度,然后将细胞随机分为对照组、纳米二氧化锆组和纳米羟基磷灰石组,定向诱导各组细胞成骨分化。在诱导分化第7天进行碱性磷酸酶染色,采用qRT-PCR和Western blot检测早期成骨标志物(Runx2和Osx)的表达水平,在诱导分化第21天进行茜素红染色,采用qRT-PCR和Western blot检测中晚期成骨标志物(OPN和OCN)的表达水平。结果与结论:①纳米二氧化锆对鼻黏膜外胚层间充质干细胞的半数致死质量浓度为0.6 mg/mL,该实验选择质量浓度为200μg/mL进行干预,二氧化锆对细胞增殖无明显影响;②与对照组相比,纳米二氧化锆组细胞碱性磷酸酶染色更明显且细胞矿化水平更高,但与纳米羟基磷灰石组对比无明显差异;③与对照组相比,纳米二氧化锆组成骨相关基因和蛋白的表达均明显增多,但与纳米羟基磷灰石组对比无明显差异;④结果表明:纳米二氧化锆具有良好的生物安全性,且能对鼻黏膜外胚层间充质干细胞的成骨分化产生促进作用,这种促进效果与纳米羟基磷灰石相当。

外胚层间充质干细胞的获取及应用

背景:外胚层间充质干细胞是一种成体干细胞,获取便捷、来源丰富,在机体组织修复与免疫调节等方面发挥着重要作用。目的:总结综述外胚层间充质干细胞获取与应用方面的最新进展。方法:检索Web of Science数据库中相关文章,检索词为“Ectodermal mesenchymal stem cells,Stem cell therapy,Spinal cord injury,Neurodegenerative disease,sepsis”,检索要求为研究原著与综述,检索时限为数据库建库至2021年,筛选出相关文献85篇,结合文献追溯法对所得文献进行分析总结。结果与结论:①外胚层间充质干细胞来源丰富、获取简便,其来源可以是牙组织、鼻黏膜和角膜组织等。与中胚层间充质干细胞相同的是,它们都具备多系分化能力和免疫调节功能。②而外胚层间充质干细胞与牙组织与神经组织具有同源性,因此具备更好的牙细胞、神经细胞分化能力,在牙组织修复、脊髓损伤修复、神经退行性疾病治疗等方面具有独特的优势,因此具备极为广阔的应用前景。③外胚层间充质干细胞的免疫调节功能同样不能忽视,目前虽仅有少量文献报道将其应用于脓毒血症等免疫疾病,但研究发现其免疫调节机制与中胚层间充质干细胞等并无二致,同时其还具备获取方式相对低损伤性等优势,因此外胚层间充质干细胞具有极佳的临床应用前景。

外胚层间充质源神经干细胞-纤维蛋白支架复合体移植修复大鼠脊髓损伤

目的：评价外胚层间充质来源的神经干细胞一纤维蛋白支架复合体移植治疗大鼠脊髓损伤的疗效。方法：于大鼠鼻呼吸黏膜组织获取外胚层间充质干细胞（EMSCs），并诱导为神经干细胞（NSCs）。制作大鼠脊髓横断模型，将EMSCs源性神经干细胞一纤维蛋白支架复合体移植入脊髓断端（作为NSCs-纤维蛋白支架移植组；N-F组），每周对大鼠行BBB评分，12周后对脊髓标本行免疫组织化学显色，并利用免疫印迹检测脊髓横断部位神经生长相关蛋白-43（GAP43）、神经丝蛋白-200（NF200）、突触蛋白（synapsin）的表达量，并与纤维蛋白支架移植组（Fg组）、单纯手术组（SCI组）进行比较。结果：鼻呼吸黏膜EMSCs源性神经干细胞高表达巢蛋白（nestin）、CDl33，在纤维蛋白胶内生长良好，并可形成神经元样突起。从术后2周开始，N-F组BBB评分每周均高于Fg组和SCI组，差异有统计学意义。免疫印迹检测显示N-F组动物脊髓标本NF200、GAP43、synapsin相对表达量均高于Fg组和SCI组。脊髓组织切片免疫组织化学显示脊髓断端N-F组可见大量阳性神经纤维呈网络状结构，并伸人断端两侧脊髓实质；Fg组有较少量纤维通过；SCI组几乎没有阳性纤维通过。结论：纤维蛋白支架对鼻呼吸黏膜EMSCs源性NSCs的生长分化具有良好的促进作用。EMSCs源NSCs对脊髓损伤后的组织学重建和功能恢复均具有明显的促进作用。

大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞向成骨细胞和神经元的诱导分化

目的:建立鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,ECTO-MSCs)的体外培养方法,探讨该细胞的干细胞特性(stemness)和分化潜能。方法:在观察ECTO-MSCs在大鼠鼻腔呼吸黏膜内分布特征的基础上,体外培养扩增ECTO-MSCs,并用干细胞标志蛋白巢蛋白、CD133、CD44、波形蛋白的抗体进行免疫荧光染色,鉴定该细胞的干细胞特性;分别用成骨诱导培养基(含地塞米松、维生素C和β-甘油磷酸钠)及神经诱导培养基(neurobasal培养液中加入B27、脑源性神经生长因子、全反式维A酸、音猬因子)诱导ECTO-MSCs向成骨细胞和神经细胞定向分化;用组织化学染色和免疫荧光染色方法,评价其诱导分化效果。结果:用成骨诱导剂诱导培养后,ECTO-MSCs碱性磷酸酶活性明显增强,在细胞表面形成大量的茜素红染色阳性的钙结节;用神经诱导培养基诱导培养后,ECTO-MSCs变化为神经细胞样形态,细胞高表达神经细胞标志蛋白NF-200,细胞发出细长突起并互相连接成神经网络。结论:大鼠鼻腔呼吸黏膜内广泛存在ECTO-MSCs,该细胞具有多向分化潜能,可作为种子细胞用于自体移植修复骨和神经组织损伤。

包埋载音猬因子壳聚糖微球纤维蛋白支架对鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞分化的影响

背景:脊髓组织工程的基本思路是将体外分离培养的种子细胞种植到具有三维结构的生物材料支架上,并加入生物活性因子保持一定浓度,构成具有生物活性的细胞-支架复合物。然而如何构建合理的细胞生长微环境以及维持生物活性因子的最佳浓度一直面临诸多问题。该实验创新性地提出了双交联缓释体系,持续稳定地释放神经营养因子,以便更好地促进种子细胞的生长与分化。目的:利用冷冻干燥法,将包载音猬因子的壳聚糖微球填充于纤维蛋白胶,构建具有三维结构的复合生物工程支架,探讨该支架对外胚层间充质干细胞向神经元样细胞分化的影响。方法:①采用离子凝胶法制备包载音猬因子的壳聚糖微球,而后将其与纤维蛋白胶混合,冷冻干燥成型,即得到包埋载音猬因子壳聚糖微球的纤维蛋白支架,采用扫描电子显微镜观察支架微观结构和ELISA检测音猬因子缓释效果,并制备包载音猬因子的纤维蛋白支架和包载音猬因子的壳聚糖微球作为对照;②采用悬浮抗贴壁法获取外胚层间充质干细胞来源的神经球样细胞分别种植于上述支架和经多聚赖氨酸修饰的圆玻片上,加入神经诱导培养基培养。14d后免疫荧光标记神经细胞相关蛋白β3-Tubulin、MAP-2和MBP,采用Westernblot方法测定神经细胞相关蛋白表达水平。结果与结论:①扫描电子显微镜观察纤维蛋白胶经冷冻干燥后呈海绵型网状结构,载音猬因子的壳聚糖微球均匀分散在其中;②ELISA检测结果显示复合纤维蛋白支架缓释速度较为平缓且持续时间较长,形成更稳定、持续的缓释体系;③免疫荧光染色显示复合纤维蛋白支架组高表达神经细胞相关蛋白;同时,Western blot检测结果显示复合纤维蛋白支架组表达的神经细胞相关蛋白水平明显高于其他组(P<0.05);④结果表明,壳聚糖复合纤维蛋白支架缓释效果较好,该复合支架对外胚层间充质干细胞来源神经球向神经元样细胞分化有一定的促进作用。

氯倍他索促进鼻粘膜间充质干细胞成神经样细胞分化

目的:研究氯倍他索(Clo)对鼻粘膜外胚层间充质干细胞(EMSCs)向神经样细胞分化的影响。方法:贴壁筛选法分离培养EMSCs,免疫荧光法鉴定体外扩增的EMSCs;MTT法检测Clo对EMSCs增殖能力的影响;成神经样细胞诱导实验分为Clo组、音猬因子(SHH)组和空白对照组,采用全反式维甲酸(ATRA)诱导各组细胞向神经样细胞分化;倒置显微镜观察细胞形态的变化;免疫荧光和免疫印迹方法检测神经元细胞相关蛋白。结果:体外分离培养的EMSCs高表达间充质干细胞和神经嵴源干细胞标志物Vimentin和Nestin。各组EMSCs成神经样细胞诱导7 d后,Clo组和SHH组EMSCs呈现双极和多极的典型神经样细胞形态并且高表达神经元细胞相关蛋白。Clo组EMSCs表达SHH和SMO的水平明显高于空白对照组,与SHH组比较差异无统计学意义(P>0.05);Clo可促进EMSCs分泌内源性脑神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)。结论:Clo可通过激活SHH信号通路和上调内源性神经营养因子水平促进EMSCs向神经样细胞分化。

TG2基因修饰的鼻粘膜间充质干细胞向神经样细胞分化的研究

目的:研究重组transglutaminase 2(TG2)腺病毒转染对鼻粘膜骨髓间充质干细胞(EMSCs)向神经样细胞分化影响。方法:利用贴壁筛选法分离培养和扩增EMSCs,通过免疫荧光方法分析EMSCs的纯度,采用免疫荧光和免疫印迹方法测定转染效率。实验分组:重组TG2腺病毒转染EMSCs(ad EMSCs)组、重组GFP腺病毒转染EMSCs组(GFP-EMSCs)和空白对照组(control),诱导细胞向神经样细胞分化,倒置显微镜观察分化过程中细胞形态的变化。免疫荧光和免疫印迹方法检测诱导后EMSCs的轴突膜蛋白(GAP-43),微管相关蛋白(MAP2)和髓磷脂碱性蛋白(MBP)的表达情况。向大鼠脊髓内注射ad EMSCs,2周后取脊髓。结果:实验数据表明转染TG2腺病毒的EMSCs可稳定表达TG2。诱导7 d后,ad EMSCs组细胞呈现双极和多极的典型神经样细胞形态,并且GAP-43,MAP2和MBP的表达水平较对照组高。移植入体内2周的ad EMSCs存活良好且部分细胞表达GAP-43。结论:TG2基因修饰有利于EMSCs在体外向神经样细胞分化,并且具有良好的可移植性。

不同胚层来源成体干细胞修复周围神经损伤

背景:成体干细胞疗法是周围神经损伤修复与再生领域的研究热点之一。中胚层被视为成体干细胞的理想来源,间充质干细胞具有获得率高、来源广、增殖快等优异性能。而外胚层来源成体干细胞,尤其是神经嵴干细胞,具有神经源性,越来越受到研究人员的关注。目的:对来自外胚层和中胚层的多功能成体干细胞在周围神经损伤修复与再生中的作用及机制进行简要综述,探究不同来源成体干细胞的研究进展与应用前景,并结合临床研究,探讨成体干细胞疗法潜在的应用价值以及亟待解决的问题。方法:第一作者于2024年2月应用计算机在PubMed和SinoMed数据库检索2001年12月至2024年2月相关文献,以“ectodermal stem cells,mesenchymal stem cells,peripheral nerve injury,repair,regeneration”为英文检索词,以“外胚层干细胞、间充质干细胞、周围神经损伤、修复、再生”为中文检索词,最终纳入69篇文献进行分析论述。结果与结论:①外胚层来源成体干细胞具有优异的分化和再生潜能,尤其是毛囊神经嵴干细胞、嗅干细胞、牙外胚层干细胞等,具有神经源性,可在体外表达神经特异性标志物,但目前缺少临床试验研究。②中胚层来源成体干细胞种类多、易获得及纯化,其中骨髓间充质干细胞和脐带间充质干细胞在周围神经损伤修复的应用疗效及安全性方面有相关临床试验支持,能改善感觉及运动神经传导,且在随访中未出现并发症和明显不良反应。骨髓间充质干细胞的获取需行侵入性外科手术且要求患者与捐赠者骨髓配型吻合,应用受到一定限制;而脐带间充质干细胞虽无需侵入性获取,但分离较困难且表型不稳定。③内胚层来源成体干细胞常难以在体外生长,应用受限,目前应用于临床的可能性低。④综合来看,骨髓间充质干细胞仍为周围神经损伤干细胞治疗的首选细胞,适用于无外科手术禁忌且符合配型要求的情况,其次为脐带间充质干细胞,辅以分离方法的改进和表型稳定性的提高策略。⑤牙外胚层干细胞以及脂肪间充质干细胞具有较高应用潜能,有待进一步临床试验,其他外胚层、中胚层来源成体干细胞各以其优异特性在动物及细胞实验研究中具有显著优势。

SHH基因修饰的大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞向神经样细胞的诱导分化

目的:探讨音猬因子(sonic hedgehog,SHH)基因转染对大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞(ectomesenchymal stem cell,EMSCs)分化为神经样细胞的影响。方法:利用组织贴壁法分离、培养和纯化EMSCs,SHH基因重组腺病毒转染EMSCs(SHH-EMSCs),免疫荧光染色观察转染前后EMSCs的干细胞标志蛋白巢蛋白、波形蛋白和Connexin-43,蛋白质印迹检测SHH蛋白表达。诱导分化实验分为4组:SHH-EMSCs诱导组、SHH-EMSCs正常培养组、EMSCs诱导组、EMSCs正常培养组;倒置相差显微镜观察分化过程中细胞形态变化;免疫荧光染色和蛋白质印迹检测诱导后轴突膜蛋白(GAP-43)、β-3微管蛋白(TUBB3)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达。并将SHH-EMSCs悬液注入大鼠脊髓组织内,观察该细胞在脊髓内存活和分化情况。结果:免疫荧光染色结果显示,经SHH基因转染后的EMSCs巢蛋白、波形蛋白和Connexin-43阳性率达90%;蛋白质印迹结果显示,SHH蛋白表达明显升高。SHH-EMSCs诱导组培养7 d后,细胞呈现双极、多极和锥形的典型神经细胞样形态;免疫荧光染色和蛋白质印迹结果表明SHH-EMSCs诱导组GAP-43、TUBB3、MBP和Smoothen的表达水平明显高于其他3组,差异有统计学意义; GFAP在4组细胞中均为弱表达,无显著差异。SHH-EMSCs在大鼠脊髓内存活情况良好且表达TUBB3。结论:SHH基因转染的EMSCs具有更高的向神经样细胞分化效率,并可在脊髓内存活; EMSCs可望成为移植脊修复髓损伤的一种新的种子细胞。

外胚层间充质干细胞在再生医学中的研究进展

再生医学在缺损或受损组织器官的修复中具有重要作用。组织工程是再生医学的重要手段,其中干细胞发挥着重要的作用。干细胞根据其来源可分为胚胎干细胞(ESCs)、成体干细胞(ASCs)和诱导多能干细胞(iPSCs)。目前,研究发现外胚层间充质干细胞(EMSCs)是一种有良好自我更新和多向分化潜能的干细胞群,并且近年来越来越受到临床关注。多项研究已经证明,EMSCs在组织再生中起到关键作用,尤其体现在颅颌面复杂的发生发育过程中。本文就EMSCs的起源、生物学特性、多向分化潜能及在牙组织再生中的应用做一总结与探讨。

鼻黏膜外胚层间充质干细胞诱导分化成骨细胞的实验分析

目的探讨鼻黏膜外胚层间充质干细胞经诱导分化为成骨细胞的效果。方法收集SD大鼠鼻黏膜,进行鼻黏膜外胚层间充质干细胞体外培养。对细胞表面标志物CD45-FITC、CD14-PE、CD105-PE、CD34-PE、CD71-PE、CD34-PE、CD44-PE进行鉴定,并对细胞进行成骨诱导。成骨诱导分化后检测细胞在不同时间的碱性磷酸酶活性变化情况,并对细胞进行茜素红染色,观察细胞诱导分化效果。结果大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞经成骨诱导分化后,碱性磷酸酶活性在诱导4 d后显著增加,并在7 d达到最大值,之后逐渐下降。成骨诱导至21 d,对大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞进行茜素红染色之后可观察到结果呈现出阳性,细胞外基质中出现钙沉积以及钙结节形成。结论在大鼠鼻黏膜中存在一定的外胚层间充质干细胞,该细胞具有分化潜能,经诱导分化可分化为成骨细胞,具有一定的临床应用前景。

植物源神经导管与鼻黏膜外胚层间充质干细胞的生物相容性

背景:神经导管桥接神经间隙替代自体神经移植修复周围神经损伤的报道很多,鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞是移植治疗周围神经损伤的重要种子细胞。目的:研究鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞与植物源神经导管的生物相容性及其在导管表面的自发分化生长情况。方法:取自然界内径为0.2 cm的植物管状茎秆,用物理和化学方法去除茎秆的肉质,保留其纤维性管状外形,用层粘连蛋白以京尼平交联修饰植物导管表面;体外分离和培养鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞,并分为3组,分别种植于空白培养板、未修饰导管及修饰导管表面,于1,3,5,7,14 d以MTT法检测细胞活性,体外评估二者的生物相容性;细胞种植并培养2周后以细胞蛋白免疫印迹及免疫荧光实验观察该导管对鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞自发分化的影响。结果与结论:①鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞在植物导管纤维表面生长良好且成定向排列,植物导管与鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞具有良好的生物相容性;②经层粘连蛋白修饰的导管表面的鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞表达MBP和S100,且均高于空白组及未修饰导管组;③结果表明,层粘连蛋白修饰的植物源神经导管可促进鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞向许旺细胞分化,可为天然植物源神经导管负载种子细胞移植修复周围神经缺损提供新的理论依据。

氯倍他索干预鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞向少突胶质样细胞分化及机制

背景:氯倍他索是临床工作中常用的糖皮质激素类药物,鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞在体外具有向少突胶质样细胞分化的潜能,氯倍他索能否促进其向少突胶质样细胞分化及其潜在的机制尚不得知。目的:观察氯倍他索对鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞向少突胶质样细胞分化的影响,探讨其可能的机制。方法:贴壁筛选法分离培养获取SD大鼠鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞,免疫荧光法鉴定其特性和纯度。MTT法检测0-10μmol/L氯倍他索对鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞增殖能力的影响。取生长良好的第3代鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞,用含氯倍他索的无血清诱导分化培养液使其向少突胶质样细胞分化,氯倍他索浓度为0,2.5和5μmol/L。倒置显微镜观察细胞形态的变化,免疫荧光和免疫印迹方法检测少突胶质细胞相关蛋白MBP和OLIG2的表达,免疫印迹法检测SHH信号通路相关蛋白SHH表达水平。结果与结论:(1)体外培养的鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞高表达vimentin和nestin;(2)低浓度的氯倍他索可促进细胞增殖;高浓度的氯倍他索则抑制细胞增殖,其中5μmol/L可能为最适增殖浓度;(3)鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞成少突胶质样细胞诱导3 d后,氯倍他索组出现多极化形态,少突胶质细胞相关蛋白MBP、OLIG2以及SHH信号通路相关蛋白SHH的表达明显高于对照组;(4)结果表明,氯倍他索可能通过SHH信号通路促进鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞向少突胶质样细胞分化。

间充质干细胞来源的外泌体的制备方法及应用

间充质干细胞是一类多能干细胞，来源于发育早期的中胚层和外胚层，可以在骨髓、脂肪、滑膜、骨骼、肌肉和脐带等多种组织中分离，经诱导后可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌和内皮等多种组织细胞。

人骨髓间充质干细胞的分离培养

选择适宜的种子细胞是骨组织工程学研究中的主要问题。干细胞是近年来研究的热点，骨髓中除造血干细胞外，还含有另一类干细胞一间充质干细胞（mesenchymal stem cell MSC），在不同的诱导条件下，具有向中胚层和神经外胚层组织细胞分化的能力，如向成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成纤维细胞、内皮细胞等分化的能力。

间充质干细胞应用的研究进展

间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）在体外不同诱导条件下，可分化为多种非造血组织特别是中胚层和神经外胚层来源的组织细胞，对脊髓损伤的恢复具有显著的促进作用。

体外扩增自体脂肪来源干细胞移植恢复鼻黏膜功能

背景:体外扩增的自体脂肪来源干细胞具有多向分化的潜能,在组织工程和再生医学领域具有广阔的应用前景。目的:观察自体脂肪来源干细胞移植受损人鼻黏膜组织的结构和功能变化。方法:选取因物理或化学因素造成鼻黏膜损害的患者10例,其中6例黏膜瘢痕,4例黏膜破溃,抽取自体脂肪组织进行脂肪来源干细胞体外分离、培养、扩增,移植前进行质量安全性检测。6例患者在黏膜瘢痕基底部、4例患者在黏膜破溃处注射移植脂肪来源干细胞(1×107/cm2),共注射3次,每2次间隔15 d。末次注射移植后30,90,150 d分别行鼻腔容积、最小横断面积、黏膜纤毛清除功能测定,其中3例患者在移植前和移植后30 d,取0.1 cm×0.1 cm黏膜组织,进行苏木精-伊红染色、Masson三色染色、AB-PAS染色。结果与结论:脂肪来源干细胞注射移植后,所有患者临床症状得到缓解。与移植前比较,脂肪来源干细胞注射移植后30,90,150 d鼻腔容积及鼻腔最小横断面积有所减少(P<0.05),鼻黏膜纤毛清除功能有所改善,但差异无显著性意义(P>0.05)。与移植前相比,脂肪来源干细胞移植30 d时3例患者鼻黏膜炎症明显减轻,胶原纤维排列整齐、沉积减少,杯状细胞分泌的黏蛋白增多。结果证明了体外扩增的脂肪来源干细胞可以重建鼻黏膜结构和恢复其功能。

嗅粘膜间充质干细胞与嗅粘膜嗅鞘细胞在人鼻粘膜中分布的研究

目的:探讨人嗅粘膜间充质干细胞(human olfactory mesenchymal stem cells,hOM-MSCs)与嗅鞘细胞(human olfactory mucosa olfactory ensheathing cells,hOM-OECs)在鼻粘膜组织中的分布情况以指导自体移植时鼻粘膜组织的取材。方法:通过鼻内窥镜在受试者嗅区粘膜区与呼吸区取鼻粘膜组织,通过细胞免疫荧光染色检测hOM-MSCs与hOM-OECs在鼻嗅区粘膜及呼吸区粘膜组织中的分布情况。结果:hOM-MSCs分布于嗅区粘膜与呼吸区粘膜的固有层中,但在嗅区细胞数多于呼吸区;hOM-OECs分布于嗅区粘膜中,且上鼻甲中细胞数多于中鼻甲处。结论:人鼻粘膜的嗅区粘膜中广泛分布hOM-MSCs和hOM-OECs,建议细胞移植可在嗅区的上鼻甲处粘膜取材。