上皮细胞在慢性鼻窦炎伴鼻息肉发病中的作用

鼻黏膜上皮是抵御病原及过敏原的第一道防线,可以通过机械屏障功能、分泌抗微生物分子及诱导免疫反应等方式维持宿主鼻腔黏膜的稳态。慢性鼻窦炎是一种高度异质性的鼻腔鼻窦慢性炎症,鼻黏膜上皮固有免疫功能的减弱、2型炎症反应的增强都与其发生、发展相关。上皮细胞具有显著多样性,各种亚型通过不同的方式影响鼻黏膜的功能。本文对鼻黏膜上皮细胞在慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)发病中作用的研究进展进行综述,以期进一步研究CRSwNP发病机制及探索精准治疗方案。

慢性鼻⁃鼻窦炎上皮细胞损伤与AMPK/mTOR激活的相关性

目的通过构建慢性鼻⁃鼻窦炎上皮细胞损伤模型,探索慢性鼻⁃鼻窦炎上皮细胞损伤中炎症与AMPK/mTOR信号通路的关系。方法采用不同浓度TNF⁃α刺激鼻粘膜上皮细胞诱导慢性鼻⁃鼻窦炎的鼻粘膜上皮细胞模型。采用Elisa检测正常鼻粘膜上皮细胞(正常组)和慢性鼻⁃鼻窦炎的鼻粘膜上皮细胞(模型组)中炎症因子水平,采用TUNEL检测正常组和模型组的鼻粘膜上皮细胞凋亡情况,采用WB检测正常组和模型组在AMPK/mTOR信号通路相关蛋白(AMPK,p⁃AMPK,mTOR,p⁃mTOR)的相对表达量。结果较0 ng/mL、1ng/mL TNF⁃α处理的慢性鼻⁃鼻窦炎的鼻粘膜上皮细胞,p⁃AMPK蛋白在10 ng/mL TNF⁃α处理组中上调,差异有统计学意义(P<0.05),而AMPK蛋白组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。较正常组,模型组中的TNF⁃α与IL⁃1β水平升高,细胞凋亡率降低,p⁃AMPK/AMPK蛋白表达含量上升,p⁃mTOR/mTOR蛋白表达含量显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论TNF⁃α通过调控AMPK/mTOR通路诱导慢性鼻⁃鼻窦炎的鼻粘膜上皮细胞损伤。

一氧化氮对慢性鼻窦炎鼻息肉粘膜上皮细胞纤毛运动的影响

目的 观察一氧化氮 (nitricoxide ,NO)对人鼻粘膜纤毛运动的影响。方法 建立慢性鼻窦炎鼻息肉粘膜上皮细胞原代培养模型 ,用电视显微镜法观察NO前体L 精氨酸对纤毛运动的影响 ,统计学方法采用配对t检验。结果 L 精氨酸能使纤毛运动频率由加药前的每分钟 (4 0 0± 48)次增加到加药后的每分钟 (793± 6 8)次 (n =9,P <0 .0 0 1) ;其同分异构体D 精氨酸无此作用 ;一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)抑制剂硝基 L 精氨酸甲酯能明显抑制L 精氨酸的作用。结论 原代培养慢性鼻窦炎鼻息肉粘膜上皮细胞能合成NOS ,L 精氨酸在NOS的作用下产生NO ,从而加快纤毛细胞的纤毛运动。

呼吸道合胞病毒感染对慢性鼻窦炎伴鼻息肉上皮屏障功能的影响

目的为探索呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染对慢性鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)和对照黏膜来源的人鼻黏膜上皮细胞(human nasal epithelial cells,hNECs)物理屏障关键分子的影响。方法不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)(0.1和0.3)的RSV分别感染鼻息肉(n=21)和对照黏膜(n=9)的hNECs 24 h和48 h后,提取总RNA,逆转录成cDNA后,采用实时荧光定量PCR检测ZO-1、ZO-2、Claudin-1、Claudin-4、Occludin、E-cadherin和N-cadherin的基因表达变化。结果RSV感染hNECs后,ZO-1、ZO-2、Claudin-1、Claudin-4、Occludin、E-cadherin和N-cadherin的基因表达水平均下降,但只在鼻息肉来源的hNECs中存在统计学差异(P<0.05)。RSV感染嗜酸性粒细胞型CRSwNP(eosinophilic CRSwNP,ECRSwNP)与非嗜酸性粒细胞型CRSwNP(nonECRSwNP)的hNECs相比,无显著差异。结论RSV感染可破坏鼻黏膜上皮屏障,与对照组相比CRSwNP组受RSV感染影响更重,且ECRSwNP组与nonECRSwNP组无显著差异。

飘散蒿属花粉对鼻粘膜上皮细胞间粘附分子表达的影响

为探讨吸入性变应原对变应性鼻炎患者鼻粘膜上皮细胞表达细胞间粘附分子（Ｉｎｔｅｒ－ｃｅｌｕｌａｒａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ－１，ＩＣＡＭ－１）的影响，对１１例蒿属花粉过敏的花粉症患者，采用ＲＴ－ＰＣＲ的方法，测定鼻粘膜上皮细胞ＩＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ表达。结果显示：在蒿属花粉飘散期，８例标本全部呈阳性；在蒿属花粉非飘散期，３例标本中２例阴性，１例阳性（该例对屋内尘土皮肤试验也呈阳性反应）。由此提示：当外界环境中的特异性变应原含量增高时，花粉症患者的鼻粘膜上皮细胞表达Ｉ－ＣＡＭ－１，而无致敏原时，ＩＣＡＭ－１的表达为阴性。

Toll样受体mRNA在慢性鼻窦炎患者鼻黏膜上皮细胞中的表达

目的 探讨Toll样受体 2 (Toll likereceptor 2 ,TLR 2 )及其Toll样受体 4(Toll likereceptor 4,TLR 4)mRNA在慢性鼻窦炎患者和健康成人鼻黏膜上皮细胞中的表达 ,分析TLR 2和TLR 4在鼻黏膜天然免疫中的作用。方法 应用核酸分子原位杂交技术检测 3 0例慢性鼻窦炎患者和 2 1例健康成人鼻黏膜上皮细胞中TLR 2和TLR 4mRNA的表达。结果 TLR 2和TLR 4mRNA在 3 0例慢性鼻窦炎上皮细胞中均有表达 ,且分别与对照组间差异有显著性意义 (t =8 60 5,P <0 0 0 0 5,t =9 0 50 ,P <0 0 0 0 5)。结论 鼻黏膜上皮细胞中可以产生TLR 2和TLR 4,表明鼻黏膜上皮不仅是单纯的物理屏障 ,更可以通过Toll样受体对病原微生物进行识别 ,以直接启动有效的抗感染机制。

两性霉素B冲洗对难治性鼻窦炎鼻内镜术后嗜酸性粒细胞、上皮化时间的影响

目的研究两性霉素B冲洗方法对难治性鼻窦炎(difficult-to-treat rhinosinusitis,DTRS)患者鼻内镜术后嗜酸性粒细胞(Eosinophils,Eos)及上皮化时间产生的影响。方法根据随机数字表法将2016年1月至2017年1月锦州市中心医院耳鼻咽喉头颈外科收治的86例接受鼻内镜手术治疗的DTRS病例分为2组,各43例,对照组术后予以常规治疗,研究组术后在常规治疗基础上使用两性霉素B冲洗,比较2组各时间段T淋巴细胞亚群(CD3^+、CD4^+、CD8^+及CD4^+/CD8^+)、Eos计数、炎性因子[白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素5(IL-5)、血清干扰素γ(IFN-γ)]、上皮化时间、术后复发率、肿痛程度及疗效。结果研究组术后疗效总有效率为95.35%,显著高于对照组81.40%(P<0.05);研究组术后1月CD3^+、CD4^+、CD8^+与CD4^+/CD8^+值显著高于对照组(P<0.05),Eos计数、IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ水平显著低于对照组(P<0.05);研究组术后7 d VAS评分、重度肿胀率明显低于对照组(P<0.05);研究组上皮化时间明显短于对照组(P<0.05),复发率明显低于对照组(P<0.05)。结论在难治性鼻窦炎鼻内镜术后应用两性霉素B冲洗,可有效增强机体免疫功能,改善炎症,缓解肿痛程度,减少Eos,缩短上皮化时间,降低术后复发率。

鼻窦炎口服液对鼻息肉上皮细胞及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的影响

目的 :研究鼻窦炎口服液对鼻息肉上皮细胞的增殖及嗜酸性粒细胞 (EOS)和粒细胞 -巨噬细胞集落刺激因子 (GM -CSF)的影响。方法 :将鼻息肉组织在含有不同浓度的鼻窦炎口服液培养液中培养 ,并与对照组比较 ,观察鼻息肉组织块周围细胞生长及鼻息肉组织中EOS超微结构的改变情况 ,应用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法检测培养上清液中GM -CSF的含量。结果 :鼻息肉组织块在鼻窦炎口服液中新生上皮细胞的数量少于无药组 ;GM -CSF含量随药物浓度的增加而下降 (P<0 01) ;电镜下观察发现 ,EOS分泌颗粒密度降低 ,或呈空泡状、指纹状改变。结论 :鼻窦炎口服液可抑制上皮细胞的增殖和鼻息肉组织中GM -CSF的释放 。

人鼻粘膜上皮细胞Na^+通道的初步研究

目的 明确人鼻粘膜上皮细胞Na+ 通道的特性 ,为研究Na+ 通道在鼻粘膜病理性改变及治疗中的作用奠定理论基础。方法 利用膜片钳技术对经无血清气 液界面培养的鼻源性鼾症患者手术切除下鼻甲标本的鼻上皮细胞进行Na+ 通道基本特性研究。结果 在细胞贴附式膜片上 ,可记录到典型的单通道电流 ,其电导为 2 1 0 9pS ,反转电位为 - 50 96mV ,且 77 78%反转电位 <- 4 0mV ,离子通透性比率PNa/PK>5 80。在Na+ 通道抑制剂 10 - 4 mmol/LAmiloride存在于电极液内时 ,Na+ 通道发生率从 2 6 7%减少到 5 13 % (P <0 0 5) ,表明大部分Na+ 通道可被Amiloride抑制。 10 - 3mmol/LCa2 + 存在于浴夜时 ,Na+ 通道的发生率无明显增加 (P >0 0 5) ,而电压对开放概率无明显影响。结论 在细胞贴附式膜片上 ,人鼻粘膜上皮细胞具有Amiloride敏感型及Amiloride非敏感型的Na+ 通道 ,且大部分是Na+ 选择性通道 ,细胞外液的Ca2 + 不能激活Na+ 通道的开放 ,通道的开放概率是非电压依赖性的。

白细胞介素17A在慢性鼻窦炎发病机制中的研究进展

慢性鼻窦炎是指鼻腔鼻窦黏膜慢性炎症性病变,其病因及发病机制复杂多变,以持续性炎症和黏膜组织重塑为特征,以鼻塞、流脓涕、嗅觉减退、头面部胀痛为主要症状。白细胞介素17A在炎症疾病的发生发展过程中发挥重要作用。近年研究发现,白细胞介素17A在慢性鼻窦炎中的发病机制具有一定的作用,本文就其生物学特征以及其在促进慢性鼻窦炎炎症反应,诱发上皮屏障破坏、上皮间充质转化和组织重塑等方面研究进展进行综述。

鼻粘膜上皮细胞中缺氧调节血管内皮生长因子及其机制

目的：探讨人类鼻粘膜上皮细胞应答组织缺氧，分泌合成血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的能力，以及缺氧调节ＶＥＧＦ的可能机制。方法：将人类鼻粘膜上皮细胞分别在常氧（２１％）和缺氧（１％）条件下进行无血清原代细胞培养３～４８小时，另外常氧培养的其中一组加入金属镍共同孵育，采用原位杂交和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）的方法检测各种条件下ＶＥＧＦ的ｍＲＮＡ水平和蛋白质水平。结果：① 缺氧条件下，ＶＥＧＦ的ｍＲＮＡ水平和蛋白质水平明显升高，与常氧组比较Ｐ＜０．００１，且具有时间依赖性；② 加入金属镍共同孵育，ＶＥＧＦ的表达也升高，与常氧组比较Ｐ＜０．０１。结论：在人类鼻粘膜上皮细胞中，缺氧可明显上调ＶＥＧＦ的ｍＲＮＡ和蛋白质表达，它的机制可能是通过含铁血红素氧敏感分子，一个与促红细胞生成素（ＥＰＯ）调节相似的途径。

大鼠鼻粘膜上皮细胞微核试验

本文报告了大鼠鼻上皮细胞微核试验。分离的鼻道粘膜以链霉蛋白酶和胶元酶消化得到上皮细胞,细胞产率为每只大鼠3.1×10~6,细胞存活率为71.6%。在涂片上,大鼠鼻上皮细胞可分为纤毛细胞、杯状细胞及其它细胞。大鼠鼻粘膜上皮自发微核率为1.76±1.2‰。以滴鼻法亚急性染毒,甲醛和二甲基亚硝胺可显著增加大鼠鼻上皮细胞微核率,并有剂量-反应关系。

2型细胞因子白细胞介素4和白细胞介素13对慢性鼻窦炎伴鼻息肉中鼻黏膜上皮细胞自噬的影响

目的 探究2型细胞因子白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)和IL-13对慢性鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)中鼻黏膜上皮细胞自噬的影响。方法 收集16例CRSwNP息肉组织(其中嗜酸细胞型和非嗜酸细胞型鼻息肉组织各8例)和8例对照黏膜组织。Western blot检测自噬标志蛋白——人微管相关蛋白1A/1B轻链3B(LC3B)的表达,免疫组化染色检测LC3B的表达和分布,免疫荧光染色实验检测LC3B的点状分布。结果 与对照黏膜组织相比,LC3BⅡ的表达在CRSwNP的息肉组织中增加,并且LC3B在嗜酸细胞型鼻息肉上皮层分布最多。IL-4和IL-13可诱导鼻黏膜上皮细胞中LC3BⅡ的表达和促进LC3B的点状分布。结论 与对照黏膜和非嗜酸细胞型鼻息肉组织相比,嗜酸细胞型鼻息肉组织上皮细胞中自噬体数量显著增加。IL-4和IL-13可有效诱导鼻黏膜上皮细胞自噬体增加。本研究为寻找以自噬为靶点的CRSwNP治疗新方法提供理论依据。

接触甲醛人群鼻粘膜上皮细胞和淋巴母细胞微核率研究

通过接触甲醛人群鼻粘膜鳞状上皮细胞微核（ＮＭＮ）试验和淋巴母细胞微核（ＬＭＮ）试验发现：ＮＭＮ率阳性的接触甲醛时间平均加权浓度（ＴＷＡ）是０．５０８ｍｇ／ｍ３８周，比呈现ＬＭＮ率阳性的ＴＷＡ０．９８５ｍｇ／ｍ３小１倍，比接触时间３６４周缩短４５倍；连续接触甲醛５年以上工人的ＮＭＮ率反而低于５年以下者（Ｐ＜０．０５）；个体间的２种ＭＮ率未见有任何联系。结果提示：鼻粘膜鳞状上皮细胞是甲醛遗传毒作用的靶细胞；高浓度长时间接触甲醛后的ＮＭＮ率下降可能与甲醛对异粘膜细胞的直接杀伤作用有关。

组蛋白去乙酰化酶1在慢性鼻窦炎上皮细胞中的表达及其对鼻黏膜上皮间质转化的影响

背景慢性鼻窦炎是耳鼻喉科常见的慢性炎症性疾病。通常不伴鼻息肉的慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP)更常见,其病因及发病机制尚不清楚。目的研究组蛋白去乙酰化酶1(sirtuin 1,SIRT1)在CRSsNP上皮细胞中的表达,并探讨其对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导鼻黏膜上皮-间质转化(epithelialmesenchymal transition,EMT)的影响。方法采用免疫组织化学染色、Real-time PCR、Western blot观察SIRT1在CRSsNP和正常对照筛窦黏膜上皮中的表达情况。对正常鼻黏膜上皮细胞进行原代培养,并予TGF-β1处理,通过Western blot检测SIRT1过表达对EMT相关蛋白(E-cadherin、α-SMA、N-cadherin、Vimentin)表达的影响。结果与对照组相比,CRSsNP组SIRT1表达减少(P<0.001)。TGF-β1下调鼻黏膜上皮中SIRT1的表达,同时E-cadherin表达减少,α-SMA、N-cadherin、Vimentin表达增加,这一效应可被SIRT1过表达所逆转。结论 SIRT1抑制TGF-β1诱导的鼻黏膜上皮EMT,可能在CRSsNP的病理生理过程中起重要作用。

白细胞介素-2受体在正常小鼠胚胎鼻粘膜上皮细胞中的表达

白细胞介素－２受体在正常小鼠胚胎鼻粘膜上皮细胞中的表达林顺涨１王锦玲１王剑波２马福成２（１第四军医大学西京医院耳鼻喉科西安７１００３３２第四军医大学病理学教研室）关键词白细胞介素－２受体小鼠胚胎鼻粘膜上皮中图号Ｒ７６４．０４本研究采用ＳＡＢＣ免疫组织...

慢性鼻窦炎鼻息肉失嗅症患者嗅上皮细胞凋亡及相关基因BCL-2,BAX的表达

目的 :探讨慢性鼻窦炎鼻息肉失嗅症患者嗅上皮中细胞凋亡和BCL - 2 ,BAX基因的表达。方法 :用免疫组化S -P法测定 2 8例慢性鼻窦炎鼻息肉失嗅症患者嗅上皮和 10例正常对照组嗅上皮凋亡抑制基因BCL - 2 ,凋亡促进基因BAX的表达 ;同时应用dUTP缺口末端标志法 (TUNEL法 )测定上述两种组织中细胞原位的凋亡。结果 :(1)慢性鼻窦炎鼻息肉失嗅症组嗅上皮中BCL - 2 ,BAX表达显著高于嗅觉正常组 (P<0 .0 5 ) ,但是 ,嗅觉障碍组嗅上皮中BAX表达显著高于BCL - 2 (P <0 .0 5 ) ;(2 )失嗅症组嗅上皮中细胞凋亡指数 (AI)高于嗅觉正常组 (P <0 .0 5 )。结论 :慢性鼻窦炎鼻息肉嗅上皮细胞凋亡显著 ,BCL -

瞬时受体电位锚蛋白1通道调节慢性鼻窦炎上皮细胞自噬及细胞间黏附分子表达的作用探究

目的 探究瞬时受体电位锚蛋白1(transient receptor potential ankyrin1,TRPA1)对慢性鼻窦炎(CRS)上皮细胞自噬与细胞间黏附分子(intercellular adhesion moleclar-1,ICAM-1)表达的影响。方法 通过免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR及Western blot检测TRPA1在对照组、慢性鼻窦炎不伴鼻息肉(chronic nasal-sinusitis without nasal polyps,CRSsNP)及慢性鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)患者鼻黏膜组织中的表达水平,并采用免疫组织化学染色和Western blot观察各组患者鼻黏膜组织内自噬水平;分离培养鼻黏膜上皮细胞,利用细胞角蛋白AE1进行免疫荧光染色鉴定上皮细胞;将鼻黏膜上皮细胞随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、LPS+TRPA1抑制剂组,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞TRPA1在mRNA和蛋白上的表达水平,以自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3感染细胞并通过荧光显微镜观察各组细胞自噬情况,并使用透射电镜观测各组细胞自噬小体形成,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞ICAM-1在mRNA和蛋白上的表达水平。结果 相较于对照组,CRSsNP与CRSwNP患者鼻黏膜上TRPA1平均光密度值升高,其mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均上调(P<0.05),且LC3-Ⅱ平均光密度值升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,Beclin-1蛋白相对表达量上调而p62蛋白相对表达量下调(P<0.05),组织内自噬水平升高。成功分离到生长密集、形状为梭形或多边形以及AE1呈阳性表达的鼻黏膜上皮细胞;与LPS组比较,经过LPS与TRPA1抑制剂共处理的鼻黏膜上皮细胞TRPA1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下调(P<0.05),自噬溶酶体红色荧光减弱,自噬小体也明显减少,同时,ICAM-1mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下调(P<0.05)。结论CRS中TRPA1表达异常增加,自噬水平也升高,靶向抑制TRPA1能够抑制CRS上皮细胞自噬以及ICAM-1表达的升高。

慢性鼻窦炎鼻内窥镜手术前后鼻粘膜观察

目的：对比观察慢性鼻窦炎鼻内窥镜手术前后鼻粘膜的变化。方法：对32例慢性鼻窦炎患者鼻内窥镜手术前及术后，与正常对照组28例，进行糖精试验和鼻粘膜光镜观察；(2)对10例慢性鼻窦炎患者鼻内窥镜手术前及术后与正常对照组2例进行鼻粘膜扫描电镜和透射电镜观察。结果：(1)慢性鼻窦炎患者术前与对照组比较，糖精试验时间(STT)明显延长(P<0．01)；术后较术前STT明显缩短(P<0．05)。(2)光镜下观察：慢性鼻窦炎患者术前出现炎性细胞浸润、水肿、息肉形成和病理性腺体增生，与对照组比较有显著性差异(P<0．01)。术后炎性细胞浸润、水肿和息肉形成明显减轻(P<0．01)，与正常对照组比较，无显著性差异(p>0．05)；但病理性腺体增生术前后对比无明显减轻(P>0．05)。(3)电镜观察：慢性鼻窦炎患者术前鼻粘膜超微结构受到破坏，术后4个月，粘膜结构基本恢复正常。结论：(1)慢性鼻窦炎患者鼻粘膜的正常结构和生理功能受到破坏；(2)慢性鼻窦炎患者FESS术后鼻粘膜的结构和纤毛清除、免疫功能较术前明显改善，术后4个月基本恢复正常；(3)慢性鼻窦炎患者FESS术后鼻粘膜中病理性腺体及粘膜分泌功能的恢复可能需要更长时间，甚至不能恢复。

慢性鼻窦炎鼻黏膜上皮TNFα和IL-1βmRNA的表达

目的 探讨前炎症细胞因子 (proinflammatorycytokine)、肿瘤坏死因子α(Tumornecrosisfactorα ,TNFα)和白细胞介素 1β(Interleukin 1β ,IL 1β)mRNA在慢性鼻窦炎病人和健康人鼻黏膜上皮细胞中的表达 ,分析鼻黏膜上皮细胞在鼻粘膜天然免疫中的作用。方法 应用核酸分子原位杂交技术检测 3 0例慢性鼻窦炎病人和 2 1例健康人鼻黏膜上皮细胞中TNFα和IL 1βmRNA的表达。 结果 TNFα和IL 1βmRNA在 3 0例慢性鼻窦炎上皮细胞中均有表达 ,且分别与健康对照组间差异有统计学意义 (t=8.13 ,P <0 .0 1)和 (t=7.74,P <0 .0 1)。结论 鼻黏膜上皮细胞可通过产生前炎症细胞因子、TNFα和IL 1β主动参与粘膜炎症。表明鼻黏膜上皮不仅是单纯的物理屏障 。