IL-17对髓鞘碱性蛋白诱导鼻黏膜免疫耐受治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

目的探讨IL-17对髓鞘碱性蛋白(MBP)68-86诱导鼻黏膜免疫耐受治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的影响。方法将大鼠分为5组,分别经鼻黏膜滴注PBS、MBP68-86、MBP68-86+IL-17(0.01μg/d)、MBP68-86+IL-17(0.05μg/d)和MBP68-86+IL-17(0.1μg/d)诱导其发生免疫耐受,并在此基础上建立EAE动物模型,观察各组大鼠发病情况;通过3H掺入试验检测特异性抗原MBP68-86多肽诱导T淋巴细胞增殖活性;HE染色观察脊髓淋巴细胞浸润情况,免疫组化方法检测脊髓中单位面积IL-17+细胞数。结果PBS组和IL-170.1μg/d组与MBP组相比,大鼠免疫后出现进食减少、体重减轻、尾瘫、后肢瘫痪等临床症状,IL-170.01μg/d组和0.05μg/d组大鼠临床症状较轻或无症状。淋巴细胞增殖试验结果显示,PBS组和IL-170.1μg/d组与MBP组相比,特异性淋巴细胞增殖反应显著增高,IL-170.01μg/d组和0.05μg/d组与MBP组相比,差异无显著意义,与IL-170.1μg/d组相比差异有显著意义;PBS组、IL-170.1μg/d组与MBP组、IL-170.01μg/d组和0.05μg/d组相比,脊髓切片中淋巴细胞浸润面积较大且细胞数量较多,IL-17+细胞数也显著增多。结论MBP68-86特异性肽段可诱导EAE免疫耐受的形成,预防EAE的发生;鼻黏膜给予IL-17可以打破MBP诱导的特异性免疫耐受,且存在剂量依赖性。

反复冷-热刺激对大鼠鼻黏膜免疫屏障功能的影响及中医解表方的作用研究

目的探讨反复冷-热刺激对大鼠鼻黏膜免疫屏障功能的影响,考察中医常用解表方麻黄汤和银翘散的作用。方法将SD大鼠置于-15℃1 h,再转入25℃30 min,冷-热交替刺激4次,末次刺激后检测不同时间点鼻黏膜中IgA蛋白表达水平,检测1 d后鼻腔灌洗液中溶菌酶、sIgA及PGE2含量,血清中的炎症因子含量;冷-热刺激后第9天,再次给予相同条件刺激,分别于末次刺激后1~11 d检测鼻黏膜中IgA蛋白动态变化,鼻腔灌洗液中溶菌酶、PGE2动态变化,血清中炎症因子动态变化,再次刺激1 d后鼻腔灌洗液中sIgA含量;解表方麻黄汤2.43 g生药/kg BW水煎液、银翘散33.48 g生药/kg BW水煎液对两轮冷-热刺激的大鼠进行干预,经第二轮冷-热刺激24 h后检测相应指标。结果反复冷-热刺激后,大鼠鼻黏膜IgA蛋白表达在刺激后1、3 d明显降低,随后逐渐上升,刺激后7 d恢复正常;刺激后1 d sIgA明显降低,溶菌酶及炎症因子无明显变化。当大鼠再次受到冷-热刺激后,鼻黏膜IgA蛋白表达显著下降,鼻腔灌洗液中溶菌酶及PGE2的含量明显降低;血清中TNF-α、PGE2、IL-1β及IL-6的含量显著升高。麻黄汤和银翘散干预后,两方均可升高大鼠鼻黏膜中IgA蛋白表达及鼻腔灌洗液中sIgA的含量,银翘散还可升高溶菌酶含量,降低血清的TNF-α、IL-1β含量。结论反复冷-热刺激可导致大鼠鼻黏膜免疫屏障功能下降,血清中多种炎症因子或炎症介质释放增加,麻黄汤和银翘散均可提高大鼠鼻黏膜免疫屏障功能,麻黄汤增加IgA含量的作用较明显,银翘散减少炎症因子的作用更明显。

鼻黏膜免疫佐剂提高疫苗免疫效应的作用机制及进展

大量研究表明,通过鼻黏膜免疫的疫苗可诱导机体生成免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA),有望成为疫苗的有效作用途径之一。但单独使用疫苗鼻黏膜免疫后不会在鼻腔中诱导强IgA产生,需要添加免疫佐剂激活先天免疫应答,增强抗原特异性IgA产生和细胞应答。目前应用的鼻黏膜免疫佐剂种类繁多,但佐剂促进免疫应答的具体机制仍不清楚。本文讨论了鼻黏膜免疫佐剂在鼻相关淋巴组织(nasal-associated lymphoid tissue,NALT)中促进免疫应答的途径,为进一步对鼻黏膜免疫佐剂的相关研究提供参考。

黏膜佐剂鼻内免疫抗旋毛虫感染作用的探讨

目的 研究黏膜佐剂霍乱毒素B亚单位(CT-B)经鼻内免疫诱发旋毛虫感染的黏膜免疫。方法 24只NIH小鼠随机分为四组,即:①CT-B免疫组(CT-B);②正常对照组(C);③CT-B免疫感染组(CT-B+INF);④单纯感染组(INF)。CT-B组和CT-B+INF组每周经鼻免疫1次(幼虫抗原100μg、CT-B10μg),共3次,末次免疫后1周,CT-B+INF组和INF组同时给予200条旋毛虫幼虫攻击感染,感染后一周,检查小鼠肠道成虫数、雌虫生殖力。CT-B组与C组于CT-B组末次免疫后7日,CT-B+INF组与INF组于攻击感染后7日,对各组小鼠血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG),肠黏液分泌型免疫球蛋白A(sIgA)进行比较。结果 与单纯感染组相比,CT-B+INF组肠道成虫数明显减少,雌虫生殖力明显降低,成虫与新生幼虫减虫率分别为89.95％和74.93％。CT-B+INF小鼠肠黏液sIgA、血清IgA较对照组小鼠明显提高(0.29±0.07vs0.09±0.02,0.25±0.09vs0.08±0.01,P<0.001);而两组IgG1和IgG2b水平无显著性差异(P>0.05)。CT-B+INF组小鼠肠黏液sIgA、血清IgA较INF组小鼠相比有显著性差异(0.78±0.25vs0.08±0.15,0.42±0.10vs0.10±0.10,P<0.001),而两组IgG1和IgG2b水平无显著性差异(P>0.05)。结论 本研究显示CT-B不仅能提高局部黏膜sIgA水平诱导局部免疫应答,还能提高IgA水平诱导全身?

绿原酸-黄芩苷共载纳米粒鼻腔原位凝胶的制备及增强鼻黏膜免疫作用

目的制备绿原酸-黄芩苷共载纳米粒鼻腔原位凝胶(chlorogenic acid-baicalin co-loaded nanoparticles in situ nasal gel,CA&B-NPs/ISNG),初步考察其对上呼吸道黏膜免疫功能低下(upper airway immunity dysfunction,UAID)小鼠的影响。方法以包封率和胶凝温度为评价指标,制备出CA&B-NPs/ISNG,表征其形态、粒径分布、ζ电位、体外释药量及凝胶溶蚀量;采用牛蛙上颚离体法考察CA&B-NPs/ISNG对纤毛的毒性;建立UAID小鼠模型,测定小鼠唾液的分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,SIgA)含量和溶菌酶活性,考察CA&B-NPs/ISNG增强鼻黏膜免疫的作用。结果优选处方:取绿原酸和黄芩苷各11.0 mg,加入10 mL聚乙二醇(PEG)400溶解成CGA-BC溶液,磁力搅拌下缓慢滴入到25 mL 2.72 mg/mL壳聚糖溶液中,调节pH至5.0,然后磁力搅拌下缓慢滴加10 mL 1.00 mg/mL三聚磷酸钠(tripolyphosphate,TPP)溶液,得CA&B-NPs混悬液;往CA&B-NPs混悬液中加入体系18.5%泊洛沙姆407(Poloxamer 407,P407),溶胀分散均匀后,加入体系1%泊洛沙姆188(Poloxamer 188,P188),待完全溶胀分散均匀,调节pH至5.5,得CA&B-NPs/ISNG。纳米粒形态规则,平均粒径(536.10±16.24)nm,粒子分散系数0.310±0.053,ζ电位(24.39±0.27)mV,绿原酸和黄芩苷包封率分别为(44.67±0.43)%和(55.25±0.61)%;胶凝温度为(32.03±0.31)℃。CA&B-NPs/ISNG表现出持续缓慢释药和无明显的纤毛毒性,且能显著提高SIgA的含量和溶菌酶的活性(P<0.05)。结论制备的CA&B-NPs/ISNG均一稳定,包封率高,适用鼻用制剂要求,可提高UAID小鼠的鼻黏膜免疫功能。

“肺开窍于鼻”理论与哮喘的相关性研究进展

从生理解剖结构看,鼻为呼吸之门户,与肺相连,脏腑络属关系密切;从鼻病与哮喘的关系看,过敏性鼻炎与哮喘同为变态反应性疾病,且二者之间存在免疫递进关系;从哮喘患者鼻咽部微生物群落特征性看,主要有链球菌属、奈瑟菌属、普雷沃菌属等菌属;在哮喘患者的鼻黏膜免疫方面,主要涉及白细胞介素(IL)-33及IL-8的活化,辅助性T细胞17(Th17)促炎因子高水平表达,IL-38抑炎因子低水平表达,细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)、IL-10高水平表达等。该文旨在研究“肺开窍于鼻”理论的真实物质形态基础与其在哮喘中的作用体现,研究哮喘患者肺-鼻的物质基础、鼻部微生态及免疫防御等特点,从而充分挖掘“肺开窍于鼻”理论等在哮喘中的实际应用。

GLS和IL-12偶联重组耻垢分枝杆菌免疫效果的观察

目的:研究携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠IL-12基因质粒(pZM03)偶联重组耻垢分枝杆菌(ATCC607)经鼻黏膜免疫小鼠后,小鼠体内的免疫状况。方法:BALB/c小鼠36只,随机分为生理盐水、pZM03、ATCC607、卡介苗(BCG)、重组ATCC607(即携带pZM03的ATCC607)、灭活重组ATCC607组;采用滴鼻法免疫小鼠,BCG组0、14天各1次,其它组0、4、14天各1次,第0天免疫后4周处死小鼠,用ELISA检测血清中IFN-γ、IL-12、IgG2a、lL-4的分泌水平和淋巴细胞PPD诱导的IFN-γ分泌水平以及肺泡灌洗液特异性SIgA的水平,用MTS法检测免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况。结果:重组ATCC607血清中IFN-γ、IL-12水平与BCG组无明显差异但明显高于其他组(P<0.05),IgG2a水平重组ATCC607组高于BCG组和其他组(P<0.05),各组间IL-4水平差异无统计学意义。重组ATCC607、BCG、灭活重组ATCC607及ATCC607组用PPD均可诱导小鼠脾淋巴细胞增殖,各组间差异无显著意义,但与生理盐水和pZM03组间差异有显著意义(P<0.05)。重组ATCC607组PPD诱导淋巴细胞IFN-γ明显高于其它组(P<0.05),与BCG组比较无显著差异。重组ATCC607等含菌组经鼻黏膜免疫可产生黏膜特异性SIgA。结论:重组ATCC607经鼻黏膜免疫小鼠后,机体特异性免疫特别是细胞免疫和黏膜免疫增强,为重组ATCC607治疗结核病的研究奠定了基础。

鼻内黏膜免疫研究进展

大多数病原体在机体的黏膜表面起始感染,因此黏膜免疫是机体抵御感染的第一道防线。黏膜免疫可通过多种途径实现,经鼻黏膜途径免疫是其中一种。鼻内黏膜免疫是机体抵抗呼吸道病原感染最有效的途径,它不仅能诱导局部黏膜免疫反应,还可诱导全身系统免疫反应,是当前预防呼吸道疾病的研究热点。文章对鼻内黏膜免疫系统、M细胞介导的抗原摄取及转运、鼻黏膜免疫的运载系统及鼻黏膜免疫的应用等研究进展进行简要的介绍。

GLS/IL-12重组耻垢分枝杆菌的构建及其在小鼠体内的表达

目的构建携带编码人天然颗粒溶素(GLS)和小鼠IL-12基因质粒(pZM03)的重组耻垢分枝杆菌,并经鼻黏膜免疫观察其在小鼠体内的表达。方法将人GLS和小鼠IL-12基因及分枝杆菌复制子OriM同时克隆进多启动子真核共表达载体pBudCE4.1中,得到穿梭质粒pZM03,以pZM03电转化耻垢分枝杆菌,再将该重组耻垢分枝杆菌滴鼻免疫Balb/c小鼠3次,第1次免疫后4周,处死小鼠,用免疫组化检测肺、脾组织中GLS表达,用ELISA检测血清IL-12和肺泡灌洗液特异性SIgA的水平。结果得到可表达GLS/IL-12重组耻垢分枝杆菌;在Balb/c小鼠肺、脾组织中均检测到重组耻垢分枝杆菌的分布,以及GLS的表达,并有血清IL-12水平升高和黏膜特异性SIgA的产生。结论成功构建GLS和IL-12修饰的重组耻垢分枝杆菌,该重组菌经鼻黏膜免疫小鼠后,可引起呼吸道黏膜特异性抗菌免疫,以及GLS和IL-12的体内表达,为新型疫苗的研究奠定了基础。