齐墩果酸对B淋巴细胞损伤的保护作用并基于网络药理学探索其作用机制

目的:研究齐墩果酸对B淋巴细胞损伤的保护作用并基于网络药理学方法阐明其作用机制。方法:在实验第1~5天每天给昆明小鼠腹腔注射环磷酰胺80 mg/kg以建立免疫抑制动物模型。从造模第6天开始每天给予25 mg/kg齐墩果酸处理,连续28 d作为干预组,同时设置模型组和空白组作为对照。采用流式细胞术检测各组小鼠的骨髓B淋巴细胞亚群百分率。为探索齐墩果酸的作用机制,进一步使用PubChem数据库获得齐墩果酸的化学结构,用SwissTargetPrediction数据库预测齐墩果酸的药物靶点,通过String平台对潜在的药物靶点进行蛋白质相互作用网络分析、基因本体(GO)生物过程富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。结果:在给药28 d后,模型组的成熟B细胞亚群(IgD与B220双阳性细胞)百分率为(2.585±0.248)%,明显低于空白组的(8.235±0.361)%,差异具有统计学意义(P<0.01),说明免疫抑制动物模型成功建立;而齐墩果酸干预组的成熟B细胞亚群百分率为(3.395±0.445)%,明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.01)。通过SwissTargetPrediction数据库筛选到PTPN1、CD81等齐墩果酸的潜在药物靶点。经String平台分析和Cytoscape绘图计算后,连通性排名前5的节点蛋白有PPARG、PTGS2、PPARA、MAPK3和HMGCR。通过GO生物过程富集分析及KEGG信号通路分析得出,齐墩果酸的药理作用富集于脂质储存的负调控等生物过程及B细胞受体(BCR)信号通路。结论:齐墩果酸能够增加骨髓成熟B细胞亚群的百分率,其机制可能是通过影响BCR信号通路在B淋巴细胞的发育过程中发挥作用。

齐墩果酸通过miR-18a-5p/STK4轴抑制白血病K562细胞恶性进展

慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是由于骨髓造血干细胞的恶性增生导致的疾病。虽然酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors,TKI)对慢性粒细胞性白血病的治疗取得长足进展,但耐药问题仍未解决。因此,寻找新的治疗药物和靶点十分关键。有研究表明,miRNAs与慢性粒细胞白血病在内的多种肿瘤有密切联系,齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对白血病细胞有较好的抑制效果。通过对转录物组测序结果发现,齐墩果酸可以显著上调丝氨酸/苏氨酸蛋白质激酶4(serine/threonine-protein kinase 4,STK 4)的水平,而miR1a-5p是STK 4的靶miRNA。因此,本文旨在探究齐墩果酸是否可以通过miR-18a-5p/STK4影响K562细胞恶性进展。K562细胞经齐墩果酸处理后差异表达基因富集在凋亡相关通路上。EdU实验和CCK-8实验结果发现,齐墩果酸降低K562细胞增殖能力(P<0.05)。qRT-PCR,免疫荧光和Western印迹结果显示,齐墩果酸处理后,K562细胞中STK 4蛋白质水平表达显著上调(P<0.05),miR-18a-5p表达下调(P<0.05)。在细胞中转染miR-18a-5p mimics,能显著抑制STK 4的表达(P<0.05);转染miR-18a-5p inhibitor能显著增加STK 4的表达(P<0.05)。活性氧(reactive oxygen species、ROS)检测和线粒体膜电位检测结果显示,齐墩果酸可以促进K562细胞中ROS的增加,降低线粒体膜电位。过表达STK 4后,与Vector组相比,细胞的线粒体膜电位下降;敲降STK 4可以逆转齐墩果酸组导致的线粒体膜电位下降。流式细胞术检测显示,齐墩果酸能明显促进细胞凋亡的发生,而转染miR-18a-5p mimics后凋亡率显著下调(P<0.05);过表达STK 4可以促进细胞从早期凋亡向晚期凋亡转化,而同时转染miR-18a-5p mimics可以抑制这一现象。我们的研究结果证实,齐墩果酸可以通过维持miR-18a-5p的低表达和保持STK 4的高表达状态来促进K562细胞的凋亡。

齐墩果酸调节Wnt/β-catenin信号通路减轻大鼠激素性股骨头坏死

背景:齐墩果酸具有促进成骨细胞增殖、抑制破骨细胞增殖,进而改善激素性股骨头坏死的功效,但其具体作用机制尚不完全清楚。目的:探究齐墩果酸通过调节Wnt/β-catenin信号通路减轻大鼠激素性股骨头坏死的机制。方法:将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、齐墩果酸组、齐墩果酸+sFRP1组,后3组大鼠注射醋酸泼尼松龙建立大鼠激素性股骨头坏死模型。齐墩果酸组大鼠灌胃10 mg/(kg·d)齐墩果酸并肌肉注射相应生理盐水,齐墩果酸+sFRP1组大鼠灌胃10 mg/(kg·d)的齐墩果酸并肌肉注射1 mg/(kg·d)的Wnt抑制剂sFRP1,对照组和模型组大鼠灌胃和肌肉注射等体积生理盐水,给药6周。检测各组大鼠血清Ca、P、转化生长因子β1及碱性磷酸酶水平;micro-CT检测股骨形态;苏木精-伊红染色观察股骨组织形态;TUNEL检测组织细胞凋亡率;蛋白印迹法检测Bcl-2、Bax、Wnt、β-catenin蛋白水平。结果与结论:①与对照组相比,模型组大鼠骨小梁、股骨头严重损伤,血清Ca、P、转化生长因子β1水平、骨组织Bcl-2、Wnt、β-catenin蛋白水平显著降低,血清碱性磷酸酶水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,齐墩果酸组大鼠骨小梁稀疏程度明显改善,股骨头损害程度显著减轻,血清碱性磷酸酶水平、细胞凋亡率、Bax蛋白水平显著降低,血清Ca、P、转化生长因子β1水平、骨组织Bcl-2、Wnt、β-catenin蛋白水平显著升高(P<0.05);与齐墩果酸组相比,齐墩果酸+sFRP1组大鼠上述指标呈现相反变化(P<0.05)。②结果说明,齐墩果酸可改善激素性股骨头坏死大鼠的骨代谢指标和骨小梁结构,减轻股骨头坏死,可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路实现的。

威灵仙栽培品和野生品的齐墩果酸含量测定及指纹图谱研究

目的 考察人工栽培的威灵仙能否达到2020版《中华人民共和国药典》(一部)对齐墩果酸含量不得低于干燥品0.3%的要求,同时比较栽培品和野生品中齐墩果酸的含量差别。建立威灵仙的指纹图谱,分析栽培品和野生品的差异性。方法 参照2020版《中华人民共和国药典》(一部)测定样品的齐墩果酸含量,通过聚类分析和非配对样本t检验比较栽培品和野生品的含量差别。基于HPLC(DAD)建立威灵仙75%乙醇-水提取物的指纹图谱,通过相似度评价、主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)确定样品之间的差异性。结果 含量测定结果显示,栽培品能达到2020版《中华人民共和国药典》(一部)关于其含量的要求,且栽培品与野生品齐墩果酸含量差异无统计学意义(P>0.05)。剔除特殊样品后建立的指纹图谱共匹配出9个共有峰,通过相似度评价发现产自辽宁省西南部的样品和产自辽宁省东北部的样品化学成分差异较大。通过PCA和OPLS-DA发现建立指纹图谱的方法能够对栽培品和野生品进行区分,并确定出保留时间(RT)为13.984、55.772、70.646、84.891 min的峰为差异性色谱峰。差异性色谱峰峰面积比较结果显示栽培品RT为13.984 min的差异性色谱峰峰面积明显高于野生品(P<0.05),其余3个差异性色谱峰峰面积均明显低于野生品(P<0.05)。结论 研究发现从齐墩果酸含量的角度无法区分威灵仙的植物基源。建立的指纹图谱能够方便快速地区分威灵仙的植物基源,为威灵仙的质控和高效利用提供参考。

基于网络药理学和分子对接技术探讨齐墩果酸治疗非酒精性脂肪肝的作用机制

目的基于网络药理学和分子对接等方法,分析齐墩果酸(OA)治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制。方法利用TCMSP、SwissTargetPrediction数据库和文献研究收集OA的潜在靶点(检索截止时间:2023年11月10日);利用GeneCards和OMIM数据库收集NAFLD相关靶点(检索截止时间:2023年11月10日)并与OA靶点进行交叉匹配,得到OA治疗NAFLD的潜在靶点。构建蛋白质-蛋白质互相作用(PPI)网络筛选核心靶点。进行GO和KEGG富集分析,进一步构建“成分-靶点-关键通路”网络。采用分子对接技术验证OA与核心靶点之间的相互作用,以验证网络药理学预测结果的准确性。结果通过文献和各数据库检索得到OA靶点94个、NAFLD靶点2816个,交集得出63个OA治疗NAFLD的潜在靶点。PPI网络分析发现PPARG、PPARA、PTGS2、ESR1和HMGCR等可能是OA治疗NAFLD的核心靶点。KEGG结果显示,潜在靶点主要富集在PPAR信号通路。进一步分子对接结果显示,OA与上述核心靶点的结合能均<-7 kcal/mol,有较高结合性能,与网络药理预测结果相符。结论OA可能是治疗NAFLD的候选药物,其可能通过调控多靶点实现治疗NAFLD的作用。该研究为OA治疗NAFLD的药理研究及临床应用提供参考。

齐墩果酸对肝癌HCCLM3细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及机制研究

目的研究齐墩果酸对人肝癌HCCLM3细胞裸鼠移植瘤生长的影响,并探讨其对肿瘤组织凋亡及相关基因表达的影响。方法BALB/c裸鼠皮下接种人肝癌细胞株HCCLM3构建肝癌移植瘤模型,随机分为模型组和药物组,分别给予0.01 mL/g玉米油和5 mg/kg齐墩果酸灌胃。给药期间测量并记录各组裸鼠的一般状态、体质量、瘤体质量和体积。通过HE、Ki67、TUNEL染色分别检测移植瘤组织中细胞坏死病理学改变、细胞增殖、细胞凋亡情况;采用qRT‐PCR检测移植瘤组织中CyclinD1、CyclinE1、CDK4、Bcl⁃2和Bax基因的mRNA表达水平。结果与模型组相比,药物组裸鼠体质量无明显差异,移植瘤体质量和体积均显著下降(均P<0.05)。HE染色结果显示药物组移植瘤组织形态发生明显改变,出现坏死区域。药物组瘤组织Ki67阳性表达强度显著低于模型组(P<0.01);TUNEL阳性表达强度显著高于模型组(P<0.05)。齐墩果酸给药后移植瘤组织中增殖相关基因CyclinD1、CyclinE1和CDK4的mRNA表达水平均降低,但差异无统计学意义(均P>0.05);抑凋亡相关基因Bcl⁃2的mRNA表达水平降低(P<0.05),而促凋亡相关基因Bax的mRNA表达水平升高(P<0.01)。结论齐墩果酸能抑制人肝癌HCCLM3细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡相关。

不同产地木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定

目的:测定不同产地木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量。方法:以云南保山、大理两产地的木瓜为试验材料,通过正交试验对提取方法进行优化,采用高效液相色谱法测定木瓜中齐墩果酸和熊果酸含量。结果:当提取试剂为甲醇、浸泡时间为1 h、超声时间为30 min时,提取效果最佳。结论:不同产地木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量有差异,为木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量测定提供理论依据。

UPLC-PDA法对圣罗勒叶中熊果酸和齐墩果酸的定性定量分析

目的:建立测定圣罗勒叶中熊果酸和齐墩果酸定量和定性的方法。方法:利用UPLC-PDA测定圣罗勒叶中熊果酸和齐墩果酸的含量,并建立其指纹图谱用来定性。结果:通过使用超高效液相色谱仪对圣罗勒叶原料、提取物和成品进行分析,得到了相同的指纹图谱用于定性和熊果酸与齐墩果酸定量的方法。结论:建立的方法快速、准确可靠、重复性好,适合于圣罗勒叶原料、提取物和成品的定性分析和其齐墩果酸和熊果酸的定量分析。

超高效液相色谱-串联质谱法研究木瓜中熊果酸和齐墩果酸含量

本文利用超高效液相色谱仪LC-30A和三重四级杆质谱仪LCMS-8050联用仪,采用外标快速法,准确地测定新鲜酸木瓜中熊果酸和齐墩果酸含量。结果表明,该方法简单、快速,能够准确区分熊果酸和齐墩果酸同分异构体保留时间,适用于酸木瓜中熊果酸和齐墩果酸的液相色谱-串联质谱含量分析。

齐墩果酸靶向Bcl-2诱导鼻咽癌细胞发生线粒体主导的凋亡

目的探索齐墩果酸(OA)对高分化鼻咽癌细胞CNE-1的抑制作用并阐明其机制。方法选择不同浓度OA处理CNE-1细胞,CCK-8实验检测细胞活力,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染法和流式细胞术分析细胞凋亡情况。检索数据库ChEMBL筛选OA调控细胞凋亡的潜在靶点,通过Western印迹检测细胞凋亡相关蛋白表达情况。结果OA导致CNE-1细胞活力降低与细胞凋亡增加。靶标预测发现抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2是OA的潜在靶点。Western印迹结果也证实OA导致线粒体凋亡相关蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3水平增加,而Bcl-2水平下降。结论OA能够靶向Bcl-2通过线粒体途径诱导鼻咽癌细胞CNE-1的凋亡,有望作为鼻咽癌治疗的候选药物。

HPLC法同时测定风湿骨痛液中常春藤皂苷元和齐墩果酸的含量

目的建立HPLC法同时测定风湿骨痛液中常春藤皂苷元、齐墩果酸含量。方法采用PFchrom C_(18)色谱柱,流动相乙腈-水(90∶10),流速1.0 mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长为205 nm,进样量10μL。结果常春藤皂苷元、齐墩果酸具有良好的线性关系,其线性范围分别为32.76~655.20μg·mL-1(r=0.9995)、20.88~417.60μg·mL-1(r=0.9996);平均回收率(n=9)分别为99.19%、99.74%,RSD分别为0.91%、1.08%。含量测定结果(n=3)分别为0.0947~0.0961 mg·mL-1、0.0473~0.0489 mg·mL-1。结论该方法为提高风湿骨痛液的质量标准研究提供了参考。

超声波辅助乙醇同时提取毛叶木瓜中的齐墩果酸与总黄酮及其应用

采取超声波辅助法研究毛叶木瓜中齐墩果酸与总黄酮的同时提取工艺.通过单因素试验,探讨超声时间、超声温度、超声功率和乙醇浓度对得率的影响,确定较优的工艺参数范围.通过设计响应面进行优化试验,以齐墩果酸与总黄酮的总得率为指标,确定最优的同时提取工艺参数.研究发现,当超声功率200 W、超声温度66℃、超声时间4 min、乙醇浓度59%时,齐墩果酸与总黄酮总得率为10.90%,其中齐墩果酸得率为5.00%,总黄酮得率为5.90%.采用提取液调配所制得的饮品均匀透亮、具有毛叶木瓜特有的香气和口感.

齐墩果酸-环金属铱配合物的点击化学合成及抗肿瘤性能

选择天然产物齐墩果酸进行炔基化修饰(OA-alkyne),与环金属铱前体CycloIr-N3在铜催化条件下发生叠氮-炔环加成(CuAAC)反应,得到新的环金属铱配合物CycloIr-OA,通过1H NMR、ESI-MS对配体及配合物进行了表征。配合物具有良好的脂溶性,可以快速进入细胞。用MTT法、激光共聚焦成像及流式细胞术对CycloIr-OA的抗肿瘤活性和抗癌机制进行了研究。结果表明,连接齐墩果酸后,配合物CycloIr-OA的抗癌活性有较大提升。CycloIr-OA富集在肿瘤细胞的线粒体中,导致活性氧产生,同时将细胞周期阻滞在S期,最终诱导肿瘤细胞坏死。

齐墩果酸对小鼠肠道免疫功能损伤的修复作用

目的揭示齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对免疫缺陷小鼠肠道免疫功能的影响。方法选取32只8周龄雌性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、OA低剂量组与OA高剂量组。模型组与OA各剂量组连续5 d、1次/d腹腔注射环磷酰胺(80 mg/kg)制备免疫缺陷动物模型,正常组腹腔注射相应体积生理盐水。OA低剂量组(5 mg/kg)、OA高剂量组(25 mg/kg)第6天起1次/d灌胃给予OA(用2%Tween 80制成混悬液),正常组与模型组灌胃给予相应体积2%Tween 80,连续给药28 d。将正常组、模型组、OA低剂量组与OA高剂量组动物实施安乐死后摘除胸腺和脾脏,分析各组动物胸腺指数与脾脏指数,通过流式细胞术分析与比较各组动物肠系膜淋巴结T淋巴细胞亚群,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)分析与比较各组动物肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(secretary immunoglobulin A,sIgA)的水平。结果模型组动物胸腺指数(0.513±0.07)与脾脏指数(2.059±0.265)均显著低于正常组动物(P<0.05);OA高剂量组动物胸腺指数为(0.690±0.027),脾脏指数为(2.441±0.257),均显著高于模型组动物(P<0.05);OA高剂量组动物肠系膜淋巴结的CD3^(+)CD4^(+)T淋巴细胞占全部淋巴细胞的百分比为(42.70±5.31)%,CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞占全部淋巴细胞的百分比为(18.33±1.90)%,均显著高于模型组动物(P<0.05);OA低剂量组动物肠系膜淋巴结的CD3^(+)CD8^(+)T淋巴细胞占全部淋巴细胞的百分比(16.48±3.80)%,显著高于模型组动物(P<0.05);OA高剂量组动物的肠黏膜sIgA含量为(1.38±0.38)ng/mL,显著高于模型组动物(P<0.05)。结论OA能够增加免疫缺陷小鼠胸腺指数与脾脏指数,增加肠系膜淋巴结T淋巴细胞的数量,促进肠黏膜sIgA的产生。OA对小鼠肠道免疫功能损伤具有修复作用。

齐墩果酸对糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应和视网膜神经节细胞损伤的影响

目的 探讨齐墩果酸对糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应和视网膜神经节细胞(RGC)损伤的影响。方法 取6周龄健康清洁级雄性SD大鼠30只,将大鼠随机分为对照组、糖尿病组和齐墩果酸组,每组10只。对照组大鼠给予鼠维持饲料喂养,糖尿病组和齐墩果酸组给予高脂饲料喂养。4周后,按照35 mg·kg^(-1)的剂量给予糖尿病组和齐墩果酸组大鼠腹腔内注射链脲佐菌素,对照组注射相应体积的柠檬酸钠缓冲液。次日尾静脉采血,大鼠空腹血糖≥11.1 mmol·L^(-1)说明造模成功。剔除2只造模失败的大鼠,最终对照组10只大鼠,糖尿病组9只,齐墩果酸组9只。齐墩果酸组大鼠每天给予100 mg·kg^(-1)齐墩果酸灌胃,对照组及糖尿病组每天给予等量的溶剂灌胃。干预8周后处死大鼠,摘取双侧眼球。分离大鼠左眼视网膜,检测大鼠视网膜组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。将大鼠右侧眼球固定后,石蜡包埋、切片,HE染色观察视网膜组织形态,免疫组织化学染色计算RGC密度并检测核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)及血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达情况。结果 糖尿病组大鼠视网膜组织SOD活性低于对照组,齐墩果酸组大鼠视网膜组织SOD活性高于糖尿病组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。糖尿病组大鼠视网膜组织MDA含量高于对照组,齐墩果酸组大鼠视网膜组织MDA含量低于糖尿病组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与对照组相比,糖尿病组大鼠视网膜变薄,结构疏松,内核层和外核层细胞排列紊乱,外丛状层连续性差;与糖尿病组相比,齐墩果酸组大鼠视网膜结构较清晰,细胞排列较整齐。糖尿病组大鼠视网膜组织RGC密度小于对照组,齐墩果酸组大鼠视网膜组织RGC密度大于糖尿病组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。糖尿病组大鼠视网膜组织Nrf2及HO-1染色阳性的平均光密度均高于对照组,齐墩果酸组大鼠视网膜组织Nrf2及HO-1染色阳性的平均光密度均高于糖尿病组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 齐墩果酸可能通过调控Nrf2/HO-1通路来减轻糖尿病大鼠视网膜氧化应激反应和RGC损伤。

齐墩果酸通过抑制自噬调节变应性鼻炎中的Treg/Th17细胞失衡

目的 探讨齐墩果酸对变应性鼻炎(AR)中调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)/辅助性T细胞17(helper T cells17,Th17)的调节作用及潜在机制。方法 收集AR患者鼻黏膜组织及外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclear cell,PBMC)。饲养BALB/c小鼠。PBMC用于建立AR细胞模型,BALB/c小鼠用于建立AR动物模型。对于AR细胞使用150μg/ml的齐墩果酸进行治疗。对于AR小鼠使用低剂量(L)-齐墩果酸(50 mg/kg)、高剂量(H)-齐墩果酸(200 mg/kg)、自噬抑制剂3-MA(10 mg/kg)、H-齐墩果酸+自噬激活剂雷帕霉素(Rapa,1 mg/kg)分别进行治疗。qRT-PCR测人鼻黏膜组织IL-17A和Foxp3的表达以及小鼠各组鼻黏膜组织中RORγt和Foxp3的表达。流式细胞术从PBMC中分选Th17和Treg细胞,并检测PBMC中白细胞介素17A(IL-17A)细胞和叉头样转录因子3(Foxp3)细胞的比例。Western blot法检测Th17和Treg细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、p62的表达。酶联免疫吸附试验检测各组小鼠鼻腔灌洗液中IL-17A和IL-10的表达。结果 AR组患者鼻黏膜组织中IL-17A表达显著增加,但Foxp3的表达显著降低(P均<0.05)。齐墩果酸下调PBMC中IL-17A的表达,并上调Foxp3的表达。齐墩果酸抑制Th17细胞和Treg细胞中Beclin1、LC3-Ⅱ以及LC3-Ⅰ的表达(P均<0.05),促进p62的表达水平。齐墩果酸降低AR小鼠体内IL-17A和RORγt水平,并上调IL-10和Foxp3的水平(P均<0.05)。结论 齐墩果酸通过抑制自噬信号改善AR中Th17/Treg细胞的平衡。

不同采收期、不同年限东北铁线莲中总多糖及齐墩果酸含量测定

目的通过测定不同采收期、不同年限东北铁线莲中总多糖及齐墩果酸含量的变化,为东北铁线莲药材的采收期和采收年限确定提供帮助。方法采用紫外分光光度法在483nm处测定东北铁线莲总多糖的含量;采用高效液相法测定东北铁线莲齐墩果酸的含量。结果东北铁线莲总多糖以8月中旬的含量最高,为30.97mgg;总多糖以三年生的含量最高,为21.48mgg。东北铁线莲齐墩果酸以10月中旬的含量最高,为8.33mg·g^(-1);齐墩果酸以二年生的含量最高,为6.95mg·g^(-1)。结论该地区的东北铁线莲最佳采收期为9月末,采收年限为三年。

齐墩果酸预防产肠毒素大肠杆菌导致的仔猪结肠损伤

为探究齐墩果酸(Oleanolic acid,OA)对细菌性腹泻仔猪肠道损伤的保护作用,利用产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)感染断奶仔猪建立肠道损伤模型。将24头35日龄9~11 kg杜×长×大三元杂交仔猪随机分为3组,每组8次重复。试验期为14 d,其中,试验期间对照与ETEC组饲喂基础日粮,ETEC+OA组饲喂基础日粮+0.01%OA。结果表明,饲喂OA预防ETEC诱导的仔猪腹泻,HE染色和ELISA检测表明OA缓解ETEC感染导致的结肠黏膜形态完整,并通过提高紧密连接蛋白的mRNA表达保护结肠屏障功能。在细胞分子层面上,通过透射电镜、免疫荧光观察结肠上皮细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR和Western blot检测发现,ETEC诱导仔猪结肠上皮细胞坏死性凋亡,而OA通过下调BAX和上调BCL-2基因和蛋白表达方式抑制ETEC诱导的肠上皮细胞凋亡。以上结果证实OA通过抑制肠道上皮细胞凋亡改善ETEC感染引起的仔猪肠道屏障完整性损伤。

齐墩果酸-壳聚糖纳米颗粒的制备及其对BRL-3A细胞氧化应激水平的影响

目的研究自组装颗粒物理性征及其对BRL-3A细胞毒性作用及氧化应激水平的影响。方法将壳聚糖制备成纳米颗粒储备液(10μg/ml)并行倍比稀释后检测其对BRL-3A细胞活力影响,以壳聚糖纳米颗粒为载体与齐墩果酸自组装,同时观察齐墩果酸自组装后物理性征变化。将BRL-3A细胞分为齐墩果酸(OA)组及齐墩果酸-壳聚糖纳米颗粒(nanoOA)组,分别施加0,6.25,12.5,25,50,100μg/ml OA和nanoOA。检测干预3,6,12,24 h后细胞相对活力变化,及各组作用24 h后细胞活性氧水平(ROS)和丙二醛(MDA)含量变化。结果壳聚糖纳米颗粒对BRL-3A细胞相对活力无影响(P<0.05),自组装后可明显提高OA溶解度。与0μg/ml组相比,高浓度OA组(50,100μg/ml)BRL-3A细胞相对活力明显降低(P<0.05),细胞ROS和MDA水平明显增加(P<0.05),且呈时间依赖性。而不同浓度nanoOA作用后BRL-3A细胞相对活力没有明显改变,ROS水平增加(P<0.05),MDA水平未见明显增加(P>0.05),且除0μg/ml外,与同浓度OA组相比ROS、MDA水平较低(P<0.05)。结论壳聚糖纳米颗粒具有生物安全性,自组装后可改善OA的水溶性,并减少OA对细胞活力和氧化应激指标的影响。